微生物快速检测方法精编版
土壤微生物量碳测定方法(精编文档).doc
【最新整理，下载后即可编辑】土壤微生物量碳测定方法及应用土壤微生物量碳（Soil microbial biomass ）不仅对土壤有机质和养分的循环起着主要作用，同时是一个重要活性养分库，直接调控着土壤养分（如氮、磷和硫等）的保持和释放及其植物有效性。
近40年来，土壤微生物生物量的研究已成为土壤学研究热点之一。
由于土壤微生物的碳含量通常是恒定的，因此采用土壤微生物碳(Microbial biomass carbon, Bc)来表示土壤微生物生物量的大小。
测定土壤微生物碳的主要方法为熏蒸培养法（Fumigation-incubation, FI ）和熏蒸提取法（Fumigation-extraction, FE ）。
熏蒸提取法（FE 法）由于熏蒸培养法测定土壤微生物量碳不仅需要较长的时间而且不适合于强酸性土壤、加入新鲜有机底物的土壤以及水田土壤。
Voroney (1983)发现熏蒸土壤用0.5mol ·L -1K 2SO 4提取液提取的碳量与生物微生物量有很好的相关性。
Vance 等(1987)建立了熏蒸提取法测定土壤微生物碳的基本方法：该方法用0.5mol ·L -1K 2SO 4提取剂（水土比1：4）直接提取熏蒸和不熏蒸土壤，提取液中有机碳含量用重铬酸钾氧化法测定；以熏蒸与不熏蒸土壤提取的有机碳增加量除以转换系数K EC (取值0.38)来计算土壤微生物碳。
Wu 等（1990）通过采用熏蒸培养法和熏蒸提取法比较研究，建立了熏蒸提取——碳自动一起法测定土壤微生物碳。
该方法大幅度提高提取液中有机碳的测定速度和测定结果的准确度。
林启美等（1999）对熏蒸提取-重铬酸钾氧化法中提取液的水土比以及氧化剂进行了改进，以提高该方法的测定结果的重复性和准确性。
对于熏蒸提取法测定土壤微生物生物碳的转换系数K EC 的取值，有很多研究进行了大量的研究。
测定K EC 值的实验方法有：直接法（加入培养微生物、用14C 底物标记土壤微生物）和间接法（与熏蒸培养法、显微镜观测法、ATP 法及底物诱导呼吸法比较）。
食品微生物快速检测常用方法-纸片法测大肠菌群(精)
︶
液体样品吸取3个1mL分别涂布于3张纸片，再 吸取l:10和l:100稀释液各3个1mL，分别涂布于3张 纸片； 固体样品，吸取l:1混悬液3个1mL(mg)，分别 涂布于3张纸片，再吸取l:10、1:100稀释液各3个 mL(mg)，分别涂布于3张纸片，而后用手轻轻压平， 置36℃±1℃恒温箱培养15h，观察结果。
食品营养与检测专业教学资源库目录页结果报告食品营养与检测专业教学资源库过渡页设备和培养基食品营养与检测专业教学资源库培养箱天平均质器或乳钵试管10ml和100ml吸管广口瓶或三角瓶玻璃珠试管架溴甲酚紫ttc培养基
食品微生物快速检测常用方法纸片法测大肠菌群
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目录页
一
设备和培养基
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过渡页 操作步骤
一
1.样品处理 2.接种 3.结果判定
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样品处理 ︵
纸 片 法 测 大 肠 菌 群
液体样品按国标乳糖发酵法进行；固体样 品取25g，研碎加入225mL灭菌生理盐水混匀。
︶
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接种 ︵
纸 片 法 测 大 肠 菌 群
操作步骤 结果报告
二
三
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食品营养与检测专业教 学资源食品营养与检测专业教 学资源库
培养箱、天平、均质器或乳钵、试管、1.0mL和 10.0mL吸管、广口瓶或三角瓶、玻璃珠、试管架、溴 甲酚紫TTC培养基。 纸片(纸片制备：定性滤纸，切成10cm×12cm， 叠成5cm×6cm大小的双层纸片，经烘干或高压灭菌后 备用)、塑料袋(为耐高温的聚丙烯塑料薄膜袋，可按实 验要求压合成一定规格，115℃灭菌15min后备用)。
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微生物快速检测方法
微生物快速检测方法概述微生物快速检测方法是通过各种技术手段，利用微生物的生物特性来快速检测微生物的存在和数量。
传统的微生物检测方法需要长时间的培养时间，而且需要复杂的设备和技术，费用昂贵，而新兴的微生物快速检测技术则能够快速、准确地检测微生物，被广泛应用于农业、食品、医疗等领域。
本文将介绍几种常见的微生物快速检测方法。
1. 荧光PCR荧光PCR指的是利用荧光标记的探针来检测PCR反应中产生的特定DNA序列。
在PCR反应过程中，如果存在目标DNA序列，则荧光标记的探针将与其特异结合，产生荧光信号，在荧光仪中进行检测即可得到检测结果。
荧光PCR具有高灵敏度、高特异性、快速方便等优点，被广泛应用于微生物检测中。
同时，还可以通过荧光PCR技术构建荧光定量PCR系统，实现对微生物数量的精确测定。
2. 生物传感器生物传感器是一种新型的可重复使用、非侵入式的微生物检测方法。
