NDRG2在乳腺癌细胞系中的表达及其对乳腺癌细胞生长的影响
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[1] Bennett G J，Xie Y K.A peripheral mononeuropathy in rat that produces disorders of pain sensation like those seen in man[J].Pain， 1988，33(1):87-107. [2] Bellavance L L，Beitz A J，Anwyl.Altered e-fos expression in the parabrachial nucleus in rodent model of CFA・induced peripheral inflammation[J]．J Comp Neuron，1996，366(3):431-447．
《中国医学创新》第 9 卷 基础研究 Jichuyanjiu
第 20 期 （总第 230 期）2012 年 7 月
NDRG2在乳腺癌细胞系中的表达及其对乳腺癌 细胞生长的影响
刘祥①
【摘要】 目的 ： 方法 ： 检测 NDRG2 在各种乳腺癌细胞系中的表达，并观察高表达 NDRG2 对乳腺癌细胞生长的影响。 应用 PCR 技术及 结果 ： Western blot 法检测 NDRG2 的表达水平，转染 pcDNA3.1-NRDG2 质粒，绘制生长曲线，观察细胞的生长情况。 MDA-MB-453 和 MDAMB-231 细胞中 NDRG2 的表达较低 ； pcDNA3.1-NRDG2 能够在 MDA-MB-453 中成功高表达 NRDG2 ； 高表达 NRDG2 的 MDA-MB-453 细胞 结论 ： 生长速度明显降低。 NRDG2 能够抑制乳腺癌细胞 MDA-MB-453 的生长。 【关键词】 乳腺癌细胞 ； NRDG2 ； 生长 doi ： 10.3969/j.issn.1674-4985.2012.20.007
图1 各种乳腺癌细胞系中NDRG2的表达
2.2 转染 pcDNA3.1-NRDG2 后，MDA-MB-453 细胞中 NDRG2
①武汉大学附ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ武汉同仁医院 湖北 武汉 430061 通讯作者 ： 刘祥
的 表 达 MDA-MB-453 细 胞 系 转 染 pcDNA3.1-NRDG2 后， NRDG2 的表达在 mRNA 水平及蛋白水平均升高 ( 图 2)。
。NDRG2 是一种抑癌基因，在多种肿瘤组
织和肿瘤细胞系中表达下调。 1 材料与方法 1.1 材 料 乳 腺 癌 细 胞 系 T47D、MCF7、MDA-MB-453、 MDA-MB-231 均购自武汉大学典型培养物典藏中心。质粒 pcDNA3.1-NRDG2 为本实验室构建并测序正确。anti-NDRG2 单克隆抗体购自 cell signaling 公司，anti-beta actin 及 HRPIgG 抗体购自博士德公司。 1.2 方 法 Western blot ：将胰蛋白酶消化的 5×10 6 个细胞 用 PBS 洗 2 遍，裂解 0.5 h 后，4 ℃离心 10 min，取上清，加 入缓冲液，煮沸。将待测蛋白电泳，转膜，封闭非特异性抗 体。然后分别加入鼠抗人 NRDG2T 抗体，4 ℃过夜。次日用
[6]
[3] Muenter Swift N，Charkoudian N，Dotson R M，et a1．Baroreflex control of muscle sympathetic nerve activity in postural orthostatic tachycardia syndrome[J]．Am J Physiol Heart Circ Physiol，2005， 289(3):1226-1233． [4] Wasner G，Schattschneider J，Binder A，et a1．Complex regional pain syndrome-diagnostic，mechanisms，CNS involvement and therapy[J].Spinal Cord，2003，41(2):61-75. [5] Attal N，Jazat F，Kayser V.Further evidence for“pain related” behaviors in a model of unilateral peripheral mononeuropathy[J].Pain， 1990，41(2):235-251. [6] Mosconi T'Kruger L．Fixed-diameter polyethelene cuffs applied to the rat sciatic nerve induce a painful neuropathy:ultrastruetrual morphometric analysis of axonal alterations[J]．Pain，1996，64(1) ： 37-57． ( 收稿日期 ： 2012-04-05) ( 本文编辑 ： 李静 )
乳腺癌的发展是一个复杂的生物学过程，包括癌基因的 激活、抑癌基因的失活以及调节凋亡、粘附和血管生成相关 基因的缺陷等
[1-3]
TBST 洗 3 遍后，再分别加入 HRP 标记的抗鼠二抗，室温孵 育 2 h，ECL 显色。 2 结果 2.1 各种乳腺癌细胞系中 NDRG2 的表达 收取常规培养的 乳腺癌细胞系，检测 mRNA 水平及蛋白水平 NDRG2 的表达， MDA-MB-453和 MDA-MB-231细胞中NDRG2 的表达较低 ( 图1)。
