NDRG2在乳腺癌细胞系中的表达及其对乳腺癌细胞生长的影响
《2024年乳腺癌中ABCG2、P-gp与淋巴细胞亚群的相关研究》范文
《乳腺癌中ABCG2、P-gp与淋巴细胞亚群的相关研究》篇一一、引言乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其发生、发展与多种基因及免疫因素密切相关。
近年来，随着分子生物学及免疫学研究的深入，乳腺癌的发病机制逐渐被揭示。
其中，ABCG2和P-gp的表达与乳腺癌的耐药性及预后密切相关，而淋巴细胞亚群在乳腺癌免疫微环境中的作用亦日益受到关注。
本文旨在探讨乳腺癌中ABCG2、P-gp与淋巴细胞亚群的相关性，以期为乳腺癌的诊疗提供新的思路。
二、研究方法1. 研究对象本研究选取了乳腺癌患者及健康女性为研究对象，其中乳腺癌患者根据病理分型分为不同组别。
2. 实验方法（1）采用免疫组化法检测乳腺癌组织中ABCG2和P-gp的表达情况；（2）利用流式细胞术分析乳腺癌患者及健康女性外周血中淋巴细胞亚群的变化；（3）结合患者临床资料，分析ABCG2、P-gp表达与淋巴细胞亚群之间的关系。
三、结果1. ABCG2和P-gp在乳腺癌组织中的表达研究结果显示，乳腺癌组织中ABCG2和P-gp的表达水平明显高于正常乳腺组织。
其中，ABCG2的表达与乳腺癌的分期、淋巴结转移等因素有关，而P-gp的表达则与患者的耐药性密切相关。
2. 淋巴细胞亚群在乳腺癌患者外周血中的变化流式细胞术检测结果显示，乳腺癌患者外周血中T细胞、B 细胞、NK细胞等淋巴细胞亚群的比例与健康女性相比存在显著差异。
其中，T细胞和NK细胞的比值降低，B细胞的比例升高。
3. ABCG2、P-gp与淋巴细胞亚群的相关性分析统计分析结果显示，ABCG2和P-gp的表达水平与T细胞、NK细胞的比例呈负相关，与B细胞的比例呈正相关。
这表明ABCG2和P-gp的表达可能影响乳腺癌患者的免疫微环境，进而影响患者的预后。
四、讨论本研究表明，ABCG2和P-gp在乳腺癌组织中的表达与淋巴细胞亚群的变化密切相关。
ABCG2的高表达可能导致T细胞和NK细胞的比值降低，B细胞的比例升高，从而影响机体的免疫应答。
抑制生长因子受体连接蛋白-2表达对乳癌细胞生长的影响
·５ ５ ·
抑制生长因子受体连接蛋白 ２表达对乳癌细胞生长的影响
１ ］ 传导途径中的分子 ［ 。抗肿瘤药物的开发已经从 传统的细胞毒性药物转向寻找与肿瘤相关的特异性 ２ ］ 信号通路为靶点的分子靶向药物的研究上 ［ 。生 长因子受体连接蛋白 ２ （ ｇ ｒ ｏ ｗ ｔ ｈｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ ｒ ｅ ｃ ｅ ｐ ｔ ｏ ｒ ｂ ｏ ｕ ｎ ｄ
，Ｇ ｒ ｂ ２ ） 是存在于细胞内的一个衔接蛋白， ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ２ 它通过其 Ｓ Ｈ ２功能区与位于细胞膜上的生长因子 受体， 如内皮细胞生长因子受体 （ ｅ ｐ ｉ ｄ ｅ ｒ ｍ ａ ｌ ｇ ｒ ｏ ｗ ｔ ｈ
－ １ ０ ． ０ ０ １（ ｍ ｍ ｏ ｌ · Ｌ ） ，１ ０ ％ 甘油， １ ％ Ｔ ｒ ｉ ｔ ｏ ｎＸ １ ０ ０及
美国 Ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ｃ ｏ ｎ公司； 核酸转 染 试 剂 盒 Ｌ ｉ ｐ ｏ ｆ ｅ ｃ ｔ ａ ｍ ｉ
Ｔ Ｍ ｎ ｅ ２ ０ ０ ０购自美国 Ｉ ｎ ｖ ｉ ｔ ｒ ｏ ｇ ｅ ｎ公司； 小鼠 Ａ Ｂ Ｃ染色
５ ］ 过表达 ［ ， Ｇ ｒ ｂ ２的高表达在乳癌的发展中起重要作
ｒ ｂ ２的功能就有可能抑制由 Ｇ ｒ ｂ ２ 用。因此， 抑制 Ｇ
６ ］ 诱导的 Ｒ ａ ｓ 的活化， 达到抑制肿瘤生长的目的 ［ 。 ［ ７ ］ Ｒ Ｎ Ａ干扰技术是近年来产生的新兴生物技术 ， 是
将目的基因所对应的小分子双链 Ｒ Ｎ Ａ （ ｄ ｏ ｕ ｂ ｌ ｅ ｓ ｔ ｒ ａ ｎ ，ｄ ｓ Ｒ Ｎ Ａ ） 导入细胞中， 导致相应的 ｍ Ｒ Ｎ Ａ ｄ ｅ ｄＲ Ｎ Ａ 降解， 从而阻断细胞中特定基因的表达。为此， 本研 究应用 Ｒ Ｎ Ａ干扰技术， 封闭 Ｈ ｅ ｒ ２高表达的乳癌细 Ｋ Ｂ ｒ ３的 Ｇ ｒ ｂ ２分子， 观察 Ｇ ｒ ｂ ２表达抑制对肿 胞株 Ｓ 瘤细胞生长的影响。
重组人NDRG2蛋白对肿瘤细胞抑制作用研究
重组人NDRG2蛋白对肿瘤细胞抑制作用研究
张翊;陈杰;裴德宁;饶春明;药立波;王军志
【期刊名称】《中国肿瘤生物治疗杂志》
【年(卷),期】2004(11)3
【摘要】目的:考察原核表达的重组人NDRG2蛋白对肿瘤细胞的作用。
方法:通过设置不同浓度的蛋白剂量并设置对照组,采用细胞MTT比色法和细胞计数检测NDRG2蛋白对7901、HHCC细胞的抑制效果,流式细胞仪检测细胞周期的变化,体内实验采用裸鼠抑瘤试验。
结果:重组人NDRG2对肿瘤细胞生长有较强的抑制作用,约50μg/ml浓度时对肿瘤细胞生长的抑制作用明显,流式细胞术结果显示肿瘤细胞G1期变化,体外能抑制裸鼠肿瘤的生成。
结论:重组人NDRG2蛋白在体内体外具有一定的抑制肿瘤细胞生长作用,在肿瘤治疗方面将具有一定的意义。
【总页数】4页(P204-207)
【关键词】NDRG2;HHCC细胞;7901细胞;肿瘤抑制
【作者】张翊;陈杰;裴德宁;饶春明;药立波;王军志
【作者单位】中国药品生物制品检定所;中国人民解放军第四军医大学
【正文语种】中文
【中图分类】R730.5
【相关文献】
1.家蝇胚胎细胞抗菌蛋白对肿瘤细胞A375抑制作用的研究 [J], 张金花;贺莉芳;杨霞霞;万启惠
2.重组人ndrg2腺病毒对胶质瘤细胞U251抑制作用的研究 [J], 李明霞;丁伯君;邓艳春
3.蛋白酶抑制剂MG132对肿瘤细胞的生长抑制作用研究 [J], 王天晓;王颖莹;张中庆
4.蛋白酶抑制剂MG132对肿瘤细胞的生长抑制作用研究 [J], 王天晓;王颖莹;张中庆
5.NDRG2基因抑制肿瘤细胞增殖机制的研究进展 [J], 苏志航; 吴舟
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DRG2基因的克隆、表达及抑瘤活性研究
DRG2基因的克隆、表达及抑瘤活性研究陈杰;张翊;饶春明;吴梧桐;王军志【期刊名称】《中国生物制品学杂志》【年(卷),期】2004(17)4【摘要】目的克隆、表达抑癌基因NDRG2 ,纯化后考察其对肿瘤细胞的抑制作用。
方法将NDRG2基因克隆进pQE30 M15表达载体 ,经DNA测序 ,IPTG诱导表达 ,SDS PAGE测定表达量及相对分子质量 ,复性后浓缩 ,脱盐 ,亲和层析纯化 ,对纯化表达产物进行一系列检测 ,考察其抑瘤作用。
结果克隆构建的表达载体经DNA测序证明构建正确 ,表达产物相对分子质量为 39977,表达量为 4 0 0 5 % ,纯度为 94 % ,等电点为 6 3,表达蛋白N端氨基酸序列正确 ,NDRG2蛋白对肿瘤细胞有较强抑制作用。
结论构建了NDRG2的pQE30 M15表达载体并取得高表达 ,该蛋白对 790 1和HHCC肿瘤细胞均有抑制作用。
【总页数】4页(P200-203)【关键词】NDRG2;基因;克隆;表达;肿瘤抑制作用;肿瘤细胞【作者】陈杰;张翊;饶春明;吴梧桐;王军志【作者单位】河南省药品检验所;中国药品生物制品检定所;中国药科大学【正文语种】中文【中图分类】Q354;Q78【相关文献】1.小鼠内皮抑素基因的克隆、表达及其抑瘤效应研究 [J], 吴景文;章翔;屈延;高大宽;荆俊杰;郭衍;李侠2.小鼠内皮抑素基因克隆、表达及其抑瘤活性鉴定 [J], 屈延;章翔;吴景文;柴玉波;吴元明;高大宽3.NDRG4基因的克隆、表达及抑瘤活性研究 [J], 陈杰;张翊;饶春明;吴梧桐;王军志4.人内皮抑素基因的克隆与表达及其抑瘤作用的实验研究 [J], 章翔;吴景文;费舟;傅洛安;高大宽;屈延5.RGD特异性结合多肽与重组改构人肿瘤坏死因子融合基因的克隆表达及其抑瘤活性 [J], 王慧;颜真;赵宁;张英起因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