生物传感器利用生物体内酶、免疫学反应或细胞作为传感元件，将其与物理、化学、电子等传感技术相结合，实现对微生物的快速检测。
生物传感器具有检测速度快、检测灵敏度高、检测范围广等优点，而且能够实现实时在线监测，被广泛应用于工业用水、环境监测、食品安全等领域。
3. 免疫学检测法免疫学检测法利用生物的免疫反应来检测微生物的存在和数量。
常用的免疫学检测法包括酶联免疫吸附检测法（ELISA）、荧光免疫检测法、放射免疫检测法等。
免疫学检测法具有高度的特异性和灵敏度，能够快速、准确地检测微生物，被广泛应用于食品卫生和临床诊断等领域。
4. 质谱技术质谱技术是一种通过分子量确定分子结构和组成的方法，能够检测各种化合物和生物大分子。
在微生物快速检测中，质谱技术通常用于检测微生物的蛋白质组成、代谢产物和生长情况等。
质谱技术具有高度的特异性和灵敏度，能够快速地检测微生物，而且对检测结果进行质量控制，确保结果的可靠性。
总结微生物快速检测方法的发展给微生物检测带来了很大的便利，提高了检测效率和准确性。
微生物快速检测方法3篇
微生物快速检测方法第一篇：微生物快速检测方法是一种用于检测微生物数量和类型的技术，它排除了传统方法中需要多日甚至数周才能得到结果的限制。
目前，有多种不同的微生物快速检测方法可供选择，以下是其中几种。
1. PCR检测法聚合酶链式反应（PCR）是一种广泛使用的微生物检测方法。
该技术依赖于单个微生物细胞中的DNA模板，通过重复循环DNA引物扩增模板DNA，从而在富集的样品中检测出微生物DNA。
相比于传统方法，PCR不需要等待微生物生长，因此它可以极大地减少样品准备和数据分析的时间。
2. 荧光定量PCR检测法荧光定量PCR（qPCR）是PCR技术的一种变体，它使用荧光探针来实现DNA扩增的实时监测。
具体地，qPCR将荧光探针引入PCR反应体系中，当扩增过程中的DNA与荧光探针结合时，就会放出荧光信号。
这种方法在微生物检测中广泛应用，因为它可以定量检测微生物数量，同时还可以消除污染的干扰。
3. 基因测序技术基因测序技术是一种高通量的检测方法，它可以快速测定微生物所携带的基因序列。
基于DNA序列的比对和解码，可以对微生物进行鉴定和分类。
整个测序过程可以在几个小时内完成，可以检测出样品中的潜在病原微生物，并发现抗药性和毒力相关基因。
基因测序技术可以通过揭示微生物的全基因组，来理解微生物的生长和感染机制。
上述方法都可以提供快速并准确的微生物检测结果，可以用于食品、环境、医疗设备等领域。
但是，所有这些方法都需要具备高质量的DNA和RNA作为输入，否则检测结果可能会出现假阳性或假阴性。
第二篇：微生物快速检测方法在农业和食品安全领域中非常重要。
传统的分离和培养方法需要数天才能得到微生物检测结果，且很难检测到低浓度菌群。
为了更快速、准确地检测微生物，出现了一些新的技术，以下是几种常用的方法。
1. 生物传感器生物传感器技术利用大肠杆菌与质粒间的交互作用来检测特定代谢产物。
这种方法可以用于检测细菌、真菌和病毒等微生物。
生物传感器不仅可以检测单一代谢产物，还可以监测多种种类，可以在几分钟内获得结果。
食品安全检测中关于微生物的快速检测方法
中图分类号：TS207.4
近年来，我国有关部门虽然加强了食品安全方面 的建设，但还是不能避免食品安全问题的发生。在食 品安全中，微生物作为其中的一项污染源也广泛引起 了人们的注意，无论是在食品的生产阶段还是运输阶 段，都有可能会有微生物的产生，当食品被微生物污 染，就很可能会造成食品的变质、损坏，经过人体食 用之后会产生相应的疾病。我国以往的微生物检测方 式虽然效率和准确度都比较良好，但是需要的工作设 备太过繁琐，同时还需要大量的检测人员辅助完成， 现阶段经过我国相关技术人员的不懈努力，各种新型 的检测技术层出不穷，最大程度上保障我国食品安全 问题能够得到有效解决。
doi:10.16736/41-1434/ts.2021.13.038
Food Science and Technology 食品科技
食品安全检测中关于微生物的快速检测方法
Rapid Detection Methods for Microorganisms in Food Safety Testing
关键词：食品安全检测；微生物；快速检测；方法
Abstract： Under the development background of the new era, people pay more attention to food safety. In order to maximize the food safety, the relevant state departments have further improved the requirements for food safety testing. Food safety inspection, as one of the most critical links in food safety construction, plays an important role.Based on this, this article studies the rapid detection methods of microorganisms in food safety testing.
