实验六微生物的生理生化反应.
微生物实验六糖发酵实验-文档资料
四、实验方法和步骤
1、编号 用记号笔在各试管上分别标明发酵培养基名称和所接种的菌
名。 2、接种 取盛有葡萄糖发酵培养基的试管3支，按编号1支接种大肠杆
菌，另1支接种枯草芽孢杆菌，第3支不接种，作为对照。另 取乳糖发酵培养基试管3支，同样1支接种大肠杆菌，1支接种 枯草芽孢杆菌，第3支不接种，作为对照。 3．将上述已接种的葡萄糖和乳糖发酵试管和对照管置37℃温 室中培养24小时。 4．观察结果，并填表记录。
五、实验结果
糖类发酵
大肠杆菌 普通变形杆菌
对照
葡萄糖发酵
乳糖发酵
将实验结果填入下表。分别用产酸产气、产酸不产气、不产酸不产气 表示
六、思考题
假如某种微生物可以有氧代谢葡萄糖，发 酵试验应该出现什么结果？
感谢聆听！
产酸产气的鉴定
产酸的判断：指示剂溴甲酚紫(pH5．2为黄 色，pH6．8为紫色)，当发酵产酸时，使培 养基由紫色变为黄色。
产气的判断：倒置的德汉氏小管（有无气泡）
糖酵试验结果： 右侧为空白对照， 左侧为发酵产酸阳 性，但不产气，中 间为产酸、产气
三、实验器材
大肠杆菌，普通变形杆菌斜面各1支；盛有 葡萄糖发酵培养基的试管和乳糖发酵培养 基的试管各3支（内装有倒置的德汉氏小 管），试管架，接种环等。
微生物实验六糖发 酵实验
精品
实验六 糖发酵实验
一、实验目的
1、了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中 的重要作用。
二、实验原理
糖发酵试验是最常用的生化反应【糖发酵实验， IMVIC实验（吲哚、甲基红、伏普、柠檬酸盐实 验）】，在肠道细菌的鉴定上尤为重要。绝大多 数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们 在分解糖的能力上有很大的差异，有些细菌能分 解某种糖并产酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和气 体（如氢、甲烷、二氧化碳等）；有些细菌只产 酸不产气。例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产 酸并产气；伤寒杆菌能分解葡萄糖产酸不产气， 不能分解乳糖；枯草芽孢杆菌分解葡萄糖产酸产 气，不能分解乳糖，普通变形杆菌能分解葡萄糖 产酸、产气，但不能分解乳糖。
生理性生化实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解细菌生理生化反应原理；2. 掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法；3. 了解生理生化反应在鉴别细菌中的意义。
二、实验原理通过测定微生物校内某些酶类的有无、对某些糖的利用能力、代谢产物的类型等来研究微生物的多样性。
某些细菌产生色氨酸酶，能分解培养基蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚，吲哚与对二甲基氨基苯甲醛发生反应，形成红色的玫瑰吲哚，为吲哚反应阳性。
微生物发酵葡萄糖成丙酮酸，2分子丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在碱性条件下与肌酸类物质反应，生成红色物质，为甲基红反应阳性。
三、实验方法1. 吲哚试验：将细菌接种于含有色氨酸的培养基中，加入吲哚试剂，观察颜色变化。
2. 甲基红试验：将细菌接种于含有葡萄糖的培养基中，加入甲基红试剂，观察颜色变化。
四、实验结果1. 吲哚试验：接种了大肠杆菌的试管在加入乙醚和吲哚试剂后，能在乙醚和液体培养基的交界面上产生红色环状物质，大肠杆菌的吲哚试验显阳性。
2. 甲基红试验：大肠杆菌甲基红试验阳性，即大肠杆菌在培养期仍维持酸性pH。
五、实验分析1. 吲哚试验失败原因分析：可能是因为乙醚加量太少，影响实验现象的观察；另一个可能的原因是大肠杆菌菌种有问题。
2. 甲基红试验结果分析：大肠杆菌在培养后仍能维持酸性，而产气杆菌则转化为非酸性末端产物。
六、实验结论1. 通过本实验，我们了解了细菌生理生化反应原理；2. 掌握了细菌鉴定中常见的生理生化反应方法；3. 认识到生理生化反应在鉴别细菌中的意义。
七、实验注意事项1. 实验过程中要严格按照操作规程进行，避免污染；2. 注意观察实验现象，记录实验数据；3. 分析实验结果，找出实验失败的原因。
第2篇一、实验目的1. 了解生理性生化实验的基本原理和方法。
2. 掌握常用的生理性生化指标及其检测方法。
3. 通过实验，学会使用生理性生化检测仪器，提高实验技能。
二、实验原理生理性生化实验是研究生物体内各种生化反应及其代谢过程的重要手段。