抑癌基因NDRG2的研究进展
抑癌基因NDRG2的研究进展
抑癌基因NDRG2是人体基因组内抑癌基因家族的成员之一，
其在多种癌症中发现表达下降或缺失，因此对于其研究一直备受关注。
本文将从分子结构、生物功能、表达模式以及治疗应用角度出发，对NDRG2的研究进展进行综述。
首先，NDRG2基因包含17个外显子和16个内含子，编码
366个氨基酸，其主要结构域为N-末端SPX区域、NDPK家
族区域以及C-末端Drg-1家族区域，其特点是螺旋状结构和
多个保守区域，这些区域能够参与多种信号通路的调控，从而发挥NDRG2的多样生物功能。
其次，NDRG2在细胞内调控多种生物过程。
研究表明，NDRG2可以抑制癌细胞的增殖、转移以及血管新生等重要过程，其抑癌机制主要涉及调节信号通路、细胞周期和凋亡等，同时还可以参与维持细胞健康状态和恢复内环境平衡等功能。
此外，NDRG2在细胞中的表达模式也备受关注，研究表明，
在多种癌症中NDRG2表达水平显著下降，如结直肠癌、肺癌、前列腺癌等，同时在非肿瘤性疾病如糖尿病、阿尔茨海默病等中发现NDRG2表达也发生变化，因此，进一步挖掘NDRG2
的表达模式将有助于癌症的早期诊断和治疗。
最后，NDRG2作为一种重要的潜在治疗靶点，其相关的治疗
方法也逐渐成为研究热点，如miRNA、DNA甲基化、表观遗
传和自噬等相关治疗方法等，对于这些治疗方法的研究将有助于探索癌症治疗的新途径。
综上所述，NDRG2作为一种重要的抑癌基因，其在细胞内发挥的多种生物功能、表达水平的变化以及与癌症治疗相关的研究应用，将在未来的临床治疗中发挥重要作用。
因此，为进一步探讨NDRG2的生物学功能和潜在治疗应用，研究者需要开展更多的临床研究和基础实验。
膜联蛋白Ⅱ在乳腺癌组织中的表达以及对乳腺癌细胞侵袭的影响
膜联蛋白Ⅱ在乳腺癌组织中的表达以及对乳腺癌细胞侵袭的影响目的探讨膜联蛋白Ⅱ在乳腺癌中的表达以及对乳腺癌细胞侵袭的影响。
方法分别采用免疫组化方法检测AnnexinⅡ蛋白在正常乳腺组织、导管原位癌以及侵袭性导管癌组织中的表达情况，并测定高侵袭性乳腺癌细胞株及低侵袭性乳腺癌细胞株中AnnexinⅡmRNA（RT-PCR法）以及蛋白（蛋白印记技术）的表达情况。
结果AnnexinⅡ在正常乳腺组织中主要表达在间质内，在乳腺导管上不表达，在导管原位癌以及侵袭性导管癌组织中间质、血管、肿瘤组织上均有表达。
AnnexinⅡ在正常乳腺组织表达的IOD值为（6.5±1.0）×106，在导管原位癌中表达的IOD值为（27.5±3.0）×106，在侵袭性导管癌组织中表达的IOD值为（40.0±11.0）×106。
三组间比较，差异有高度统计学意义（P < 0.01），导管原位癌、侵袭性导管癌组织中的表达量显著高于正常乳腺组织，而侵袭性导管癌中的表达量显著高于导管原位癌（均P < 0.01）。
AnnexinⅡmRNA在高侵袭性人乳腺癌细胞株MDA-MB-435s中的表达灰度值（0.83±0.11）显著高于MCF-7株中的表达（0.07±0.01），差异有高度统计学意义（P < 0.01）；AnnexinⅡ蛋白在高侵袭性人乳腺癌细胞株MDA-MB-435s中的表达（1.47±0.08）显著高于MCF-7株中的表达（0.11±0.03），差异有高度统计学意义（P < 0.01）。
结论AnnexinⅡ在乳腺癌中高表达，并且瘤细胞侵袭性越强，其表达也越强。
[Abstract] Objective To discuss expression of Annexin Ⅱin breast cancer and the effects on the invasion of breast cancer cells. Methods Annexin Ⅱexpression in normal breast tissue，ductal carcinoma in situ and invasive ductal carcinoma tissues were detected by immunohistochemical method，and Annexin ⅡmRNA （RT-PCR）and protein （Western blot）expressions in high invasive breast cancer cell lines and low invasive breast cancer cell lines were detected. Results In normal breast tissue，Annexin Ⅱwas mainly detected in troma，without expression on breast catheter. In ductal carcinoma in situ and invasive ductal carcinoma tissues，Annexin Ⅱwas detected in troma，vessel and tumor tissue. IOD of Annexin Ⅱexpression in normal breast tissue was （6.5±1.0）×106，in ductal carcinoma was （27.5±3.0）×106，and in invasive ductal carcinoma tissues was （40.0±11.0）×106. There was significant difference in three groups （P < 0.01）. IOD of Annexin Ⅱexpression in invasive ductal carcinoma tissues and ductal carcinoma was higher than that in normal breast tissue，and IOD of Annexin Ⅱexpression in invasive ductal carcinoma tissues was higher than that in ductal carcinoma （all P < 0.01）. Gray value of AnnexinⅡmRNA expression in high invasive breast cancer cell lines MDA-MB-435s was （0.83±0.11），which was higher than that in low invasive breast cancer cell lines MCF-7 （0.07±0.01），and there was significant difference between two cell lines （P < 0.01）. IOD of AnnexinⅡprotein expression in high invasive breast cancer cell lines MDA-MB-435s was （1.47±0.08），which was higher than that in low invasive breast cancer cell lines MCF-7 （0.11±0.03），and there was significant difference between two cell lines （P < 0.01）. Conclusion Annexin Ⅱshows high expression in breast cancer，and the stronger aggressive of tumor cells is，the higher expression of it is.[Key words] Breast cancer；Multiplication；Annexin Ⅱ乳腺癌是临床常见的恶性肿瘤之一，近年来乳腺癌的发病率有上升的趋势。
