实验五培养基的配制

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培养基配制安排

实验6-9所需材料实验6 （6人一组），材料在上实验五时配制每个组所需材料：6个平板；1瓶90ml无菌水，用三角瓶盛放，内放8-10个玻璃珠；5支9ml的无菌水试管；1包培养皿（6套）1ml的移液管6支。

实验七所需材料在上实验五时配制每个组所需材料牛肉膏蛋白胨培养基斜面：6支（用于大肠杆菌和枯草杆菌，每个菌种为3支，1支直线、2支波浪线接种）；牛肉膏蛋白胨液体培养基：试管装，4支；牛肉膏蛋白胨液体培养基：试管装，4支。

注：免去了马丁氏培养基和高氏1号培养基斜面。

实验八所需材料在上实验七时配制每组所需材料淀粉培养皿：3个；明胶试管：6个；菌种：枯草杆菌和大肠杆菌实验九所需材料在上实验七时配制每组所需材料2个三角瓶：内放培养基10个试管：内放培养基6个平皿实验五培养基的制备（40人以上）1组：牛肉膏培养基300ml，固体，装20个试管，剩下的装入1个三角瓶；2组：牛肉膏培养基300ml，固体，装20个试管，剩下的装入1个三角瓶；3组：牛肉膏培养基400ml，固体，分装30个试管，剩下的状1个三角瓶；4组：高氏1号固体培养基，300ml，分装到2个三角瓶中，每个150ml（4，6组备用）5组：马丁氏固体培养基，300ml，分装到2个三角瓶中，每个150ml（5，7组备用）6组：牛肉膏液体培养基，300ml，分装到30个试管中（整个班用）；7组：牛肉膏半固体培养基，300ml，分装到30个试管中（整个班用）；注：所配制的牛肉膏试管斜面中，包括老师接菌种所用斜面。

每个组还需要：1瓶90ml无菌水，三角瓶盛放，玻璃珠8-10个；5支9ml的无菌水，试管盛放；1包培养皿（6套）6支1.0ml的移液管棉塞：2个大的，6个小的；实验五培养基的制备（30人左右）1组：牛肉膏培养基250ml，固体，装14个试管，剩下的装入1个三角瓶；2组：牛肉膏培养基250ml，固体，装14个试管，剩下的装入1个三角瓶；；3组：牛肉膏培养基250ml，固体，装14个试管，剩下的装入1个三角瓶；4组：高氏1号固体培养基，150ml，分装到1个三角瓶中（4，6组备用）5组：马丁氏固体培养基，150ml，分装到1个三角瓶中（5，7组备用）6组：牛肉膏液体培养基，300ml，分装到30个试管中（整个班用）；7组：牛肉膏半固体培养基，300ml，分装到30个试管中（整个班用）；注：所配制的牛肉膏试管斜面中，包括老师接菌种所用斜面。

实验五牛肉膏蛋白胨培养基的制备及高压蒸汽灭菌

实验五牛肉膏蛋白胨培养基的制备及高压蒸汽灭菌一实验目的：掌握培养基的配制原则与方法；熟悉手提式高压灭菌器的使用方法和注意事项；二实验材料：器材：试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅等。

试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂等三实验原理：牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。

由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。

高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。

将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。

待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。

此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。

四实验步骤：1.牛肉膏蛋白胨培养基的制备（1）称量准确称取各种成分。

一些不易称量的成分如牛肉膏，可用玻璃棒取出放称量纸上称量，然后连同称量纸一起放入烧杯中。

（2）溶解向烧杯内加入所需的水量，将牛肉膏用水洗下后，加热搅拌全溶后稍放冷。

（4）调pH值精密pH试纸测定其pH值，并用NaOH调至所需pH值（5）分装根据不同需要，可将配好的培养基分装入配有棉塞的试管或三角瓶内。

注意分装时避免培养基挂在瓶口或管口上引起杂菌污染。

如液体培养基，应装试管高度的1/4左右；固体培养基装试管高度的1/5左右；装入三角瓶的量以三角瓶容量的一半为限。

（6）包扎试管扎成捆。

纸上表明培养基的名称、配制日期等。

（7）灭菌培养基用0.1Mpa高压蒸汽灭菌15~20min，五注意事项1.要严格按配方配制。

2.调pH不要过头。

3.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。

配方：牛肉膏：1.5g 蛋白胨5.0g 氯化钠2.5g水500mL 琼脂 7.5g pH 7.2。

实验五高氏一号合成培养基的制备、土壤中放线菌的分离

实验五高氏一号合成培养基的制备、土壤中放线菌的分离实验目的：掌握配制合成培养基的一般方法。

掌握稀释倒平板法从土壤中分离放线菌的基本原理和基本操作技术。

实验材料：药品：可溶性淀粉、KNO3、NaCl、K2HPO4•3H2O、MgSO4•7H2O、FeSO4•7H2O、琼脂。

其他：高压蒸汽灭菌锅、扭力天平、药匙、烧杯、量筒、玻璃棒、三角瓶、试管、牛皮纸、硫酸纸、线绳、无菌培养皿、铁锹、小铲、酒精棉球、镊子、玻璃铅笔。

实验原理：高氏一号合成培养基是培养放线菌的培养基。

这种培养基是采用化学成分完全了解的纯试剂配制而成的培养基，高氏一号培养基：碳源为可溶性淀粉、氮源为KNO3 、NaCl 、K2HPO4•3H2O 、MgSO4•7H2O 作为无机盐，FeSO4•7H2O作为微生物的微量元素，提供铁离子等组成。

