干细胞治疗薄型子宫内膜的研究进展

是骨髓中除造血干细胞外，另一类具有多项分化潜 能的细胞群体，其在特定的诱导条件下可以向3个 胚层的组织细胞分化。
Du等[7]研究发现子宫缺血/再灌注损伤导致子宫 内膜可募集到更多BMSCs，其数量达未损伤时的2 倍，参与损伤后子宫内膜的修复，但在子宫内膜生 理周期中并无此现象，这为将BMSCs用于薄型子宫 内膜的治疗提供了可能。Zhao等[8]将BMSCs注入薄型 子宫内膜的SD大鼠宫腔，发现大鼠子宫内膜显著增 厚，推测BMSCs在子宫腔可直接分化为子宫内膜细 胞，或通过分泌细胞因子和免疫调节作用刺激子宫 内膜细胞增殖。该研究的另一个新发现是移植 BMSCs后，整合素αγβ3、白血病抑制因子（LIF）的含 量与正常鼠的含量相近，整合素和LIF是子宫内膜容 受性的标志物，对胚胎着床有重要作用，提示干细 胞灌注不仅提高了子宫内膜的再生能力，还提高了 内膜的容受性。
有报道通过研究子宫内膜SP细胞凋亡模式和 大鼠子宫内膜缺血模型证实：在缺血缺氧的条件 下，SP细胞的端粒酶、c-kit以及pou5fl表达降低，而 Caspase -3（促 进 细 胞 凋 亡）表 达 增 加 ，细 胞 凋 亡 增 多[16]。推测在缺血条件下大鼠子宫内膜变薄与SP细 胞的凋亡增加有关，据此认为在无法通过药物、手术 等改善子宫内膜血流的情况下，通过增强EDSCs活 性，增加其数量或减少凋亡可治疗薄型子宫内膜。
【Abstract】 In assisted reproductive technology (ART), the endometrial thickness is a common index of the endometrial function. When the endometrium is too thin to suit for embryonic implantation and clinical pregnancy, it is defined as the thin endometrium. Although there are many treatments for thin endometrium, the effects are not satisfied. Stem cells, including embryonic stem cells (ES), adult stem cells and induced pluripotent stem cells (iPS), with the ability of self-renewal and differentiation, have been applied in many clinical trials. Studies showed that stem cells can be induced to endometrial cells, and that stem cells can promote the endometrial growth of endometrium, which means that stem cells may be used to treat thin endometrium. In this review, we discussed the research progress on the application of bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs), endometrial stem cells (EDSCs), human embryonic stem cells (hESCs) and human wharton′s jelly mesenchymal stem cells (WJ-MSCs) in the treatment of thin endometrium, and compared their advantages and disadvantages.
LRCs） 将5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷 （5-bromo-2deoxyuridine，BrdU）染料注射入小鼠体内，在有丝分 裂的DNA复制期，BrdU染料与DNA发生融合，一段 时间后，已分化细胞因代谢快，BrdU染料逐渐消失， 而未分化干细胞仍稳定保留BrdU，采用组织切片化 学染色原理对EDSCs进行分离鉴定及空间定位[11]。 2.1.3 Hoechst33342—— —SP法 是目前最为常用的 方法，Hoechst33342是一种通过三磷酸腺苷结合转 运 蛋 白 G 超 家 族 成 员 2 （ATP -binding cassette transporter sub-family G member 2，ABCG2） 转运的 DNA染料。侧群细胞（SP细胞）通过ABCG2可快速排 除DNA染料Hoechst33342，而呈现着色较浅甚至不 着色，通过流式细胞仪可将其分选出来[12]。 2.1.4 细胞表面标记筛选法 正常子宫内膜或高或 低表达13种作 为干细胞标 记的特性基 因（SOXZ， SOX15，ERAS，SALL4，OCT4，NANOG，UTFI，DPPAZ， BMI1，GDF3，ZFP42，KLF4，TCLI）[13]以及目前新发现 的W5C5[14]，可用于分选子宫内膜干细胞群。
以上研究表明，BMSCs直接输注薄型子宫内膜 的宫腔促进子宫内膜细胞再生，为治疗薄型子宫内 膜提供了新思路。 1.2 BMSCs应用于薄型子宫内膜治疗的优越性和 局限性 BMSCs是最早发现可分化为子宫内膜细胞 的 多 能 间 充 质 干 细 胞 （mesenchymal stem cells， MSCs），其可从骨髓中成功分离，较易在体外培养、 诱导和扩增，临床应用无免疫排斥反应和伦理问 题。但其获取过程有创，可能会造成机体的伤害及 增加感染的风险；同时所含MSCs数量较少，只占骨 髓有核细胞的0.001%～0.01%；分化潜能也随年龄增 长而显著降低，这些缺点使其在薄型子宫内膜治疗 的应用受到了限制。
【关键词】 薄型子宫内膜；子宫内膜；干细胞；干细胞移植；治疗
