大鼠脑缺血模型
大鼠缺血模型
大鼠和小鼠的优势
1. 大鼠品种多，易于饲养，价格低廉 2. 纯种鼠属近亲交配，基因型相似，脑血管解剖和生理机能也相 似 3. 大鼠脑血管解剖和生理机能接近于人类 4. 脑血管损伤部位恒定，实验重复性好 5. 动物存活时间长，利于脑缺血相关病理改变过程的研究 6. 脑体积大小适宜，易施低温固定技术和组织生化分析 7. 有关系列大鼠的生理、药理和生化方面的实验资料可供分析比 较 8. 克服了体外实验无法实施再灌流的缺陷 9. 沙土鼠缺乏后交通动脉及完整的基底动脉环，两侧大脑供血相 对独立，通过闭塞一侧或双侧CCA即可复制效果明显的同侧或 双侧脑缺血模型
栓线法
由 ECA 插入 4 -0 尼龙线进入 ICA , 阻断 MCA起 始端而导致局灶性脑缺血。通过提拉插线可以造成 再灌流损伤模型。
优点：该法手术创伤小, 动物易长时间存活血栓形
成过程与人类相似可选择皮层梗塞部位
缺点：较早地导致终末动脉及微血管永久性闭塞 ,
不利于扩血管及促进侧支循环作，切开皮肤， 暴露颅骨，静脉注射光敏材料虎红酸钠，用特 定冷光源(500--600nm)照射切口处颅骨，光 线透过颅骨与血管内的光敏物质接触，激发光 化学反应而产生单线态氧，直接损伤血管内皮 细胞而诱导血栓形成。 优点：不开颅，手术创伤小，动物易长时间存 活，血栓形成过程与人类近似，适用于抗血小 板、抗血栓及内皮细胞保护药物的急慢性动物 实验研究。 缺点：较早地导致终未动脉及微血管永久性闭 塞，不利于扩血管及促进侧支循环作用的研究
开颅法、光学法、栓塞法、栓线法。
开颅法
麻醉动物，耳眼连线的中点垂直切开皮肤，通过钝
性分离颞肌，开颅后暴露MCA，用电凝器横过嗅束旁 的MCA使其凝闭，用10号手术丝线结扎MCA，造成MCA 支配区局灶性脑缺血模型。
3种大鼠全脑缺血模型定量脑电图的实验研究
phenol reagent[J].J Boil Chem,1951,193:265.[4] Chandan K S,Lester P.Antioxidant and redoxregulation ofgenetranscription[J].FASE B J,1996,10(2):109-120. [5] Reiter R J,T ang L,G arcia JJ,et al.Pharmacological actionsof melatonin in oxygen radical pharmacology[J].Life Sci, 1997,60(25):2255-2271.[6] Fernando A,Barclay LRC,Ing old K U,et al.On the antiox2idant activity of melatonin[J].Free Rad Bio Med,1999,36(1/2):117-128.[7] S iesjo BK,Zhao Q,Pahlmark K,et al.G lutamate,calcium,and free radicals as mediators of ischemia brain damage[J].Ann Thorac Surg,1995,59(5):1316-1320.[8] K otler M,R odriquez C,Sainz RM,et al.Melatonon increas2es gene expression for antioxidant enzymes in rat brain cortex [J].J Pineal Res,1998,24(2):83-89.