放线菌是重要的抗生素产生菌，主要分布在土壤中，其数量仅次于细菌，一般在中性偏碱性、有机质丰富、通气性好的土壤中含量较多。

由于土壤中的微生物是各种不同种类微生物的混合体，为了研究某种微生物，就必须把它们从这些混杂的微生物群体中分离出来，从而获得某一菌株的纯培养。

分离放线菌常用稀释倒平板法。

根据放线菌的营养、酸碱度等条件要求，常选用合成培养基或有机氮培养基。

如果培养基成分改变，或土壤预先处理（120℃热处理1h），或加入某种抑制剂（如加数滴10%酚等），都可以使细菌，霉菌出现的数量大大减少，从而淘汰了其它杂菌。

再通过稀释法，使放线菌在固体培养基上形成单独菌落，并可得到纯菌株。

实验内容：1.高氏一号合成培养基的制备先将可溶性淀粉称好，在小烧杯内用50~100ml水调成糊状，再在另一容器内加入900~950ml热水，将小烧杯内淀粉倒入混匀。

再分别称取其它药品，并加热搅拌使之溶解后，调pH至7.2~7.4，分装，0.1Mpa（15lb/in2）15~30min高压蒸汽灭菌。

2.土壤中放线菌的分离（1）取9套无菌平皿，在皿底贴上标签，注明土壤稀释液的稀释度（10-3、10-4、10-5）、组别、姓名、操作日期等。

实验五、培养基制备及灭菌乳酸发酵、酒精发酵

实验五、培养基制备及灭菌乳酸发酵、酒精发酵一、培养基的制备及灭菌（一）、实验目的学习几类微生物常用培养基的配置及灭菌方法。

（二）、实验材料 1．药品试剂： 2．器皿及材料：3．仪器设备：立式高压蒸汽灭菌锅、电热烘箱。

（三）、实验原理培养基是根据微生物生长繁殖的需要人工配制的营养基质，其中含有微生物生长繁殖所需的碳源、氮源、无机盐、生长因子等。

配制培养基时，应根据微生物种类的不同，将其所需的营养物质以合理的方法加以配制。

配制好的培养基还应具有适宜的 pH，经过灭菌，杀死其中所有的微生物后才能使用。

（四）、实验方法 1、培养基的配制①．根据实验和研究对象，选择培养基，本实验着重配制下列培养基（见下表）：培养基牛肉膏蛋白胨琼脂培养基马铃薯琼脂培养基高氏一号琼脂培养基牛肉膏 3 克去皮马铃薯 200 克可溶性淀粉 20 克蛋白胨10 克葡萄糖/蔗糖 20 克 K 2HPO 4·3H 2O 0.5 克 NaCl 5 克琼脂 18 克 MgSO 4·7H 2O0.5 克琼脂18 克FeSO 4·7H 2O 0.01 克 NaCl 0.5 克 KNO 3 1.0 克琼脂18 克水 1000mL 1000mL 1000mL 组成成分pH7.2～7.46.5 7 适合于培养的微生物一般腐生细菌一般真菌一般放线菌②．称量：根据配制培养基总量，准确称取各成份于烧杯中。