微生物快速检测
目录页
快速检测方法及应用 3M测试法操作步骤 3M测试法结果判读
— 1—
快速检测方法及应用
1.选择、鉴定用培养基法 2.基因探针技术 3.微生物自动监测仪
— 2—
食
品
中
检 测
微 生 物
的
快
速
• 选择、鉴定用培养基法
微生物具有种属特异性酶，在培养基质中加入相应的显色酶 底物，经微生物生长代谢产生酶水解底物释放色原物质，使 培养物着色从而进行目标微生物筛选鉴别。 优点：分离与鉴定合二为一，省时、操作简便、敏感性和特 异性较高。
— 1—
食
品
中
检 测
微 生 物
的
快
速
• 3M测试片
2.优点：
避免物理性污染（如玻璃器皿打碎等）； 红色菌落易识别，容易计数，误差小； 菌落分布均匀，不出现重叠现象； 很少菌落蔓延；密闭性好；透气膜等。
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食
品
中
检 测
微 生 物
的
快
速
• 3M测试法操作步骤
1.将测试片置于平坦表面处，揭开上层膜。 2.使用吸管将1mL样液垂直滴加在测试片的中央处。 3.允许使用上层膜直接落下，切勿向下滚动上层膜。 4.使用压板隆起面底朝下，放置在上层膜中央处。 5.轻轻的压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上，切勿扭转压板。 6.拿起压板，静置至少1分钟以使培养基凝固。
— 1—
食
品
中
检 测
微 生 物
的
快
速
• 3M测试片
1.3M测试片：
由上下两层组成，上层的薄膜上通过粘合剂结合了指示剂，并涂覆了冷水可 溶性凝胶，下层的纸片上涂覆了改良的培养基，并印有方格以便于计数。它 是一种预先制备好的培养基系统，只需要将待测样品或样品稀释液直接接种 ，即可进行下一步的培养和计数。
食品中微生物的快速检测
ATP生物荧光法
一.原理
• “ATP荧光法微生物快速检测系统”简称“细菌快检仪”， 依据萤火虫发光原理研制，由试剂组、微量荧光检测仪、 样品预处理耗材三部件组成。该仪器可在短短1-5分钟内即 完成测试，并提供实时检测数据，具备准确、便携、操作 容易等特点，同时可以连接电脑，对数据进行储存。 • ATP＋萤光素+萤光素酶+O2—AMP+Ppi+二氧化碳+氧化萤光 素+光
通过颜色变化检测
• 微生物生长导致培养基pH值发生变 化，由光学检测器检测底部琼脂层 的颜色变化，记录达到突变点的时 间。 • 与阻抗法类似，可以实现快速检测。 • 缺点：需要购买原厂的预装培养基， 应用范围受限制，成本高昂。
流式细胞技术
• 原理
液体样品流过仪器中的激光照射的流动池，当微生物流过 显微镜聚焦的流动池时就能被自动地检测到。
微量量热法
利用细菌生长时产生热量的原理设计而成。微生物在生长 和代谢的过程中，能产生大量的代谢热。由于各种微生物 的代谢产物热效应不同，因此可显示出特异性的热效应曲 线图。热效应曲线图的形成，是由于培养基含有多种成分， 微生物则产生多种不同的代谢产物，以此表现出的热效应 为多个曲线峰，如为单一营养成分，则只有一个峰出现。 在细菌生长的过程中，用微量量热计测量产热量等热数据， 经计算机处理，绘制成以产热量对比时间组成的热曲线图， 以此推断细菌存在数量。
检测步骤
• • • • • • 放入样本 打开瓶盖，加入11ml无菌水 放入液态（固态）样本0.1~1.0ml（0.1~1.0g） 盖紧瓶盖 摇动瓶子直到溶剂充分溶解 充分溶解混合后立即放入检测仪 ，得到100%定量分析结 果 • 使用后无菌处理 ：按下RVL微生物检测瓶的瓶盖上方 • 放心安全丢弃（与过期药物同样处理）
食品微生物快速检测方法
食品微生物快速检测方法传统的微生物培养法耗时太多，不利于工厂生产的快速调整，因此，需要建立现代的微生物快速检测方法。
快速测定方法建立的基础是：利用现代技术测定微生物的代谢产物或微生物的繁殖速度，以确定微生物的数量。
现将国外较成熟，常刚的典型快速测定方法介绍如下：微生物的快速检测方法按检出时间可分为三类：第一类方法是在比相应的传统方法短的时间内得出结果。
此类方法的典型例广是：膜过滤一微菌落一荧光法。
具体方法是将一定量的样品(或样品稀释液)经膜过滤(过滤膜φ巾≤0．45μm)，再过滤膜放在培养基上或放在浸行液体培养基的厚纸板上在适宜温度条件下培养一段时间，然后将膜放在浸过0．1％ANS(8一苯胺基萘磺酸镁)溶液的纸片上作用10分钟，将膜揭下，在80℃条件下干燥 5—10分钟，最后在100倍的荧光显微镜(入=340~ 380nm)下计数蓝绿色菌落的数目。
