基因敲除MDA-MB-231细胞系,乳腺癌研发福音
敲除BLM基因的MDA-MB-231乳腺癌细胞株的构建
敲除BLM基因的MDA-MB-231乳腺癌细胞株的构建黄晏军; 郑艺; 汤长宁; 刘金河; 刘杰麟【期刊名称】《《贵阳医学院学报》》【年(卷),期】2018(043)005【摘要】目的:应用规律成簇间隔短回文重复序列(CRISPR/Cas9)技术构建敲除BLM基因的人乳腺癌MDA-MB-231细胞株。
方法:根据CRISPR/Cas9技术靶点设计原则,在BLM基因的3号外显子设计2条靶向小向导RNA(sgRNA),利用PX459 V2质粒载体,构建PX459 V2-sgRNA重组质粒;将建构成功的重组质粒转染至MDA-MB-231细胞中,通过嘌呤霉素筛选获得阳性克隆,使用Cruiser^(TM)核酸内切酶检测打靶效率,将打靶效率较高的阳性克隆进行单克隆培养,再利用免疫印迹法检测筛选出敲除BLM基因的MDA-MB-231乳腺癌细胞株。
结果:测序结果表明重组质粒构建成功,免疫印迹法显示敲除BLM基因后的MDA-MB-231细胞中BLM蛋白明显降低,与空白对照组相比,BLM-KO组BLM表达水平明显低于对照组。
结论:应用CRISPR/Cas9技术成功构建了BLM基因敲除的MDA-MB-231细胞株。
【总页数】5页(P503-507)【作者】黄晏军; 郑艺; 汤长宁; 刘金河; 刘杰麟【作者单位】贵州医科大学免疫学教研室贵州贵阳 550004; 贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心贵州贵阳 550004【正文语种】中文【中图分类】R737.9【相关文献】1.siRNA介导的Bmi-1基因沉默对乳腺癌细胞株MDA-MB-231侵袭迁移的影响[J], 李海玉;武向梅;陈兴凤;李韵;樊建军;刘革力;宋方洲2.MTA2基因敲除抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞株增殖和迁移能力 [J], 翁伟;徐元宏;宋晓菲3.BLNK基因慢病毒载体构建及其稳定表达的人乳腺癌MDA-MB-231细胞株的筛选 [J], 肖斌;庄玉格;侯贤德;刘萍;陈建芸;孙朝晖;李林海4.敲除BLM基因的MDA-MB-231乳腺癌细胞株的构建 [J], 黄晏军;郑艺;汤长宁;刘金河;刘杰麟;;;;;;;;;5.SK-1基因敲除联合阿霉素抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖和迁移 [J], 续旭;任树昱;辛翠燕因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
Mortalin促进人乳腺癌细胞MDA-MB231的恶性进展
Ｍｏ ｒ ｔ ａ ｌ ｉ ｎ 促 进人乳腺癌 细胞 ＭＤ Ａ — ＭＢ ２ ３ １的恶性进展
金海 丹 ，周 宪春 ，张松 男 ，林 贞花 ，金铁 峰ｈ
（ 延边 大学 １ ．肿瘤研究所 ； ２ ．延边大学 附属医院 肿瘤科 ， 吉林 延吉 １ ３ ３ ０ ０ ２ ）
瘤发生发 展过程 中起到 了重要 的作用 ， 但 Ｍ ｏ ｒ ｔ ａ ｌ ｉ ｎ在乳腺 癌 的研究 较 少 。上皮一 间质 转 化 （ ｅ ｐ ｉ ｔ ｈ ｅ ｌ ｉ ａ ｌ — ｍ ｅ ｓ ｅ ｎ ｃ ｈ ｙ ｍ ａ ｌ ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｉ — ｔ ｉ ｏ ｎ Ｅ ＭＴ ） 是肿瘤发生迁移 、 侵袭， 维持 干细胞 样特征 及抗 凋
后， 用 嘌呤霉素 （ １ ｍ ｇ ／ Ｌ ） 筛 选稳 定 表达 Ｍｏ ｒ ｔ ａ ｌ ｉ ｎ的靶 细胞 。
最 后 利 用 Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ ｂ ｌ ｏ ｔ 法 鉴 定 Ｍｏ ｒ ｔ ｌｉ ａ ｎ的表 达 情 况 。
２ ０ １ ５年 ６月 第３ ５ 卷 第６ 期
文 章 编 号 ：１ ０ ０ １ — ６ ３ ２ ５（ ２ ０ １ ５） ０ ６ ． ０ ８ ３ ３ — ０ ３
基 础 医学与 临床
Ｂａ ｓ ｉ ｃ＆ Ｃｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ
Ｊ ｕ ｎ ｅ ２ ０ １ ５
中 图分 类 号 ： Ｒ ７ ３ ４ ． ２ ； Ｒ ７ ３ ０ ． ５
文 献标 志 码 ： Ａ
全球 每年有超过 １ ０ ０万乳腺 癌新发病 例 ， 转 移是其 难治
吸光度值 ， 并计算 细胞 生存 率 。 １ ． ２ ． ３ Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｎ ｒ ｂ ｌ ｏ ｔ 检测 ： 将 Ｍ一 ２ ３ １ 及 Ｍ一 ２ ３ １ ／ Ｍｏ ｒ 细胞 以冷 Ｐ Ｂ Ｓ洗 ２次后提取总蛋 白 ； Ｂ Ｃ Ａ法测定 蛋 白浓度 ； ８ ％Ｓ Ｄ Ｓ聚 丙烯酰胺凝胶垂 直 电泳 进行 蛋 白分 离 ； 转至 Ｐ Ｖ Ｄ Ｆ膜上 ； 室 温下摇床 封闭 （ Ｔ Ｂ Ｓ Ｔ＋５ ％脱 脂奶 粉 ） ２ ｈ ； 加入一 抗 ； ４℃过
黄芩素对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231_侵袭、迁移、上皮间充质转化的调控作用及其机制
黄芩素对人乳腺癌细胞系MDA -MB -231侵袭、迁移、上皮间充质转化的调控作用及其机制陈林1，2，梁秋果1，2，吉杨丹1，2，王恒1，21 黔南民族医学高等专科学校基础医学部，贵州都匀558013；2 黔南州天然产物与组分功效重点实验室摘要：目的 观察黄岑素对人乳腺癌细胞系MDA -MB -231的侵袭、迁移及上皮间充质转化（EMT ）的调控作用，探讨其可能作用机制。
方法 取对数生长期MDA -MB -231细胞分为一组、二组、三组及对照组，一组、二组、三组分别加入2.5、5、10 μmol /L 的黄岑素，对照组不做任何处理。
培养48 h 时采用划痕修复实验观察四组细胞迁移能力、采用Transwell 侵袭实验观察四组细胞侵袭能力，采用Western Blotting 法检测细胞EMT 标志物波形蛋白（vimentin ）及E -钙黏蛋白（E -cadherin ）、整合素αv 、β3、磷酸化黏着斑激酶（p -FAK ）、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶（整合素p -PI3K ）。
结果 与对照组相比，黄岑素组细胞迁移率降低、侵袭细胞数少，细胞E -cadherin 相对表达量高，vimentin 、整合素αv 、整合素β3、p -FAK 、p -PI3K 蛋白相对表达量低，且呈剂量依赖性（P 均<0.05）。
结论 黄芩素抑制MDA -MB -231细胞的侵袭、迁移及EMT 。
黄岑素可能通过抑制整合素αv 、整合素β3表达，进一步抑制p -FAK 、p -PI3K 蛋白表达，抑制MDA -MB -231的侵袭、迁移及EMT 。