NDRG2
80生物技术世界 BIOTECHWORLDNDRG家族由4个高度同源(同源性57%-65%)的基因组成,除NDRG4表达相对局限,其他3个成员在组织中的表达都比较广泛,这提示NDRG基因家族在机体中具有广泛的生理作用。
NDRG2是我国科学家于1999 年发现的新基因,其 mRNA 全长2024bp, 编码一个含有357个氨基酸残基的功能未知蛋白,其与α/β水解酶超家族成员具有高度同源性,但对其结构进行分析时却未能发现相关的催化活性基团[1]。
经过十几年的研究,我们对NDRG2有了更多了解,研究表明,该基因在多种终末分化的细胞中均有高水平表达,例如中枢神经细胞和骨骼肌细胞等,而在骨髓干细胞等分裂能力比较旺盛的细胞中表达水平很低,胚胎发育中的等多种脏器(心、肝、肺)NDRG2的表达量也明显低于成体相应器官,这提示NDRG2的表达水平与细胞的增殖能力呈负性相关。
随后的众多研究表明,NDRG2在神经胶质瘤,肝癌,乳腺癌,结肠癌和肺癌等多种恶性肿瘤中低表达甚至不表达,干扰NDRG2表达的胃癌细胞增殖速度明显加快并表现出对顺铂的拮抗,而NDRG2的过表达则能显著地抑制胶质瘤细胞系U373 和U138的增殖速率,其抗增殖作用在肝癌、肺癌、皮肤癌等多种癌症中也均有报道。
以上研究结果表明 NDRG2 具有肿瘤抑制作用,但对NDRG2抑制肿瘤的确切机制目前还不是很清楚。
c-Myc、p53是发现较早研究较多的癌基因和抑癌基因,其二者促进/抑制肿瘤的机制有较多报道,了解NDRG2与c-Myc、p53的关系对我们探究NDRG2抑制肿瘤的机制有重要意义。
1 NDRG2与c-Myc施海等[2]利用组织芯片、免疫组织化学、蛋白印记以及Re al time-PCR等技术分析了213例不同分化程度的结肠癌临床样本,结果表明随着结肠癌分化的成熟NDRG2在蛋白及基因两个水平上均表达上升,而c-MYC的表达则呈相反的趋势;进一步观察各例患者癌、癌旁及正常对照样本发现,有136例样本NDRG2表达呈上升趋势;同时151例样本c-MYC的表达呈下降趋势。
NDRG1在乳腺浸润性导管癌中的表达及其与侵袭、转移的关系
NDRG1在乳腺浸润性导管癌中的表达及其与侵袭、转移的关系左晓明;姚晓虹【期刊名称】《上海交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2007(027)012【摘要】目的研究NDRG1(N-myc downstream regulated gene 1)基因在乳腺浸润性导管癌中的表达,及其与乳腺癌侵袭、转移的关系.方法应用免疫组化法检测26例伴淋巴结转移的乳腺浸润性导管癌和45例无淋巴结转移的乳腺癌中的NDRG1、MMP2、MMP9、TIMP2、E-cad的表达状态.结果乳腺癌伴淋巴结转移的标本中NDRG1的表达率低于无淋巴结转移标本(P＜0.01).NDRG1蛋白的表达与TIMP2的表达正相关(P＜0.05);而与MMP2、MMP9和E-cad的表达无关(P ＞0.05).结论 NDRG1与浸润性导管癌的侵袭和转移能力密切相关,可能是一个候选的肿瘤转移抑制基因,并且可能成为乳腺癌的一个有用的预后指标.【总页数】3页(P1498-1500)【作者】左晓明;姚晓虹【作者单位】上海杨浦区中心医院病理科;上海交通大学,医学院新华医院病理科,上海,200092【正文语种】中文【中图分类】R737.9【相关文献】1.乳腺浸润性导管癌组织中p－AKT、VEGF－C的表达及其与侵袭、转移的关系[J], 刘君;黄凤德;胡晋太;岳明全2.CXCR4及NDRG1蛋白在前列腺癌中的表达及其与侵袭转移的相关性分析 [J], 平浩;牛亦农;杨飞亚;王明帅;邢念增3.NDRG1与Hpa在肝癌中的表达及与肝癌浸润转移的关系 [J], 高峰;杨季红;刘渤;刘玉英;马芳4.人胃癌细胞原位移植转移裸鼠原发灶及转移灶中锌指蛋白139的表达及其与肿瘤侵袭转移的关系研究 [J], 赵群;李勇;范立侨;檀碧波;侯五辉;李兆星;王冬;刘羽5.CD44v4在乳腺浸润性导管癌中的表达及其与浸润转移的关系 [J], 李俊;李春英因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
真核表达载体pcDNA3.1-NDRG2的构建及其在乳腺癌细胞系内的表达
真核表达载体pcDNA3.1-NDRG2的构建及其在乳腺癌细胞系内的表达刘祥【摘要】目的:构建pcDNA3.1-NDRG2 真核表达载体,并检测其在乳腺癌细胞系MDA-MB-453 中的表达情况.方法:聚合酶链反应技术从人NDRG2 cDNA 中扩增出NDRG2 基因进行双酶切,将其插入载体pcDNA3.1,将重组质粒转染MDA-MB-453 细胞,应用PCR 技术及Western blot 法检测NDRG2 的表达水平.结果:酶切和测序结果表明,扩增的NDRG2 基因序列正确.PCR 及Western blot 表明pcDNA3.1-NRDG2 能够在MDA-MB-453 中成功高表达NRDG2.结论:真核表达载体pcDNA3.1-NDRG2 构建成功,NDRG2 能在MDA-MB-453 中高表达.【期刊名称】《中外医学研究》【年(卷),期】2012(010)018【总页数】1页(P134-134)【关键词】NDRG2;乳腺癌细胞系;真核载体构建【作者】刘祥【作者单位】武汉大学附属武汉同仁医院,湖北,武汉,430061【正文语种】中文【中图分类】R33乳腺癌的发展是一个复杂的生物学过程，包括癌基因的激活，抑癌基因的失活，凋亡、粘附、血管生成等调节基因的缺陷[1-3]。
NDRG2是一种抑癌基因，参与抑制肿瘤的发生和发展，在多种肿瘤组织和肿瘤细胞系中表达减少。
1 资料与方法1.1 一般资料乳腺癌细胞系MDA-MB-453购自武汉大学典型培养物典藏中心；质粒pcDNA3.1载体购自Invitrogen；限制性内切酶、DNA连接酶、Taq酶购自NEB公司；DNA纯化试剂盒购自大连宝生物工程有限公司；DMEM培养基、Lipofectamine 2000转染试剂购自Invitrogen公司；抗NDRG2蛋白抗体购自cell signaling，逆转录试剂盒购自北京全式金公司。
1.2 方法人NDRG2的PCR扩增：根据GenBank中报告的序列设计引物。
NDRG2通过抑制β-catenin表达和入核调控乳腺癌细胞增殖
NDRG2通过抑制β-catenin表达和入核调控乳腺癌细胞增殖周晓雷;朱重悦;张世光;周志艳;李海潮;邹卫【期刊名称】《中国癌症杂志》【年(卷),期】2016(26)12【摘要】背景与目的：乳腺癌是女性发病率最高的恶性肿瘤之一，肿瘤细胞的恶性增殖是造成患者死亡的重要原因。
本研究利用具有相同遗传背景但不同增殖能力的乳腺癌细胞模型，研究N-myc下游调节基因2(N-myc downstream regulated gene 2，NDRG2)调控乳腺癌细胞增殖的作用及分子机制。
方法：通过蛋白[质]印迹法(Western blot)检测MCF-7/LM-MCF-7细胞中NDRG2蛋白表达水平；构建NDRG2真核表达载体及siRNA干扰片段，通过转染上调或沉默NDRG2表达，流式细胞实验检测细胞增殖能力，Western blot检测β-连环蛋白(β-catenin)表达，免疫荧光染色检测β-catenin细胞定位；共转染MCF-7细胞NDRG2 siRNA和pCMV-Tcfδ，流式细胞实验检测细胞增殖能力。
结果：NDRG2的蛋白表达水平同乳腺癌细胞增殖能力负相关；在增殖的LM-MCF-7细胞中上调NDRG2表达，细胞增殖指数(proliferation index，PI)由47.18%下降至31.78%(P<0.001)；在低增殖的MCF-7细胞中沉默NDRG2表达，PI由32.00%上升至52.59%(P<0.001)；Western blot及免疫荧光结果显示，NDRG2可抑制β-catenin表达，并抑制其聚集入核；流式细胞检测结果显示，共转染siRNA和pCMV-Tcfδ的MCF-7细胞增殖能力未增强，进一步说明NDRG2是通过抑制β-catenin的转录调节作用抑制肿瘤细胞增殖。