损伤区域远端的有髓鞘纤维几乎全部脱髓鞘，但无髓鞘 C 纤 维保持完整，损伤区域近端神经纤维正常 。 本研究还发现，CCI 模型大鼠非手术侧 ( 右侧 ) 在术前、 术后无显著变化，说明未发生超敏反应，无 “镜像”痛发生。 CCI 大鼠行为学的改变及痛阈指标的变化有一定联系，与经 典文献报道相符，说明模型建立成功，为进一步的深入研究 奠定了良好基础。 参 考 文 献
《中国医学创新》第 9 卷 基础研究 Jichuyanjiu
第 20 期 （总第 230 期）2012 年 7 月
NDRG2在乳腺癌细胞系中的表达及其对乳腺癌 细胞生长的影响
刘祥①
【摘要】 目的 ： 方法 ： 检测 NDRG2 在各种乳腺癌细胞系中的表达，并观察高表达 NDRG2 对乳腺癌细胞生长的影响。 应用 PCR 技术及 结果 ： Western blot 法检测 NDRG2 的表达水平，转染 pcDNA3.1-NRDG2 质粒，绘制生长曲线，观察细胞的生长情况。 MDA-MB-453 和 MDAMB-231 细胞中 NDRG2 的表达较低 ； pcDNA3.1-NRDG2 能够在 MDA-MB-453 中成功高表达 NRDG2 ； 高表达 NRDG2 的 MDA-MB-453 细胞 结论 ： 生长速度明显降低。 NRDG2 能够抑制乳腺癌细胞 MDA-MB-453 的生长。 【关键词】 乳腺癌细胞 ； NRDG2 ； 生长 doi ： 10.3969/j.issn.1674-4985.2012.20.007
图1 各种乳腺癌细胞系中NDRG2的表达
2.2 转染 pcDNA3.1-NRDG2 后，MDA-MB-453 细胞中 NDRG2
①武汉大学附ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ武汉同仁医院 湖北 武汉 430061 通讯作者 ： 刘祥
的 表 达 MDA-MB-453 细 胞 系 转 染 pcDNA3.1-NRDG2 后， NRDG2 的表达在 mRNA 水平及蛋白水平均升高 ( 图 2)。
。NDRG2 是一种抑癌基因，在多种肿瘤组
织和肿瘤细胞系中表达下调。 1 材料与方法 1.1 材 料 乳 腺 癌 细 胞 系 T47D、MCF7、MDA-MB-453、 MDA-MB-231 均购自武汉大学典型培养物典藏中心。质粒 pcDNA3.1-NRDG2 为本实验室构建并测序正确。anti-NDRG2 单克隆抗体购自 cell signaling 公司，anti-beta actin 及 HRPIgG 抗体购自博士德公司。 1.2 方 法 Western blot ：将胰蛋白酶消化的 5×10 6 个细胞 用 PBS 洗 2 遍，裂解 0.5 h 后，4 ℃离心 10 min，取上清，加 入缓冲液，煮沸。将待测蛋白电泳，转膜，封闭非特异性抗 体。然后分别加入鼠抗人 NRDG2T 抗体，4 ℃过夜。次日用
[6]
[3] Muenter Swift N，Charkoudian N，Dotson R M，et a1．Baroreflex control of muscle sympathetic nerve activity in postural orthostatic tachycardia syndrome[J]．Am J Physiol Heart Circ Physiol，2005， 289(3):1226-1233． [4] Wasner G，Schattschneider J，Binder A，et a1．Complex regional pain syndrome-diagnostic，mechanisms，CNS involvement and therapy[J].Spinal Cord，2003，41(2):61-75. [5] Attal N，Jazat F，Kayser V.Further evidence for“pain related” behaviors in a model of unilateral peripheral mononeuropathy[J].Pain， 1990，41(2):235-251. [6] Mosconi T'Kruger L．Fixed-diameter polyethelene cuffs applied to the rat sciatic nerve induce a painful neuropathy:ultrastruetrual morphometric analysis of axonal alterations[J]．Pain，1996，64(1) ： 37-57． ( 收稿日期 ： 2012-04-05) ( 本文编辑 ： 李静 )
乳腺癌的发展是一个复杂的生物学过程，包括癌基因的 激活、抑癌基因的失活以及调节凋亡、粘附和血管生成相关 基因的缺陷等
[1-3]
TBST 洗 3 遍后，再分别加入 HRP 标记的抗鼠二抗，室温孵 育 2 h，ECL 显色。 2 结果 2.1 各种乳腺癌细胞系中 NDRG2 的表达 收取常规培养的 乳腺癌细胞系，检测 mRNA 水平及蛋白水平 NDRG2 的表达， MDA-MB-453和 MDA-MB-231细胞中NDRG2 的表达较低 ( 图1)。
损伤区域远端的有髓鞘纤维几乎全部脱髓鞘，但无髓鞘 C 纤 维保持完整，损伤区域近端神经纤维正常 。 本研究还发现，CCI 模型大鼠非手术侧 ( 右侧 ) 在术前、 术后无显著变化，说明未发生超敏反应，无 “镜像”痛发生。 CCI 大鼠行为学的改变及痛阈指标的变化有一定联系，与经 典文献报道相符，说明模型建立成功，为进一步的深入研究 奠定了良好基础。 参 考 文 献