对于不同样品，膜过滤一微菌落一荧光法使用的培养基和培养时间不同。
检验凝乳中酵母菌时，可采用含琼脂的固体培养基，也可放在2ml双料液体培养基浸润的纸片上培养15—24小时。
检验食品中需氧性细菌数时，可用琼脂计数平板，也可用营养肉汤或酪蛋白胨一豆粉蛋白胨液体培养基，培养8小时。
食品中酵母和霉菌的选择性检测可使用添加100ppm氯霉素的麦芽汁提取物琼脂培养基，或添加100ppm氯霉素的双料麦芽汁提取物液体培养基。
糖果中耐渗透酵母的检测可采用50% 葡萄糖液体培养基，培养时间为48小时(菌数>10个／克)—72小时(菌数≤10个／克)。
第二：类快速检测方法一般在6—12小时内得出检验结果。
典型的方法有放射性示踪法和阻抗测定法。
放射性示踪法是以放射性标记物作碳源，测定经微生物发酵产生的有放射性标记的CO2量，从而确定样品中含菌量。
测定菌数小于1000个／毫升的样品，大约需要7小时。
阻抗测定法可根据食品的微生物污染程度在一天内完成检测。
这种方法依据的原理是：微生物在培养基中不断缯殖，其代谢产物的增加会导致液体培养基中电阻的变化，使介质的导电性增强，即电阻减小。
微生物快速检测方法
大肠菌群测试片产品名称：大肠菌群测试片∙产品规格： 24片/包∙产品用途：食品、饮用水、原料和食品加工设备表面大肠菌群的检测产品说明1、原理及适用范围大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被广泛应用于食品卫生检验工作中。
大肠菌群多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，大肠菌群数的高低，表明了食品及食品生产过程中受污染的程度。
大肠菌群测试片（Filmplate TM Enumeration of Coliform BE211）含有选择性培养基、大肠菌群特异性半乳糖苷酶的显色指示剂和高分子吸水凝胶，运用微生物测试片专有技术，做成一次性快速检验产品。
本产品适合于食品、饮用水及原料中大肠菌群的计数，也可用于食品加工设备表面的卫生检测。
执行标准：食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数（GB/T 4789.3—2010）。
2、操作方法2.1、样品处理：取样品25mL（g）放入含有225mL灭菌磷酸缓冲液稀释液（或生理盐水）的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液，用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，注入含有9mL稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液。
2.2、接种：一般食品选2～3个适宜的稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。
将大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后将上层膜缓慢盖下，静置10s左右使培养基凝固。
每个稀释度接种两片。
同时做一片空白阴性对照。
2.3、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中，并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。
培养温度为36℃±1℃，培养15～24h。
3、计数原则及报告方式3.1、培养后纸片上的蓝色菌落为大肠菌群菌落，选择菌落数在15CFU～150CFU之间的纸片进行计数。
3.2、若两个稀释度的菌落数均在15CFU～150CFU之间，则取其平均菌落数乘以稀释倍数报告之，即为每毫升（或每克）样品中的大肠菌群菌落数。
微生物快速检测技术
分子生物学检测技术
聚合酶链式反应（ PCR）：通过扩增目 标微生物的基因片段 ，实现快速、灵敏的 检测。具有高特异性 和灵敏度。
基因芯片技术：将大 量探针固定于芯片上 ，通过与样本中微生 物的基因进行杂交， 实现多靶点检测。具 有高通量和自动化传感器：利用 电化学原理，将微生 物代谢产物转化为电 信号，实现快速、连 续的监测。具有高响 应速度和稳定性。