关键词：黄芩素；乳腺癌；细胞侵袭；细胞迁移；上皮间质转化；波形蛋白；E -钙黏蛋白；整合素αv 、整合素β3；黏着斑激酶；磷脂酰肌醇3激酶doi ：10.3969/j.issn.1002-266X.2024.06.003中图分类号：R965.1 文献标志码：A 文章编号：1002-266X （2024）06-0010-04Regulatory effects of baicalein on invasion ， migration ， and EMT in human breast cancer cell line MDA -MB -231CHEN Lin 1， LIANG Qiuguo ， JI Yangdan ， WANG Heng1 Department of Basic Medicine ， Qiannan Medical College for Nationalities ， Duyun 558013， ChinaAbstract ： Objective To investigate the regulatory effects of baicalein on the invasion ， migration ， and epithelial -mesenchymal transition （EMT ） of human breast cancer cell line MDA -MB -231 and to explore its potential mechanism of action. Methods MDA -MB -231 cells in the logarithmic growth phase were divided into the Group 1， Group 2， Group 3， and Control group. Baicalein was added to cells in the Group 1， Group 2， and Group 3 at concentrations of 2.5， 5， and 10 μmol /L ， respectively ， while cells in the Control group were not treated. After 48 h of incubation ， Scratch repair experi‐ment was used to observe cell migration capacity ， Transwell invasion experiment was performed to assess cell invasion ca‐pacity ， and Western blotting was utilized to detect the expression levels of EMT markers including vimentin and E -cad‐herin ， as well as integrin αv ， integrin β3， phosphorylated focal adhesion kinase （p -FAK ）， and phosphorylated phosphati‐dylinositol -3 kinase （p -PI3K ） proteins. Results Compared with the control group ， the cell migration rate decreased ， the number of invading cells decreased ， the relative expression level of E -cadherin was higher ， and the relative expression levels of vimentin ， integrin αv ， integrin β3， p -FAK ， and p -PI3K protein were lower in the baicalein group ， with a dose -de‐pendant manner （all P <0.05）. Conclusions Baicalein inhibits the invasion ， migration ， and EMT of MDA -MB -231cells. Baicalein may inhibit the expression of integrin αv ， integrin β3， and further inhibit the expression of p -FAK and p -PI3K proteins ， thereby inhibiting the invasion ， migration ， and EMT of MDA -MB -231 cells.Key words ： baicalein; breast carcinoma; cell invasion; cell migration; epithelial -mesenchymal transition; vimentin;基金项目：黔南民族医学高等专科学校校基金（qnyz202013，qnyz202206）；黔南民族医学高等专科学教育教学科研基金项目（qnyzjx202205）；黔南民族医学高等专科学校大学生科技创新项目（qnyz202201）。
EphrinA2基因促进MDA-MB-231乳腺癌细胞迁移的初步研究
EphrinA2基因促进MDA-MB-231乳腺癌细胞迁移的初步研究史钟;郁肖夫;王晓稼【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2015(44)9【摘要】目的在MDA-MB-231人乳腺癌细胞系中过表达EphrinA2基因,研究其对肿瘤细胞迁移能力的影响,并初步探讨其可能的作用机制.方法用脂质体法将EphrinA2真核表达质粒转染至MDA-MB-231细胞中,用Western blot法检测转染前后细胞中EphrinA2、E-Cadherin及p27/Kip1蛋白的表达;并用细胞疏散、细胞划痕及Transwell小室试验检测转染前后细胞迁移能力的变化;用Rac1抑制剂NSC23766抑制Rac1活性后用细胞划痕试验检测细胞迁移能力变化.结果转染EphrinA2后的细胞迁移能力更强,并且呈现出E-Cadherin及p27/Kip1蛋白表达下降;用NSC23766抑制Rac1活性能抑制EphrinA2介导的细胞迁移.结论EphrinA2能促进MDA-MB-231乳腺癌细胞的迁移,其机制可能与E-Cadherin和p27/Kip1蛋白下调及Rac1活性抑制有关.【总页数】6页(P67-72)【作者】史钟;郁肖夫;王晓稼【作者单位】310022 杭州,浙江省肿瘤医院化疗中心;310022 杭州,浙江省肿瘤医院放疗科;310022 杭州,浙江省肿瘤医院化疗中心【正文语种】中文【中图分类】R73-3【相关文献】1.丙戊酸钠上调NM23H1基因的表达来抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞的细胞迁移 [J], 李高峰;钱淘来;李桂生;杨春旭;2.埃兹蛋白对人乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭转移能力影响的初步实验研究 [J], 何菁;夏添松;王水3.雌激素受体β1对乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮间质转化影响的初步研究 [J], 周艳;陈莉;明佳;唐鹏;张毅;杨新华;姜军4.刺五加皂苷B/E对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移能力的影响及作用机制研究[J], 梁睿; 翟溯澜; 吕梦雨; 蒋艳婷; 韦翠萍; 郭冷秋5.RNAi技术敲减乳腺癌MDA-MB-231细胞SIRT2基因的研究 [J], 张舟; 邓小冲; 章骏; 夏振华; 房林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
伊班膦酸钠对人乳腺癌细胞系MDA—MB-231、MDA—MB-453的体外生长
伊班膦酸钠对人乳腺癌细胞系MDA—MB-231、MDA—MB-
453的体外生长
伊班膦酸钠是一种有效的治疗骨转移的药物，其另一个重要的应用领域就是治疗乳腺癌。
在体外实验中，伊班膦酸钠能够抑制MDA—MB-231和MDA—MB-453细胞系的生长。
MDA—MB-231和MDA—MB-453细胞系都是一种三阴性乳腺癌细胞系，其没有表达雌激素受体、孕激素受体和人表皮生长因子受体2（HER2）受体，因此难以通过内分泌治疗和靶向治疗来治疗。