[9] Bettahi I,P ozo D,Osuna C,et al.Physiological concentra2tions of melatonin inhibit nitric oxide synthase activity in rat hypothalamus[J].J Pineal Res,1996,20(4):205-210.收稿日期:2000-10-26 修回日期:2001-02-15本文编辑:程春开3种大鼠全脑缺血模型定量脑电图的实验研究Ξ吴克俭,花 放,孙景玲(徐州医学院附属医院神经内科,江苏徐州221002) 摘要:目的 比较正常大鼠不同电极联接方式的脑电图的差异,并以脑电图作为判定指标,评价3种全脑缺血大鼠模型的缺血效果。
线栓法大鼠大脑中动脉脑缺血模型的评价方法初探
性 脑 血 管病 的好 发部 位 ， 因此 理论 上 阻断 ＭＣ Ａ 可 以产 生较 为 理 想 的脑缺 血 动物 模 型 。Ｋｏ ｉ ｚ ｕ ｍｉ 等【 ：
和Ｌ ｏ ｎ ｇ 等【 】 发 明的线栓 法大 脑 中动脉 闭塞脑 缺血 动 物 模型 （ ｍｉ ｄ ｄ ｌ ｅ ｃ ｅ ｒ ｅ ｂ ｒ ａ ｌ ａ ｒ ｔ ｅ ｒ ｙ ｏ ｃ ｃ ｌ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ， ＭＣ ＡＯ） 具 备
线 栓 法 大 鼠大脑 中动脉脑 缺 血模 型 的评 价 方法 初探
邢凤英 ， 周 颖 ， 马政文 ， 吴文庆 ，李 圭 ， 陈学进 － ， 严 国锋 （ １ ． 上海交通大学医学院实验动物科学部， 上海 ２ ０ ０ ０ ２ ５ ； ２ ． 上海交通大学 生物 医学工程， 上海 ２ ０ ０ ２ ４ ０ ）
由于大脑 中动脉 （ ｍｉ ｄ ｄ ｌ ｅ ｃ ｅ ｒ ｅ ｂ ｒ ａ ｌ ａ ｒ ｔ ｅ ｒ ｙ ， ＭＣ Ａ ） 是缺 血
系 十分 重要 。 以往 的评 价体系 多采 用神经 缺 失症 状 和梗 死体 积， 少数采 用 了脑含水 量及 体质 量变化 【 】 ， 但 单一指 标都 不 能较 全面 的反 映模 型效果 。 在本实 验 中 ，采 用线 栓法制 备永 久性大 鼠大 脑 中动脉缺 血 模 型， 结合 多种 参 数， 初 步 探讨 一种 新 的评价 体 系 。
Ｏｃ ｔ ． ２ ０ １ ３ ． ３ ３ （ ５ ）
实验动物与 比较 医学 Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ Ａ ｎ ｉ ｍａ ｌ ａ ｎ ｄ Ｃ ｏ ｍｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ
３ ３ ９
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ ４ — ５ ８ １ ７ ． ２ ０ １ ３ ． ０ ５ ． ０ ０ ３
大鼠大脑中动脉缺血模型
大鼠大脑中动脉缺血模型
大鼠大脑中动脉缺血模型是一种用于研究脑血管疾病的实验动物模型。
该模型通过阻塞大鼠大脑中动脉，使特定区域的脑组织缺氧，从而模拟脑卒中等脑血管疾病的病理过程。
该模型的建立常用的方法有两种：颅骨开窗法和线栓法。
颅骨开窗法是通过手术在大鼠头部挖取窗口，暴露出脑表面的动脉，然后用丝线或微疏松的阻塞物将动脉堵塞，造成脑缺血。