04
微生物快速检测技术在环 境监测中的应用
水质监测中的微生物快速检测
总结词
水质监测中的微生物快速检测技术主 要用于检测水体中的细菌、病毒、寄 生虫等微生物，以确保水质安全。
详细描述
通过使用自动化仪器、免疫学技术和 分子生物学技术等手段，可以在短时 间内快速准确地检测出水体中的微生 物种类和数量，及时发现污染源并采 取相应措施。
大气监测中的微生物快速检测
总结词
大气监测中的微生物快速检测技术主要用于检测空气中的细菌、病毒、霉菌等微生物，以评估空气质量和健康风 险。
详细描述
通过收集空气样本，利用微生物培养、免疫学和分子生物学等方法，可以快速检测出空气中的微生物种类和数量 ，及时预警和采取防控措施。
土壤监测中的微生物快速检测
要点一
总结词
要点二
详细描述
灵敏度高、特异性好、可定量
分子生物学技术通过检测微生物的基因序列来实现快速检 测。该方法包括聚合酶链式反应（PCR）、基因芯片等技 术，能够灵敏地检测环境中的微生物，并且可以特异性地 识别不同种类的微生物。此外，分子生物学技术还可以实 现微生物的定量检测，为环境监测提供更准确的数据。
详细描述
通过引入自动化技术，可以减少人为误差和 提高检测效率。智能化技术则有助于实现自 动识别、自动分类和自动报告等功能，进一 步提高检测准确性和及时性。
微生物快速检测方法共33页文档
谢谢！
微生物快速检测方法
36、“不可能”这个字(法语是一个字 )，只 在愚人 的字典 中找得 到。--拿 破仑。 37、不要生气要争气，不要看破要突 破，不 要嫉妒 要欣赏 ，不要 托延要 积极， 不要心 动要行 动。 38、勤奋，机会，乐观是成功的三要 素。(注 意：传 统观念 认为勤 奋和机 会是成 功的要 素，但 是经过 统计学 和成功 人士的 分析得 出，乐 观是成 功的第 三要素 。
39、没有不老的誓言，没有不变的承 诺，踏 上旅途 ，义无 反顾。 40、对时间的价值没有没有深切认识 的人， 决不会 坚韧勤 勉。
61、奢侈是舒适的，否则就不是奢侈 。——CocoCha nel 62、少而好学，如日出之阳；壮而好学 ，如日 中之光 ；志而 好学， 如炳烛 之光。 ——刘 向 63、三军可夺帅也，匹夫不可夺志也。 ——孔 丘 64、人生就是学校。在那里，与其说好 的教师 是幸福 ，不如 说好的 教师是 不幸。 ——海 贝尔 65、接受挑战，就可以享受胜利的喜悦 。——杰纳勒 尔·乔治·S·巴顿
微生物快速检查方法
微生物快速检查方法我这微生物快速检查方法，那可真是摸索了好久才有了点心得。
我一开始啊，真的是瞎摸索。
就像没头的苍蝇一样乱撞。
我想到的第一个方法呢，就是直接用显微镜看。
我想这微生物不就是小嘛，放大了看肯定行。
我费了好大劲，弄了样本放在载玻片上，就开始看。
结果呢，发现样本里乱糟糟的一片，啥也看不清。
后来我才知道，样本处理可重要了。
就好比盖房子打地基一样，地基没弄好，楼肯定盖不起来。
这样本要是没处理好，微生物在里面就跟缠在一起的乱麻似的，怎么能看得清呢。
后来我又试了染色的方法。
我寻思着给微生物上个色，不就更容易区分了嘛。
但是这个染色可不好掌握。
你得选择合适的染料，还要控制好染色的时间。
我一开始是染色时间太长了，结果把整个样本都染得黑乎乎的，还以为自己发现了什么超级大细菌呢，哈哈哈，现在想想真好笑。
在不断尝试后，我总算知道了不同类型的微生物大概要用多久染色。
而且染色后确实清楚了不少，就像在一群穿着黑白衣服的人里给几个人穿上了鲜艳颜色的衣服，一下子就能看到他们在哪了。
还有培养法，这也是常见的。
我把样本放到培养皿里，等着微生物慢慢长。
可是这个时间太长了，有时候等得心焦。
而且有的微生物还特别挑剔，稍微培养条件不对，它们就不长。
这就像我们种花似的，有的花得天天浇水施肥，稍微没照顾到就死翘翘了。
所以培养的时候，温度啊，营养物质啊，都得仔细控制。
再说说分子生物学的方法，像PCR之类的。
这个方法我不太确定我完全掌握了。
我知道这个方法是根据微生物的核酸来检测的。
但是操作起来，对仪器和试剂的要求特别高。
一旦试剂哪个没加对量，或者仪器的操作步骤错了一步，结果就完全不对。
记得有一次，我可能在加某种试剂的时候手抖了一下，量不对了，结果出来的东西那叫一个莫名其妙。
不过这个方法要是做得好了，那确实能非常快速准确地检测出微生物。
