液相色谱SPE固相萃取小柱
固相萃取-高效液相色谱法测定豆豉制品中苯甲酸钠和山梨酸钾含量
分析检测固相萃取-高效液相色谱法测定豆豉制品中苯甲酸钠和山梨酸钾含量单晓静（广东美味鲜调味食品有限公司，广东中山 528437）摘 要：建立了固相萃取-高效液相色谱法测定豆豉制品中苯甲酸钠、山梨酸钾的方法。
样品经提取后，经C18 SPE固相萃取小柱净化，C18色谱柱进行分离，DAD检测器进行信号检测。
结果表明该方法检出限低，目标物浓度在1～50 mg·L-1信号强度和浓度呈良好的线性关系，并具有良好的精密度与准确度，可作为检测豆豉制品中苯甲酸钠、山梨酸钾的有效定量方法。
关键词：固相萃取；高效液相色谱；豆豉制品；苯甲酸钠；山梨酸钾Determination of Sodium Benzoate and Potassium Sorbatein Soybean Products by Solid Phase Extraction-HighPerformance Liquid ChromatographySHAN Xiaojing(Guangdong Meiweixian Flavoring Foods Co., Ltd., Zhongshan 528437, China) Abstract: A method was developed for the determination of sodium benzoate and potassium sorbate in tempeh products by solid-phase extraction-high performance liquid chromatography. The extracted samples was purified by C18 SPE solid phase extraction column, separated by C18 chromatographic column and detected by DAD detector. The method has low detection limits and a good linear relationship when the target in the range of 1～50 mg·L-1, the method also has good precision and accuracy. It can be used as an effective quantitative method to measure sodium benzoate and potassium sorbate in soybean products.Keywords: solid phase extraction; high performance liquid chromatography; soybean products; sodium benzoate; potassium sorbate豆豉制品营养丰富，富含优质蛋白质、不饱和脂肪酸等营养物质，受到众多消费者的青睐[1]。
固相萃取SPE
固相萃取SPE一、概念和原理固相萃取（Solid-Phase Extraction，简称SPE）是一项从八十年代中期开始发展起来的样品前处理技术。
主要用于液体中的半挥发性、难挥发性物质的检测基于液-固相色谱理论，采用选择性吸附、选择性洗脱的方式对样品进行富集、分离、纯化，是一种包括液相和固相的物理萃取过程，利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物与干扰化合物分离，达到分离和富集目标化合物的目的。
SPE是利用选择性吸附与选择性洗脱的液相色谱法分离原理。
其分离机理是利用杂质或目标化合物与样品技术基体溶剂和吸附剂之间亲和力的相对大小。
二、SPE的模式及原理1、正相SPE采用比样品本身更强极性的溶剂洗脱吸附的分析物质①吸附剂（固定相）：极性键合相和极性吸附剂，如硅胶键合－NH2、－CN，-Diol（二醇基）silica、florisil、(A-,N-,B-)alumina、硅藻土等．②原理：分析物的极性官能团与吸附剂表面的极性官能团之间的相互作用。
③作用机理：极性-极性、偶极-偶极、偶极-诱导偶极、氢键，π-π键等。
④流动相：非极性、中等极性⑤固定相：极性。
⑥分析物质：极性、中等极性、非极性⑦应用：从非极性溶剂样品中萃取极性化合物。
⑧常用正相固相萃取柱极性官能团键合硅胶-CN，-NH2，-Diol极性吸附物质ProElut TM-Silica，ProElutTM-Florisi ProElutTM-Alumina2、反相SPE用非极性溶剂解吸吸附在固定相中的目标物质。
①吸附剂（固定相）：非极性或弱极性，如硅胶键合C18,C8, C4,C2,-苯基等。
②分析物中的CH键+ 硅胶表面官能团→吸附→极性溶液中的弱有机分析物→保留在SPE。
③作用机理：非极性-非极性相互作用，如范德华力或色散力。