实验六微生物大小测定
长 宽
结果计算 长μm＝平均格数×校正值 宽μm＝平均格数×校正值 大小表示：宽μm×长μm
思考题
1、 P51： 思考题2（2） 2、 P113： 思考题1（1） 预习实验七：微生物的生理生化反应
一、实验目的 二、实验原理 三、实验器材 四、实验内容步骤
主 页
目镜测微尺外观
镜台测微尺外观
下一页
1ml菌液中的总菌数=（5个方格中的总菌数/5）×16×104 稀释倍数
或
1ml菌液中的总菌数=平均每小格的菌数×400×104× 稀释倍数
本实验中暂规定：计上不计下，计左不计右 即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格 的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中 见图：即本格中计数细胞为3个。
显微镜计数
返 回
主 页
显微镜直接计数法
• 利用血球计数板直接在显微镜下计数微生 物的细胞（或孢子）数目 • 优点：直观、快速、操作简便 • 缺点：不能区分死菌与活菌；不适于对运 动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察
计数公式
1ml菌液中的总菌数=（5个方格中的总菌数/5）×25×104× 稀释倍数
目 镜 测 微 尺 放 大
0
10
20
30
40
50
镜 台 测 微 尺 放 大
返 回
目 镜 测 微 尺 的 标 定
目镜测微尺
0 10 20 30 40 50
微生物细胞
镜台测微尺
两条重合线间镜台测微尺的格数 目镜测微尺每格长度/μm = 两条重合线间目镜测微尺的格数 ×10
一、实验目的 二、实验原理 三、实验器材 四、实验内容步骤
返 回
装目镜测微尺 目镜测微尺的格数标定
微生物的生理生化反应
实验六微生物的生理生化反应一、实验目的掌握细菌鉴定中主要生理生化反应的常规实验法。
二、实验原理由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。
具体个原理如下：1、淀粉水解试验：在淀粉固体培养基上接种两种细菌（1—枯草杆菌，5—大肠杆菌），培养两天以后，再往培养基中加碘液染色，若该细菌能分泌胞外淀粉酶，则能利用其周围的淀粉，淡然在染色后，其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈。
2、明胶水解试验：穿刺接种于明胶培养基中的细菌，若能产生明胶酶利用明胶，则该培养基在4摄氏度条件下会处于液体状态，从而区别于正常条件下4摄氏度时固态的明胶培养基。
3、糖发酵试验：不同的细菌分解糖的能力不同，有些细菌能利用糖发酵产酸和产气，有些则不能。
酸在加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。
若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。
4、IMVC实验包括四个试验，主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌，多用于水环境的细胞血检查。
①吲哚试验：在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。
本次不做该试验。
②甲基红试验（MR）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者进而被分解产生甲酸，乙算和乳酸等多种有机酸，是培养液PH值降至4.2以下，加入甲基红后溶液呈红色。
③柠檬酸盐利用试验：有些细菌能利用柠檬酸盐作为唯一的碳源，而有些细菌则不能利用。
由于细菌不断地利用柠檬酸盐并生成碳酸盐，使培养基PH由中性变为碱性，培养基中的指示剂有浅绿色变为蓝色。
④伏-普试验（乙酰甲基甲醇试验 VP）：某些细菌在代谢过程中，能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸在羧化酶的催化下脱羧后形成活性乙醛，后者与丙酮酸缩合，脱羧形成乙酰甲基甲醇，或者乙醛化合生成乙酰甲基甲醇。
实验六细菌的生理生化试验教学
02
酶活性测定是了解细菌代谢途径的重要手段。
03
在实验中，我们对该细菌的几种关键酶进行了活性测定。通过分析酶活性，我 们发现该细菌具有较高的酶活性水平，这表明该细菌具有较为活跃的代谢状态 。这些结果有助于我们进一步了解该细菌的生化特性和代谢途径。
结果总结与讨论
总结
通过对生理和生化试验结果的综合分析，我们对该细 菌的生理生化特性有了更深入的了解。这些结果不仅 有助于我们更好地认识该细菌的生长、繁殖和代谢特 点，还为进一步研究该细菌的生物学特性和应用提供 了重要的参考依据。