线栓法则是将一根细线或者硬化的凝血物插入大鼠颈动脉，将其推进至前大脑动脉分支处，从而阻塞动脉血流。
这种模型可以模拟脑血管疾病引起的脑缺血损伤，包括缺血区域的神经元死亡、神经胶质细胞激活、炎症反应等。
研究人员可以通过该模型观察脑缺血后的病理变化和分子机制，评估各种药物或治疗方法对脑缺血的治疗效果。
需要注意的是，动物实验必须符合伦理规范和相关法律法规，研究人员应尽量减少动物的痛苦和不适。
同时，在进行实验前需要仔细设计实验方案，选择适当的动物模型和操作方法，以确保实验结果的可靠性和准确性。
大鼠脑缺血模型制作
大鼠脑缺血模型制作大鼠脑缺血是一种神经病理学状态，常用于研究脑缺血和再灌注相关的疾病，如中风和心脑血管疾病。
制作大鼠脑缺血模型可以帮助研究者深入了解脑缺血的机制，并探索治疗方法。
下面将介绍一种常用的大鼠脑缺血模型制作方法。
材料准备：1.正常健康的大鼠（约250-300g）2.异氟醚（用于麻醉大鼠）3.氧化氮（用于麻醉大鼠）4.0.9%氯化钠溶液（生理盐水，用于预先裂解血栓）5.弹簧夹（用于阻断大脑供血）6.血管夹（用于再灌注）7.生理盐水或PBS（用于清洗伤口和冲洗大脑）操作步骤：1.麻醉大鼠-以适当的浓度向氧化氮罩中送气，让大鼠吸入异氟醚麻醉。
-确定大鼠是否处于麻醉状态，如失去帕金森反射。
-为了确保大鼠的安全性和麻醉质量，要定期监测大鼠的许多生理参数，如呼吸频率、血氧饱和度和体温。
2.颅窗手术-将大鼠固定在手术台上，用5%碘伏消毒实验区域的皮肤。
-在头部进行剃发和消毒。
- 用手术刀在头部切开皮肤，在颅骨上切开一个直径约 1 cm的圆洞。
-清除头骨上的组织，暴露出颅骨。
-用电动开骨钻在颅骨上进行微抖动，直到打开一个圆洞。
通过控制速度和钻头的压力来避免损伤脑组织。
-用细钳将头皮撕开，暴露出脑膜。
3.制作脑缺血-用生理盐水或PBS洗涤脑膜，以确保大脑的清洁。
-用弹簧夹仔细阻断大脑的供血。
通常选择大脑的前动脉（MCA）或双侧MCA，使大脑区域发生缺血。
-检查大鼠是否出现神经功能缺陷，如软瘫、不对称性和意识丧失等。
-记录缺血时间，通常在20-30分钟之间。
-选择再灌注时间，通常是60分钟。
4.再灌注-在再灌注前，用生理盐水或PBS冲洗大脑。
通过防止缺血时间和再灌注时间的太长，以减少实验操作引起的伤害。
-用血管夹将阻断的血管解除，实现再灌注。
-观察大鼠是否恢复神经功能，例如排尿、动作和体位等。
-保持大鼠体温适宜，定期监测大鼠身体参数。
5.实验后处理-在实验结束后，用生理盐水或PBS冲洗伤口。
-给大鼠提供足够的水和食物，让其恢复。
大鼠窒息性心跳骤停全脑缺血模型制作的改进
大 鼠窒息 性 心 跳 骤停 全 脑 缺 血 模 型 制作 的改 进
廖 常莉 。 姜 鲜。 张 英。 欧册 华 （ 州医 学院附属 医院 ， 泸 四川 泸 州 ６６０ ） ４００
摘要 ： 目的
对 大 鼠窒 息性心跳骤停 全脑缺 血模型进行 改进 。方法
（ ０ ０ ） ａｄｔ ｅｒｎ ｅ ｓｉ ｅｅｌ ｅ ａ ｏｅｉ ａ ｏｐ（ ０ ０ ） ｏ ｃ ｓ ｎ Ｒ ｔ ｄ ｌ ｆ ｓ Ｐ＜ ． １ ， ｎ ｅｎｕ ａ ｄｎｉｅ ｗ ｒ ｗ ｒｈ ｎｔ ｓ ｓ ｍ ｇ ｕ Ｐ＜ ．１ ．Ｃ ｎ ｌ ｉ ｓ ａ ｍｏｅ ｏ — ｈ ｏｌ ｔｓ ｏ ｔ ｈ ｎｈ ｒ ｕｏ ａ