在伊班膦酸钠的作用下，这些细胞系的增殖能力显著降低，细胞增殖曲线明显下降。
此外，伊班膦酸钠还能够诱导MDA—MB-231和MDA—MB-453细胞的凋亡。
通过检测细胞的DNA片段化程度和细胞形态的改变，可以发现伊班膦酸钠处理后，这些细胞系死亡比例增加，凋亡率明显上升。
伊班膦酸钠可能通过多个途径来抑制乳腺癌细胞系的生长。
一方面，伊班膦酸钠能够抑制骨吸收和骨髓内的肿瘤微环境，从而减少乳腺癌细胞的生长和迁移。
另一方面，伊班膦酸钠还能够抑制乳腺癌细胞的凋亡抗原Bcl-2，促进凋亡信号通路的激活。
综合来看，伊班膦酸钠在乳腺癌治疗中具有广泛的潜在应用价值，特别是在治疗三阴性乳腺癌方面。
需要更多的临床和基础研究来评估伊班膦酸钠与传统化疗、内分泌治疗和靶向治疗的联合应用，进一步确定其在乳腺癌治疗中的作用和机制。
用于活体成像的人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞系的构建
用于活体成像的人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞系的构建王珂;谢四梅;何建军;任予;夏海滨;张新伟【摘要】Objective To investigate the apoptosis-inducing effect of honokiol on human non-Hodgkin lymphoma Raji cells and the possible mechanism. Methods Raji cells were treated with different concentrations of honokiol, and the proliferation of the cells was detected using MTT assay. Flow cytometry was employed to analyze the cell cycle changes and apoptosis of honokiol-treated cells. Caspase 8 activity in the cells was measured by caspase 8 kit, and RT-PCR was used to detect the expression of apoptosis-related genes Bcl-2, Bad, and Bax. Results Honokiol significantly inhibited the growth of Raji cells in a time- and dose-dependent manner, with IC50 concentration of 17.53, 12.61, and 7.4 μg/ml at 12, 24, 48 h, respectively. Flow cytometry revealed cell cycle arrest atG0/G1 phase following honokiol treatment. The apoptosis rates of Raji cells treated with 7.5 and 15 μg/ml honokiol were significantly higher than that of the control cells [(18.24+2.53)%, (28.44±2.48)% vs (4.84±1.15)%,P<0.01]. Caspase 8 activity in Raji cells was significantly enhanced by honokiol (P<0.05). The mRNA expression of the apoptosis-promoting gene Bad was significantly increased following honokiol treatment (P<0.01), while the expressions of Bcl-2 and Bax remained unchanged. Conclusion Honokiol can induce apoptosis in Raji cells possibly in relation to enhancement of caspase 8 activity and Bad gene expression.%目的构建能稳定表达荧光素酶和绿色荧光蛋白的人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞系以建立可用于活体成像的三阴性乳腺癌裸鼠移植瘤模型.方法采用磷酸钙共沉淀的方法构建表达荧光素酶和绿色荧光蛋白的慢病毒载体,体外感染MDA-MB-231细胞,经G418筛选得到稳定细胞系后,通过活体成像评价感染后细胞表达荧光素酶的情况,并通过MTT法、transwell肿瘤侵袭模型、细胞划痕实验等评价细胞的增殖、侵袭及转移能力是否改变；此外将细胞接种至雌性BALB/c-nu//nu裸小鼠的右侧第2对乳房垫内,构建乳腺癌原位肿瘤模型.利用活体成像系统监测体内肿瘤的生长及转移情况,并通过冰冻切片、HE染色评价细胞系在活体内的稳定性及成瘤能力.结果成功构建能稳定表达荧光素酶和绿色荧光蛋白的MDA-MB-231细胞系,荧光素酶的活性达到每细胞9689 photons/s,慢病毒的整合没有改变细胞的增殖、迁移及侵袭能力；成功建立了乳腺癌裸鼠原位移植瘤模型.结论 (1)慢病毒以其高效稳定的感染率,应作为标记荧光素酶基因的首选载体；(2)带有荧光素酶的MDA-MB-231细胞在动物体内可被快速而灵敏的检测到,这将为人三阴性乳腺癌转移机制的研究及抗肿瘤药物的研发提供一个直观、方便及灵敏的平台；(3)荧光素酶和荧光蛋白基因双标记优于单标记.【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2011(031)011【总页数】7页(P1812-1818)【关键词】活体生物发光成像;MDA-MB-231细胞;三阴性乳腺癌;裸鼠;移植瘤模型【作者】王珂;谢四梅;何建军;任予;夏海滨;张新伟【作者单位】西安交通大学第一附属医院肿瘤外科,陕西西安710061;西安交通大学第一附属医院肿瘤外科,陕西西安710061;西安交通大学第一附属医院肿瘤外科,陕西西安710061;西安交通大学第一附属医院肿瘤外科,陕西西安710061;陕西师范大学基因治疗实验室,陕西西安710062;西安交通大学第一附属医院肿瘤外科,陕西西安710061【正文语种】中文【中图分类】R737.9三阴性乳腺癌（TNBC）是指雌激素受体、孕激素受体和人表皮生长因子受体2（HER-2）均阴性表达的乳腺癌。
KDM3A沉默对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231凋亡和侵袭能力的影响
January 2021Vol.41 No.12021年 1月 第41卷第1期基础医学与临床Basic & Clinical Medicine文章编号：1001-6325 ( 2021 ) 01-0033-05研究论文KDM 3A 沉默对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231凋亡和侵袭能力的影响张天瑞1,高文怡1,姚 娟2*收稿日期：2020-08-06 修回日期：2020-11-05基信项目：国家自然科学基金(81960339,81660305)*通信作者(corresponding author ) :yaoj324@ (1.新疆医科大学，新疆乌鲁木齐830000； 2.新疆医科大学第一附属医院影像中心，新疆乌鲁木齐830000)摘要：目的探讨siRNA 介导的KDM 3A 基因沉默对乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖、凋亡及侵袭的影响。