④流动相：极性（水溶液）或中等极性⑤固定相：非极性⑥分离对象：中等到非极性物质⑦应用：强极性的溶剂中（如水样）萃取是非极性或弱极性的化合物。
抗氧化剂检测：植物油的前处理方案
抗氧化剂作为食品添加剂可以帮助防止食品变质，但摄入过量会对人体有害，因此对抗氧化剂的检测非常重要。
最近小编收到反馈，按照《食品安全国家标准食品中9种抗氧化剂的测定》第一法高效液相色谱法的前处理操作，9种抗氧化剂的回收率都较差，因此，小编进行了一系列的优化，下面小编就和大家分享一下优化的过程，顺便给大家讲述一下，使用SPE进行前处理，回收率不好时的一些优化步骤。
一、固相萃取小柱的选择和分布收集在国标GB 5009.32-2016中，采用的是C18固相萃取柱，而小编想选择另一种小柱和C18进行比较，查阅资料后发现PSD小柱和C18相似，但又具有一些优点，PSD具有疏水的表面，属于非极性的固相萃取材料，由于PSD的苯环的电子云能够与目标化合物的π键作用，使得PSD 的吸附能力比C18反相吸附剂更强。
与反相硅胶吸附剂比较，聚合物填料在耐酸碱方面性能要好很多，通常在pH1~14的范围都是稳定的。
另外由于PSD没有键合硅胶存在的硅羟基，所以无需考虑硅羟基对萃取可能造成的影响。
因此选择了PSD和C18一起实验进行比较。
在SPE操作过程中，分布收集是一种非常实用的实验技巧，分布收集就是通过收集上样液、淋洗液、洗脱液甚至进行二次洗脱，并上机分析，从而判断目标化合物具体损失的环节，明确实验步骤中具体需要优化的环节。
根据以上讲述，确定实验方案。
小编进行了一次实验，得出了实验数据。
（1）基质植物油准确称取混合均匀的试样1g（精确至0.01 g）于50mL离心管中，加标（1000ppm，100ul），加入5mL乙腈饱和的正己烷溶液溶解样品，涡旋1min，静置10min，用5mL正己烷饱和的乙腈溶液涡旋提取2min，3000r/min离心5min，收集乙腈层于另一50mL离心管中，再重复使用5mL正己烷饱和的乙腈溶液提取2次，合并3次提取液，待上样。
（实验过程记得避光操作）（2）净化小柱：SBEQ-CA0858 CNWBOND HC-C18 SPE 小柱2g/10ml，SBEQ-CA3554 CNW Poly-Sery PSD SPE 小柱500mg/6ml。
固相萃取技术固相萃取理论
固相萃取技术固相萃取（Solid Phase Extraction，简称SPE）技术，发展于上世纪70年代，由于其具有高效、可靠、消耗试剂少等优点，在许多领域取代了传统的液－液萃取而成为样品前处理的有效手段。
一些传统的介绍SPE的书籍将其归于一个液相色谱的原理，这其实是引起使用不当的主要源由之一。
把SPE小柱看作一根液相色谱柱，不如把它看成单纯的萃取剂更合适，因为：液相色谱的重点在于分离，而SPE的重点在于萃取。
固相萃取技术在样品处理中的作用分两种：一是净化，二是富集,这两种作用可能同时存在。
固体萃取和液－液萃取相比，其长处在于方便和消耗试剂少，短处在于批次间的重复性难以保证。
出现这种情况的原因在于：液体试剂的重复性好，只要其纯度可靠，不同年代的产品的物理化学性质都是可靠的。
而固体萃取剂就算保证了纯度外，还存在着颗粒度的差异，外形的差异等液体试剂不存在的且难以衡量的因素，不同年代不同批号的萃取性质可能会有较大的区别。
从理论上和厂家宣传来看，固相萃取应该在色谱分析的前处理上得到很好的应用：有机溶剂用得很少，可批量处理样品，既可富集，又能除杂质，给人印象是前处理的革命性进步。
然而现实情况，起码在国内，虽然推广了多年，实际应用还是相当有限。
SPE应用得不广，与我们的使用方式和期望有关，也与它本身的局限有关。
对于供应商来说，从经济利益出发，向来都是忽略固相萃取的局限与不足。
固相萃取可以作为前处理手段的一个很好补充，但是在使用时，一定要清醒知道到它的优点和缺点，注意因地制宜，扬长避短。
固相萃取理论反相固相萃取反相分离包括一个极性或中等极性的样品基质（流动相）和一个非极性的固定相。
分析物通常是中等极性到非极性。
几种SPE材料属于反相类，如烷基，或芳香基键合的硅胶（LC-18，ENVI-18，LC-8，ENVI-8，LC-4，和LC-Ph）。
在这里，纯硅胶（一般孔径为60—40mm大小的颗粒）表面的亲水性硅醇基通过硅烷化学反应，被含有疏水性的烷基或芳香基取代了。
氧化铝固相萃取小柱在苦参生物碱含量测定中的应用
氧化铝固相萃取小柱在苦参生物碱含量测定中的应用摘要该文使用中性氧化铝Cleanert Alumina-N-SPE小柱（0.5 g/6 mL），洗脱剂为三氯甲烷-甲醇（7∶3）5 mL，代替氧化铝开放柱（100～200目，5 g，内径1 cm），依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇（7∶3）各20 mL进行洗脱对苦参药材供试液进行处理，该方法优化洗脱溶剂使用种类和数量，并优化了苦参药材中苦参碱和氧化苦参碱含量测定的色谱条件，将2010年版《中国药典》中流动相条件乙腈-无水乙醇-3%磷酸溶液（80∶10∶10）优化为乙腈-无水乙醇-3%磷酸溶液（84∶6∶10）；简化了2010年版《中国药典》规定苦参药材供试液的前处理，缩短了样品处理时间，减少了洗脱溶剂，结果更为准确可靠，适合苦参药材中含量的测定，提高苦参药材中苦参生物碱含量测定的工作效率。