③．配制：a.先从总量水中，取少量水溶解药品，遇不易溶药品，加热溶解。

b. 对易发生沉淀的药品，如 K2HPO4 与 MgSO4 会产生絮状沉淀，应分开溶解，最后加入培养基。

对非溶性药品如 CaCO3 等亦需最后加入。

c. 马铃薯去皮后称重，切成 1cm 3 左右的小块，加水煮沸 20～30 分钟，用四层纱布过滤后，取其清液供配制用。

d. 可溶性淀粉先用少量水搅匀，然后徐徐倒入煮沸的溶液中溶解。

实验五培养基的配制和灭菌

实验五培养基的配制和灭菌实验五培养基的配制和灭菌一、实验目的1.了解配制培养基的原理，并掌握配制培养基的一般方法和步骤。

2.学习常用培养基的配制、分装和灭菌的操作方法。

3.熟练掌握高压蒸汽灭菌锅的使用方法。

二、实验器材1.药品及试剂马铃薯，葡萄糖，琼脂，牛肉膏，蛋白胨，NaCl，无菌水2.仪器及其它试管、三角瓶、烧杯、玻棒、天平、药匙、高压蒸汽灭菌锅、棉花、旧报纸、麻绳、纱布、培养皿三、实验内容1.实验分组食科0901本 29人/班→7人/组，分4组2.培养基配方配方一：马铃薯培养基200ml→培养酵母菌用马铃薯水煮液 40g、葡萄糖 4 g、琼脂 4g、水 200ml、pH 自然马铃薯去皮装于烧杯中，进行煮沸，用四层纱布过滤于三角瓶中，再加糖和琼脂补水至200ml 121℃灭菌20min配方二：普通营养琼脂培养基150ml→培养大肠杆菌、枯草芽孢杆菌用蛋白胨 10g、牛肉膏 10g、氯化钠 5g、琼脂 20g分装于10支试管中（试管1/5体积装液量）121℃灭菌20min四、实验方法、步骤（一）试管、锥形瓶及培养皿清洗 1人/组（二）棉塞制做 1人/组（三）培养基制作 1人/组1、马铃薯培养基削皮→切片→称量→装于烧杯中煮沸→纱布过滤于三角瓶→加糖、琼脂融化→补无菌水至200ml2、普通营养琼脂培养基称量→熔化均一→分装（试管1/5体积装液量）（四）加棉塞培养基配制完毕后，在试管口或三角瓶口塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。

（五）试管与三角瓶包扎试管5个/扎用橡皮筋捆成一捆，三角瓶在棉塞外包扎旧报纸（学会活结打法），贴上标签，注明培养基名称、日期、组别。

（六）培养皿包扎 8套/包.组（七）灭菌锅的使用将包扎好的培养皿，装有培养基且包扎好的试管与三角瓶放入高压蒸汽灭菌锅内，121℃,20min高压蒸汽灭菌。

（八）摆斜面灭菌完毕，将试管培养基冷至50℃左右，将试管棉塞搁在玻棒（或木棍）上，搁成斜面，搁置的斜面长度以不超过试管总长度的一半为宜。

实验五%20培养基的制备、包扎

实验五培养基的制备、包扎一、实验教学目的与要求目的：1、明确培养基的配制原理。

2、掌握配制培养基的一般方法和步骤。

内容：1、牛肉膏蛋白胨培养基的配制。

2、SDAY培养基的配制。

二、实验原理培养基是供微生物生长、繁殖和代谢的营养基质。

培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子及水分等。

培养还应具有适宜的pH、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。

在液体培养基中加入0.5%-1.0%的琼脂配置为半固体培养基，加入1%-2%的琼脂配置为固体培养基。

琼脂是从石花菜等海藻中提取的多糖，是应用最广的凝固剂。

琼脂在96-100℃融化，46℃以下凝固。

培养基经灭菌后方可使用。

三、实验材料及用具1.试剂牛肉膏、蛋白胨、酵母浸出粉、葡萄糖、琼脂、链霉素、1M NaOH、1M HCl、NaCl、蒸馏水。

2.仪器及用具试管、三角瓶、培养皿、烧杯、量筒、玻璃棒、分液漏斗、天平、药匙、pH试纸、称量纸、棉花、纱布、线绳、橡胶管、报纸、铁架台、标签纸。

四、操作步骤（一）培养基配方：牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂20g、蒸馏水1L、pH 7.0～7.2。

SDAY培养基：葡萄糖40g、蛋白胨10g、酵母浸出粉10g、琼脂20g、蒸馏水1L。

（二）步骤：操作图示（1）称量按照培养基配方，准确称量各成份放于烧杯中。

对于不是粉状（如肉膏），应用烧杯称量。

（2）配调向烧杯中加入适量的水，搅拌，使其溶解（可加热助溶）。

如是配制固体培养基，在琼脂的熔化时，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。

待完全熔化后，补足所失水分。

如果配方中含有淀粉，先将淀粉用少量冷水调成糊状并在火上加热搅拌，然后加足水分及其他药品，待完全熔化后补足所失水分。

（3）调节pH值培养基溶解均匀并冷却至室温时用pH试纸测pH，然后根据要求加酸或碱（一般用1molHcl和1molNaOH），要缓慢少量且多加搅拌。

实验五产淀粉酶细菌的分离(一)培养基的制备及常用器皿的准备

实验五实验五产淀粉酶细菌的分离一产淀粉酶细菌的分离一培养基的制备及常用器皿的准备培养基的制备及常用器皿的准备河南工业大学微生物学实验室河南工业大学微生物学实验室1学会培养基的制备和常用器皿的准备方法2学会高压蒸汽灭菌及干热灭菌方法将样品制成菌悬液80水浴处理10分钟
综合性实验
实验五产淀粉酶细菌的分离（一）培养基的制备及常用器皿的准备
河南工业大学微生物学实验室
一、实验目的及要求
1、学会培养基的制备和常用器皿的准备方法 2、学会高压蒸汽灭菌及干热灭菌方法
二、实验原理
将样品制成菌悬液，80℃ 水
浴处理10分钟。
选择
将菌悬液适当稀释后，在淀粉平板上进行涂布分离培养；加入碘液显色后，挑取透明圈直径较大的菌落。
鉴别
电热鼓风干燥箱（干热灭菌用）
五、作业题
1、高压蒸汽灭菌和干热灭菌各适用于哪些物品？ 2、两种灭菌技术应注意哪些关键操作？ 3、培养皿等干热灭菌前包扎的目的？
4、培养皿桶1个。
5、1-2ml刻度吸管2支。 6、洗耳球1个、玻璃棒1支。 7、搪瓷量杯1个。 8、量筒1个。
纱布、棉花、棉绳、培养基、天平等在最后一排实验台
四、实验方法和步骤
1、营养琼脂培养基的配制称量1.2克可溶性淀粉。加少量水加热溶化，然后加入6.8克营养琼脂，加水至150毫升，煮沸后倒入250ml容量的三角瓶中，加棉塞灭菌。
四、实验方法和步骤
2、无菌水的制备（稀释用）
取 9ml 蒸馏水于试管（ 18×180mm）中，塞棉塞，报纸包扎后湿热灭菌。取 90ml 蒸馏水于 250ml 三角瓶中，塞棉塞，报纸包扎后湿热灭菌。
手提小型高压蒸汽灭菌
立式高压蒸汽灭菌