总的来说呢，微生物快速检查方法，真的是得不断尝试，总结经验。
样本处理是基础，选择合适的检测方法也很重要，每一个小细节都不能放过，不然都可能导致失败。
微生物快速检测技术
其它即用胶，MPN改良法
Simplate
colilert
主要用于 水样或澄 清样品的 大肠菌群 或大肠杆 菌检测
• SimPlateTMTPC 法：基于食源性细菌的蛋白质 有特异性酶类，TPC培养基内含有多种细菌酶 类所对应的底物。检样被细菌污染时，只要具 有一种酶的活性即能与底物作用生成4-甲基伞 形酮，培养24h后，在紫外线照射下，发出蓝 色荧光。
便于计数。
• 缺点：需要额外的支出购买真空泵，多 联支架及一次性滤膜；如果抽滤过程空 气洁净度不够，有可能造成二次污染， 尤其是对菌数要求特别严格的产品，如 啤酒，澄清果汁，桶装饮用水等。
皿膜法—以纸片法为代表
•纸片法是目前被广泛接受的方法。国标 餐具大肠菌群采用的就是纸片法。
• 优点：无需制备培养基，携带方便，非漫延菌落 计数较方便。
接种针往外移动 同时自动将样品 稀释1000倍
平皿旋转
螺旋平板法的优缺点
• 优点： 与传统方法相比，无需稀释3个梯度，
每个梯度倒2个平板，节省了大量人力物 力。 • 缺点：
检测时间并没有缩短，菌落总数仍需 要培养48小时。
需要配合自动菌落计数仪，否则人工 计数更麻烦。
滤膜法
• 滤膜法常用于可过滤样品的微生物检测。 • 优点：灵敏度增大，菌落无扩散情况，
LUM-T的独特优势
• CHEF 熟肉制品成熟度检验 • MicroQ 水中微生物污染程度检测 • Cidelite 杀虫剂残留初筛 • Paslite 牛奶巴氏消毒效果 • Somalite 体细胞计数 • SL/MRL test 抗生素残留检测（连接
微生物快检方法
微生物快检方法作者：苏野柴景亮李亮亮来源：《丝路视野》2019年第13期摘要：随着当今社会的飞速发展，越来越多的家庭已经步入小康，人们也从如何“生存”转向了如何“生活”，民众的目光也渐渐地聚焦在了食品安全问题上。
那么如何快速准确地监控、检测食品安全呢？本文主要在微生物快速检测方法中，通过纸片法和平板培养法的对比，对它们的优缺点进行探究。
关键词：快检纸片法平板培养法就食品服务行业来说，目前存在着一些不明来历的“三无食品”“黑工厂”“黑作坊”，导致老百姓时刻都要担心吃进肚子里的食品到底是不是安全的。
由于这些问题的存在，拥有高效、便捷的食品安全检验检测方法是迅速发现并解决食品安全问题的关键所在，这也导致了食品检验检测的发展方向是向着“批量检测”和“快速检测”两方面发展。
一、研究目的及意义研究目的：1.研究“纸片法”和“平板培养法”的优缺点和特点;2.通过研究各种食品微生物快速检验来对比“纸片法”和“平板培养法”的优势。
研究意义：食品微生物快检方法的不断发展与进步是保障民众的饮食安全和生活质量的重要保证之一。
食品微生物快检这项技术，还能对食品类产品受到的病原微生物污染程度做出一个十分具有科学性及准确性的正确评价，从而对那些被判定为受到污染的食品产品立案调查，以此作为防治食品安全隐患的重要保障措施。
现今食品微生物快检方法多种多样，但其中的大部分都需要一定的经济基础来支持检验项目的顺利进行，而食品微生物快速检验则是一种以“预防”为主的检控手段，它需要检验人员和市场监管人员大量、定期地进行市场产品管理与抽样检控，因此，当食品微生物快速检验技术进入了现今的“n=5/AC=0”时代后，如何做到快速化、批量化、准确化和经济化四者兼顾变成了全世界所有检验人的研究方向与目的。
二、食品微生物快速检验的常用方法介绍1.纸片法：在使用快检纸片时，确保除样品外一切与纸片直接接触的物品、工具都应经过无菌处理，操作人员进行操作时需佩戴头套、口罩及无菌手套，将纸片取出后，以生理盐水浸泡后，用纸片充分接触样品，维持30秒左右，后取下纸片，放入培养箱，以37°恒温培养，一般18小时后便可查看结果。
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培养膜法_快速检测纸片技术
优点：
➢ 可节约玻璃仪器、培养基。 ➢ 可节省培养基等试剂的配置灭菌和玻璃仪器灭菌和清洗的
时间、人力和费用。 ➢ 因为有显色剂和小方格，计数方便。 ➢ 节约稀释的繁琐动作。 ➢ 可快速测试致病菌，节省大量的实验步骤。
缺点
➢ 成本比传统方法要稍高些。 ➢ 测试细菌总数、大肠菌群、霉菌和酵母菌时不能节约培养