糖发酵试验是鉴定细菌生化特性的重要手段。
生化试验一：糖发酵试验
在糖发酵试验中，我们观察到该细菌能够利用不同的 糖类作为碳源进行发酵。通过分析不同糖类的发酵产 物，我们可以了解该细菌对不同糖类的代谢能力和发 酵特性。这些结果对于进一步了解该细菌的生化特性 具有重要的意义。
生化试验结果与分析
01
生化试验二：酶活性测定
生理试验结果与分析
生理试验二：对数生长期的代谢产物
在细菌的对数生长期，其代谢产物具有一定的特点。
在对数生长期，我们观察到该细菌产生了一些具有特殊性质的代谢产物， 这些代谢产物可能对该细菌的生长和繁殖具有重要作用。通过对这些代 谢产物的分析，我们可以更深入地了解该细菌的生理特性。
生化试验结果与分析
实验六细菌的生理生化试验 教学
contents
目录
• 实验目的与简介 • 实验材料与试剂 • 实验步骤与操作 • 实验结果与分析 • 实验结论与建议 • 参考文献与拓展阅读
生理生化 特性，了解不同细菌 在生化反应中的差异。
通过实验结果分析， 能够对细菌进行初步 鉴定。
《细菌与人类健康》
生化反应实验报告
一、实验目的1. 了解生化反应的基本原理和实验方法。
2. 掌握常见生化试剂的使用方法。
3. 通过实验，观察和分析生化反应的现象，加深对生化反应的理解。
二、实验原理生化反应是指生物体内或生物体外，生物分子之间发生的化学反应。
这些反应是生命活动的基础，包括酶促反应、非酶促反应、氧化还原反应、酸碱反应等。
本实验主要涉及酶促反应和氧化还原反应。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌- 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基- 试剂：斐林试剂、双缩脲试剂、碘液、酚酞指示剂、硫酸铜溶液、氢氧化钠溶液、葡萄糖、蛋白质、淀粉2. 实验仪器：- 酒精灯、试管、试管架、烧杯、量筒、移液枪、滴管、试管夹、超净工作台、恒温培养箱四、实验步骤1. 酶促反应实验：（1）将葡萄糖蛋白胨水培养基分别接种枯草芽孢杆菌和大肠杆菌，置于恒温培养箱中培养24小时。
（2）取培养好的菌液，加入斐林试剂，观察颜色变化。
（3）取培养好的菌液，加入双缩脲试剂，观察颜色变化。
2. 氧化还原反应实验：（1）取淀粉溶液，加入碘液，观察颜色变化。
（2）取淀粉溶液，加入葡萄糖，观察颜色变化。
（3）取蛋白质溶液，加入硫酸铜溶液，观察颜色变化。
3. 酸碱反应实验：（1）取一定量的葡萄糖溶液，加入酚酞指示剂，观察颜色变化。
（2）向上述溶液中加入氢氧化钠溶液，观察颜色变化。
五、实验结果与分析1. 酶促反应实验结果：- 枯草芽孢杆菌菌液加入斐林试剂后，溶液变为红色，表明其含有葡萄糖氧化酶。
- 大肠杆菌菌液加入斐林试剂后，溶液无明显变化，表明其不含葡萄糖氧化酶。
- 枯草芽孢杆菌菌液加入双缩脲试剂后，溶液变为紫色，表明其含有蛋白质。
2. 氧化还原反应实验结果：- 淀粉溶液加入碘液后，溶液变为蓝色，表明淀粉存在。
- 淀粉溶液加入葡萄糖后，蓝色消失，表明葡萄糖与淀粉发生反应，生成葡萄糖淀粉。
- 蛋白质溶液加入硫酸铜溶液后，溶液变为蓝色，表明蛋白质存在。
实验六、细菌分解代谢系列实验
3、明胶液化试验
明胶是一种动物蛋白。明胶培养基本身低于 20℃时凝固，高于25℃则自行液化。某些细 菌能够产生蛋白酶将明胶水解成小分子物质， 因此培养后的培养基即使在低于20℃的温度 下，明胶也不再凝固，而由原来的固体状态 转化为液体状态。
三、操作步骤：
（一）淀粉水解试验：
(1)准备淀粉培养基平板：将熔化后冷却至50℃左右的淀粉培养基 倒入无菌平皿中，待凝固后制成平板。
（二）油脂水解试验：
（1）将装有油脂培养基的三角瓶置于沸水浴中 熔化，取出并充分振荡（使油脂均匀分布）， 再倾入无菌平皿中，待凝固制成平板。
（2）划线接种于同一平皿的两边(其中一种是 金黄色葡萄球菌作为对照菌)。置于37℃恒温箱 培养24h，取出后观察平板底层长菌的地方， 如出现红色斑点，即说明脂肪被水解了，此反 应为正反应。
（三）明胶液化试验：
（1）接种：用穿刺接种法接种大肠杆菌或产气肠杆菌 于明胶培养基中。
（2）培养：放20℃恒温箱中培养48h。若细菌在20℃下 不长，则应放在最适温度下培养。 （3）观察结果：观察培养基有无液化情况及液化后的 形状。 因明胶在低于20℃时凝固，高于25℃时自行液化，若 是在高于20℃下培养的细菌，观察时应放在冰浴中观 察，若明被被细菌液化，即使在低温下明胶也不会再 凝固。
二、实验原理