关键词苦参；固相萃取柱；方法优化苦参为常用中药，来源于豆科植物苦参Sophora flavescens Ait.的干燥根，具有清热燥湿、杀虫利尿之功效。
苦参含有生物碱类、黄酮类等多种化学成分，其中生物碱类中的苦参碱（matrine）、氧化苦参碱（oxymatrine）是2010年版《中国药典》规定的苦参药材质量控制成分。
文献报道苦参生物碱的含量测定方法中，大多参照2010年版《中国药典》方法[1-2]，部分用酸碱处理和液液萃取的方法[3-4]，也有直接提取液进样检测的报道[5-6]，但后者样液杂质多，影响色谱柱的寿命。
固相萃取（SPE）是20世纪80年代发展起来的一项样品萃取技术。
已经广泛应用于药品、代谢物、食品成分检测和环境监测等方面，但在药典中的中药样品前处理应用尚不够普及[7-10]。
2010年版《中国药典》记载的苦参含量测定过程中采用开放的中性氧化铝萃取柱进行样品前处理，洗脱时间长，洗脱剂用量多，难以满足生产实践及科学研究中大量苦参样品的含量测定。
本实验利用SPE 柱代替中性氧化铝开放柱，旨在除去药材中的部分杂质以保护色谱柱的使用寿命；相比药典记载的中性氧化铝柱，SPE柱简化苦参药材前处理过程，提高工作效率。
固相萃取小柱操作方法
固相萃取小柱操作方法固相萃取（Solid-Phase Extraction，SPE）是一种用于样品前处理和分离的常见技术。
固相萃取小柱（SPE小柱）是固相萃取的一种形式，它通常由液相进样和固相填料组成。
本文将详细介绍SPE小柱的操作方法。
1. 选择适当的固相填料在使用SPE小柱进行分离前，需要先选择适合特定应用的固相填料。
固相填料的选择应该考虑到样品的性质、目标分析物的特性以及所需的分离效果。
根据目标分析物的特性和样品基质的复杂性，可以选择不同类型的固相填料，如正相、反相、离子交换、固相反萃取等。
2. 准备固相小柱首先，选择适合样品量的SPE小柱，并装入固相填料。
一般情况下，固相填料的用量应为小柱的2-4倍。
将填料固定在小柱内，可以使用以填料为基础的底部阀门或其他装置来固定填料。
3. 洗涤固相小柱在进行样品固相萃取之前，需要对小柱进行洗涤以去除残留物。
首先，将洗涤溶液通过小柱底部加入小柱中，对填料进行膨胀和湿润。
然后，开启小柱底部的阀门，通过引力或气压将洗涤溶液迅速从小柱中排出，以去除可能存在的杂质。
通常情况下，常用的洗涤溶液包括甲醇、乙醇、醋酸、水和酸碱溶液。
4. 进样操作样品的进样量应该根据分析物的浓度和样品基质的复杂程度进行确定。
进样时，可以使用注射器或其他适当的装置将样品溶液缓慢地加入小柱中。
进样完成后，关闭小柱底部的阀门，使样品停留在填料上。
5. 洗脱分离物洗脱是SPE小柱中最关键的步骤之一，其目的是从样品基质中分离出目标分析物。
根据目标分析物的特性，选择合适的洗脱溶液。
如果是正相SPE小柱，一般使用有机溶剂（如甲醇、乙醇）作为洗脱溶液；如果是反相SPE小柱，则通常使用水作为洗脱溶液。
洗脱溶液通过小柱时，目标分析物会与洗脱溶液中的溶剂相互作用，从而被洗脱出来。
为了保证洗脱效果，通常用2-3倍溶剂体积进行洗脱。
6. 干燥小柱洗脱完成后，需要将小柱中的溶剂蒸发掉。
这可以通过利用负压或氮气吹扫的方式进行。
固相萃取技术
在2003版的“食品卫生检测方法”标准系列中，有一个较大的改动就是很多项目，尤其是农药项目的前处理普遍使用了固相萃取技术（详见表1 ）。
现针对这一技术的原理、使用和误区进行探讨。
一．固相萃取技术简介固相萃取（Solid Phase Extraction，简称SPE）技术，发展于上世纪70年代，由于其具有高效、可靠、消耗试剂少等优点，在许多领域取代了传统的液－液萃取而成为样品前处理的有效手段。
一些传统的介绍SPE的书籍将其归于一个液相色谱的原理，这其实是引起使用不当的主要源由之一。
把SPE小柱看作一根液相色谱柱，不如把它看成单纯的萃取剂更合适，因为：液相色谱的重点在于分离，而SPE的重点在于萃取。
固相萃取技术在样品处理中的作用分两种：一是净化，二是富集,这两种作用可能同时存在。
固体萃取和液－液萃取相比，其长处在于方便和消耗试剂少，短处在于批次间的重复性难以保证。
出现这种情况的原因在于：液体试剂的重复性好，只要其纯度可靠，不同年代的产品的物理化学性质都是可靠的。
而固体萃取剂就算保证了纯度外，还存在着颗粒度的差异，外形的差异等液体试剂不存在的且难以衡量的因素，不同年代不同批号的萃取性质可能会有较大的区别。
从理论上和厂家宣传来看，固相萃取应该在色谱分析的前处理上得到很好的应用：有机溶剂用得很少，可批量处理样品，既可富集，又能除杂质，给人印象是前处理的革命性进步。
