医学论文抗肌球蛋白重链和轻链抗体在扩张型心肌病

医学论文

抗肌球蛋白重链和轻链抗体在扩张型心肌病

与冠心病鉴别诊断中的价值

[摘要] 目的旨在探讨抗肌球蛋白重链和轻链抗体，在扩张型心肌病）DCM）与冠心病鉴别诊断中的价值。方法对21例DCM患者，14例冠心病患者及例，进行临床免疫学检测，应用ELISA 法，免疫转印法检测数值予以分析。结果ELISA法DCM组阳性率43.9％，冠心病组28.6％，正常对照组均为阴性。免疫转印法21例的DCM患抗肌球蛋白重链抗体（200KD）10例阳性，阳性率47.6％，冠心组抗肌球蛋白轻链抗体（27.5％KD）阳性4例，阳性率28.6％，PBS替代试验均为阳性。结论抗肌球蛋白重链和轻链的抗体在抗体检测有助于DCM和冠心病的鉴别诊断。

[关键词] 心脏病鉴别诊断早期发现

肌球蛋白由2条重链a和b（分子量约200KD）和4条轻链（分子量范围17-27KD）组成⑴，它存在于心肌、骨骼肌和平滑肌中，作为1种抗原物质，它可以刺激机体产生自身抗体。扩张型心肌病（DCM）和冠心病患者血清可检测出抗肌球蛋白抗体（2.3）。本文应用ELISE法和免疫转印法检测抗肌球蛋白抗体，探讨该抗体在DCM和冠心病诊断与鉴别诊断中的价值。

1 材料和方法

1.1 对象：心肌病组：DCM患者21例，男16例，女5例，年龄36-65（46±13）岁，DCM诊断符合WHO/ISFC1980年标准。冠心病组急性心肌梗塞14例，男10例，女4例，年龄42-76（58±9）岁，急性心肌梗塞均有心电图动态变化和心肌酶谱变化，于出院前采血。正常值组：健康献血员18例，男10例，女8例，年龄24-36（30±4）岁。每例抽血2ml，分离血清-20℃冻存备检。

1.2 抗体检测方法：猪心肌肌球蛋白和心肌肌球蛋白转印膜由同济医科大学心血管病研究所提供。ELISE法检测抗心肌肌球蛋白抗体和免疫转印法检测抗心肌肌球蛋白重链和轻链抗体均参照汪朝晖等⑶方法。

1.2.1 ELISE法：将猪心肌的肌球蛋白用PH9.6的0.05mol/L碳酸盐缓冲液1：2000稀释包被于微量反应板中，每孔加150ul，置4℃过夜。用PH7.4的0.01mol/LPBS-TWEEN20洗涤液反复洗涤3次。加1：80稀释待检血清150ul于微孔板中，置37℃孵育1h；倾去血清后洗涤3次，加1：1500稀释过氧化物酶（HRP）标记抗人1gG（协和医院临床病毒室产品）150ul于微孔板中。37℃孵育1h；洗涤3次，加底物溶液（OPD-H2O2柠檬酸-磷酸盐缓冲液）每孔150ul，37℃放置15min，用2mol/LH2SO4终止反应。酶标仪492mm处读数并记录OD值，每孔测3次，以大于正常对照组各OD均值的平均数与2倍标准差之和为阳性。同时用PBS替代血清作空白对照。

1.2.2 免疫转印法：心肌肌球蛋白转印膜小条洗涤后，加1：40稀释待测血清4℃过夜，洗涤3次，加1：1000稀释HRP标记抗人

IgG，37℃温育2h；洗涤后加0.05％二氨基联苯胺/0.02％过氧化氢底物溶显色，出现棕色条带为阳性。同时用PBS替代血清或HRP标记抗人IgG，作为非特异性染色对照。

1.3 统计学处理：数据用X±S表示，X2表示检验。

2 结果

用ELISE法测得21例DCM患者抗肌球蛋白抗体9例阳性，阳性率为42.9％；正常对照组18均为阴性；冠心病组4例阳性，阳性率为28.6％，详见附表。用免疫转印法测定21例DCM患者抗肌球蛋白重链抗体（200KD）10例阳性，阳性率47.6％；14例冠心病患者抗肌球蛋白轻链抗体（27.5KD）阳性4例，阳性率28.6％。PBS 替代试验均为阴性。（见附表）

附表各级抗肌蛋白抗体的ELISE检测结果

组别n 492nm处光密度值

（OD值）抗体阳性（％）

正常人组心肌病组冠心病组18

21

14

0.03±0.04

0.26±0.15

0.30±0.22

9（42.9）＊＊

4（28.6）

注：与正常值组比较＊＊P<0.01

3 讨论

扩张性心肌病的发生与病毒感染和自身免疫反应有关，在DCM 患者血清中发现抗心肌肌球蛋白重链（2-3）。心肌球蛋白是一个细胞内分子，它为何能刺激机会产生自身免疫应答？一种观点为分子模仿理论，即病毒抗原与肌球蛋白之间具有相同的抗原决定蔟，病毒感染诱导机体产生自身免疫反应⑷。本组ELISE法检测21例DCM患者抗心肌肌球蛋白抗体阳性率为42.9％，免疫转印法检测抗心肌肌球蛋白抗

体重链抗体阳性率为47.6％，与国内外文献报道一致（2.3）。Beisel等报道抗柯萨奇病毒Vp-1壳体蛋白的单克隆抗体与心肌肌球蛋白重链抗体产生，可能与病毒感染后诱导自身免疫反应有关。

另一种观点认为各种原因所致心肌坏死，心肌肌球蛋白抗原暴露或释放至血液中，可激活自身免疫反应⑷。本组14例冠心病急性心肌梗塞3周后的患者心肌肌球蛋白抗体轻链抗体阳性率为28.6％。提示急性心肌梗塞时心肌细胞内分子释放血液中，可以诱导机体产生自身免疫应答。

缺血性心肌病表现为心肌收缩功能异常和心脏扩大，临床表现与DCM相似；冠状动脉造影有助于2种疾病的鉴别诊断。本组对急性心肌梗塞3周后的患者进行抗心肌肌球蛋白轻链反应；而DCM患者自身抗体主要与心肌肌球蛋白重链反应。因此，抗心肌肌球蛋白重链和轻链抗体检测有助于DCM和冠心病的鉴别诊断。