致病菌快速检测方法
显色培养基法：技术成熟，产品很多。 免疫学方法：产品最多，特异性和敏感性都很高，但
有假阳性存在，阳性结果需要确认。通常的原理有EIA， ELISA，GLISA，荧光酶免、免疫磁分离等方法。 分子生物学方法：以基因探针检测法和PCR法为主。 基因芯片
显色培养基法
原理
与阻抗法类似，可以实现快速检测。 缺点：需要购买原厂的预装培养基，
应用范围受限制，成本高昂。
梅里埃的BacT/Alert微生物检测仪
基于微生物生成产生CO2的原 理。CO2积累越多，底部的 CO2传感器变黄，由LED发射 一束光至底部，探头检测反射 光的强度。光强度与微生物数 量有一定关系。
➢ 其最大的特点是只检测活细胞数，速度极快，处理量大。 ➢ 检测步骤：1、过滤；2、标记，直接对活细胞和酵母进行
标记；3、激光扫描。
三种型号的差异
产品型号 主要参数
Bactiflow
总活菌数
√
酵母和霉菌数
√
大肠杆菌和大肠菌群
贾第鞭毛虫和隐孢子虫
处理速度
10-14个样品/小时
灵敏度 适用范围
100-100,000个细胞/g 适用于含菌量较高的
对于菌数太低的不好，样品中还不能用防腐剂，否则结果 是乱七八糟的。 ➢ 电阻抗法制作标准曲线过程中工作量较大，但以后的检测 简便的多，不需要一系列稀释，只需样品1ml，培养基 9ml，测量管一只。
通过颜色变化检测
微生物生长导致培养基pH值发生变 化，由光学检测器检测底部琼脂层 的颜色变化，记录达到突变点的时 间。
滤膜法
滤膜法常用于可过滤样品的微生物检测。
优点
灵敏度增大，菌落无扩散情况，便于计数。
缺点
需要额外的支出购买真空泵，多联支架及一次性滤膜； 如果抽滤过程空气洁净度不够，有可能造成二次污染， 尤其是对菌数要求特别严格的产品，如啤酒，澄清果 汁，桶装饮用水等。
ATP生物荧光法
原理
ATP＋萤光素+萤光素酶+O2—AMP+Ppi+CO2+氧化萤光 素+光
时间。
培养膜法_快速检测纸片技术
应用
➢ 细菌总数 测试片中含有一种红色指示染剂，使所有菌落易认别计数。
➢ 大肠菌群 测试片中含有指示剂，使菌落为红色，且有气泡产生。
➢ 大肠杆菌 指示剂可使所有菌落为红色，并可留住大肠杆菌产生的气 泡。 24小时可确定大肠杆菌数。
培养膜法_快速检测纸片技术
➢ 霉菌和酵母菌计数 测试片中加入的抗生素，可以抑制细菌生长；指示剂使酵 母菌易认别计数；霉菌可产生特有的色泽。
➢ 金黄色葡萄球菌 使用了具有热稳定的核酸酶反应片，核酸酶反应产生的粉 红色环带色围着一个红色或兰色菌落即为金黄色葡萄球菌， 26小时可确认结果。
螺旋平板法
DWS螺旋平板接种仪
自动菌落计数仪
螺旋平板法
原理
样品制备的菌悬液在琼脂表面形成阿基米德螺旋型轨迹。 当用于分液的空心针从平板中心移向边缘时，菌液体积减 少，注入的体积和琼脂半径间存在指数关系。培养时菌落 沿注液线生长。用一计数的方格来校准与琼脂表面不同区 域有关的样品量，计数每个区域的已知菌落数，在计算细 菌浓度。
快速检测的新方法
1、ATP生物荧光法 2、电阻抗法 3、颜色变化 4、流式细胞技术及激光扫描技术 5、其它：热量法，放射测量法
培养膜法_快速检测纸片技术
原理
二片塑料膜构成，上薄为盖，下厚为培养基。
操作方法：
检样稀释→取1ml滴于下膜正中央→盖上膜→扩展器压成 20cm2圆圈 →37℃培养24h →计数(显色的斑点)
清洗保养要求特别高。另外，有存在假阴性的可能。
电阻抗法测定细菌总数
原理
供细菌生长的液体培养基是电的良导体，在特制的测量 管底部装入电极插头，即可对接种生长的培养基的阻抗变 化进行检测。阻抗变化的产生是由于微生物生长过程中的 新陈代谢使培养基中的大分子营养物质(糖、脂类、蛋白 质等）被分解成小分子代谢物，即较小的带电离子（乳酸 盐、醋酸盐、重碳酸或氨等）这些代谢产物的出现和聚集， 增强了培养基的导电性能，从而降低了其阻抗值。
电阻抗法测定细菌总数
M=(R0-RT)/R0×100% 其中R0表示开始时培养基的阻抗值
RT表示任意时刻培养基的阻抗值 M表示培养基电阻减少的百分数。
➢ 电阻越小细菌活动越多，在一定范围内，菌落形成单位的 对数Log(CFU)与IDT（阻抗检测时间）呈直线关系。
电阻抗法测定细菌总数
优缺点： ➢ 电阻抗法较省力，样品细菌数在4～18小时内出结果。但
微量量热法