然而现实情况，起码在国内，虽然推广了多年，实际应用还是相当有限。
SPE应用得不广，与我们的使用方式和期望有关，也与它本身的局限有关。
对于供应商来说，从经济利益出发，向来都是忽略固相萃取的局限与不足。
固相萃取可以作为前处理手段的一个很好补充，但是在使用时，一定要清醒知道到它的优点和缺点，注意因地制宜，扬长避短。
二、固相萃取的应用优势在什么项目的前处理适合使用固相萃取技术，即用固相萃取会比普通的溶剂萃取更理想，个人认为有以下几种情况：（一）水中有机物的前处理。
SPE
SPE̶̶HPLC法同时测定水产品中四种抗生素残留的研究SPE目的：为快速、简便、灵敏的检测水产品中土霉素、四环素、金霉素、氯霉素残留，建立了固相萃取（SPE）－高效液相色谱（HPLC）分析法。
方法：样品高氯酸沉淀蛋白质，超声波提取，固相萃取，高效液相色谱法同时测定4种抗生素。
固相萃取小柱为ZORBAXSPE C18 Cart，洗脱液为50%甲醇水；色谱柱为SUPELCO Discovery C185μm250×4.6mm，流动相为0.01mol/L磷酸二氢钠+0.001mol/L EDTA:甲醇=60:40（V／V，pH=2.0），流速为0.8ml/min，检测波长为268nm。
结果:本方法的最低检出浓度分别为:土霉素（0.018 mg/kg）、四环素（0.025mg/kg）、金霉素（0.043mg/kg）、氯霉素（0.010mg/kg）、标准曲线线性良好，其回归方程及相关系数r分别为土霉素：Υ=56.3215x-0.9004，r=0.9999；四环素：Y=42.8345x-1.1484，r=0.9999；金霉素：Y=23.0097x-0.9630，r=0.9999；氯霉素：Y=38.8332x+0.1655，r=0.9999，回收率在93%～101%之间，相对标准偏差小于1.9%。
结论:以超声波萃取，经固相柱净化、用二极管阵列检测器是一种快速、灵敏、简便的测定水产品中抗生素残留的高效液相色谱方法。
随着我国养殖业的发展，越来越多的抗生素被应用于渔业生产中，这些药物的使用几乎贯穿养殖的全过程，由于养殖户不遵守休药期规定及未正确使用药物，造成在水产品中的高水平残留。
人长期摄入含抗生素残留的水产品后，药物不断在体内蓄积，当浓度达到一定量后，就会对人体产生毒性作用，四环素类药物的毒性反应主要表现为对胃、肠、肝脏的损害及牙齿的染色等。
还会造成过敏反应，二重感染，致畸胎作用。
而氯霉素有严重的副作用，它能抑制人体骨髓造血功能而引起再生障碍性贫血和粒状白细胞缺乏症等疾病，对人类的健康构成潜在的危害。
SPE
SPE定义SPE，固相萃取( Solid Phase Extraction,简称SPE)是1 种用途广泛而且越来越受欢迎的样品前处理技术。
SPE 是利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附, 与样品的基体和干扰化合物分离, 然后再用洗脱液洗脱或加热解吸附, 达到分离和富集目标化合物的目的。
与传统的液液萃取法相比较可以提高分析物的回收率，更有效的将分析物与干扰组分分离，减少样品预处理过程，操作简单、省时、省力。
广泛的应用在医药、食品、环境、商检、化工等领域。
因其具有安全、回收率高, 重现性好、操作简便、快速、应用范围广、易实现自动化操作[等特点, 从而显示出良好的发展前景, 在相关领域的应用越来越多[。
从1978 年美国Waters 公司首先将一次性SPE 商品柱投放到市场以来,据不完全统计, SPE 商品柱一直以每年10%的增长速度。
SPE装置SPE 装置一般由柱管、烧结垫, 固定相3 部分组成,其中固定相是SPE 柱中最重要的部分。
最常见的固定相是键合的硅胶材料, 也有很多非硅胶基的固定相被广泛应用。
工作原理固相萃取是一个包括液相和固相的物理萃取过程,主要适用于水中组分的处理。
吸附剂是固相,而液相是萃取过程中的水样或解析过程的有机溶剂。
当水样通过装有合适吸附剂的SPE 柱时,其中某些痕量待测物质被保留在固定相当中,然后再用少量的选择性溶剂浏兑,因此, SpE 是同时进行萃取和浓缩的有效方法。
由于其工作原理、固定相、溶剂的选择等方面与高效液相色谱有许多相似之处，SPE也可以近似的看成是一个简单的柱色谱过程。
固相萃取(SPE) 技术基于液-固相色谱理论，采用选择性吸附、选择性洗脱的方式对样品进行富集、分离、纯化，是一种包括液相和固相的物理萃取过程；也可以将其近似的看作一种简单的色谱过程。
SPE是利用选择性吸附与选择性洗脱的液相色谱法分离原理。
较常用的方法是使液体样品通过一吸附剂，保留其中被测物质，再选用适当强度溶剂冲去杂质，然后用少量良溶剂洗脱被测物质，从而达到快速分离净化与浓缩的目的。
固相萃取-超高效液相色谱法测定话梅中亮蓝残留
将 Ｓ Ｘ 固 相 萃 取 小 柱 ，依 次 用 ３ Ｌ甲 醇 和 Ａ ｍ