方法构建KDM3A 基因特异性siRNA 慢病毒载体。
感染MDA-MB-231细胞，实时荧光定量PCR 检测乳腺癌细胞转染siRNA-KDM3A 的效率；CCK-8法检测细胞增殖；Westem blot 检测细胞凋亡；Transwell 小室法检测细胞侵袭。
结果在 MDA-MB-231 细胞中，相对于 NC 组，KDM3A-sh1、KDM3A-sh2、KDM3A-sh3 组中 KDM3A 基因的 mRNA 表达均下调；KDM3A-sh2组基因敲低效率最高;mRNA 相对表达量降低了 80. 1%(P <0.01)；沉默KDM 3A 基因后，MDA-MB-231 细胞增殖能力减弱，凋亡率升高(P <0. 05)，侵袭能力下降(P <0. 01)。
结论siRNA 介导的KDM 3A 沉默能抑制乳腺 癌细胞的增殖、侵袭，并促进细胞凋亡。
关键词：KDM3A ；基因沉默;乳腺癌;增殖;凋亡中图分类号:R34文献标志码：AEffects of KDM 3A silencing on the apoptosisand invasion of human breast cancer cell line MDA-MB-231ZHANG Tian-rui 1 , GAO Wen-yi 1 , YAO Juan 2*(1. Xinjiang Medical University , Urumqi 830000； 2. Imaging Center , Department of Radiology, the First Affiliated Hospital ,Xinjiang Medical U Diversity , Urumqi 830000, China)Abstract : Objective To investigate the effect of siRNA mediated KDM 3A gene silencing on cell proliferation andapoptosis of breast cancer cell line MDA-MB-231. Methods Constructed a KDM 3A gene-specific siRNA lentiviral vector to infect breast cancer MDA-MB-231 cells ， and detected the efficiency of breast cancer cells transfected withsiRNA-KDM3A by the real-time fluorescent quantitative PCR. CCK-8 method was used to detect cell proliferation ， Western blot was used to test cell apoptosis and Transwell method was used to detect cell invasion. Results Compared with the control group ， the expression of KDM3A mRNA was down-regulated in KDM3A-sh1， KDM3A-sh2 andKDM3A-sh3 cells ， and the most efficient interference RNA was KDM3A-sh2， with the expression of mRNA de creased by 80. 1%( P <0. 01). After silencing KDM 3A , the proliferation of MDA-MB-231 cells decreased , the apop tosis rate increased ( P <0.05) , and the invasion ability decreased ( P <0.01). Conclusions siRNA -mediated KDM 3A gene silencing inhibits proliferation and invasion of breast cancer cells and promotes their apoptosis.Key words : KDM3A ； gene silencing ； breast cancer ； proliferation ； apoptosis34基础医学与临床Basic&Clinical Medicine2021.41(1)乳腺癌（breast cancer）是全世界女性最常见的恶性肿瘤［1］。
乳腺癌细胞MDA-MB-231诱导破骨细胞成熟方法研究
第24卷3期 2018年5月天津医科大学学报Journal of Tianjin Medical University Vol. 24, No. 3May 2018205文章编号1006-8147(2018)03-0205-04乳腺癌细胞MDA-MB-231诱导破骨细胞成熟方法研究论著王硕(天津医科大学肿瘤医院生物化学与分子生物学研究室，国家肿瘤临床医学研究中心，天津市“肿瘤防治”重 点实验室，天津市恶性肿瘤临床医学研究中心，乳腺癌防治教育部重点实验室，天津300060)摘要目的:探索乳腺癌细胞诱导小鼠骨髓源性破骨细胞成熟最佳条件。
方法:采用贴壁分选法和贴壁前加入15ng/mL巨噬细 胞集落刺激因子（M-CSF)贴壁分选法分离得到小鼠骨髓单核细胞。
两种分选方法得到的小鼠骨髓单核细胞用30ng/mLM-CSF 处理3d后，分别均分为两组，一组用50ng/mL核因子！B受体活化因子配体(；A<KL)，30ng/mLM-CSF和20%MDA-MB-231 细胞上清处理 7d;另一组用 50ng/mL;A<KL 和 30ng/mLM-CSF 处理 2d 后再用 50ng/mL;A<KL，30ng/mLM-CSF 和 20> MDA-MB-231细胞上清处理7d，T;A P染色，统计分析TRAP阳性细胞数和直径大小。
结果：50ng/mL;A<KL，30ng/mLM- CSF和20%MDA-MB-231细胞条件培养基诱导，细胞发生炎症反应；50ng/mL;A<KL和30ng/mlM-CSF处理2d后，50ng/ mL;A<KL，30ng/mLM-CSF和20%MDA-MB-231细胞条件培养基能够诱导出成熟的破骨细胞；相比直接贴壁分选，贴壁前 加入15ng/mLM-CSF贴壁分选能够分选出更多具有活力的前体破骨细胞。
结论:诱导破骨细胞分化最佳条件为：贴壁前加入 15ng/mLM-CSF 处理 24h，30ng/mLM-CSF 处理 3d 后，用50ng/mL;A<KL 和 30ng/mLM-CSF 处理 2d，再用 50ng/mL ;A<KL，30ng/mLM-CSF 和 20%MDA-MB-231 细胞条件培养基诱导 7d。
马钱子碱对乳腺癌细胞MDA-MB-231作用的实验研究
