实验六微生物的生理生化反应.

实验六微生物的生理生化反应
一、实验目的
掌握i 微生物（细菌）鉴定中主要生化反应的常规实验法
二、实验原理
（一）大分子物质（如淀粉、明胶）在常规条件下不被降解成小分子物质，但某些微生物细胞能分泌胞外酶，使大分子物质降解。

大分子物质在微生物分泌的胞外酶的作用下分解成小分子物质。

1. 淀粉水解实验根据淀粉遇碘变蓝的原理，向含有淀粉培养基中加入碘
产生淀粉酶无色透明圈
微生物细胞
无淀粉酶蓝色
2. 明胶水解实验产生明胶酶的，明胶培养基在4 度时成液体状微生物细胞
无明胶酶时，在明胶培养基在4 度成固体状
（二）糖发酵实验
不同的细菌分解糖，醇的能力不同，有些细菌分解某些糖产酸并产气，有的分解糖仅产酸而不产气，因此，可根据其分解利用糖的差异作为鉴定菌种的依据之一。

在糖发酵实验中，用溴甲酚紫作为指示剂，PH6.8时为紫色，当PH< 5.2时变为黄色，若细菌分解糖产酸，则培养液由紫色变为黄色，有无气体产生，可以从德汗氏小管中观察。

（三）IMVC 实验
IMVC 实验主要包括吲哚（indol test）试验、甲基红（methyl red test）试验、柠檬酸盐（citrate test）试验、伏-普（Voges-Prokauer test）试验，这四个试验主要是用来
快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌，多用于水环境的细菌学检查
甲基红试验（M.R.试验）某些细菌在糖代谢过程中，分解培养基中的糖产生丙酮酸，丙酮酸再被分解为甲酸，乙酸等，使培养基的PH 值降至4.5 以下。

酸的产生可由甲基红的变色来指示。

甲基红的变色范围是PH4.2-6.3，PH4.2 时为红色，PH6.3 时为黄色。

若细菌分解葡萄糖产酸量少时，则培养基PH 值在6.3以上，故加入甲基红指示剂呈黄色，为阴性。

伏普试验有些细菌可以分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸通过缩合和脱羧产生乙酰甲基甲醇。

在碱性条件下，乙酰甲基甲醇被氧化成二乙酰，二乙酰可以与培养基中的蛋白胨中的精氨酸的胍基产生红色化合物。

柠檬酸盐试验有的细菌可以利用柠檬酸盐作为碳源，将其分解为二氧化碳，最后产生碳酸盐使培养基变碱。

指示剂可用溴麝香草酚蓝（PH<6 时呈黄色，PH 在6－7.6 之间时为绿色，PH>7.6 时呈蓝色）培养基中的溴麝香草酚蓝由绿色变为深蓝色，则为阳性。

三实验材料菌种：枯草芽孢杆菌（1 号），大肠杆菌（5 号），产气肠杆菌（7 号）培养基：淀粉培养基平板，明胶培养基试管（2 个），葡萄糖发酵培养基（2 个），葡萄糖蛋白胨水培养基（4个），柠檬酸盐培养基斜面（2个）
试剂：甲基红试剂，伏普试剂，碘溶液，KOH 溶液，
四实验步骤
（一）按下表接种
（二）将各培养基在37下培养2d。

（三）加试剂
1.在淀粉培养基平板上的菌落上滴加碘液。

2•甲基红实验：在培养基中加3滴甲基红试剂。

3. 伏一普实验：在每个培养基内分别加5滴40%KOH溶液，然后加入5滴5 % a—荼酚溶液,
用力振荡后放入37C温箱中保温15—30min。

五实验结果
六思考题
大肠埃希氏菌和产气肠杆菌分解葡萄糖所生成的产物有所不同？
答：大肠埃希氏菌分解葡萄糖为丙酮酸，丙酮酸再进而分解产生甲酸、乙酸和乳酸等多种有机酸，产气肠杆菌也光分解葡萄糖为丙酮酸，丙酮酸在羧化酶的催化下脱羧后形成活性
乙醛，乙醛再与丙酮酸缩合，脱羧形成乙酰甲基甲醇，或者与乙酰甲基甲醇。

由于分解葡萄糖所生成的产物不同，所以可以用甲基红实验和VP实验对它们进行鉴别。