ｒ ｕ ． ａｈ ｔ ｒｗ ｒ ｎ ｅ ｔ ｎ ｏ ａ ｔｒ ｎ ｅ ｏ ｓ ａｔ ｎ ｓｈ ｓａ ａ ｄ ｔａ ｈ ａ ｉ ｔｂ ｔ ｇｏ ｐ Ｃ ｔｅ ｅ ｅ ｅ ｉ ｓ ｒ ｄ ｉｔ ｒｅｉ ｓａ ｄ ｖ ｎ ｕ ｆ ｒａ ｅ ｔ ｅ ｉ ｎ ｒｃ ｅ ｎ ｕ ａｉｎ，Ｉ Ｒ ｇ ｏ ｐ ｓ ｔ ｐ ａ ｐ ｙ ｉ ｅ ｅ ｅ ｌ ｏ ／ ｕ ｅ ｓ ｈ ｘａ ｒ ｕ ｌ ｃ ｄ ａ ｒｅ ｔｍｏ ｅ ，ｃ ｒ ｉｐ ｌ ｎ ｒ ｅ ｕ ｃｔ ｔ ｎ ａｔｒｔ ｅ ｍｅ ｒｅ ａ ｒ ｓｕ ｅ ｗａ ｏ ｒｔ ａ ｒ ａ ｉｃ ａ ｒ ｓ ｄ ｌ ａ ｄｏ ｕ ｍｏ ａｙ ｒ ｓ ｓ ｉ ｉ ｅ ｈ ａ ａｔ ｒ ｌ ｅ ｓ ｒ ｓｌｗｅ ｎ ６ ｍｍＨｇ４ ｍｉ ｕ ｅ ａ ・ ａｏ ｆ ｎ ｉ ｐ ｈ ｎ ｔ ｓｌｔ ｔ ｒ ｈ ｍ ｏ ｐ ｄ ｄ ｎ ｔｓ ｆ ｃ ｔ ．Ｔ ｖ ｌ ａｅｔ ｅ ｎ ｕ ｌｇｃ ｌ ｅ ａ ｉ ｒ ｃ ｒ ｄ ｏ ｓ ｒｅ ｔ ｅｃ ａ ｇ ｆ ｒ ｈ ｓ ｆ ｉ — ｅ ，ｓ ａ ｇ ｕ ｉ ｏ ｕ ｏ ａｅ ｏｅ ａｕ ｔ ｈ ｅ ｒ ｏ ｉａ ｈ ｖ ｏａ ｓ ｏｅ ａ ｂ ｅ ｖ ｈ ｎ ｅｏ ｐ ｏ ｉ ｏ ｐ ｒ ｏ ｂ ｌ ｎ ｈ ｍｏ ｓ ｈ ｐ ｅ ｐ ｌｎ ｕ ｏ ｓａ ｄ ｎ ｕ ｎ ｅ ｓ ｉｓａ ，１ ｏ ａ ａ ｅ ｒ ｎ ｎ ｅ ｒ ａ ｄ ｎ ｉ ｅ ｔ ｈ ２ ｈ，２ ，４ ｄ ７ ｔｒｏ ｅ ａｉｎ ｍ ｏ ｌ ｔ ６ ４ ｈ ８ ｈ ａ ２ ｈ ａ ｅ ｐ ｒ ｔ ．Ｒｅ ｕ ｔ Ｉ Ｒ ｒｕ ，ａ ｈ ｎ ｆ ｏ ｓｌ ｎ Ｉ ｇｏ ｐ ｔ ｅ ／ ｔ ２ ４ ｈ，４ ｎ ２ ｈ ｔ ｏ ｎ ｔ ｒｃ ｒ ｂ ａ ｓ ｈ ｍｉ ，ｎ ｕ ｌ ｇｃ ｅ ａ ｉｒｓ ｏｅ ｒ ｉｈ ｒｔ ａ ｈ ｓ ｎ ｓ ａ ｇ ｏ ｐ ８ ｈ ａ ｄ ７ ｉ ｐ ｉ ｔ ｅ ｅ ｅ ｒ ｉｃ ｅ ａ ｅ ｒ ｏ ｉａ ｂ ｈ ｖｏ ｃ ｒ ｓｗｅ ｅｈ ｇ ｅ ｎ ｔｏ ｅｉ ｈ ｍ ｒｕ ｍｅ ｆ ａ ｌ ｏ ｌ ｈ
全脑缺血再灌注动物模型建立方法
全脑缺血再灌注动物模型建立方法引言全脑缺血再灌注是一种临床上常见的危重症，常见于心脏骤停、溺水等情况下，出现全脑缺血缺氧，随后通过复苏措施进行再灌注。
建立全脑缺血再灌注动物模型对于深入研究相关疾病的发病机制，评估治疗方法具有重要意义。
本文将介绍一种常用的全脑缺血再灌注动物模型的建立方法。
动物模型选择建立全脑缺血再灌注模型时，主要选择小鼠或大鼠作为实验动物。
一般情况下，小鼠更为常用，因其易于操作、成本较低，且其脑血管结构与人类相似，因此具有较高的可比性。
对于大鼠，其相对较大的体积能够更好地模拟人体情况，但操作相对较为复杂。
手术操作准备在进行全脑缺血再灌注动物模型的建立前，需要进行手术操作的准备工作。
首先需要进行动物的麻醉和固定，确保手术操作的安全性。
其次需要准备全脑缺血再灌注模型所需的仪器和设备，包括导管、监测仪器等。
在手术操作前，还需要对实验动物进行术前处理，包括禁食、定时给予抗生素等。
手术操作步骤1. 麻醉和固定：将实验动物置于麻醉箱内，使用合适的麻醉药物使其达到麻醉状态。
随后将其固定在手术台上，以确保手术操作的稳定性。
2. 手术部位暴露：在麻醉状态下，对实验动物进行皮肤消毒，随后进行手术部位的切开，暴露出颅骨表面。
3. 血管结扎：通过显微外科手术操作，对实验动物的颅骨表面的动脉和静脉进行结扎，以模拟全脑缺血的状态。
4. 缺血时间控制：根据实验设计的需要，控制全脑缺血的时间，一般为15至20分钟。