马钱子碱对乳腺癌细胞MDA-MB-231作用的实验研究余志艳;李平【期刊名称】《安徽医药》【年(卷),期】2008(012)009【摘要】目的本研究旨在观察马钱子碱(Brucine)对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖抑制和诱导凋亡作用,并分析Brucine在诱导细胞凋亡过程中对Bcl-2、Bax 和Caspase-3蛋白表达的调控作用.方法人乳腺癌细胞株MDA-MB-231(雌激素受体阴性)细胞以L-15培养基体外培养,用MTT 法测定Brucine对细胞的增殖抑制作用;倒置显微镜观察细胞形态;以碘化丙啶(PI)单染流式细胞仪检测细胞凋亡;AnnexinV-FITC /PI双染流式细胞术检测Brucine对MDA-MB-231的诱导凋亡作用;Western蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase3的表达.结果 Brucine对MDA-MB-231细胞有明显的增殖抑制作用;观察到典型的细胞凋亡形态学特征性改变;流式细胞术PI染色结果显示随着Brucine浓度的增加细胞凋亡率逐渐增高并呈明显的浓度依赖,与对照组相比差异有显著性(P<0.05);早期凋亡率和晚期凋亡率先增加后降低,但死亡细胞逐渐增加;且随着Brucine浓度的增加抗凋亡基因Bcl-2表达水平明显降低,而促凋亡基因Bax和Caspase-3表达明显增高.结论 Brucine能够诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡,其分子机制可能与激活Bax、Caspase-3和抑制Bcl-2等凋亡调控基因有关.【总页数】4页(P779-782)【作者】余志艳;李平【作者单位】安徽医科大学,安徽,合肥,230001;安徽医科大学附属省立医院中医科,安徽,合肥,230001【正文语种】中文【中图分类】R9【相关文献】1.Ghrelin抑制多柔比星诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡的实验研究 [J], 曲文志;杨蕾;涂巍;张云微;金光华;温健2.埃兹蛋白对人乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭转移能力影响的初步实验研究 [J], 何菁;夏添松;王水3.光动力疗法对乳腺癌细胞株MDA-MB-231的体外实验研究 [J], 杨华伟;刘剑仑;蔡军;蒋奕4.山奈酚诱导三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231中乳腺癌耐药蛋白的表达并下调抗肿瘤药物对MDA-MB-231细胞的杀伤作用 [J], 张磊; 林晓萌; 曹哲丽; 李静; 杨晓妹5.阿帕替尼与白蛋白结合型紫杉醇在MDA-MB-231乳腺癌细胞系中的协同抗癌作用 [J], 李静;王志芬;张晓慧;杨庚武;刘峥;牛广旭因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
KCNQ1OT1基因敲除联合鸦胆子素D对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移及侵袭的影响
doi:10.3971/j.issn.1000-8578.2023.23.0456KCNQ1OT1基因敲除联合鸦胆子素D 对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移及侵袭的影响龙凤1,2,3，赵玉1﹡，黄勇1，刘晓燕1，周旋1，李雪1，叶海琳1Effects of KCNQ1OT1 Gene Knockout Combined with Bruceine D on Proliferation, Migration, and Invasion of Breast Cancer MDA-MB-231 CellsLONG Feng 1,2,3, ZHAO Yu 1*, HUANG Yong 1, LIU Xiaoyan 1, ZHOU Xuan 1, LI Xue 1, YE Hailin 1 (*: Contributed Equally as the First Author)1. School of Basic Medicine, Gansu University of Chinese Medicine, Lanzhou 730000, China;2. Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Prevention and Treatment of Chronic Diseases in Gansu Provincial (Cultivation Base), Lanzhou 730000, China;3. Provincial Key Laboratory of Molecular Medicine and Chinese Medicine Prevention and Control of Major Diseases in Universities of Gansu Province, Lanzhou 730000, ChinaAbstract: Objective To explore the effect of KCNQ1OT1 gene knockout combined with bruceine D on the proliferation, migration, and invasion of breast cancer MDA-MB-231 cells. Methods Cell Counting Kit-8, wound healing, and Transwell invasion assay were used to detect the effects of bruceine D and siKCNQ1OT1 on the viability, migration, and invasion of MDA-MB-231 cells. Effect of bruceine D and siKCNQ1OT1 on the expression of KCNQ1OT1 in MDA-MB-231 cells was detected by qRT-PCR. Western blot was used to detect the effect of bruceine D and siKCNQ1OT1 on the expression of EMT-related proteins and CDC42, p-MKK7, MKK7 proteins in MDA-MB-231 cells. Results Bruceine D and siKCNQ1OT1 could significantly inhibit the viability, migration, and invasion of MDA-MB-231 cells, and the inhibitory effect was enhanced when they were combined (all P <0.05); bruceine D downregulated the expression of KCNQ1OT1 in MDA-MB-231 cells (all P <0.05); bruceine D combined with siKCNQ1OT1 significantly decreased CDC42, p-MKK7, N-cadherin, and Vimentin expression in MDA-MB-231 cells and increased the expression of E-cadherin (all P <0.05). Conclusion Bruceine D combined with siKCNQ1OT1 significantly inhibit the proliferation, migration, invasion, and EMT of human breast cancer MDA-MB-231 cells, and its molecular mechanism may be related to the blocking of CDC42/MKK7 signaling pathway.Key words: Breast cancer; Bruceine D; KCNQ1OT1; Migration; InvasionFunding: Gansu Province’s “Double First Class” Scientific Research Key Project (No. GSSYLXM-01); Gansu Province Higher Education Innovation Fund (No. 2021A-078); Education Unveiling and Leadership Project (No. 2021jyjbgs-03)Competing interests: The authors declare that they have no competing interests.摘 要：目的 探讨KCNQ1OT1基因敲除联合鸦胆子素D 对乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响及其机制。