实验五培养基的制作及灭菌

实验五培养基的制作及灭菌实验目的：1.学习培养基的制作方法。

2.掌握培养基的灭菌技术。

实验步骤：1.准备所需材料和设备，包括琼脂、蒸馏水、酵母粉、葡萄糖、盐以及烧杯、量筒、试管等。

2.称取所需的琼脂，按照所需制作的培养基的浓度要求，将琼脂加入一个烧杯中。

3.加入适量的蒸馏水，并用玻璃转子搅拌均匀，直到琼脂完全溶解。

4.将琼脂溶液转移到一个大容器中，继续搅拌一段时间，以使溶液均匀充分。

5.在此过程中，可以将所需添加的其他成分进行称量，如酵母粉、葡萄糖和盐。

根据配方要求逐一加入琼脂溶液中。

6.继续用玻璃转子搅拌溶液，直到所有成分完全溶解。

7.将培养基溶液倒入装有文化管的试管中，每个试管约装满一半。

8.置于培养基外表面有菌或细菌孢子的地方，将试管口用针灼烧，使培养基杀菌。

9.将装有培养基溶液的试管加入至高温高压灭菌锅中，进行高温高压灭菌。

10.灭菌完成后，将试管从高温高压灭菌锅中取出，放置在室温下冷却。

11.等试管冷却至室温后，将试管翻转，使培养基均匀附着在试管内壁。

实验结果：制作好的培养基溶液应呈均匀透明的状态，无沉淀物和杂质。

实验注意事项：1.在称取琼脂时要小心，避免粉尘飞扬和吸入。

2.加入蒸馏水时要慢慢倒入，避免烧伤。

3.加入其他成分时要保持适当的温度，避免成分无法溶解。

4.灭菌时应注意安全，避免受烫伤。

5.使用高温高压灭菌锅时要严格按照使用说明操作，避免安全事故发生。

实验讨论：在制作培养基的过程中，要严格控制各种成分的比例，以确保培养基的浓度和配比符合要求。

另外，灭菌步骤也是非常重要的，只有有效灭菌才能确保培养基无菌。

培养基的制作与灭菌是微生物学实验中常用的操作，它是为了提供细胞生长所必需的营养物质和环境，并排除外界的其他微生物干扰。

通过制作培养基，可以为后续的微生物培养提供基础设施，为微生物的生物学研究提供必要的条件。

总结：本实验主要介绍了培养基的制作方法和灭菌技术。

通过制作培养基和灭菌步骤，可以为后续的微生物培养提供必要的条件，确保培养基无菌和符合要求。

实验室常用培养基的配制方法

实验室常用培养基的配制方法实验室中常用的培养基有很多种，包括通用培养基、选择性培养基、富集培养基等。

下面以常用的LB培养基和M9培养基为例，介绍它们的配制方法。

1. LB培养基（Luria-Bertani agar）LB培养基是一种通用培养基，适用于许多不同类型的细菌。

它由三种主要成分组成：蛋白胨、酵母提取物和氯化钠。

配方如下：-蛋白胨：10克-酵母提取物：5克-NaCl：10克-精制水：1000毫升步骤如下：1)在一个大容量烧杯中加入蛋白胨、酵母提取物和NaCl。

2)加入适量的精制水，搅拌溶解。

3) 将溶液移至一个继续器中，并用精制水补足至1000ml。

4)蓄满培养基的瓶子，盖上盖子，并使用自动压力灭菌器进行高压灭菌，或者将瓶子放入高压灭菌器中，将压力调至15磅（每平方英寸）。

2.M9培养基M9培养基是一种无机盐培养基，常用于细菌的生长和培养。

它的配方相对简单，由无机盐、葡萄糖和维生素B1组成。

配方如下：-Na2HPO4：6克-KH2PO4：3克-NaCl：0.5克-NH4Cl：1克-葡萄糖：0.4克-维生素B1：0.1克-精制水：1000毫升步骤如下：1)在一个大容量烧杯中加入Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和NH4Cl。