1、乙酰甲基甲醇试验 a、实验目的：检测细菌分解葡萄糖的代谢产物 b、原理：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖 产生丙酮酸，丙酮酸脱羧通过缩合和脱羧后转变 成乙酰甲基甲醇，然后被还原成2，3—丁二醇。 乙酰甲基甲醇在碱性条件下，被空气中的氧气氧 化成为二乙酰，二乙酰再与蛋白胨中的精氨酸的 胍基作用生成红色化合物，此为乙酰甲级甲醇反 应。在试管中加入α—萘酚时，可促进反应出现。
微生物生理生化反应实验报告
微生物的生理生化反应一、实验目的1.掌握细菌鉴定中常用生理生化反应的测定方法。
2.了解细菌代谢类型的多样性。
3.了解细菌生长现象及代谢产物在鉴别中的意义。
4.学习接种技术。
二、实验原理在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主要是酶促反应过程，由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌。
1.糖发酵试验：糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应,绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源,但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异.有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸,醋酸,丙酸等)和气体(如氢气,甲烷,二氧化碳等);有些细菌只产酸不产气.例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气。
产酸后再加入溴甲酚紫指示剂后会使溶液呈黄色，且杜氏小管中会收集到一部分气体。
若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且杜氏小管中无气体。
2.甲基红试验（MR）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者进而被分解产生甲酸，乙酸和乳酸等多种有机酸，培养基就会变酸，使加入培养基中的甲基红指示剂由橙黄色转变为红色，即甲基红反应。
大肠杆菌为阳性，产气肠杆菌为阴性。
3.伏-普试验（VP）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成非酸性或中性末端产物，某些细菌产生丙酮酸，再将丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇，在碱性条件下被氧化成二乙酰，二乙酰与胍基作用，生成红色化合物，为阳性。
4.靛基质（吲哚）试验：是用来检测吲哚的产生，在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。
但并非所有的微生物都具有分解色氨酸产生吲哚的能力，所以吲哚实验可以作为一个生物化学检测的指标。
大肠杆菌吲哚反应阳性，产气肠杆菌为阴性。
5.硫化氢实验：某些细菌分解含硫的氨基酸，产生硫化氢，硫酸铵亚铁等铁盐可与硫化氢反应生成不溶性硫化亚铁之黑色沉淀，为硫化氢实验阳性。
细菌生化反应实验报告
一、实验目的1. 了解细菌生理生化反应的基本原理。
2. 掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。
3. 熟悉生理生化反应在细菌鉴别中的实际应用。
二、实验原理细菌生理生化反应是指细菌在生长代谢过程中，通过酶催化作用，将底物转化为产物的化学反应。
这些反应能够反映细菌的代谢类型和生理特性，从而用于细菌的鉴定。
常见的细菌生理生化反应包括吲哚试验、甲基红试验、V-P试验、糖发酵试验等。
三、实验材料与仪器1. 菌种：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌。
2. 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂。
3. 仪器：酒精灯、接种环、超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液枪、滴管。
四、实验步骤1. 接种：将菌种接种于相应的培养基中，37℃恒温培养箱中培养24小时。
2. 吲哚试验：取少量培养液，加入吲哚试剂，观察颜色变化。
3. 甲基红试验：取少量培养液，加入甲基红试剂，观察颜色变化。
4. V-P试验：取少量培养液，加入V-P试剂，观察颜色变化。
5. 糖发酵试验：将不同糖类培养基分别接种菌种，观察颜色变化。