利用细菌生长时产生热量的原理设计而成。微生物在生长 和代谢的过程中，能产生大量的代谢热。由于各种微生物 的代谢产物热效应不同，因此可显示出特异性的热效应曲 线图。热效应曲线图的形成，是由于培养基含有多种成分， 微生物则产生多种不同的代谢产物，以此表现出的热效应 为多个曲线峰，如为单一营养成分，则只有一个峰出现。
流式细胞技术
原理
液体样品流过仪器中的激光照射的流动池，当微生物流过 显微镜聚焦的流动池时就能被自动地检测到。
特点
检测方法与使用的仪器有高度的特异性，所以应遵循生产 厂商提供的方法。
流式细胞技术
FOSS公司BactoScan FC牛奶中总菌数快速检测 仪
➢ 采用流式细胞原理。对微生物进行核酸染色，用流式细胞 技术进行计数。
优点是检测灵敏度高，速度快，可以在48小时的时间内快 速鉴定沙门氏菌、大肠杆菌O157：H7、单核李斯特菌， 空肠弯曲杆菌和葡萄球菌肠毒素等。
分子生物学方法
基因探针法及PCR方法在国外已经有相当成熟的表现。 有普通PCR，荧光PCR，实时荧光PCR（定量PCR）等多
种方法。 基因探针法一般也需要增菌，然后加探针试剂杂交，然后
在细菌生长的过程中，用微量量热计测量产热量等热数据， 经计算机处理，绘制成以产热量对比时间组成的热曲线图， 以此推断细菌存在数量。
发射测量法
利用细菌在代谢碳水化合物时产生CO2的原理，把微量的 放射性标记引入葡萄糖或其他糖类分子中。细菌生长时， 糖被利用并放出标记的CO2，将生成的放射性标记CO2从 培养装置中导出或用化学法吸收后，利用专用的放射测量 仪来测定放射性CO2 。放射量与菌数成正比。
食品、化妆品及水等
样品。每天检测量不
大于40个样品。
ChemScan RDI
Real-time analyser D-count
√ √
√ √ 90分钟内出定量结果 1-5000个细胞 特别适用于医药工业、饮用水 尤其是直饮水中对可过滤的样 品进行有害肠道菌及原生动物 进行快速检测
√ √
50个样品/小时 1-1000cfu/g(mL) 适用于含菌量较低的 不可过滤的食品、化 妆品等样品。每天检 测量大于40个样品。
➢ 优点：速度快(50-150样品/小时) ➢ 缺点：死活细胞一起检测，消耗成本较高，仪器比较难保
养。灵敏度不够高。 ➢ 适合牛奶企业检测原奶中细菌总数。
流式细胞技术
美国Chemunex公司微生物快速检测系统
➢ 将流式细胞技术与活细胞荧光探针标记及激光扫描技术相 结合，推出的最新一代的速度更快的Bactiflow以及更高 端的ScanRDI和D-count微生物快速检测仪。
应用
➢ 用于食品生产线和管道进行快速清洁程度检测。 ➢ 用于水质检测。 ➢ 改良后用于食品的商业无菌检测或终产品检验。
ATP生物荧光法
表面清洁度/水质检测
涂抹采样
混合:震荡5s 10秒获得结果
检测
ATP生物荧光法
ATP法检测成品的优缺点
➢ 优点：大大缩短库存时间，减少物流压力和成本。 ➢ 缺点：ATP方法需要消耗大量的较昂贵的试剂，对仪器的
螺旋平板法
阿 基 米 德 螺 旋 型 轨 迹
平皿旋转
接种针往外移动 同时自动将样品 稀释1000倍
螺旋平板法
优点
➢ 与传统方法相比，无需稀释梯度，每个梯度倒2个平板， 节省了大量人力物力。
仍需要培养48小时。 ➢ 需要配合自动菌落计数仪，否则人工计数更麻烦。
微生物快速检测方法简介
常见微生物检测项目
常规微生物项目
细菌总数、大肠菌群、大肠杆菌、霉菌及酵母菌
致病微生物项目
沙门氏菌、李斯特菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157： H7、弯曲杆菌、致病弧菌、副溶血弧菌、志贺氏菌、假 单胞菌等
常规微生物检测方法
传统计数改良法
1、培养膜法 2、螺旋平板计数法：螺旋接种仪＋菌落计数 3、滤膜法：常用于一些可过滤样品的检测
在选择性培养基的基础上经过改良。 利用细菌特有的生理生化反应，使培养基中的指示剂产生 颜色变化，以将目标菌与其他菌区别开来
酶联免疫技术—mini-Vidas全自动免疫分析仪
利用荧光分析技术通过固相吸附器，用已知抗体来捕捉目 标生物体，然后以带荧光的酶联抗体再次结合，经充分冲 洗，通过激发光源检测，即能自动读出发光的阳性标本。
法比没有速度优势。 ➢ 目前不少产品已经通过AOAC的认证。
在荧光显微镜荧光检测器下获得结果。 PCR方法一般不需增菌太长时间，通过PCR方法对待测微
生物的特征片断进行扩增，然后通过凝胶电泳或荧光PCR 技术判断结果。