2)加入一部分的精制水，搅拌溶解。

3)加入葡萄糖和维生素B1，搅拌均匀。

4) 将溶液移至一个继续器中，并用精制水补足至1000ml。

5)蓄满培养基的瓶子，盖上盖子，并使用自动压力灭菌器进行高压灭菌，或者将瓶子放入高压灭菌器中，将压力调至15磅（每平方英寸）。

以上是LB培养基和M9培养基的配制方法的简要介绍。

当然，实验室中还有很多其他种类的培养基，它们的配制方法也各有不同，需要根据具体的实验目的和细菌类型进行调整。

在培养基配制过程中，应当注意严格按照配方比例配制，保持清洁卫生，避免污染，并注意高压灭菌的操作安全。

水处理生物学实验指导05培养基的制备及灭菌

实验五培养基的制备及灭菌本次实验可为下次实验作准备。

实验内容主要包括玻璃器皿的洗刷、包装和培养基的制备以及灭菌技术等。

在进行微生物学实验时，所用培养基及玻璃器皿等均须进行灭菌。

一、目的1．学会玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备工作。

2．掌握培养基配制和无菌水制备的方法。

3．学会高压蒸汽灭菌技术。

二、实验器材1．培养皿(又称平皿，直径90mm)、试管、吸管、锥形瓶、烧杯等。

2．纱布、棉花、报纸、牛皮纸。

3．pH试纸6—8.4(或pH电位计或氢离子浓度比色计)、洗液、10％HCL、10％NaOH。

4．牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水。

5．高压蒸气灭菌器、烘箱、冰箱、电炉等。

三、实验内容(一)玻璃器皿的洗刷与包装1．洗刷玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。

培养皿、试管、锥形瓶等可先用去污粉或肥皂洗刷，然后用自来水冲洗。

吸管则先用洗液浸泡、再用水冲洗。

洗刷干净的玻璃器皿应放在烘箱中烘干。

2．包装(1)培养皿由一底一盖组成一套，按实验所需的套数一起用牛皮纸包装。

(2)吸管应在吸端用铁丝塞入少许棉花，构成1一1.5cm长的棉塞，以防止细菌吸入口中，并避免将口中细菌吹入管内。

棉花要塞得松紧适宜，吸时既能通气，又不致使棉花滑入管内。

将塞好棉花的吸管的尖端，放在4—5cm宽的长纸条的一端，吸管与纸条约成45°交角，折叠包装纸包住尖端(图8—8)，用左手将吸管压紧，在桌面上向前搓转，纸条即螺旋式地包在管子外面，余下纸头折叠打结，按照实验需要，可单支包装或多支包装，以备灭菌。

培养皿和吸管也有放在特制容器内进行灭菌的。

(3)试管和锥形瓶等的管口或瓶口均需用棉花塞堵塞。

做好的棉塞，四周应紧贴管壁和瓶口，不留缝隙，以防空气中微生物会沿棉塞皱折浸入。

棉塞不宜过松或过紧，以手提棉塞，管、瓶不掉下为准。

棉塞的2／3应在管内或瓶口内，上端露出少许，以便拔塞。

棉塞的大小及形状应如图8—9所示。

在制作培养基的过程中，如不慎将棉塞沾上培养基时，应用清洁棉花重做。

实训五 MS培养基的配制与灭菌

三、边示范边讲解实验方法和步骤
1、计算并填写培养基成分单
计算公式：∨母液﹦∨配制÷母液倍数
∨激素﹦∨配制×培养基中所要求的激素浓度÷激素母液浓度
2.每组取500ml的烧杯一只，加300ml蒸馏水，用天平称4g琼脂放入蒸馏水中，在电炉上加热溶解。称15g蔗糖放入溶解的琼脂中。
3.按配方取出各种母液，放入到溶解后的琼脂和蔗糖溶液中，用玻璃棒搅动混合，并加蒸馏水定容至500ml。
4.用1mol/L的NaOH或1mol/LHCL将PH值调至5.8，可用PH精密试纸或酸度计测定。
5.用培养基分装用具将500ml的培养基分注于15个所选用的培养瓶中。
6.用封口膜、棉塞或其它封口物包扎瓶口，并做好标记。
7.把分装好的培养基及所需灭菌的各种用具、蒸馏水等，放入高压灭菌锅的消毒桶内，将外层锅内加水至水位线。盖好锅盖，上好螺丝，接通电源升温。待锅内温度达100。C（0.05kgf/cm2或0.005MPa）左右时，打开排气阀排净锅内冷空气，然后关闭排气阀，继续加热至温度达到121。C（1.05kgf/cm2或0.103MPa）时，维持20~30min即可切断电源，让锅内气压自然下降，当压力降到零点后，打开排气阀，排出剩余蒸汽，再打开锅盖取出培养基及灭菌物品。
名称
规格型号
单位
数量
配制MS培养基所需的母液
ml
各1-100
蒸馏水
二次蒸馏
ml
6000
琼脂
克50Βιβλιοθήκη 蔗糖克200
标签
张
3
记号笔
只
1
备注
8.培养基及灭菌物品在室温下自然冷却后，存放于阴凉干燥洁净处待用。
四、总结高压蒸汽灭菌的原理和一般操作步骤实验，布置作业