结论：在乳腺癌细胞中，NDRG2的表达水平下调，导致β-catenin聚集入核，并激活下游靶基因，促进乳腺癌细胞增殖。
Ndrg2基因及NDRG2蛋白的生物信息学分析
Ndrg2基因及NDRG2蛋白的生物信息学分析张文红;刘新平;王琰;韩月恒;药立波【期刊名称】《第四军医大学学报》【年(卷),期】2003(024)017【摘要】目的:对ndrg2( n-myc downsream regulator gene 2)基因调控区和NDRG2蛋白序列进行生物信息学分析,从结构上预测其功能. 方法:运用internet 网络上的数据库及程序,对ndrg2基因的调控区和NDRG2蛋白的二级结构进行生物信息学分析. 结果:ndrg2基因调控区存在多种转录因子结合位点,功能主要涉及组织特异性表达调控,细胞生长发育相关基因和应激反应基因的表达调控等;NDRG2蛋白的结构属于α/β水解酶类折叠,其分类预测表明与细菌环氧化物水解酶的二级结构极为相似. 结论:生物信息学分析提示NDRG2蛋白具有一定的酶活性,可能参与细胞抗氧化应激反应,内外源有毒物质的代谢,维持细胞内氧还电势平衡等.【总页数】3页(P1537-1539)【作者】张文红;刘新平;王琰;韩月恒;药立波【作者单位】第四军医大学,基础部生物化学与分子生物学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学,基础部生物化学与分子生物学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学,科研部全军基因诊断技术应用研究所,陕西,西安,710033;第四军医大学,基础部生物化学与分子生物学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学,基础部生物化学与分子生物学教研室,陕西,西安,710033【正文语种】中文【中图分类】R61【相关文献】1.NDRG2与癌基因c-Myc和抑癌基因p53的关系 [J], 潘涛;张芳;2.肿瘤抑制基因NDRG2调节结肠癌细胞糖酵解抑制结肠癌细胞增殖的研究 [J], 施景龙;林显敢;蓝球生;许鹤洋3.NDRG1及NDRG2基因在结直肠癌组织中的表达及临床意义 [J], 风琴;刘轩;刘彩霞;袁宏伟;乔晓娟4.NDRG1及NDRG2基因在结直肠癌组织中的表达及临床意义 [J], 风琴;刘轩;刘彩霞;袁宏伟;乔晓娟;5.NDRG2基因抑制肿瘤细胞增殖机制的研究进展 [J], 苏志航; 吴舟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
乳腺癌NKG2D表达及对NK细胞杀伤活性的影响
乳腺癌NKG2D表达及对NK细胞杀伤活性的影响【摘要】目的分析乳腺癌NKG2D表达及对NK细胞细胞毒的影响。
方法应用免疫荧光技术和流式细胞术(FCM)分选25例乳腺癌、25例健康对照的外周血NK细胞,定量分析NKG2D 蛋白表达。
用MTT比色法检测抗NKG2DpAb加入前后NK细胞的细胞毒效应。
结果乳腺癌患者NK细胞的NKG2D蛋白表达量均低于正常对照,差异有显著性(P＜0.05) 。
抗NKG2DpAb能显著抑制NK细胞对K562细胞的细胞毒效应。
结论NK细胞NKG2D表达异常与乳腺癌的发生发展可能有关。
【关键词】乳腺癌;杀伤细胞,天然;NKG2DExpression of NKG2D and Its Effect on Cytotoxicity of NK Cells in Human Breast CancerZHOU Feng-ling, LIN Na.Department of biochemical laboratory,Jining medical college,Jining 272013,China【Abstract】Objective To analyze the expression of NKG2D and its effect on cytotoxicity of natural killer (NK) cells in patients with breast cancer.Methods NK cells in the peripheral blood of 25 patients with breast cancer and 25 healthy subjects were sorted by immunofluorescence technique and flow cytometry(FCM).Expression of NKG2D protein was quantitatively analyzed.The cytotoxicity of NK cells before and after addition of NKG2DpAb was detected by monotetrazolium(MTT) colorimetry. Results The levels of NKG2D expression in NK cells of patients with breast cancer were significantly lower than those in normal controls (P＜0.05).The NKG2DpAb could obviously inhibit the cytotoxicity of NK cells towards K562 cells.Conclusion Abnormal expression of NKG2D protein in NK cells may be correlated with the occurrence and progression of breast cancer.【Key words】Breast cancer; Natural killer cell; NKG2DNKG2D是NK细胞表面主要的活化性受体,近年来研究表明NKG2D在NK 细胞的感染免疫和肿瘤免疫发挥重要的作用,成为肿瘤免疫机制研究热点。
NDRG2在肿瘤糖代谢中的作用与机制研究
第四军医大学硕士学位论文
缩略语表
缩略词
英文全称
中文全称
AMPK AMP-activated protein kinase
腺苷酸活化蛋白激酶
ATP
Adenosine TriphosPhate
三磷酸腺苷
Bp
Base pair
碱基对
BSA
Bovine serum albumin
牛血清白蛋白
DEPC
Diethyl pyrocarbonate
第四军医大学
The Fourth Military Medical University
分 类 号 R73 U D C 616-006 密级
硕士学位论文
NDRG2 在肿瘤糖代谢中的作用与机制研究
李剑英
培养类别 学位类型 一级学科(专业类) 二级学科(专业) 研究方向 指导教师 培养单位
全日制 专业学位 临床医学 临床检验诊断学 肿瘤代谢 药立波 教授 基础部生化教研室
18F-FDG 18F-fluorodeoxyglucose
转/分钟
十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝 胶电泳
申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。
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Ninjurin2_在乳腺癌中的表达及其与预后的关系