5. 再灌注：在全脑缺血一定时间后，通过解开血管结扎，使血液重新灌注至大脑。
6. 术后处理：对实验动物进行术后处理，包括给予液体、保暖、饲养等。
检测指标和评价方法建立全脑缺血再灌注模型后，需要对实验动物进行一系列的检测和评价，以评估其神经功能恢复情况。
常用的评价指标包括神经行为学评分、脑组织病理学检测、神经元凋亡检测、脑组织炎症因子检测等。
通过对这些指标的检测和评价，可以全面地评估全脑缺血再灌注模型的建立效果，为后续的实验研究提供可靠的依据。
线栓法大鼠脑缺血再灌注模型的制备
线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型的方法研究马贤德1孙宏伟1 柴纪严1 赵金茹1（1 辽宁中医药大学，辽宁沈阳 110032；）摘要①目的建立一种比较系统，操作简单，成功率高的大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)再灌注动物模型，达到只要读者根据本文所述的方法操作就能制作出MCAO再灌注模型的目的。
②方法成年健康雄性 SD大鼠40只，参照Longa法并适当改进建立MCAO模型20只，假手术组20只。
本文将详细叙述手术过程以及再灌注时间点的合理选择。
最后利用行为学测试、四氮唑(TTC)染色对模型成功与否进行判定。
③结论线栓法是一种操作简单的制备MCAO 再灌注动物模型的方法，并且此方法的再灌注效果较为明显。
关键词动物模型；脑缺血；再灌注；线栓法Establishment a model of rat ischemia-reperfusion injury with intraluminal sutureMa Xian-de1 Sun Hong-wei1 Chai Ji-yan1 Zhao Jin-ru1(1.Liaoning University of Chinese Traditional Medicine, Shenyang, 110032) Abstract: Objective To establish a model of rat ischemia-reperfusion injury, in terms of the model, the operation will be simple, and the achievement ratio will be high. Methods: 40 Male Sprague-Dawley ( SD ) rats were separated into two groups randomly: 20 were model of rat ischemia-reperfusion injury based on Longa method, and the other 20 were sham-operated group. The process of the operation and the selection of different time point following ischemic-reperfusion were discussed in the paper. What’s more , the model was appraised by behavioral test and Triphenyl Tetrazolium Choloride（TTC）Staining. Conclusion: The operation of