培养基的配制与灭菌实验报告

培养基的配制与灭菌实验报告一、实验目的1.掌握培养基的配制方法；2.掌握培养基的灭菌方法；3.了解常用的培养基配方和用途。

二、实验仪器和试剂仪器：称量器、自动调pH计、恒温培养箱、高压灭菌器等。

试剂：各种常用的培养基配方、蒸馏水、紫外灯、酒精等。

三、实验步骤1.准备工作首先准备好需要的试剂和仪器，经过试剂和仪器的消毒处理后，将其放置在试验台上，以备使用。

2.培养基的配制培养基的配制是实验的关键步骤之一。

在实验过程中，我们使用锥形试管来制备试验的培养基。

首先需要称量出所需的重量并将其加到试管中，之后按照规定的比例加入蒸馏水、糖和其他的试剂，搅拌均匀。

最后使用自动调pH计来调节培养基的pH，确保在制备培养基过程中能够准确地保持pH值在标准范围内。

3.培养基的灭菌在实验中，我们使用高压灭菌器对制备好的培养基进行灭菌处理，以确保在培养试验过程中，培养基中不会出现杂菌和异物的干扰。

在灭菌过程中，我们需要将培养基放入高压灭菌器中，通过高压和高温来杀死细菌和其他微生物。

同时，也需要不断监测培养基的温度和压力，确保灭菌过程的正常进行。

四、实验结果根据实验的结果可以发现，在正确地配制和灭菌培养基的情况下，我们可以得到符合规定标准的培养基样品。

通过实验，我们也可以更加深入地理解常见的培养基配方和用途，为今后的实验研究提供更加可靠和高质量的实验基础。

五、实验思考在实验过程中，我们还需要注意以下几个问题：1.实验时需要仔细操作，避免粗心大意和疏忽带来的不好的影响。

2.在配制和灭菌时，需要严格遵守规定的操作流程和步骤，以免影响前后实验结果的统一性和准确性。

3.值得注意的是，在配制和灭菌过程中，需要注意卫生和消毒处理，以避免细菌和其他微生物的污染和繁殖。

4.在实验过程中，还需要对实验结果进行仔细的分析和讲解，以便更好的理解和掌握实验原理和方法。

综上所述，在实验培养基的配制和灭菌实验中，需要做好多方面的考虑和准备，以确保实验能够顺利进行，并能获得稳定、高质量和高准确度的结果。

培养基的配制

实验五微生物培养基的配制和灭菌培养基是将微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的各种营养基质。

培养基为微生物的生长提供营养物质和生存空间。

它具有微生物正常生活所需的各种养料和适宜的环境条件；（1）适当组分和比例的营养物质；（2）适宜的pH值；（3）合适的渗透压；（4）保持无菌状态。

所以培养基是培养微生物所必需的最主要材料。

培养基的配制是微生物学工作者的主要技术操作之一。

培养基的种类：根据培养基的组成成分，可将培养基分为三类：合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。

半合成培养基：由一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。

天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成的。

从培养基的物理状态来分：液体培养基：不加凝固剂的液态状培养基。

固体培养基：在液体培养基中加入2％左右的凝固剂的固体状培养基或固体状农副产品培养基。

半固体培养基：在液体培养基中加入0.2％-0.5％凝固剂而成的半固体状培养基。

微生物最常用的凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。

它不是一种营养物质，只能被极少数种类的细菌分解利用。

琼脂是从海藻中（主要是石花菜）提取而制成的。

是一种多糖类化合物，主要成分是复杂的多糖硫酸酯钙盐，琼脂是一种可逆性胶体，在常规浓度下加热到96C以上即成溶胶状态，融化的琼脂，当温度下降到42℃以下，又凝固为固体。

一、目的要求l. 了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。

2. 了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。

3. 熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。

二、实验材料1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O等。

2. 高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀菌灯。

3. 其它：天平、牛角匙、电炉、1N HCl、1N NaOH、pH试纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养血、吸管、各种包装纸防水纸、绳索、棉花、标签等。

实验五--培养基的制备与灭菌

实验五--培养基的制备与灭菌(总4页)--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小--实验五培养基的制备与灭菌一、目的要求1.掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。

2.掌握培养基的配置方法。

3.掌握干热灭菌和高压蒸汽灭菌的操作方法。

二、基本原理正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础。

由于微生物种类及代谢类型的多样性．因而用于培养微生物的培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各有差异。

但一般培养基的配制程序却大致相同．例如器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本环节大致相同。

本实验配置牛肉膏蛋白胨培养基、配方如下：牛肉膏蛋白胨 gNaCl g水 1000mlpH ~三、实验材料1.药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/LHCL、NaOH。