[收稿日期]2020-11-30 [修回日期]2021-11-30[基金项目]重庆市科委联合基金项目(2018RC083)[作者单位]重庆市荣昌区人民医院病理科,402460[作者简介]杨 清(1984-),男,主管技师.[通信作者]陈广业,副主任医师.E⁃mail:yishixiehui1998@[文章编号]1000⁃2200(2023)07⁃0877⁃04㊃基础医学㊃Ninjurin2在乳腺癌中的表达及其与预后的关系杨 清,陈广业[摘要]目的:探讨神经损伤诱导蛋白2(nerve injury⁃induced protein 2,Ninjurin2)在乳腺癌中的表达及其与预后的关系㊂方法:免疫组织化学染色法检测52例乳腺癌组织及配对癌旁组织中Ninjurin2的表达,分析Ninjurin2表达与乳腺癌临床病理特征及预后的关系㊂生存分析用Kaplan⁃Meier 法㊂Western blotting 检测乳腺癌细胞系(T47D㊁SKBR3㊁HCC1954和MDA⁃MB231)和正常乳腺上皮细胞系(MCF⁃10A)中Ninjurin2的表达㊂用Lipofectamine TM 2000试剂盒将Ninjurin2siRNA 序列(沉默组)㊁阴性对照序列(对照组)分别转入MDA⁃MB231细胞中,随后用克隆形成实验和CCK8法检测细胞增殖;Transwell 实验检测MDA⁃MB231细胞的侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移㊂结果:Ninjurin2在乳腺癌组织中高表达率为69.23%(36/52),高于癌旁组织的30.77%(16/52)(P <0.05)㊂与MCF⁃10A 细胞比较,T47D㊁SKBR3㊁HCC1954和MDA⁃MB231细胞的Ninjurin2蛋白相对表达量较高(P <0.05)㊂Ninjurin2与乳腺癌分期有关(P <0.05),与年龄㊁绝经状态㊁肿瘤大小和淋巴结转移无关(P >0.05)㊂生存曲线分析结果显示,Ninjurin2高表达病人的无病生存率低于低表达病人(P <0.05)㊂与对照组比较,沉默组Ninjurin2蛋白相对表达量㊁克隆细胞数㊁细胞培养72h 和96h 时的增殖活力㊁侵袭细胞数和细胞迁移率均较低(P <0.05)㊂结论:Ninjurin2在乳腺癌细胞及组织中高表达,与乳腺癌临床预后有关㊂[关键词]乳腺肿瘤;神经损伤诱导蛋白2;增殖;侵袭;迁移;预后[中图法分类号]R 737.9 [文献标志码]A DOI :10.13898/ki.issn.1000⁃2200.2023.07.005Expression of Ninjurin2in breast cancer and its relationship with prognosisYANG Qing,CHEN Guang⁃ye(Department of Pathology ,Chongqing Rongchang District People′s Hospital ,Chongqing 402460,China )[Abstract ]Objective :To explore the expression of nerve injury⁃induced protein 2(Ninjurin2)in breast cancer and its relationship with prognosis.Methods :Immunohistochemical staining was used to detect the expression of Ninjurin2in 52cases of breast cancer tissues and paired adjacent tissues.The relationship between the expression of Ninjurin2and the clinicopathological characteristics and prognosis of breast cancer was analyzed.The Kaplan⁃Meier method was used for survival analysis.The expression of Ninjurin2in breast cancer cell lines(T47D,SKBR3,HCC1954and MDA⁃MB231)and normal breast epithelial cell lines(MCF⁃10A)was detected by Western blotting.Ninjurin2siRNA sequence (silencing group)and negative control sequence (control group)were transferred into MDA⁃MB231cells with lipofectamine TM 2000kit,and then cell proliferation was detected by clone formation assay and CCK8method.The invasive ability of MDA⁃MB231cells was detected by Transwell assay,and cell migration was detected by cell scratch test.Results :The high expression rate of Ninjurin2in breast cancer tissues was 69.23%(36/52),which was higher than 30.77%(16/52)in adjacent tissues,and the difference was statistically significant(P <0.05).Compared with MCF⁃10A cells,the relative expression of Ninjurin2protein in T47D,SKBR3,HCC1954and MDA⁃MB231cells was higher(P <0.05).Ninjurin2was related to breast cancerstage(P <0.05),but not related to age,menopausal status,tumor size,and lymph node metastasis(P >0.05).The results of survival curve analysis showed that the disease⁃free survival rate(DFS)of patients with high expression of Ninjurin2was lower than that of patients with low expression(P <0.05).Compared with the control group,the relative expression of Ninjurin2protein,the number of cloned cells,the proliferation activity at 72h and 96h of cell culture,the number of invasive cells and cell migration rate in the silence group were lower(P <0.05).Conclusions :Ninjurin2is highly expressed in breast cancer cells and tissues,and is related to the clinical prognosis of breast cancer.