３ Ｌ水活化 ，当溶 剂液 面到达 柱吸 附层 表 面时 ，立 ｍ
即将 ２ ｍＬ上 述 待净 化 溶 液 上 样 ，依 次 用 ３ ｍＬ水 、
着 色 。亮蓝是 食 品合 成色 素 的重 要品种 之一 ．广泛 应 用 于食 品领 域 中。为保 障公众健 康 ，我 国规定 了 食 品中亮 蓝 的最大 残 留限量 值 ，其 中凉果类最 大使
用 量为 ２ ｍｇ ｇ 。 ５ ／ ￣ ｋ”
离 心 ５ ｉ，上 清 液转 入 １０ ａ ｒｎ ５ｍＬ旋 转 蒸 发瓶 中 ，同
设 添加 水 平 为 ｌ ｇｋ 、４ ｇｋ ｍ ／ｇ ｍ ／ｇ和 ８ ｇｋ ， 并 ｍ ／ｇ 设空 白对照 ，重复 ５次 。样 品处 理 步骤 同 １ 。 ． ３
２ 结果 与 分析
２１ 检测 波长 的选择 ．
００ ｍｏ Ｌ乙酸 铵 等体 系作 为 流 动 相 ，通过 改 变 流 ．２ ｌ ／
提 取 ，再 经 Ｓ Ｘ 固相 萃取 小 柱 净化 ，建立 了话 梅 Ａ
落黄的含量检测 高效液相 色谱法 【】． Ｓ 北京 ：中国标
准 出版 社 ，２ ０ ． ０６
中亮 蓝残 留量 的超高效 液相 色谱测 定方法 。在选 定
的最佳条 件下 。该分 析方法 对话梅 中亮蓝 添加 回收 率 在 ８ ．％～ ９０ ４９ ９ ．％之 间 ，批 内 Ｒ Ｄ在 ２ ％～ ．％ Ｓ ． ８３ ９
振荡 提取 ，再 经 Ｓ Ｘ 固 相 萃取 小 柱 净 化 ，超 高 效 液 相色 谱 分 析 。该 分 析 方 法对 话梅 中亮 蓝 添 加 回 收 率 在 ８ ． Ａ ４ ％一 ９ ９ ．％２ １ ９ｏ ； ￣ １，批 内变 异 系 数 在 ２９ ８３ ．％－ ．％之 间 ，批 间 变 异 系数 为 ２２ ４３ ． ％－ ．％，最 低 检 出限 为 Ｏ１ｍ ／ｇ ． ｇｋ 。本 方法 操 Ｏ 作简 便 、灵 敏 、 准确 ，适 用 于话 梅 中亮 蓝含 量 测 定 。 关 键 词 亮 蓝 ；超 高 效液 相 色 谱 法 ；固相 萃 取
固相萃取的概念、步骤和操作
固相萃取的概念、步骤和操作概念：利用固体吸附剂将样品中的目标分析物吸附，与样品的基质和干扰物分离，然后再用有机溶剂或加热解吸附，达到分离、纯化及浓缩目标物的目的。
固相萃取（SPE）是利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附，与样品的基体和干扰化合物分离，然后再用洗脱液洗脱，达到分离和富集的目的。
先使液体样品通过一装有吸附剂（固相）小柱，保留其中某些组分，再选用适当的溶剂冲洗杂质，然后用少量溶剂迅速洗脱，从而达到快速分离净化与浓缩的目的。
SPE可以用于所有类型样品的处理，但是液体样品是最容易处理的与液液萃取(LLE)相比，固相萃取具有如下优点：①回收率和富集倍数高；②有机溶剂消耗量低，减少对环境的污染；③更有效的将分析物与干扰组分分离；④无相分离操作过程，容易收集分析物；⑤能处理小体积试样；⑥操作简便、快速，费用低，易于实现自动化及与其他分析仪器联用。
固相萃取的基本原理：吸附剂上的活性部分对目标物和样品基质的分子作用力存在差异固相萃取保留或洗脱的机制取决于被分析物与吸附剂表面的活性基团，以及被分析物与液相之间的分子作用力。
洗脱模式：一种是目标化合物比干扰物与吸附剂之间的亲和力更强，因而被保留，洗脱时采用对目标化合物亲和力更强的溶剂；另一种是干扰物比目标化合物与吸附剂之间的亲和力更强，则目标化合物被直接的洗脱。
通常采用前一种洗脱方式。
一、固相萃取的分离模式：反相固相萃取、正相固相萃取、离子交换萃取、免疫亲和1、反相固相萃取：吸附剂（固定相）是非极性或弱极性的，如硅胶键合C18, C8, C4，C2,-苯基等。
流动相为极性（水溶液）或中等极性样品基质。
吸附剂的极性小于洗脱液的极性。
应用：可以从强极性的溶剂中（如水样）萃取非极性或弱极性的化合物。
作用机理：非极性-非极性相互作用（疏水作用），如范德华力或色散力。
例如水中PAHs，利用C18柱，甲醇洗脱剂洗脱。
2、正相固相萃取：（1）吸附剂：极性键合相，如硅胶键合氨基－NH2、氰基－CN，-Diol（二醇基）；（2）极性吸附剂，如silica、Florisil、(A-,N-,B-)alumina、硅藻土等。
液相色谱柱和固相萃取柱到底有什么区分 固相萃取柱技术指标
液相色谱柱和固相萃取柱到底有什么区分固相萃取柱技术指标液相色谱柱和固相萃取柱到底有什么区分可以从下面几个方面考虑：1：应用范围不同：单纯的精密分别vs一般性分别和纯化。
2：几何参数和结构不同；3：柱子的负载本领不同；HLPC Column负负载本领较低；4：工作压力不同；高压力vs常压到低压力。
5: 使用过程的辅佑襄助工作环境不同；精密稳定的高压泵系统vs重力淋洗或进样端常规加压或出样端负压淋洗。
6、颗粒有差异，色谱柱颗粒一般为球型，萃取柱为不定型。
7、柱效差异，色谱柱柱效一般在10000以上，萃取柱一般只有几百。
8、操作时间差异，色谱柱操作时间长，一般需要选择合适的分析条件，萃取柱操作快。