五、实验结果与分析1. 吲哚试验：大肠杆菌和产气肠杆菌呈现阳性反应，普通变形菌和枯草芽孢杆菌呈现阴性反应。
2. 甲基红试验：大肠杆菌和产气肠杆菌呈现阳性反应，普通变形菌和枯草芽孢杆菌呈现阴性反应。
3. V-P试验：大肠杆菌和产气肠杆菌呈现阳性反应，普通变形菌和枯草芽孢杆菌呈现阴性反应。
4. 糖发酵试验：大肠杆菌和产气肠杆菌对葡萄糖、乳糖和蔗糖均呈现阳性反应，普通变形菌和枯草芽孢杆菌对葡萄糖和乳糖呈现阴性反应。
六、实验结论通过本次实验，我们掌握了细菌生理生化反应的基本原理和实验方法。
通过对吲哚试验、甲基红试验、V-P试验和糖发酵试验的结果分析，我们可以初步判断出大肠杆菌和产气肠杆菌为阳性反应，普通变形菌和枯草芽孢杆菌为阴性反应。
这表明生理生化反应在细菌鉴别中具有重要的实际应用价值。
最新微生物学实验指导书
微生物学实验指导书生物技术教学部初立业编重庆邮电学院生物信息学院2003年12月30日前言一、本课程的性质和任务微生物学实验是生物学重要的基础课之一，特别是随着分子生物学的发展与拓宽，微生物学方法与技术显得尤为重要。
此外，医学、农学、林学等学科，甚至地质学、太空学等也需微生物的方法与技术。
因此，熟悉掌握微生物学方法与技术，对其它很多学科的发展有直接的影响。
无菌操作技能和无菌概念的建立是微生物学实验中最重要的内容，微生物学实验课主要任务是使学生掌握研究与应用微生物的主要方法与技术，包括经典的、常规的、以及现代的方法与技术，使学生具有适应于从事相关学科的基础理论研究与实际生产应用的微生物学实验技能。
与微生物学基础理论课紧密结合，使学生将理性知识与感性认识有机地结合，将书本知识用于实验，在实验中更深地理解基础理论，提高学生的综合能力与创新意识。
提高学生分析问题和解决问题的能力。
根据本学科的特点，逐步使学生认识微生物的基本特性，比较它们与其它生物的相似和不同之处，知道如何研究微生物以及对研究中所出现的问题点样分析，并加以解决。
二、教学要求与教学方法1.教学要求1)注重微生物学基础实验技能的掌握与提高，克服盲目追求新颖而忽视基础的倾向；2)实验课前要预习，明确每次实验的目的与基本步骤；3)在实验中要有严紧的科学态度，尊重事实与实验结果，要善于发现新现象；4)树立密切合作的风气，包括学生与老师、班与班、组与组、组长与组员之间的密配合。
2.教学方法1)以学生自己动手为主，老师在适当时间予以提示；2)对实验中所出现的一些现象多向学生提出问题，使它们学会分析结果，并与理论知识有机结合；3）根据实验的进行程度，引导学生更深入思考，逐步树立他们的创新意思；4）严格要求使操作技能规范化，老师作示范，强调其要点学生自己练。
三. 教学学时分配与安排本课程按每周3学时安排，共6个实验，总学时18。
目录实验一细菌的革兰氏染色 (3)实验二根霉、酵母菌形态结构的观察 (4)实验三培养基制备 (6)实验四灭菌与消毒 (9)实验五微生物的分离和纯化 (12)实验六微生物的生理生化反应 (14)实验七水中细菌总数的测定 (19)实验八放线菌形态的观察 (21)实验九细菌的芽胞染色 (22)实验十微生物菌种保藏 (24)实验一细菌的革兰氏染色法实验目的：1．学习并初步掌握革兰氏染色法。
[实验六细菌的生化试验]细菌的生化实验
![[实验六细菌的生化试验]细菌的生化实验](https://img.taocdn.com/s3/m/1967ad89f01dc281e43af093.png)
[实验六细菌的生化试验]细菌的生化实验实验六细菌的生化试验目的要求1．通过本试验加深对细菌生化反应原理和意义的理解；2．掌握常规细菌生化试验操作方法。
操作步骤一、糖类发酵（分解）试验原理：细菌含有分解不同蔗糖（醇、苷）类的酶，因而分解各种糖（醇、苷）类的能力也不必一样。
有些细菌分解某些糖（醇、苷）产酸（符号：+）、产气（符号：○），培养基由兰变黄（指示剂溴指示剂麝香草酚兰由兰遇酸福兰县的结果），并有气泡；有些产酸，仅培养基变黄；有些不分解糖类（符号：－），培养基仍为兰色。
（一）适用于需氧菌的方法培养基用邓亨氏（Dunham）蛋白胨水溶液（蛋白胨1g，氯化钠0.5g，水100ml，pH7.6按0.5～1％的比例分别加入各种辣椒），每100ml加入1.2ml的0.2％溴麝香草酚蓝（或用1.6％溴甲酚紫酒精溶液0.1ml）作指示剂。
分装于试管（每一个试管事先都加有一枚倒立的小发酵管），10磅高压灭菌10分钟。
如在培养基中加入琼脂达0.5～0.7％，则成半固体，可省去倒立的小失水管。
0.2％溴麝香草酚蓝溶液配法：溴麝香草酚蓝 0.2g0.1N NaOH 5ml蒸馏水 95ml方法：从琼脂斜面的纯培养物上，用接种环取少量被检细菌接种于糖发酵管培养基中（如为半固体，应穿刺），在37℃培养，一般观察2～3天，观察时用上述符号标记之。