[Key words ]breast neoplasms;nerve injury⁃induced protein 2;proliferation;invasion;migration;prognosis 乳腺癌约占所有癌症的11.6%,是仅次于肺癌的第二大常见癌症,是女性常见的恶性肿瘤之一[1]㊂我国每年新增乳腺癌病例占全世界的12.2%,死亡病例占9.6%[2]㊂神经损伤诱导蛋白(nerve injury⁃induced protein,Ninjurin)是广泛表达于胚胎和成体组织结构中的黏附分子小家族,包括Ninjurin1和Ninjurin2两种同源分子[3]㊂研究[4-5]显示,Ninjurin2与肿瘤密切相关,可能参与胶质瘤和结直肠癌的发生和发展㊂Ninjurin2与乳腺癌的关系既往鲜有报道㊂本研究旨在分析Ninjurin2在乳腺癌组织和细胞中的表达,并探讨其与乳腺癌临床病理特征及预后的关系㊂1 材料与方法1.1 材料 1.1.1 试剂 DF⁃12培养基和胎牛血清均购于美国Sigma公司;免疫组化试剂盒购于北京博蕾德科技发展有限公司;Ninjurin2抗体㊁羊抗鼠IgG㊁GAPDH抗体购于英国Abcam公司;BCA蛋白检测试剂盒和凝胶快速制备试剂盒均购于美国Sigma公司;LipoFiter TM脂质体转染试剂购于上海汉恒生物科技有限公司;Ninjurin2siRNA序列㊁阴性对照序列由上海吉马制药有限公司提供;CCK⁃8试剂盒和Transwell小室购于武汉博士德生物科技有限公司㊂1.1.2 细胞 乳腺癌细胞系(T47D㊁SKBR3㊁HCC1954和MDA⁃MB231)和正常乳腺上皮细胞系(MCF⁃10A)购于中科院上海细胞库,用含10%胎牛血清的DF⁃12培养基,在37℃㊁5%CO2条件下进行培养,每3d换液1次,当细胞融合度达80%时进行传代㊂1.1.3 组织样本 选取2006年5月至2010年10月我院手术切除的52例乳腺癌组织及其配对的癌旁组织标本,病人临床病理资料完整㊂年龄43~69岁;绝经26例;淋巴结转移29例;TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期34例,Ⅲ~Ⅳ期18例㊂1.2 方法 1.2.1 免疫组织化学染色法检测组织中Ninjurin2的表达 切片经二甲苯脱蜡㊁梯度乙醇水化㊁枸橼酸溶液抗原修复后,进行聚乙二醇辛基苯基醚通透,用3%过氧化氢溶液灭活内源性过氧化物酶,随后用山羊血清封闭㊂滴加Ninjurin2一抗(1∶500),孵育过夜㊂用DAB显色,苏木精复染㊂梯度乙醇脱水,二甲苯溶液透明,中性树胶封片㊂显微镜下进行观察,根据细胞的染色强度及阳性细胞比例判断Ninjurin2表达情况㊂染色强度评分:阴性㊁染色为浅黄色㊁棕黄色㊁棕褐色分别计0㊁1㊁2㊁3分;阳性细胞比例评分:0%~10%㊁11%~50%㊁51%~80%㊁81%~ 100%分别计1㊁2㊁3㊁4分㊂将两种评分相乘,0~3分为低表达;4~12分为高表达[6]㊂1.2.2 Western blotting检测细胞中Ninjurin2的表达 用RAPI裂解液提取乳腺癌细胞及正常乳腺上皮细胞中的总蛋白,用BCA试剂盒检测蛋白浓度,每孔所加蛋白量为50μg㊂经10%SDS⁃PAGE凝胶电泳后,将蛋白转移至PVDF膜上㊂随后用脱脂奶粉封闭1h,孵育Ninjurin2(1∶500)一抗,4℃过夜㊂用TBST缓冲液洗涤3次,加入二抗,封闭1h㊂用ECL法显色,Image J软件分析灰度值㊂1.2.3 MDA⁃MB231细胞转染 用Lipofectamine TM 2000试剂盒将Ninjurin2siRNA序列(沉默组)㊁阴性对照序列(对照组)分别转入MDA⁃MB231细胞㊂NC⁃siRNA序列:5′⁃GGA GAC TAC CAG AAG GCT TAT⁃3′;Ninjurin2⁃siRNA序列:5′⁃GGA GCC TGG AGG AGC CCA CGC AG⁃3′㊂转染步骤严格按照试剂说明书操作进行㊂1.2.4 MDA⁃MB231细胞增殖㊁侵袭和迁移的检测 克隆形成实验和CCK8法检测细胞增殖,克隆形成实验:用胰蛋白酶消化转染后的MDA⁃MB231细胞,接种于6孔板中,温箱中培养3周㊂当出现菌落时停止培养,用4%多聚甲醛进行固定,随后进行结晶紫染色,显微镜下计算克隆细胞数目㊂CCK⁃8法:用CCK⁃8试剂盒检测细胞活性,MDA⁃MB231细胞培养24㊁48㊁72㊁96h时,用酶标仪在490nm波长处读取吸光度[7]㊂Transwell实验检测MDA⁃MB231细胞的侵袭能力:首先在Transwell迁移板上室铺基质胶,随后将处于对数生长期的MDA⁃MB231细胞接种于Transwell小室24孔板㊂培养至细胞贴壁后更换上室培养液,继续培养24h㊂用棉签小心擦拭去小室滤膜上的癌细胞,随后用甲醛固定15min,并进行HE染色,光镜下统计侵袭细胞数[8]㊂细胞划痕实验检测细胞迁移:将对数生长期MDA⁃MB231细胞接种于培养板上,当细胞融合度达80%时用无菌枪头进行划痕㊂培养0㊁24h时用显微镜拍照,划痕愈合率=(0h划痕宽度-24h划痕宽度)/0h划痕宽度×100%[9]㊂1.3 统计学方法 采用t检验㊁方差分析和χ2检验㊂生存分析用Kaplan⁃Meier法㊂2 结果2.1 Ninjurin2在乳腺癌组织和细胞中的表达 Ninjurin2在乳腺癌组织中高表达率为69.23%(36/ 52),高于癌旁组织的30.77%(16/52)(χ2=15.39, P<0.01)(见图1)㊂T47D㊁SKBR3㊁HCC1954㊁MDA⁃MB231和MCF⁃10A细胞中Ninjurin2蛋白相对表达量分别为(0.22±0.04)(0.25±0.03)(0.68±0.21)(0.16±0.01)(0.12±0.01),差异有统计学意义(F =22.00,P <0.01)㊂与MCF⁃10A 细胞比较,T47D㊁SKBR3㊁HCC1954和MDA⁃MB231细胞的Ninjurin2蛋白相对表达量较高(P <0.05)㊂2.2 Ninjurin2与乳腺癌临床病理特征及预后的关系 Ninjurin2与乳腺癌分期有关(P <0.05),与年龄㊁绝经状态㊁肿瘤最大径和淋巴结转移无关(P >0.05)(见表1)㊂52例乳腺癌病人随访时间均超过5年,36例Ninjurin2高表达病人中有8例死亡,4例复发和转移;16例Ninjurin2低表达病人中,3例死亡,1例复发和转移㊂生存曲线分析结果显示,Ninjurin2高表达病人的中位生存时间为65.6个月,低表达病人的中位生存时间为87.4个月,组间比较差异有统计学意义(χ2=6.67,P <0.01)㊂表1 Ninjurin2与乳腺癌临床病理特征的关系(n )临床病理特征n高表达(n =36)低表达(n =16)χ2P年龄/岁 ≥50 <5028241917970.05>0.05绝经 是 否26261620106 1.44>0.05肿瘤最大径/cm ≥2 <223291818511 1.58>0.05淋巴结转移 是 否29232313610 3.13>0.05肿瘤分期 Ⅰ~Ⅱ Ⅲ~Ⅳ341820161424.99<0.052.3 沉默Ninjurin2对MDA⁃MB231细胞增殖、侵袭和迁移的影响 与对照组比较,沉默组Ninjurin2蛋白相对表达量㊁克隆细胞数㊁细胞培养72h 和96h 时的增殖活力㊁侵袭细胞数和细胞迁移率均较低(P <0.05~P <0.01)(见表2)㊂表2 沉默Ninjurin2对MDA⁃MB231细胞增殖㊁侵袭和迁移的影响(x ±s ) 分组n Ninjurin2蛋白相对表达量克隆细胞数/个细胞增殖活力(490nm) 24h 48h 72h 96h 侵袭细胞数/个细胞迁移率/%沉默组50.47±0.0943.08±10.560.19±0.030.23±0.030.27±0.050.39±0.0739.12±11.2019.56±7.23对照组50.78±0.12121.90±32.090.20±0.030.27±0.020.54±0.090.78±0.1283.31±25.8046.11±18.67t 4.62 5.270.53 2.12 5.86 6.28 3.51 2.97P<0.01<0.01>0.05>0.05<0.01<0.01<0.01<0.053 讨论 乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一,严重影响了病人的生存质量[10]㊂乳腺癌的发病机制目前尚未完全明确,深入分析其发病机制对早期预防㊁诊断和改善预后有重要意义㊂细胞之间㊁细胞和细胞外基质之间的黏附在癌症发展中的作用近年来备受关注[11]㊂黏附分子在组织生长发育㊁免疫炎症损伤和血液凝固等病理生理过程中发挥重要作用,是肿瘤浸润和转移的分子生物学基础[12-13]㊂Ninjurin 是广泛表达于胚胎和成体组织结构中的黏附分子小家族,包括Ninjurin1和Ninjurin2两种同源分子,Ninjurin1已被证实和多种癌症的进展有关[14-15]㊂Ninjurin2是Ninjurin1的同源物,但是它与癌症的关系既往少有报道㊂Ninjurin2基因定位于染色体12p13上,是一种新型细胞黏附蛋白,可作为内皮炎症激活和调节因子[16]㊂Ninjurin2在人体组织中广泛表达,如神经组织㊁结肠组织㊁肝脏组织和乳腺组织等㊂既往研究[4]显示,Ninjurin2与肿瘤的发生和发展有关,但是具体的生物学机制还未完全明确㊂Ninjurin2可以与Toll 样受体4相互作用,调控转录因子κB 及c⁃Jun通路的激活[16];另外Ninjurin2可能与多种受体酪氨酸激酶(EGFR㊁VEGFR㊁FGFR和PDGFR等)相互作用[16],进而调控肿瘤进展㊂Ninjurin2在乳腺癌中的表达及作用机制既往未见报道,本研究发现与癌旁组织比较,乳腺癌组织中Ninjurin2高表达率较高,并且Ⅲ~Ⅳ期乳腺癌病人的Ninjurin2高表达率较高㊂另外,与MCF⁃10A细胞比较,T47D㊁SKBR3㊁HCC1954和MDA⁃MB231细胞的Ninjurin2蛋白相对表达量较高㊂以上提示, Ninjurin2可能参与乳腺癌的发生㊂癌症的侵袭和转移是影响病人生存预后的主要因素[17]㊂既往研究[4]发现,Ninjurin2高表达与结直肠癌病人的不良生存预后有关㊂本研究也发现,Ninjurin2高表达病人的中位生存时间低于低表达病人㊂为了进一步验证Ninjurin2在乳腺癌中的作用,我们用Lipofectamine TM2000将Ninjurin2siRNA序列或阴性对照序列分别转入MDA⁃MB231细胞,结果显示沉默Ninjurin2后,MDA⁃MB231细胞增殖㊁侵袭和迁移力明显下降㊂提示Ninjurin2参与了乳腺癌的进展㊂本研究的局限性为:(1)未检测Ninjurin2下游分子的变化;(2)在分析Ninjurin2与乳腺癌临床病理特征及预后关系时,样本量较小;(3)既往研究显示,Ninjurin2基因多态性可能与阿尔茨海默症等疾病的易感性有关[18],其是否会影响癌症的发生和进展,需要未来进行分析㊂(4)未检测乳腺癌病人血清中Ninjurin2的变化,Ninjurin2对乳腺癌早期诊断的价值需要未来进一步分析㊂综上所述,Ninjurin2在乳腺癌细胞及组织中高表达,沉默Ninjurin2可以抑制乳腺癌细胞的增殖㊁侵袭和迁移,Ninjurin2与乳腺癌临床分期和临床预后有关,以上提示Ninjurin2可能参与乳腺癌的发生和发展,未来需要深入分析Ninjurin2在乳腺癌中的作用机制㊂[参考文献][1] GARCÍA⁃ARANDA M,REDONDO M.Immunotherapy:achallenge of breast cancer treatment[J].Cancers(Basel),2019,11(12):1822.[2] LI T,MELLO⁃THOMS C,BRENNAN PC.Descriptiveepidemiology of breast cancer in China:incidence,mortality,survival and prevalence[J].Breast Cancer Res Treat,2016,159(3):395.[3] EKANAYAKE P,AHN M,KIM J,et al.Immunohistochemicallocalization of nerve injury⁃induced protein⁃1in mouse tissues[J].Anat Cell Biol,2019,52(4):455.[4] LI G,ZHOU LN,YANG H,et al.Ninjurin2overexpressionpromotes human colorectal cancer cell growth in vitro and 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bydirectly interacting with PTEN and activating PI3K/Akt/GSK⁃3βpathway[J].Mol Cancer Ther,2019,18(12):2457. 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ndrg2促进乳腺癌化疗敏感性的机制研究
分类号密级公开国际十进分类号（UDC）第四军医大学学位论文NDRG2促进乳腺癌化疗敏感性的机制研究（题名和副题名）张永平（作者姓名）指导教师姓名药立波教授指导教师单位第四军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室申请学位级别硕士专业名称生物化学与分子生物学论文提交日期2012.03答辩日期2012.05论文起止时间2010年09月至2012年02月学位授予单位第四军医大学独创性声明秉承学校严谨的学风与优良的科学道德，本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。
尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，不包含本人或他人已申请学位或其他用途使用过的成果。
与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了致谢。
申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。
论文作者签名：日期：保护知识产权声明本人完全了解第四军医大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属第四军医大学。
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论文作者签名：导师签名：日期：NDRG2促进乳腺癌化疗敏感性的机制研究研究生：张永平学科专业：生物化学与分子生物学所在单位：第四军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室导师：药立波教授辅导教师：张健副教授资助基金项目：国家自然科学基金重点课题（30830054）关键词：NDRG2；乳腺癌；阿霉素；增殖；凋亡；化疗敏感性；BRCA1中国人民解放军第四军医大学二O一二年三月目录缩略语表 (1)中文摘要 (4)英文摘要 (7)前言 (11)文献回顾 (12)正文 (36)实验一实验细胞模型确定 (36)1材料 (36)2方法 (37)3结果 (43)4讨论 (47)实验二NDRG2能促进乳腺癌化疗敏感性 (49)1材料 (49)2方法 (49)3结果 (53)4讨论 (71)实验三NDRG2提高化疗敏感性机制初步探讨 (73)1材料 (73)2方法 (73)3结果 (74)4讨论 (78)小结 (79)参考文献 (80)附录 (92)个人简历和研究成果 (98)致谢 (99)缩略语表缩略词英文全称中文全称AA Amino Acid氨基酸Adr Adriamycin阿霉素bp Base pairs碱基对BRCA1Breast cancer1乳腺癌相关基因1 cDNA Complementray DNA互补DNACDS Coding Sequence编码区CIB1Calcium and Integrin Binding1钙整合素1DEPC Diethyl pyrocarbonate编码区序列DMSO Dimethyl sulfoxide二甲基亚砜DMEM dulbecco's modified