2.仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿等。

3.其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。

（一）玻璃器皿的洗涤和包装1．玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。

将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。

移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。

洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。

2．灭菌前玻璃器皿的包装（1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。

包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。

（2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并图8-1 移液管的包扎防止菌液等吸入口中。

塞入此小段棉花应距管口约左右，棉花自身长度约1~。

塞棉花时．可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。

实验五培养基的制作以及灭菌

实验五培养基的制作以及灭菌生物科学贺冰冰 040012010025 周二 9、0 节一、实验目的：1 学习培养基的配制原理和一般方法步骤2 掌握高压蒸汽灭菌的原理方法3 了解干热灭菌的原理方法二、实验原理：1 培养基的原理培养基（medium）是用人工的办法将多种营养物质按微生物生长代谢的需要配制成的一种营养基质。

由于微生物种类繁多，对营养物质的要求各异，加之实验和研究的目的不同，所以培养基在组成成分上也各有差异。

但是，不同种类或不同组成的培养基中，均应含有满足微生物生长发育且比例合适的水分、碳源、氮源、无机盐、生长因素以及某些特需的微量元素等。

配制培养基时不仅需要考虑满足这些营养成分的需求，而且应该注意各营养成分之问的协调。

按照配制培养基的营养物质来源，可将培养基分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基三类.按培养基外观的物理状态可将培养基分成三类，即液体培养基、固体培养基和半固体培养基.按照培养基的功能和用途，可将其分为基础培养基、加富培养基、选择培养基、鉴别培养基等.牛肉膏蛋白胨培养基是细菌学研究最常用的天然培养基。

在配方中不加琼脂时称之为肉汤培养基。

加入琼脂配制的固体培养基一般用于细菌的分离、培养和计数等.2 灭菌的原理（1) 干热灭菌用干燥热空气杀死微生物的方法称为干热灭菌。

通常将灭菌物品置于鼓风干燥箱内，在160℃～170℃加热1～2h。

灭菌时间可根据灭菌物品性质与体积作适当调整，以达到灭菌日的。

玻璃器皿（如吸管、培养皿等）、金属用具等凡不适于用其他方法灭菌而又能耐高温的物品都可用此法灭菌；但是，培养基、橡胶制品、塑料制品等不能使用干热灭菌。

注意事项：（1）灭菌的玻璃器皿切不可有水。

有水的玻璃器皿在干热灭菌中容易炸裂。

（2）灭菌物品不能堆得太满、太紧，以免影响温度均匀上升。

（3）灭菌物品不能直接放在电烘箱底板上。

以防止包装纸或棉花被烤焦。

（4）灭菌温度恒定在160～170℃为宜。

温度超过180℃棉花、报纸会烧焦甚至燃烧。

实验五微生培养基配制与灭菌

无菌室无菌柜超净工作台
1、无菌室
（1）无菌室的结构：更衣间、缓冲间、操作间（2）无菌室的消毒和防污染每日（使用前）紫外线照射（1~2小时）. 每周用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时）. 每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒。
2、超净工作台
超净台的使用与保养: （1）风速保持在0.32-0.48米/秒; （2）使用前开启紫外灯照射30分钟以上; （3）让超净台预工作10－15分钟; （4）使用完毕后，用70%酒精将台面和台
培养基和玻璃器材的灭菌方法
培养基和玻璃器材的灭菌方法
紫外线灭菌法：一般30W灯管，9m3空间，距地面2m每次打开紫外线照射0.5h，就使室内空气灭菌。若照射紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂，可增强灭菌效果。紫外线虽有较强的杀菌力，但穿透力弱，即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫外线滤除，因此只适用于空气及表面杀菌。
煮沸消毒法
灼烧灭菌
100℃、5~6min
干热灭菌
巴氏消毒法
接种环、接种针等金属用具
方法
70~75℃、30min
耐高温需保持干燥的物品
化学药剂 80℃、15min
160～170℃ 1-2小时
高压蒸汽灭菌
紫外线
培养基，
酒精、氯气、石炭酸等
100KPa、 121℃、15～30min
湿热灭菌的优点
湿热灭菌法菌体吸收水分蛋白质较易凝固湿热的穿透力比干热大，水的传热能力比许多非导体的
注意事项 – 生物性废弃物
生物性废弃物
放至正确位置以便灭菌
二、微生物的接种与分离技术
（一）、接种
将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。

微生物实验05培养基的制备和消毒灭菌资料.

