基于Gateway技术的低成本植物双分子荧光互补分析系统

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同时创制低成本低克隆背景的Ｇａｔｅｗａｙ入门载体。利用人门载体，采用Ｇａｔｅｗａｙ技术快速将目标基因重组到ＢｉＦＣ目标载体，并采用农杆菌注射侵染烟草的方法观察荧光互作结果。构建的Ｇａｔｅｗａｙ入门载体，由于带有ｃｃｄＢ基因，非线性化的载体无法在ｃｃｄＢ敏感菌株中生长，因此消除了载体本身的背景。同时由ＸｃｍＩ酶切后产生的Ｔ突出，可以很好地与ＰＣＲ产物结合，连接效率和普通商业化Ｔ载体一致。此外，由于载体可由实验室自行制备且采用了ＴＡ克隆，创制入门克隆的成本大大降低。借助该研究改造的ＢｉＦＣ目标载体，目的基因能快速地重组到目的载体用于基因互作鉴定。利用本研究构建的Ｇａｔｅｗａｙ系统，能够以较低成本快速的进
（ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙＢｒｅｅｄｉｎｇＢａｓｅｆｏｒＺｈｅｉｆａｎｇＳｕｓｔａｉｎａｂｌｅＰｅｓｔａｎｄＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌ，ＭＯＡｅｙＫａｂＬｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＺｈｅｊｉａｎｇＰｒｏｖｉｎｃｉａｌｅｙＫＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＰｌａｎｔＶｉｒｏｌｏｇｙ，ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏＶｉｒｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＺｈｅｉｆａｎｇＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１００２１，Ｃｈｉｎａ；ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＬｉｆｅ
行基因克隆和互作研究。
关键词：入门载体；ＢｉＦＣ；基因互作；Ｇａｔｅｗａｙ
中图分类号：Ｑ７８文献标志码：Ａ文章编号：１００４ — １５２４（２０１３）０５ — １０２４ — ０７
Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｚｈ４ｉａｎｇＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉｎｈｕａ３２１０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｇａｔｅｗａｙ — ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅｂｉｍｏｌｅｃｕｌａｒｌｆｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ（ＢｉＦＣ）ａｓｓａｙｓｙｓｔｅｍ Fra Baidu bibliotek ｓｗｅｌｌａｓａｌｏｗ — ｃｏｓｔ
Ｌｏｗ・－ｃｏｓｔｇａｔｅｗａｙ－－ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅｂｉｍｏｌｅｃｕｌａｒｌｕｏｆｒｅｓｃｅｎｃｅｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎａｓｓａｙｓｙｓｔｅｍ
，陈剑平
（浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所省部共建国家重点实验室培育基地，农业部植物保护与生物技术重点实验室，浙江省
摘
要：创制基于Ｇａｔｅｗａｙ重组技术的双分子荧光互补（ｂｉｍｏｌｅｃｕｌａｒｌｆｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ，ＢｉＦＣ）载体，
浙江农业学报ＡｃｔａＡｇｒｉｃｕｈｕｒａｅＺｈｅｉｆａｎｇｅｎｓｉｓ，２０１３，２５（５）：１０２４ — １０３０
ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｚｊｎｙｘｂ．ｃｎ
基于Ｇａｔｅｗａｙ技术的低成本植物双分子荧光互补分析系统
周洁一，王栩鸣，陈斌，陈娟，杨勇，余初浪，严成其
植物病毒重点实验室，浙江杭州３１００２１；浙江师范大学化学与生命科学学院，浙江金华３２１０００）
ＺＨＯＵＪｉｅ ’ ，ＷＡＮＧＸｙｕ — ｍｉｎｇ一，ＣｈｅｎＢｉｎ，ＣＨＥＮＪｕａｎ，ＹＡＮＧＹｏｎｇ，ＹＹＵＣｈｕ — ｌａｎｇ，ＹＡＮＣｈｅｎｇ — ｑ，ＣＨＥＮＪｉａｎ — ｐｉｎｇ
周洁，王栩鸣，陈斌，等．基于Ｇａｔｅｗａｙ技术的低成本植物双分子荧光互补分析系统［Ｊ］．浙江农业学报，２０１３，２５（５）：
１０２４— １０３０．
ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４ — １５２４．２０１３．０５．２１