相同点：使用的固定相的确仿佛，但是粒度和粒度分布不同；都使用流动相，但压力也不同。
固相萃取柱（Solid Phase Extraction Column,简称SPE柱）是从层析柱进展而来的一种用于萃取、分别、浓缩的样品前处理装置。
紧要应用于各种食品、农畜产品、环境样品以及生物样品中目标化合物的样品前处理。
固相萃取技术已经被广泛地使用在很多国标（GB/T）以及行业分析标准中。
固相萃取柱原理SPE技术基于液—固相色谱理论，接受选择性吸附、选择性洗脱的方式对样品进行富集、分别、净化，是一种包括液相和固相物理萃取过程；也可以将其貌似地看作一种简单的色谱过程。
SPE是利用选择性吸附与选择性洗脱的液相色谱法分别原理。
较常用的方法是使液体样品溶液通过吸附剂，保留其中被测物质，再选用适当强度溶剂冲去杂质，然后用少量溶剂快速洗脱被测物质，从而达到快速分别净化与浓缩的目的。
也可选择性吸附干扰杂质，而让被测物质流出；或同时吸附杂质和被测物质，再使用合适的溶剂选择性洗脱被测物质。
无筛板SPE柱是一种一体型的新型SPE柱。
固相萃取柱优势:1、无筛板，完美避开了由筛板引起的非特异性吸附。
2、填料稳固定能良好，不会显现常见的填料松散等问题。
固相萃取简介
固相萃取基础知识固相萃取（Solid-Phase Extraction，简称SPE）是近年发展起来一种样品预处理技术，由液固萃取和柱液相色谱技术相结合发展而来，主要用于样品的分离、纯化和浓缩，与传统的液液萃取法相比较可以提高分析物的回收率，更有效的将分析物与干扰组分分离，减少样品预处理过程，操作简单、省时、省力。
广泛的应用在医药、食品、环境、商检、化工等领域。
原理：SPE是一个包括液相和固相的物理萃取过程。
在SPE过程中，固相对分析物的吸附力大于样品母液，当样品通过SPE柱时，分析物被吸附在固体表面，其他组分则随样品母液通过柱子，最后用适当的溶剂将分析物脱下来。
利用被测样品中的化合物与背景杂质在SEP柱不同填料中的分配系数差异，匹配相应的洗脱溶剂，将化合物和杂质分离。
固相萃取(SPE)是一种用途广泛而且越来越受欢迎的样品前处理技术,它建立在传统的液-液萃取(LLE) 基础之上,结合物质相互作用的相似相溶机理和目前广泛应用的HPLC、 GC中的固定相基本知识逐渐发展起来的。
SPE具有有机溶剂用量少、便捷、安全、高效等特点。
SPE根据其相似相溶机理可分为四种:反相SPE、正相SPE、离子交换SPE、吸附SPE。
SPE大多数用来处理液体样品,萃取、浓缩和净化其中的半挥发性和不挥发性化合物,也可用于固体样品,但必须先处理成液体。
用途：1、被测样品的富集2、除去干扰的杂质3、改变被测样品的基体，使其适合分析时的需要。
目前国内主要应用在水中多环芳烃(PAHs) 和多氯联苯(PCBs)等有机物质分析,水果、蔬菜及食品中农药和除草剂残留分析,抗生素分析,临床药物分析等方面。
SPE装置由SPE小柱和辅件构成。
SPE小柱由三部分组成, 医用聚丙烯柱管、烧结垫（多孔聚丙烯筛板）和填料（多为40-60μm，80-100μm）。
常见规格：实际中常用的是100mg/1ml,200mg/3ml,500mg/3ml,1g/6ml等。
液相预处理方法汇总
小柱净化，收集液体，上机检测。[超高效液相色谱－四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱筛查水产品中21种环境激素]
土壤
1、QuEChERS技术：称取20 g土壤样品至50 mL塑料离心管内，加入5 mL水和20 mL乙腈(含体积分数为2%的甲酸)振荡30 min，分别加入3 g氯化钠和4 g无水硫酸镁，涡旋1 min，于5000 r/min下离心5 min。取上清液过0.22 μm有机系滤膜，待测。[QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定双氟磺草胺和氯氟吡氧乙酸在小麦和土壤中的残留及消解动态]
2、液液萃取法：量取100mL经0.45um水系滤膜过滤后的水样于250mL分液漏斗中，加入5g氯化钠摇匀。用20m L二氯甲烷分两次萃取，每次10m L，充分振荡5min，注意及时放气，静置分层后，将有机相通过装有无水硫酸钠的漏斗中，接至浓缩瓶中。合并两次二氯甲烷的萃取液，用浓缩仪浓缩至近干，用甲醇定容至1.00m L，入棕色进样瓶待测。（液液萃取-高效液相色谱法测定地表水中阿特拉津）
9固相萃取法(SPE)作为样品前处理使用介绍
溶剂极性图
反相溶剂洗脱强度
己烷 异辛烷 四氯化碳 氯仿 二氯甲烷 四氢呋喃 乙醚 乙酸乙酯 丙酮 乙腈 异丙醇 甲醇 水
正相溶剂洗脱强度
萃取小柱填料规格(反相)