Outlook of Stem Cells for the Treatment of Thin Endometrium YU Lu -ping，LIU Ying. Department of Reproductive Medicine，Beijing Obstetrics and Gynecology Hospital，Capital Medical University，Beijing 100026， China Corresponding author：LIU Ying，E-mail：yingliubj@hotmail.com
孕。薄型子宫内膜的治疗方法主要有药物治疗、搔 刮刺激治疗、宫腔内注射粒细胞集落刺激因子治疗 等。虽然薄型子宫内膜的治疗方式较多，但总体治 疗效果欠佳。
干细胞是具有自我更新和多向分化潜能的未 分化细胞群体，按发生学来源可分为胚胎干细胞 （embryonic stem cells，ESCs）、成体干细胞（adult stem cells，ASCs）和诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPSCs）。因干细胞在再生医学上突显出其 独特的优势而快速发展，已有研究报道用干细胞成 功修复子宫内膜并妊娠[6]。现从干细胞的角度总结 薄型子宫内膜治疗的研究进展，为薄型子宫内膜的 治疗提供新思路。
1 骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs） 1.1 BMSCs应用于子宫内膜修复的研究现状 BMSCs
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国际生殖健康 ／ 计划生育杂志 ２０１６ 年 ７ 月第 ３５ 卷第 ４ 期 Ｊ Ｉｎｔ Ｒｅｐｒｏｄ Ｈｅａｌｔｈ蛐Ｆａｍ Ｐｌａｎ，Ｊｕｌｙ ２０１６, Ｖｏｌ． ３５, Ｎｏ． ４
2 子宫内膜干细胞（endometrial stem cells，EDSCs） 2.1 EDSCs 的 存 在 依 据 和 分 离 鉴 定 方 法 早 在 1978年Prianishnikov[9]ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ提出可能存在EDSCs。子宫 内膜具有再生修复功能，发生在经期、分娩、流产和 其他原因造成的内膜损伤后。子宫内膜还具有远处 转移和种植等类似于肿瘤的生物学行为，子宫内膜 异位症就提示了EDSCs的存在。目前用于分离鉴定 EDSCs的方法如下。 2.1.1 集落生成法（colony-forming unit，CFU） CFU 是最经典的方法，通过制备单细胞悬液，以极低密 度种植后形成克隆性集落，可用于分离与鉴定 EDSCs[10]。 2.1.2 标 签 滞 留 细 胞 群 法 （label retaining cells，
以上研究均提示子宫内膜组织中可能存在干 细胞，但是通过以上4种方法并没有筛选出完全重 叠的细胞群。 2.2 EDSCs应用于子宫内膜修复的研究现状 EDSCs 作为一种ASCs，已被证实具有高增殖潜力和多向分 化潜力。
Masuda等[15]将人类子宫内膜上皮和基质混合细 胞群移植到NOD/SCID小鼠肾包膜下进行异种移植 研究，混合细胞群能在小鼠体内存活并增殖，再生 出含有腺体和基质的子宫内膜样结构，并随着激素 变化而发生增生、分化、脱落的周期性改变。混合细 胞群能分化并生长出血管，侵入宿主的脉管系统而 建立血管网。证实部分子宫内膜细胞在异种移植体 系中能够自我更新，具有高增殖能力和一定的分化 潜力，符合干细胞的特性。
【Keywords】 Thin endometrium；Endometrium；Stem cells；Stem cell transplantation；Therapy （J Int Reprod Health蛐Fam Plan，2016，35：331-334）
子宫内膜过薄是导致妇女不孕和宫腔粘连的 常见原因之一，目前，国际上对薄型子宫内膜的评 价标准尚未统一，最新的一项Meta分析认为子宫内 膜厚度超过7 mm的患者妊娠率明显高于不足7 mm 者[1]。薄型子宫内膜的病因尚未明确，有研究发现， 薄型子宫内膜形成主要与子宫内膜雌、孕激素效能 下降[2]、宫腔刮宫等操作史[3]、长期（≥5年）服用复方 口服避孕药等有关[4]。Miwa等[5]首次提出薄型子宫内 膜 的 发 生 机 制 为 血 管 内 皮 生 长 因 子（VEGF）低 表 达、血流高阻力和腺上皮生长缓慢。其主要临床表 现为月经周期正常，但经量过少（小于30 mL）和不
国际生殖健康 ／ 计划生育杂志 ２０１６ 年 ７ 月第 ３５ 卷第 ４ 期 Ｊ Ｉｎｔ Ｒｅｐｒｏｄ Ｈｅａｌｔｈ蛐Ｆａｍ Ｐｌａｎ，Ｊｕｌｙ ２０１６, Ｖｏｌ． ３５, Ｎｏ． ４
干细胞治疗薄型子宫内膜的研究进展
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·综 述·
余璐萍，刘英△
【摘 要】 在辅助生殖技术中，子宫内膜厚度可以反映内膜功能状态，薄型子宫内膜是指子宫内膜厚度 不足以获得胚胎着床及临床妊娠。虽然临床对薄型子宫内膜治疗的方式较多，但总体治疗效果欠佳。干细胞 因具有多向分化和自我更新的潜能而展现出广阔的发展前景，包括胚胎干细胞、成体干细胞和诱导多能干细 胞，随着对干细胞研究的深入，目前有研究诱导干细胞向子宫内膜细胞定向分化并增生，以促进子宫内膜生 长，进而用于治疗薄型子宫内膜。现主要就骨髓间质干细胞（BMSCs）、子宫内膜干细胞（EDSCs）、人胚胎干细 胞（hESCs）及人脐带华通胶间充质干细胞（WJ-MSCs）在薄型子宫内膜治疗的研究进展以及这4种细胞用于 临床治疗的优缺点进行综述。
基金项目：国家自然科学基金（81471520），国家留学基金项目（20119 11033），北京市自然科学基金（5122015），北京市卫生系 统高层次卫生技术人才培养项目（2014-3-075）
作者单位：100026 北京，首都医科大学附属北京妇产医院生殖医学科 通信作者：刘英，E-mail：yingliubj@hotmail.com △审校者