（二）适用于厌氧菌的方法培养基：蛋白胨 20g氯化钠 5g琼脂 1g1.6％硫甲酚紫酒精溶液 1ml糖 10g硫乙醇酸钠 1g蒸馏水 1000ml将胨、盐、硫乙醇酸钠、琼脂和水放于水槽内，加热使融化，再加入所需的糖，调整pH到7.0，加入指示剂，分装试管，在10磅高压灭菌15分钟后，做成高层。
方法将厌氧菌的培养物用穿刺接种法接种于上述培养基的深部，于37℃培养。
结果观察同需氧菌。
二、V－P试验（二乙酰试验）原理：某些细菌能从葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇（Acetymethyl carbinol）→2，3-丁烯二醇（2，3-bytaylene cylycol），在有碱阿提斯鲁夫尔谷存在时氧化成二乙酰，后者和胨中的胍基化合物起作用，会带来粉红色的化合物。
实验6-微生物的生理生化反应
实验六微生物的生理生化反应1、实验目的探究菌株在碳源同化、氮源利用、乙醇发酵和抗生素效价分析等方面不同的生长特性，观察并简要分析不同微生物的生理生化特征及其形成机理。
2、实验过程简述2.1 培养基与试剂准备2.1.1碳源同化培养基准备碳源为葡萄糖、半乳糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、棉籽糖、蜜二糖、纤维二糖、海藻糖、松三糖、可溶性淀粉、α-甲基葡萄糖苷的YNB 培养基，放入一根杜氏管。
2.1.2氮源同化培养基准备氮源为硫酸铵，尿素，蛋白胨，硝酸钾，无氮源YNB 的固体、液体培养基。
2.1.3 乙醇发酵用种子培养基：YPD 培养基2.1.4乙醇发酵用发酵培养基葡萄糖，酵母粉，蛋白胨，尿素，磷酸二氢钾，硫酸镁，氯化钙。
2.1.5抗生素效价测定用培养基：LB 培养基2.1.6青霉素：用pH 6.0 磷酸缓冲液配制，浓度为100 mg/ml，0.22μm 孔径过滤灭菌。
2.2 微生物的碳源同化和发酵1、从菌体斜面接一环菌于1 ml 无菌水中，室温静置2 h。
2、取200 μl 菌悬液，分别转接于含杜氏管的小试管中，静置培养48 h。
3、每24 h 观察记录生长和产气情况。
4、根据实验结果判断不同菌株对不同碳源的同化或发酵。
2.3 微生物的氮源利用1、从菌体斜面接一环菌于1 ml 无菌水中，室温静置2 h。
2、取200μl 菌悬液，分别转接于上述培养基小试管中，30℃或37℃静置培养48 h。
3、各取20μl 菌悬液，分别划线于不同氮源的固体平板上，待菌液被吸收后，培养皿倒置，静置培养48 h。
4、每24 h 观察记录生长情况，48 h 测定液体培养物的OD 600。
5、根据实验结果判断不同菌株对不同氮源的利用能力或偏好性。
2.4 酵母菌的乙醇发酵1、种子液培养：将酿酒酵母从菌种斜面上接一接种环至YPD 种子培养基中，30℃，200rpm，培养18 h。
2、乙醇发酵：按照10%（v/v）的比例将培养好的种子液接入100 ml 发酵培养基中，用无菌塑料布将封口密封，30℃，静置培养，每24 h 手摇1 次，发酵3-4 d。
实验六__微生物生理生化反应观察共31页文档
6、纪律是自由的第一条件。——黑格 尔 7、纪律是集体的面貌，集体的声音， 集体的 动作， 集体的 表情， 集体的 信念。 ——马 卡连柯
8、我们现—马 克思 9、学校没有纪律便如磨坊没有水。— —夸美 纽斯
Thank you
10、一个人应该：活泼而守纪律，天 真而不 幼稚， 勇敢而 鲁莽， 倔强而 有原则 ，热情 而不冲 动，乐 观而不 盲目。 ——马 克思
6、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎 7、自知之明是最难得的知识。——西班牙 8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。——塞内加 9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
微生实验报告2012.11.14实验六、土壤中微生物的分离和纯化,微生物的培养特征观察
微⽣实验报告2012.11.14实验六、⼟壤中微⽣物的分离和纯化,微⽣物的培养特征观察微⽣实验报告姓名：王晶晖专业年级：2011级⽣物技术学号：040312011032实验六⼟壤中微⽣物的分离和纯化, 微⽣物的培养特征观察,环境中的微⽣物⼀、实验⽬的1、学习掌握倒平板的⽅法和⼏种分离纯化微⽣物的基本操作技术2、了解不同微⽣物在液体,半固体,固体培养基上的培养特征3、学习并掌握各种⽆菌操作接种技术⼆实验原理1、微⽣物的分离纯化原理⾃然条件下的微⽣物往往是不同种类微⽣物的混合体。
为了研究某种微⽣物的特性或者要⼤量培养和使⽤某种微⽣物，必须从这些混杂的微⽣物群落中获得纯培养，这种获得纯培养的⽅法称为微⽣物的分离与纯化。