实验五、培养基的制备和消毒灭菌
一、培养基的制备：（一）目的要求：
➢ 学习掌握配置培养基的一般方法、步骤和原理。
（二）原理：
培养基是按照微生物生长繁殖或积累代谢产物所需的各种营养物质，用人工方法配制而成的一种基质。它包括碳源、氮源、生长因子、无机盐和水等营养要素。
由于不同微生物细胞组成不同，因而所需营养基质不同，为了分离、培养和鉴定不同的微生物，必须根据其需要，配制合适的培养基。
2.器材：
试管、烧杯、三角瓶、量筒、玻璃棒、铁架台、漏斗、天平、牛角匙、高压锅、微波炉、 pH试纸（5.5-9.0）、棉花、纱布、线绳、聚丙烯袋等。
（四）步骤：
斜面培养基制作：
➢ 计算称量过滤（可省略）
制作）包扎
无菌检查
加热溶化分装灭菌
调PH 加塞（附棉塞摆斜面
1.称量按照培养基配方，准确称量各成份放于
培养基的制备原则：
1.根据不同微生物的营养需要配置不同的培养基。
细菌牛肉膏蛋白胨放线菌高氏1号真菌查氏、马丁氏各类M 土豆葡萄糖
2.调配好培养基营养成分的浓度和比例。 3.控制微生物的培养条件（渗透压、pH、氧化还原
电位等）
（三）器材：
1.药品和试剂：
葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨、可溶性淀粉、琼脂、 NaCl、K2HPO4、 KH2PO4、 KNO3、MgSO4、 FeSO4、孟加拉红、1mol/L NaOH、
二、消毒灭菌：
➢ 物理法：加热、过滤、照射
加热
灼烧干热湿热
高压间歇煮沸
➢ 化学法：化学药品
（一）目的要求：
1.了解干热灭菌、高压蒸汽灭菌和紫外线灭菌的原理及应用范围。
2.掌握干热灭菌、高压蒸汽灭菌和紫外线灭菌的技术。

实验五 RPMI-1640的配制

实验六 RPMI-1640的配制
不完全RPMI-1640培养液配方
RPMI-1640干粉 1袋(1,000mL量)
L-谷氨酰胺
NaHCO3溶液
0.29g
2.2g
HEPEs
去离子水
2.39g
1,000mL
溶解，过滤除菌，分装，-20℃保存。
合成培养基的配制
1、将RPMI-1640粉袋竖立轻弹，使袋中干粉下沉，剪开袋口，将干粉倒入3,000mL三角瓶中； 2、加入1,000mL去离子水，快速旋转摇动三角瓶，或用磁力搅拌器搅拌一定时间使干粉培养基充分溶解；
3、称取3.7g NaHCO3、2.39g HEPEs加入三角瓶，快
速旋转摇动充分溶解；
4、在超净台中安装好灭菌过滤器，对溶液进行滤过
除菌，分装入250mL或500mL瓶中，瓶口用胶塞塞紧；
合成培养基的配制
5、用塑料膜将瓶口封好，加皮筋扎紧，4℃冰箱或
-20℃贮存备用，此为不完全RPMI-1640液。
6、完全RPMI-1640培Fra bibliotek液的配制：不完全RPMI-1640
培养液占80％~90％，小牛血清占10％~20％。按1％
体积分别加入双抗贮存液(青霉素+链霉素)，使青霉素和链霉素的终浓度分别为100U／mL。

简述配制培养基的基本步骤及注意事项

简述配制培养基的基本步骤及注意事项配制培养基是在实验室中进行细胞培养和微生物培养的重要步骤。

正确的配制培养基对于细胞和微生物的生长和繁殖至关重要。

下面将简述配制培养基的基本步骤及注意事项。

一、准备培养基所需的原料和试剂配制培养基所需的原料和试剂包括蛋白胨、酵母提取物、葡萄糖、盐酸、硝酸钠等。

在备用的容器中准备好这些原料和试剂，确保其纯度和质量。

二、称量原料和试剂按照所需的培养基配方，准确称量所需的原料和试剂。

注意要使用准确的称量工具，并遵循准确的称量方法，以确保配制的培养基的准确性和一致性。

三、溶解原料和试剂将称量好的原料和试剂逐一加入适量的蒸馏水中，并充分搅拌溶解。

溶解过程中要注意控制溶解温度和时间，避免结晶或沉淀的产生。

四、调节pH值根据培养基配方的要求，使用盐酸或硝酸钠等酸碱溶液逐渐调节培养基的pH值。

调节过程中要注意使用准确的pH计，并逐渐添加酸碱溶液，以避免pH值过大或过小。

五、加入其他添加物根据具体需要，可以添加抗生素、染料或其他添加物来增强培养基的特定功能。

添加时要注意添加的量不能过多，以避免对细胞或微生物的生长产生不良影响。

六、灭菌配制好的培养基需要进行灭菌处理，以杀死其中可能存在的细菌、真菌或其他微生物。

常用的灭菌方法有高温高压灭菌和过滤灭菌。

要选择适合的灭菌方法，并严格按照操作规程进行灭菌处理。

七、保存和使用灭菌后的培养基应尽快冷却并储存在无菌条件下。

使用时要注意避免污染，使用无菌的培养皿或试管，并采取无菌操作，以确保培养基的纯净度。

在配制培养基的过程中，我们需要注意以下几点：1. 严格按照培养基配方的要求进行操作，避免原料和试剂的误用或误量。

2. 使用纯净的蒸馏水和高质量的原料和试剂，以确保培养基的质量和纯度。

3. 在配制过程中要注意溶解的充分和均匀，避免结晶或沉淀的产生。

4. 调节pH值时要小心操作，逐渐添加酸碱溶液，以避免pH值的剧烈变化。

5. 添加其他添加物时要谨慎，避免添加过多或添加不当。