eagle medium DMEM细胞培养基EB Ethidium bromide溴化乙锭EDTA Ethylenediamine tetraacetic acid乙二胺四乙酸二钠ER Estrogen Receptor雌激素受体FITC Fluorescein isothiocyanate异硫氰酸荧光素GAPDH Glyceraldehyde-3-phosphate磷酸甘油醛脱氢酶dehydrogenaseHEPES2-hydroxyethyl羟乙基哌嗪乙硫磺酸KD Kilodalton千道尔顿LB Luria Bertani medium LB培养基mRNA Messenge RNA信使RNAMTT Methyl thiazolyl tetrazolium噻唑蓝NC Nitrocellulose硝酸纤维膜NDRG N-myc downstream-regulated gene N-myc下游调节基因ORF Open Reading Frame开放读码框PAGE Polyacrylamide gel ectrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳PBS Phosphate-buffered saline磷酸盐缓冲液PBST Phosphate-buffered saline含Tween-20的磷酸盐With Tween-20缓冲液PCR Polymerase chain reaction聚合酶链反应p53Protein53p53蛋白RT-PCR Reverse Transcription Polymerase逆转录PCRChain ReactionSDS Sodium Dodecyl Sulfate十二烷基硫酸钠Tris2-amino-2（hydroxymethyl）-1,3-三羟甲基氨基甲烷propanediolTUNEL Transferase-mediated dUTP-biotin nick原位末端标记end labelingVEGF Vascular Endothelial Growth Factor血管内皮生长因子XRCC X ray repair cross complem-X射线损伤修复Enting gene的交叉互补基因NDRG2促进乳腺癌化疗敏感性的机制研究硕士研究生：张永平导师：药立波教授第四军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室，西安710032中文摘要乳腺癌是女性常见的肿瘤之一，严重威胁女性的身体健康，据统计乳腺癌占女性全身癌症的1/4。
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损伤区域远端的有髓鞘纤维几乎全部脱髓鞘，但无髓鞘 C 纤 维保持完整，损伤区域近端神经纤维正常 。 本研究还发现，CCI 模型大鼠非手术侧 ( 右侧 ) 在术前、 术后无显著变化，说明未发生超敏反应，无 “镜像”痛发生。 CCI 大鼠行为学的改变及痛阈指标的变化有一定联系，与经 典文献报道相符，说明模型建立成功，为进一步的深入研究 奠定了良好基础。 参 考 文 献
。NDRG2 是一种抑癌基因，在多种肿瘤组
织和肿瘤细胞系中表达下调。 1 材料与方法 1.1 材 料 乳 腺 癌 细 胞 系 T47D、MCF7、MDA-MB-453、 MDA-MB-231 均购自武汉大学典型培养物典藏中心。质粒 pcDNA3.1-NRDG2 为本实验室构建并测序正确。anti-NDRG2 单克隆抗体购自 cell signaling 公司，anti-beta actin 及 HRPIgG 抗体购自博士德公司。 1.2 方 法 Western blot ：将胰蛋白酶消化的 5×10 6 个细胞 用 PBS 洗 2 遍，裂解 0.5 h 后，4 ℃离心 10 min，取上清，加 入缓冲液，煮沸。将待测蛋白电泳，转膜，封闭非特异性抗 体。然后分别加入鼠抗人 NRDG2T 抗体，4 ℃过夜。次日用
图1 各1-NRDG2 后，MDA-MB-453 细胞中 NDRG2
①武汉大学附属武汉同仁医院 湖北 武汉 430061 通讯作者 ： 刘祥
的 表 达 MDA-MB-453 细 胞 系 转 染 pcDNA3.1-NRDG2 后， NRDG2 的表达在 mRNA 水平及蛋白水平均升高 ( 图 2)。
《中国医学创新》第 9 卷 基础研究 Jichuyanjiu
第 20 期 （总第 230 期）2012 年 7 月
NDRG2在乳腺癌细胞系中的表达及其对乳腺癌 细胞生长的影响
刘祥①
【摘要】 目的 ： 方法 ： 检测 NDRG2 在各种乳腺癌细胞系中的表达，并观察高表达 NDRG2 对乳腺癌细胞生长的影响。 应用 PCR 技术及 结果 ： Western blot 法检测 NDRG2 的表达水平，转染 pcDNA3.1-NRDG2 质粒，绘制生长曲线，观察细胞的生长情况。 MDA-MB-453 和 MDAMB-231 细胞中 NDRG2 的表达较低 ； pcDNA3.1-NRDG2 能够在 MDA-MB-453 中成功高表达 NRDG2 ； 高表达 NRDG2 的 MDA-MB-453 细胞 结论 ： 生长速度明显降低。 NRDG2 能够抑制乳腺癌细胞 MDA-MB-453 的生长。 【关键词】 乳腺癌细胞 ； NRDG2 ； 生长 doi ： 10.3969/j.issn.1674-4985.2012.20.007
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[3] Muenter Swift N，Charkoudian N，Dotson R M，et a1．Baroreflex control of muscle sympathetic nerve activity in postural orthostatic tachycardia syndrome[J]．Am J Physiol Heart Circ Physiol，2005， 289(3):1226-1233． [4] Wasner G，Schattschneider J，Binder A，et a1．Complex regional pain syndrome-diagnostic，mechanisms，CNS involvement and therapy[J].Spinal Cord，2003，41(2):61-75. [5] Attal N，Jazat F，Kayser V.Further evidence for“pain related” behaviors in a model of unilateral peripheral mononeuropathy[J].Pain， 1990，41(2):235-251. [6] Mosconi T'Kruger L．Fixed-diameter polyethelene cuffs applied to the rat sciatic nerve induce a painful neuropathy:ultrastruetrual morphometric analysis of axonal alterations[J]．Pain，1996，64(1) ： 37-57． ( 收稿日期 ： 2012-04-05) ( 本文编辑 ： 李静 )
乳腺癌的发展是一个复杂的生物学过程，包括癌基因的 激活、抑癌基因的失活以及调节凋亡、粘附和血管生成相关 基因的缺陷等
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TBST 洗 3 遍后，再分别加入 HRP 标记的抗鼠二抗，室温孵 育 2 h，ECL 显色。 2 结果 2.1 各种乳腺癌细胞系中 NDRG2 的表达 收取常规培养的 乳腺癌细胞系，检测 mRNA 水平及蛋白水平 NDRG2 的表达， MDA-MB-453和 MDA-MB-231细胞中NDRG2 的表达较低 ( 图1)。