在⾃然界中，上壤是微⽣物⽣活的良好环境，其中⽣活的微⽣物数量和种类都是极其丰富的。
⼟壤中的微⽣物数量与种类⾮常多,在通⽓良好的花园⼟中，好⽓性微⽣物占有绝对优势。
本实验以花园⼟为材料分离⼟壤中的好⽓性细菌。
分离微⽣物常⽤的⽅法有稀释平板分离法和划线分离法，根据不同的材料，可以采⽤不同⽅法，其最终⽬的是要在培养基上出现欲分离微⽣物的单个菌落，必要时再对单菌落进⼀步分离纯化。
在⽤稀释平板法分离微⽣物时，还可以同时测定待分离的微⽣物的数量。
倒平板的⽅法稀释平板计数法中样品的稀释和稀释后的取样培养平板涂布法平板划线分离法（a）交叉划线法。
（l、2、3、4为依次划线的起点）；（b）连续划线法（1、 2⼒依次划线的起点）；（c）划线操作2 微⽣物的培养特征原理1) 微⽣物的菌落特征在固体平板培养基上，单个微⽣物细胞或孢⼦⽣长繁殖可以形成⼀个具有特定形状的菌落。
在⼀定的培养基上和⼀定培养条件下，微⽣物的菌落特征是稳定的，因此通过菌落的观察可以识别细菌、放线菌、酵母菌和霉菌等⼏⼤类微⽣物。
菌落的基本特征包括菌落形状、⼤⼩、边缘、隆起度和颜⾊等。
2)微⽣物的培养特征是指微⽣物培养在培养基上所表现出来的群体形态和⽣长情况。
各类微生物生化实验方式原理
各类微生物生化实验方式原理通常利用生化实验的方式，检测细菌对各类物质的代谢作用及其代谢产物，称为细菌的生化反映，经常使用于细菌的辨别。
一、糖类分解产物（1）糖发酵实验（carbohydrate fermentation test）不同种类的细菌对糖的分解利用能力不同，一样以可否分解某种糖，是不是产酸产气等现象来辨别。
例如大肠杆菌能分解葡萄糖和乳糖，产酸且产气；而伤寒杆菌只分解葡萄糖产酸不产气，且不分解乳糖。
这是因为大肠杆菌分解葡萄糖等产生甲酸，经甲酸解氢酶的作用生成H2和CO2。
而伤寒杆菌无此酶，故分解葡萄糖只产酸不产气。
（2）VP实验（Voges-Proskauer test）产气杆菌将分解葡萄糖产生的两分子丙酮酸脱羧，生成一分子乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气中氧气氧化，生成二乙酰，二乙酰可与培育液中含胍基的化合物（如蛋白胨中的精氨酸）反映，生成红色的化合物，此为VP实验阳性。
大肠杆菌分解葡萄糖不生成乙酰甲基甲醇，故VP实验阴性。
（3）甲基红实验（methyl red test）大肠杆菌和产气杆菌均属G-短杆菌，且都能分解葡萄糖、乳糖产酸产气，二者不易区别。
但二者所产生的酸类和总酸量不一：大肠杆菌可产生甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸等，而产气杆菌只产生甲酸、乙醇及乙酰甲基甲醇。
故大肠杆菌培育液PH在以下，加入甲基红指示剂呈红色，为甲基红实验阳性；产气杆菌培育液PH在以上，加入甲基红后呈桔黄色，为甲基红实验阴性。
（4）枸橼酸盐利用实验(citrate utilization test）产气杆菌在以枸橼酸盐为唯一碳源的培育基上生长，分解枸橼酸盐产生CO2，并转变成碳酸盐，使培育基由中性变成碱性，含溴麝香草酚蓝（BTB）指示剂的培育基由淡绿色变成深兰色，此为枸橼酸盐利用实验阳性。
大肠杆菌不能利用枸橼酸盐，故在此培育基上不能生长，培育基仍为绿色。
二、蛋白质及氨基酸的分解产物（1）硫化氢实验（hydrogen sulfide test）有些细菌能分解培育基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、甲硫氨酸等）产生H2S，如遇醋酸铅或硫酸亚铁，能生成黑色的硫化物，为硫化氢实验阳性。
实验五 微生物的生理生化反应、免疫标本的观察
实验六病原微生物标本观察实验目的：了解临床常见病原微生物形态特征实验材料：结核杆菌、链球菌、炭疽杆菌、破伤风梭状杆菌实验原理：（一）结核杆菌结核杆菌是结核病的病原菌，对人类有致病性的结核杆菌有人型、牛型、非洲型等。
其中以人型结核菌最为重要。
人型结核杆菌为细长略带弯曲的杆菌。
有单个排列的，有平行相聚排列的，有时呈分枝状似V、T、Y字型排列，菌体宽0.3~0.6um，长2.5~4um，菌体有颗粒状结构，无鞭毛、无芽胞、无荚膜。
牛型结核杆菌较人型结核杆菌短而粗。
结核杆菌为专性需氧菌，在肉汤培养基上不能生长，必须在含有血清、卵黄、马铃薯、甘油等营养物质的特殊培养基中才能生长，且生长缓慢，一般37℃经3~4周才能生长旺盛。
结核杆菌不易着色，观察一般用抗酸性染色法染色，结核杆菌呈红色，其它非抗酸菌呈蓝色。
（二）链球菌链球菌种类很多，在自然界中分布甚广，空气、水、正常人及动物体表及口腔、鼻、咽腔和肠道中常有本菌寄居。