乳腺癌细胞MDA-MB-231诱导破骨细胞成熟方法研究
乳腺癌细胞MDA-MB-231诱导破骨细胞成熟方法研究王硕【摘要】目的:探索乳腺癌细胞诱导小鼠骨髓源性破骨细胞成熟最佳条件.方法:采用贴壁分选法和贴壁前加入15 ng/mL巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)贴壁分选法分离得到小鼠骨髓单核细胞.两种分选方法得到的小鼠骨髓单核细胞用30 ng/mL M-CSF处理3d后,分别均分为两组,一组用50 ng/mL核因子κB受体活化因子配体(RANKL),30 ng/mL M-CSF和20％ MDA-MB-231细胞上清处理7d;另一组用50 ng/mL RANKL和30 ng/mL M-CSF处理2d后再用50 ng/mL RANKL,30 ng/mL M-CSF和20％MDA-MB-231细胞上清处理7d,TRAP染色,统计分析TRAP阳性细胞数和直径大小.结果:50 ng/mL RANKL,30 ng/mL M-CSF和20％MDA-MB-231细胞条件培养基诱导,细胞发生炎症反应;50 ng/mL RANKL和30 ng/ml M-CSF处理2d后,50 ng/mLRANKL,30 ng/mL M-CSF和20％ MDA-MB-231细胞条件培养基能够诱导出成熟的破骨细胞;相比直接贴壁分选,贴壁前加入15 ng/mL M-CSF贴壁分选能够分选出更多具有活力的前体破骨细胞.结论:诱导破骨细胞分化最佳条件为:贴壁前加入15 ng/mL M-CSF处理24 h,30 ng/mL M-CSF处理3d后,用50 ng/mL RANKL和30 ng/mL M-CSF处理2d,再用50 ng/mLRANKL,30 ng/mL M-CSF和20％ MDA-MB-231细胞条件培养基诱导7d.【期刊名称】《天津医科大学学报》【年(卷),期】2018(024)003【总页数】4页(P205-208)【关键词】M-CSF;RANKL;破骨细胞;乳腺癌;炎症反应【作者】王硕【作者单位】天津医科大学肿瘤医院生物化学与分子生物学研究室,国家肿瘤临床医学研究中心,天津市“肿瘤防治”重点实验室,天津市恶性肿瘤临床医学研究中心,乳腺癌防治教育部重点实验室,天津300060【正文语种】中文【中图分类】R737.9在女性人群中乳腺癌是一种常见的恶性肿瘤，每年将近有160万患者被确诊为乳腺癌，其中30%～40%的乳腺癌患者会发生转移，而超过90%死亡患者发生乳腺癌转移[1]。
乳腺癌细胞MDA-MB-231的核酸适体LXL-3及其应用[发明专利]
![乳腺癌细胞MDA-MB-231的核酸适体LXL-3及其应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/e045ad144693daef5ff73dd3.png)
专利名称：乳腺癌细胞MDA-MB-231的核酸适体LXL-3及其应用
专利类型：发明专利
发明人：杨朝勇,李西兰,朱志,欧阳高亮,张伟云,宋彦龄
申请号：CN201310314448.6
申请日：20130724
公开号：CN103343128A
公开日：
20131009
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：乳腺癌细胞MDA-MB-231的核酸适体LXL-3及其应用，涉及乳腺癌细胞。
所述乳腺癌细胞MDA-MB-231的核酸适体LXL-3在0℃，0.157M/L Na，0.005M/L Mg条件下具有独特的茎环结构。
所述乳腺癌细胞MDA-MB-231的核酸适体LXL-3在制备乳腺癌诊断试剂、治疗乳腺癌药物、乳腺癌的肿瘤标志物等中，以及在研究乳腺癌与正常组织的差异性、乳腺肿瘤组织切片成像、乳腺肿瘤相关的活体成像、乳腺癌的靶向治疗等中的应用。
申请人：厦门大学
地址：361005 福建省厦门市思明南路422号
国籍：CN
代理机构：厦门南强之路专利事务所(普通合伙)
代理人：马应森
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MCM10沉默对乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用及其机制
第47卷第3期2021年5月吉林大学学报(医学版)Journal of Jilin University(Medicine Edition)Vol.47No.3May2021652［文章编号］1671-587X(2021)03-0652-08DOI：10.13481/j.1671-587X.20210315MCM10沉默对乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用及其机制巩培1,刘竟然1,赵世敏1,王玉珍1,谢基明2(1.内蒙古农业大学生命科学学院生物制药工程系，内蒙古呼和浩特010108；2.内蒙古自治区人民医院检验科，内蒙古呼和浩特010020)［摘要］目的：探讨微小染色体维持蛋白10(MCM10)基因沉默对乳腺癌细胞的增殖抑制作用，并阐明其作用机制。
方法：将人三阴性乳腺癌(TNBC)MDA-MB-231细胞分为对照组、MCM10干扰组1(shMCM10-1组)和MCM10干扰组2(shMCM10-2组)。
构建MCM10慢病毒干扰载体MCM10-1和MCM10-2,分别感染shMCM10-1组和shMCM10-2组MDA-MB-231细胞，对照组MDA-MB-231细胞感染阴性对照病毒。
采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测各组MDA-MB-231细胞中MCM10mRNA和蛋白表达水平，Cellomics计数法检测各组MDA-MB-231细胞的增殖率,流式细胞术检测各组MDA-MB-231细胞凋亡率,采用Caspase3/7活性检测试剂盒检测各组MDA-MB-231细胞中Caspase3/7活性。
结果：与对照组比较，shMCM10-1组和shMCM10-2组MDA-MB-231细胞中MCM10mRNA表达率明显降低(P<0.01),未检测到MCM10蛋白表达；与对照组比较，shMCM10-1组和shMCM10-2组MDA-MB-231细胞相对增殖倍数明显降低(P<0.01),MDA-MB-231细胞凋亡率明显升高(P<0.01),MDA-MB-231细胞中Caspase3/7活性明显升高(P<0.01)。
MDA-MB-231人乳腺癌细胞
