米氏常数
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反应物 管 号 0 1 2 3
0.1mol/L 蔗糖液 pH4.6 buffer 酶液 （ml） 1mol/L NaOH (ml)
活力测定
吸取 反应物 (ml) DNS 试剂 (ml) 水 (ml) A 540
数据处理
底物 浓度 (S) 1/S 1/A
0 0.4 0.5 0.6
2.00 1.60 1.50 1.40
0.5
0.5 0.5 0.5
0.5
0.5 0.5 0.5
3
3 3 3
1.5
1.5 1.5 1.5
0.02
0.025 0.0375 0.050
50
40 26.7 20
数据处理： 以A值作为相对反应速度，以1/S为横坐 标，1/A为纵坐标作图，由图求出Km和Vmax值。
蔗糖酶米氏常数的测定操作方法
1）将离子交换柱层析得的E3稀释(pH4.6 HAC缓冲液)至20U/mL，共16ml。 2）取试管8支，按0--7编号，0为对照管。 3）按表 1将蔗糖液、醋酸缓冲液分别加入试管中，于35℃水浴中保温（使 温度平衡，以下同）10min。
4）取约16ml酶液，放入同一水浴中保温约10min。
5）于各管中依次按同样时间间隔加入已保温过的酶液 2ml，记时，立即摇 匀。在35℃水浴中准确反应3min。
6）按同样次序和时间间隔，加入0.5ml的1mol/L NaOH，摇匀，终止反应。
7）吸取反应混合物0.5ml，加入盛有3ml DNS试剂和1.5ml去离子水的血糖 管中，放入沸水中加热 5min，冷却后稀释定容至 25ml，摇匀后，测定 A540值。
2.00 2.00 2.00 2.00
0.5 0.5 0.5 0.5
0.5 0.5 0.5 0.5
3 3 3 3
1.5 1.5 1.5 1.5
0 0.010 0.0125 0.015 100 80 66.7
4
5 6 7
0.8
1.0 1.5 2.0
1.20
1.00 0.50 0.00
2Hale Waihona Puke Baidu00
2.00 2.00 2.00