链球菌引起人类的疾病种类很多，重要的有蜂窝组织炎、丹毒、肺炎、猩红热、产褥热、败血症、心内膜炎等。
链球菌的分类，一般实验室均以溶血性来分。
即甲型溶血性链球菌（草绿色链球菌）、乙型溶血性链球菌（溶血性链球菌）及丙型溶血链球菌（非溶血性链球菌）。
大多数链球菌为需氧或兼性厌氧，但也有专性厌氧的，厌氧性链球菌常常引起严重的产褥热。
链球菌单个球菌为球形或卵圆形，呈链状排列，菌链长度变化很大，在很大程度上是由生长环境因素所决定的。
（三）炭疽杆菌炭疽杆菌主要是羊、牛、马所患的疾病，人很少受感染。
通常因芽胞侵入受损皮肤粘膜而引起感染，很少经空气感染。
芽胞在侵入部位组织中发芽，变为繁殖体，引起胶液性水肿和充血。
细菌通过淋巴管进入血液，于动物死亡前后的短时间内，在血液和组织内大量繁殖。
炭疽杆菌为需氧芽胞杆菌，在普通琼脂平板上菌落呈圆形，状如精细雕刻的玻璃。
镜下为革兰阳性大杆菌，两端平截有时略为凹陷，纯培养物呈链状排列，芽胞位于菌体中央，无鞭毛，不运动。
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实验六微生物的生理生化反应
一、实验目的
掌握i 微生物（细菌）鉴定中主要生化反应的常规实验法
二、实验原理
（一）大分子物质（如淀粉、明胶）在常规条件下不被降解成小分子物质，但某些微生物细胞能分泌胞外酶，使大分子物质降解。
大分子物质在微生物分泌的胞外酶的作用下分解成小分子物质。
1. 淀粉水解实验根据淀粉遇碘变蓝的原理，向含有淀粉培养基中加入碘
产生淀粉酶无色透明圈
微生物细胞
无淀粉酶蓝色
2. 明胶水解实验产生明胶酶的，明胶培养基在4 度时成液体状微生物细胞
无明胶酶时，在明胶培养基在4 度成固体状
（二）糖发酵实验
不同的细菌分解糖，醇的能力不同，有些细菌分解某些糖产酸并产气，有的分解糖仅产酸而不产气，因此，可根据其分解利用糖的差异作为鉴定菌种的依据之一。
在糖发酵实验中，用溴甲酚紫作为指示剂，PH6.8时为紫色，当PH< 5.2时变为黄色，若细菌分解糖产酸，则培养液由紫色变为黄色，有无气体产生，可以从德汗氏小管中观察。
（三）IMVC 实验
IMVC 实验主要包括吲哚（indol test）试验、甲基红（methyl red test）试验、柠檬酸盐（citrate test）试验、伏-普（Voges-Prokauer test）试验，这四个试验主要是用来
快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌，多用于水环境的细菌学检查
甲基红试验（M.R.试验）某些细菌在糖代谢过程中，分解培养基中的糖产生丙酮酸，丙酮酸再被分解为甲酸，乙酸等，使培养基的PH 值降至4.5 以下。
酸的产生可由甲基红的变色来指示。
甲基红的变色范围是PH4.2-6.3，PH4.2 时为红色，PH6.3 时为黄色。
若细菌分解葡萄糖产酸量少时，则培养基PH 值在6.3以上，故加入甲基红指示剂呈黄色，为阴性。
伏普试验有些细菌可以分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸通过缩合和脱羧产生乙酰甲基甲醇。
在碱性条件下，乙酰甲基甲醇被氧化成二乙酰，二乙酰可以与培养基中的蛋白胨中的精氨酸的胍基产生红色化合物。
柠檬酸盐试验有的细菌可以利用柠檬酸盐作为碳源，将其分解为二氧化碳，最后产生碳酸盐使培养基变碱。
指示剂可用溴麝香草酚蓝（PH<6 时呈黄色，PH 在6－7.6 之间时为绿色，PH>7.6 时呈蓝色）培养基中的溴麝香草酚蓝由绿色变为深蓝色，则为阳性。
三实验材料菌种：枯草芽孢杆菌（1 号），大肠杆菌（5 号），产气肠杆菌（7 号）培养基：淀粉培养基平板，明胶培养基试管（2 个），葡萄糖发酵培养基（2 个），葡萄糖蛋白胨水培养基（4个），柠檬酸盐培养基斜面（2个）
试剂：甲基红试剂，伏普试剂，碘溶液，KOH 溶液，
四实验步骤
（一）按下表接种
（二）将各培养基在37下培养2d。
（三）加试剂
1.在淀粉培养基平板上的菌落上滴加碘液。
2•甲基红实验：在培养基中加3滴甲基红试剂。
3. 伏一普实验：在每个培养基内分别加5滴40%KOH溶液，然后加入5滴5 % a—荼酚溶液,
用力振荡后放入37C温箱中保温15—30min。
五实验结果
六思考题
大肠埃希氏菌和产气肠杆菌分解葡萄糖所生成的产物有所不同？
答：大肠埃希氏菌分解葡萄糖为丙酮酸，丙酮酸再进而分解产生甲酸、乙酸和乳酸等多种有机酸，产气肠杆菌也光分解葡萄糖为丙酮酸，丙酮酸在羧化酶的催化下脱羧后形成活性
乙醛，乙醛再与丙酮酸缩合，脱羧形成乙酰甲基甲醇，或者与乙酰甲基甲醇。
由于分解葡萄糖所生成的产物不同，所以可以用甲基红实验和VP实验对它们进行鉴别。