官能团 C 18 高流速C 18 高容量C 18 C8 高容量C 8 乙基C 2 苯基 环己基 基质 硅胶 硅胶 硅胶 硅胶 硅胶 硅胶 硅胶 硅胶 平均颗粒度 孔径 50u m 100u m 50u m 50u m 50u m 50u m 50u m 50u m 60 A 60 A 60 A 60 A 60 A 60 A 60 A 60 A 碳覆盖率 6. 0% 8. 0% 17. 0% 4. 5% 8. 5% 5. 5% 3. 8% 3. 5% 封尾 有 有 有 有 有 有 有 有
固相萃取法(SPE) 作为样品前处理使用介绍
什么是SPE？
•固体Solid(S)，状态或相Phase(P)，萃 取Extraction(E) •样品在分析前的预处理 •基于液相色谱原理 •将被分析物与杂质分开 •浓缩样品
HPLC与SPE比较
硬件 颗粒度(um ) 颗粒形状 塔板数/柱 分离机理 操作成本 设备成本 分离模式 操作 H P LC 不锈钢柱 5 球型 20-25, 000 连续洗脱 中至高 高 多种 可重复使用 SPE 塑料柱 40 无定型 <100 “数字式” 开关洗脱 低 低 多种 一次性
SPE产品选择指导
可溶解样品
真空萃取
E xtra ct-C l ean柱 非极性样品 反相填料
Al l te ch
针筒萃取
M a xi -C l ean柱
极性样品 正相填料
离子性样品 离子交换填料
分子量少于2000
可溶于有机溶剂样品 溶 于 甲 醇 或 甲 醇 /水 溶于己烷
SPE固相萃取柱填料的介绍
SPE固相萃取柱填料的介绍固相萃取柱（英文Solid Phase Extraction Column, 简称SPE column，或Solid Phase extraction Cartridges，简称SPE cartridges）是从层析柱发展而来的一种用于萃取、分离、浓缩的样品前处理装置。
主要应用于各种食品、农畜产品、环境样品以及生物样品中目标化合物的样品前处理。
固相萃取技术已经被广泛地使用在许多国标（GB/T）以及行业分析标准中。
SPE技术基于液-固相色谱理论，采用选择性吸附、选择性洗脱的方式对样品进行富集、分离、净化，是一种包括液相和固相物理萃取过程；也可以将其近似地看作一种简单的色谱过程。
SPE是利用选择性吸附与选择性洗脱的液相色谱法分离原理。
较常用的方法是使液体样品溶液通过吸附剂，保留其中被测物质，再选用适当强度溶剂冲去杂质，然后用少量溶剂迅速洗脱被测物质，从而达到快速分离净化与浓缩的目的。
也可选择性吸附干扰杂质，而让被测物质流出；或同时吸附杂质和被测物质，再使用合适的溶剂选择性洗脱被测物质。
CNWBOND Carbon-GCB(碳黑)石墨化碳黑(CNWBOND Carbon-GCB)固相萃取小柱在萃取很多极性物质，如氨基甲酸酯和硫脲等农药，有着比C8或C18更高更稳定的回收率。
有数据显示，石墨化碳黑SPE同时提取食品中超过200多种农残有很好的效果，如有机氯、有机磷、含氮以及氨基甲酸酯类农药等。
Carbon-GCB石墨化碳黑由于其非多孔性，对样品的吸附不要求扩散至有孔区域，所以萃取过程非常迅速。
此外，虽然其比表面积小于硅胶基质，对化合物的吸附容量却比硅胶大一倍有余。
由于Carbon-GCB碳表面的正六元环结构，使其对平面分子有极强的亲和力，非常适用于很多有机物的萃取和净化，尤其适于分离或去除各类基质如地表水和果蔬中的色素（如叶绿素和类胡萝卜素）、甾醇、苯酚、氯苯胺、有机氯农药、氨基甲酸盐、三嗪类除草剂等。
固相萃取(SPE)技术的介绍和实际应用
Increasing polarity NON-POLAR PHASES C18 C2 CH PH Octadecyl Ethyl Cyclohexyl Phenyl POLAR PHASES CN 2OH NH2 SI Cyanopropyl Diol Aminopropyl Silica
SPE柱子类型的选择
1、Reversed-phase bonded silica sorbents having alkyl groups such as octadecyl (C18, C18), octyl (C8, C8), or ethyl (C2, C2) covalently bonded to the silica gel backbone or cyclohexyl (CH) or phenyl groups and sorbents composed of polymeric resins such as polystyrene–divinylbenzeneinteract primarily with analytes via van der Waals forces. 2、Nonionic watersoluble compounds can be retained by reversed-phase sorbents but may not be as well retained as analytes that are soluble in methanol or methanol–water miscible mixtures. 