MDA-MB-231人乳腺癌细胞Cat Number：KG033 For Research Use Only一、组成:组份KG033细胞一瓶25cm2细胞说明书1份细胞培养注意事项1份二、客户自备试剂:1、PBS (凯基货号：KGB5001)2、Complete growth medium (凯基货号：KGM 41300-500)3、0.25% （W/V） Trypsin-0.53mM EDTA (凯基货号：KGY0012)三、细胞简介:Growth Properties: adherentOrganism: Homo sapiens (human)Source: Organ: mammary gland; breastCell type: epithelialDisease: adenocarcinomaDerived from metastatic site: pleural effusionAge: 51 years adultGender: femaleEthnicity: CaucasianPropagation: Complete growth medium: L-15+10%进口FBS+P/STemperature: 37.CAtmosphere: Without(CO2)Subculturing: Protocol:1.Remove and discard culture medium.2.Briefly rinse the cell layer with 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA solutionto remove all traces of serum that contains trypsin inhibitor.3.Add 2.0 to 3.0 ml of Trypsin-EDTA solution to flask and observe cells underan inverted microscope until cell layer is dispersed.Note: To avoid clumping do not agitate the cells by hitting or shaking the flaskwhile waiting for the cells to detach. Cells that are difficult to detach maybe placed at 37°C to facilitate dispersal.4.Add 6.0 to 8.0 ml of complete growth medium and aspirate cells by gentlypipetting.5.Add appropriate aliquots of the cell suspension to new culture vessels.6.Incubate cultures at 37°C without CO2.Subcultivation ratio: A subcultivation ratio of 1:2 to 1:4 is recommendedMedium renewal: 2 to 3 times per weekPreservation: Freeze medium: Complete growth medium supplemented with 5% (v/v) DMSOStorage temperature: liquid nitrogen vapor phase四、常见问题及解决方案:1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。
沉默EGFR基因对MDA-MB-231细胞化疗药物敏感性的研究
华中科技大学硕士学位论文前 言乳腺癌是严重威胁女性健康和生命的常见恶性肿瘤，每年约有一百八十万女性确诊此病[1]。
随着研究的不断深入，人们逐渐认识到不同生物学行为的乳腺癌亚型对判断预后和指导临床治疗显示出越来越重要的作用。
根据基因芯片技术，乳腺癌表达的基因谱进行分类[2]：①Luminal A型；②Luminal B 型；③Her-2 过表达型；④Normal-like 型；⑤Basal-like 型。
其中Basal-like型的乳腺癌中，又有一类特殊的乳腺癌，其ER、PR、Her-2 均为阴性，我们又称为三阴性乳腺癌。
这类乳腺癌占所有乳腺癌类型的10%-20.8%[3]。
其对内分泌治疗和Herceptin的靶向治疗的效果欠佳，虽然对化疗有较好的敏感性，但其复发、局部、远处转移的风险相比其他四类乳腺癌都要高。
目前还没有专门针对三阴性乳腺癌的治疗指南。
为了让患者能够从化疗中最大程度的获益，乳腺癌的个体化治疗逐渐成为医学发展的趋势[4]。
我们需要探寻能够预测乳腺癌患者对化疗药物敏感的分子标记物，以此来规范我们对化疗药物的使用原则，同时也为科学、合理、有效的开展个体化治疗提供依据。
表皮生长因子受体（Epidermal growth factor receptor, EGFR）是相对分子量为170kD的跨膜糖蛋白，具有酪氨酸激酶活性，在包括肺癌、乳腺癌在内的多种上皮来源的恶性肿瘤中呈高表达，大量的回顾性研究显示EGFR的过表达与肿瘤的恶性程度、易感性、放化疗敏感度下降密切相关。
许多阻滞和下调EGFR的方法被用来抑制肿瘤细胞的生长、分化、增殖、迁移以改善预后，因此EGFR目前被认为是肿瘤基因治疗的重要靶点之一[5]。
多项回顾性研究显示EGFR在三阴性乳腺癌中是过表达的。
某些文献报道其过表达率高达65%。
而且EGFR是评价三阴性乳腺癌对化疗敏感性及预后的一个重要指标[6，7，8]。
Hiroko等[9]人的回顾性研究显示EGFR在三阴性乳腺癌中表达率达62%。
MTA2基因敲除抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞株增殖和迁移能力
MTA2基因敲除抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞株增殖和迁移能力翁伟;徐元宏;宋晓菲【摘要】目的探讨人乳腺癌MDA-MB-231细胞MTA2基因敲减后,人乳腺癌生物学特性的改变.方法体外化学合成MTA2序列特异性的shRNA,经慢病毒转染人乳腺癌细胞系MDA-MB-231后,挑选出稳定低表达MTA2的细胞株.收集敲除了MTA2的细胞,定量实时荧光PCR (qRT-PCR)、Westem blot法分别检测MTA2mRNA和蛋白的抑制水平.采用CCK-8法、Transwell迁移实验以及划痕实验观察敲减MTA2对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移能力的影响,体外利用裸鼠荷瘤实验进一步观察MTA2敲除后乳腺癌生长、转移能力的变化.结果MTA2的shRNA有效地抑制了MTA2mRNA和蛋白水平(P＜0.05).shRNA干扰MTA2组的MDA-MB-231细胞,细胞增殖能力显著降低(P＜0.05);细胞侵袭、迁移能力明显降低(P＜0.05);裸鼠荷瘤实验中MTA2下调组瘤体明显更小,而且肺部转移灶明显减少(P＜0.05).结论 MTA2被稳定干扰后,乳腺癌的某些恶性生物学行为能有效抑制;表明MTA2与乳腺癌的生长、转移有一定关系.【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2016(051)003【总页数】5页(P373-377)【关键词】RNA干扰;MTA2;乳腺癌;生长;转移【作者】翁伟;徐元宏;宋晓菲【作者单位】安徽医科大学第一附属医院检验科,合肥230022;安徽医科大学第一附属医院检验科,合肥230022;铜陵市人民医院输血科,铜陵244009【正文语种】中文【中图分类】R737.9转移相关基因家族（metastasis-associated gene family，MTA）家族包含3个成员，MTA1、MTA2和MTA3。
MTA1在很多肿瘤中高表达，如乳腺癌、食管癌、胰腺癌和肝细胞肝癌等［1］，并且参与了肿瘤的转移和浸润［2-3］。
乳腺癌细胞MDA-MB-231肺转移模型的建立及其评价
乳腺癌细胞MDA-MB-231肺转移模型的建立及其评价曹让娟1，翟艳华1，卿旭1，刘雅文2，朱筱娟1【摘要】[摘要] 目的：探讨用绿色荧光蛋白(GFP)标记的乳腺癌细胞MDA-MB-231建立可量化评估的自发性肺转移和实验性肺转移动物模型，为研究乳腺癌的转移机制提供依据。
方法：采用慢病毒载体介导的病毒包装体系，获得稳定表达GFP的细胞系MDA-MB-231-GFP，通过皮下注射方式将细胞接种于Balb/C裸鼠皮下，建立自发性肺转移模型，通过尾静脉注射方式将细胞接种到重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠体内，建立实验性肺转移模型,分别于8周和5周后处死小鼠，取肺组织于体视显微镜下观察。
结果：自发性肺转移小鼠接种细胞8周后，原位形成直径约为15 mm的肿瘤块；处死小鼠后肺部大体标本未见结节状转移灶，但488 nm激发光下见转移灶呈绿色点状分布。
实验性肺转移小鼠接种细胞5周后处死小鼠，肺部形成的转移灶肉眼不可见，但在488 nm激发光波长下同样呈现绿色点状分布。
肺转移灶易于观察和统计。
结论：成功建立了可以量化的MDA-MB-231细胞肺转移动物模型。
【期刊名称】吉林大学学报（医学版）【年(卷),期】2011(037)003【总页数】6【关键词】[关键词] 乳腺肿瘤；慢病毒体系；肺转移；动物模型乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，乳腺癌转移和复发是导致患者死亡的主要原因[1-2]。
对乳腺癌发病或转移机制的研究需要建立可靠的实验动物模型，以便模拟体内过程，为进一步的临床治疗提供理论依据。
肺组织因含有丰富的血氧供应，常常是恶性肿瘤易于侵犯的器官，因此阻断肺转移过程是提高乳腺癌患者生存质量的重要环节，建立量化的肺转移模型尤为重要。
肺转移动物模型可分为自发性和实验性肺转移动物模型：将乳腺癌细胞接种到免疫缺陷小鼠乳腺脂肪垫或皮下，由于肿瘤的生长而形成的远端肺转移为自发性肺转移；将细胞通过尾静脉注射到免疫缺陷小鼠体内而形成的肺转移为实验性肺转移[3]。
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MDA-MB-231细胞系是从一名51岁的白种女性转移性乳腺癌的胸腔积液建立的人乳腺细胞系。
该上皮细胞系是医学研究实验室中使用最广泛的乳腺癌细胞系之一，特别是涉及CRISPR/Cas9基因敲除的那些。
由于缺乏ER和PR表达以及HER2扩增，该细胞系最初被归类为“基础”乳腺癌细胞系。
然而，由于它表现出claudin-3和claudinin-4的下调，Ki-67增殖标记物的低表达，与上皮-间质转化有关的标记物的富集，因此现在被认为属于claudin-低分子亚型。
以及与乳腺癌干细胞（CSC）相关的特征的表达，例如CD44 + CD24- /低表型。
这就是为什么许多研究一直专注于基因编辑
MDA-MB-231细胞系的原因。
应用：
1. CRISPR / Cas9诱变使靶向MDA-MB-231细胞的推定癌症依赖性无效。
癌细胞需要表达某些基因的表达，这些基因编码肿瘤生长所必需的蛋白质。
沉默这些基因的表达或阻断蛋白质的活性可以触发细胞死亡和持久的肿瘤消退。
因此，识别和表征癌症依赖性是临床前癌症研究的关键目标。
MELK被认为是多种癌症类型的癌症依赖性和推定药物靶标，其中之一是MDA-MB-231细胞系。
MELK在乳腺癌细胞中过表达，与患者预后不良有关。
此外，据报道，使用RNAi 敲低MDA-MB-231细胞中的MELK可阻止癌细胞增殖并触发细胞周期停滞或有丝分裂灾难。
研究人员设计了针对MELK的七个指导RNA（gRNA），并将每个指导RNA 克隆到一个表达GFP的载体中，并将该指南转导到了三个表达Cas9细胞系中：三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231据报道会上瘾。
MELK表达。
对过表达的MDA-MB-231细胞中MELK蛋白水平的蛋白质印迹分析证实，CRISPR系统可有效消除MELK表达。
2.β1整合素对MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖和细胞信号传导的不同影响
为了探索β1整合素的功能意义，研究人员通过基于CRISPR/Cas9的方法建立了β1-KOMDA-MB-231细胞。
进行蛋白质的印迹和FACS分析以确认
MDA-MB-231细胞系中β1的有效敲除。
令人惊讶地，β1的表达对细胞增殖表现出相反的作用。
这些效应取决于细胞密度，当在稀疏条件下培养细胞时，它们显示出细胞增殖的上调，而在稠密条件下，则表明细胞生长的下调。
与野生型细胞相比，KO MDA-MB-231细胞中ERK的磷酸化水平在稀疏培养条件下始终被抑制，而在致密培养条件下始终被上调。
KO MDA-MB-231细胞中EGFR的磷酸化水平增加。
相比之下，MDA-MB-231 KO细胞中AKT的磷酸化水平降低。
在MDA-MB-231敲除细胞中，集落和肿瘤形成的能力均被显着抑制，这表明β1在肿瘤发生的细胞存活信号转导中起重要作用。
在Res细胞中拯救了KO细胞
中的这些异常表型。
综上所述，这些结果清楚地表明了β1在癌细胞中的独特作用：抑制细胞生长和促进细胞存活，这可能有所启发。
3.敲低BCL2L12导致MDA-MB-231乳腺癌细胞中的顺铂耐药
发现基因BCL2L12在正常乳腺组织中高表达，并且与乳腺癌患者的良好预后相关。
研究人员报道，在MDA-MB-231乳腺癌细胞中，顺铂处理后，BCL2L12的mRNA水平及其转录变异体BCL2L12A可能被上调。
BCL2L12和BCL2L12A 的组合大大抑制了顺铂诱导的细胞凋亡。
相反，每种蛋白质的异位表达促进顺铂
诱导的细胞凋亡。
这些结果表明，BCL2L12和BCL2L12A的表达降低或缺失可能有助于乳腺癌患者的顺铂耐药性。
此外，我们发现顺铂诱导的β-catenin的下调在BCL2L12-和BCL2L12A敲除的MDA-MB-231细胞中被部分抑制，这表明这两种蛋白的敲低可能稳定顺铂诱导的细胞凋亡中的β-catenin。
简而言之，我们提出BCL2L12和BCL2L12A可能在顺铂诱导的MDA-MB-231乳腺癌细胞凋亡中起重要作用。
基因敲除切割效率不仅可以让人具有生成人糖基化谱和建立调控记录的能力，而且具有多种优势，是一种特别有吸引力的重组蛋白表达系统。
首先，它在谷氨酸上羧基化，在酪氨酸上硫酸化。
第二，操作简单，通过瞬时基因表达可以快速产
生重组蛋白。
第三，可用于稳定的重组蛋白生产。
一些研究人员利用基因敲除切割效率系统产生基因编辑细胞系，对GLUL基因组位点进行靶向测序，产生产生产生EPO的稳转细胞系，并发现重组促红细胞生成素在人体内稳定表达的机制。
根据科研需求，结合靶基因的情况进行基因稳转敲除方案设计。
方案1：小片段基因敲除方案，gRNA设在外显子2两端的内含子中，敲除外显子编码碱基数为非3倍数，敲除后可造成移码。
方案2：移码基因敲除方案，gRNA设在外显子上，缺失的碱基数为非3倍数，敲除后可发生移码突变。
方案3：大片段基因敲除方案，将整个基因的编码序列敲除，达到大片段敲除的效果。
Reference:
5 Contributions HeLa Cells Have Made to Science. Cell Science from Technology Networks. Retrieved 2020-03-25.
Yao Ye-bao, Wang Guang-fei, Dong Qing-cai, Cao Cheng. Construction of stable Cdc25C knockout HeLa cell strains using CRISPR/Cas9
gene-editing system, Military Medical Sciences, 2019,42(1):1-5. Huang Rongfu, Peng Weilin, Lin Jiansheng, Lian Jianfeng, Yang Xiaoyu, Zheng Ming. Construction of stable Cdc25C knockout HeLa cell strains using CRISPR/Cas9 gene-editing system. Military Medical Sciences, 2017,41(5):359-362。