3、Normal-phase polar sorbents, such as silica, alumina, and Florisil, and cyano (CN) bonded phases interact by polar-dipole/dipole forces between polar functional groups in the analyte and the polar surface of the sorbent. 4、Amino (NH2) and diol sorbents interact with analytes by hydrogen bonding. 5、Hexane-soluble analytes are best retained by normalphase sorbents such as silica or Florisil or polar functionally substituted bonded phases such as amino or diol. 6、Strong cation-exchange (SCX) and strong anion-exchange (SAX) sorbents interact primarily through electrostatic attractions between the sorbent and the analyte. 7、Graphitized carbon sorbents exhibit both nonspecific van der Waals interactions and anionexchange, or electrostatic, attraction for analytes.
液相色谱基础知识(waters)
色谱柱的联接
各种锥箍和管路接头长度示意图:
色谱柱的联接
在同样情况下保留行为也有差异
因此：
需要对色谱化学品(色谱柱)有更多的了解 需要不同品牌，即各个因素有较大差异的色
谱柱，以得到更多种选择性
Waters拥有众多不同品牌的色谱柱，目的 就是：供不同应用的要求
用不同品牌的色谱柱时，色谱方法有时可 能需要重新开发
Waters各种硅胶基质的色谱柱
C1 C4 C6 C8 C18 Phenyl CN NH2
mBandaPak
Resolve
Nova-Pak
Delta-Pak
Symmetry
Spherisorb
Waters不同品牌的色谱柱
m-BondaPak
文献背景强, 是工业标准 平均孔径125Å，10mm高活性、无定形硅胶 中等疏水性表面，端基封口。有独特选择性
对HPLC柱填料的了解（二）
平均孔径/孔体积 孔径/孔体积分布
大的孔径可分析高分 子量的分子
对HPLC柱填料的了解（三）
键合相化学
影响化合物的分离度：a
不同键合相对不同种类的化合物分离不同 可能导致色谱的分离机理不同 如：C18、C8、CN
硅胶表面及键合相
H 3 C
H 3 C
注意在用文献方法时转换流速,即:降低流速,以 保持线速度相同。
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国达SPE固相萃取小柱|固相萃取仪|固相萃取法SPE固相萃取小柱广泛用于的应于医药检测、食品安全、农药残留、预防疾控、环境保护等领域的样品分析及制备。
尤其在食品中三聚氰胺、瘦肉精的检测、《2010中国药典》的应用等。
我们还可以按客户要求定制产品或开发应用方法！
国达SPE固相萃取小柱的特点及简单的技术说明
1．硅胶基质：
目前在SPE中最常用的吸附剂仍然是硅胶或键合硅胶，其pH适用范围2-8。
硅胶基质填料种类多，具有多选择性的优点。
郑州市国达仪器设备有限公司供应的硅胶基质SPE固相萃取小柱包括C18E(封尾)，C18(未封尾)，C8, CN, NH2,DIA,Phenyl, SCX, SAX, WCX, PRS，Silica, Diol等13种填料。
2．非硅胶类无机吸附剂：电话400-1158-566
有Florisil（弗洛里硅土），GraphiCarb（石墨化碳），Alumina-N（中性氧化铝），Alumina-A（酸性氧化铝），Alumina-B（碱性氧化铝）和Celite（硅藻土）等6种常见的正相吸附剂，选择性和吸附作用和正相硅胶不完全一样。
它们具有不同程度的极性和表面碱性，主要用途是对分析前复杂基体的样品进行清洗净化。
3．混合型吸附剂：
郑州市国达仪器设备有限公司供应的SPE固相萃取小柱系列中包括GraphiCarb/NH2、C8/SCX和C18E/SiO2等三种混合吸附剂。
4．聚合物基质：
聚合物基质填料克服了传统硅胶基质填料存在的缺点，在SPE固相萃取小
柱中的使用比例有逐年上升的趋势。
聚合物基质SPE固相萃取小柱相对于硅胶基质，有如下优势：
1）pH适用范围广（0-14），且能与大部分有机溶剂适配使用；
2）聚合物表面没有活性羟基，消除了次级吸附作用所引起碱性化合物。