intraluminal suture method is very simple for the establishment of model of rat ischemia-reperfusion, what’s more, the effect of reperfusion is very obvious.Key words: Animal Model, ischemia, reperfusion, intraluminal suture脑缺血再灌注动物模型是研究缺血性脑血管病的一条重要途径，因为脑缺血再灌注动物模型具有很好的重复性并能最大程度模拟人类缺血性卒中的发生。
全脑缺血动物模型制作步骤及方法
全脑缺血动物模型制作步骤及方法1两动脉阻断法(occlusion of bilaterial carotis communis artery) (1)复制方法 SD大鼠，雌雄不拘，体重为250～300g。
经腹腔注射水合氯醛(350～400mg/kg体重的剂量)或戊丨巴丨比丨妥丨钠(50～60mg/kg体重的剂量)麻醉后，仰卧位固定，剃除颈部毛发，手术区域皮肤常规消毒。
颈前正中切口，分离双侧颈总动脉(carotis communis artery, OCA)，夹闭双侧CCA，同时合并低血压以减少脑血流量，造成急性脑缺血。
由于啮齿动物(沙土鼠除外)脑血液循环有较人类丰富的侧支循环，仅结扎双侧CCA不足以明显降低脑血流量(CBF)，因此结合降压药三丨甲噻吩、酚妥拉明或静脉放血等方法使动脉血压降低至50mmHg(6.7kPa)，使CBF降低至正常的5％～15％。
放血方法：由颈静脉插管至右心房，供放血并连续记录EEG。
采用抽血的方法放血，失血达80mmHg(10.7kPa)时结扎双侧颈动脉，再继续抽血，使血压降至6.7kPa。
(2)模型特点此方法的优点是操作简便，用一次性手术即可完成，阻断可逆，可人为控制动物呼吸。
采用这种方法复制的模型，能进行缺血再灌流损伤的研究，模拟了临床上休克、心功能不全、脑血管严重狭窄或阻塞合并血液低灌流引起的脑循环障碍，造成不同程度的脑组织缺血损伤。
因而，对于探讨人类缺血性脑损伤的发病规律，评价抗脑缺血药物的疗效等有价值。
缺点是：①模型不能在清醒动物上复制，无法研究血管狭窄后行为学的变化。
②常因存在侧支循环而造成缺血不，部位不宜确定。
③脑缺血时限长，有时导致脑缺血后抽搐、癫癎等并发症的发生。
且由于低血压状态，可干扰其他器官、组织的供血和实验结果。
此方法除可用于大鼠外，也可用于兔、猫和猴的性脑缺血。
2四动脉阻断法(occlusion of four blood vessels)(1)复制方法 SD大鼠，雌雄不拘，体重为250～300g。
眼针对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑皮层组织IKKβNF-κB表达的影响
眼针对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑皮层组织IKK β/NF-κB 表达的影响赵丹玉王艳杰苗兰英曹阳王德山（辽宁中医药大学基础医学院，辽宁沈阳110847）〔摘要〕目的观察眼针对脑缺血再灌注损伤（CIRI ）模型大鼠脑皮层组织中I κB 激酶β（IKK β）及核因子-κB （NF-κB ）表达，探讨眼针治疗脑损伤的作用机制。
方法健康雄性SPF 级Wistar 雄性大鼠60只，随机分为正常组、假手术组、CIRI 模型组和眼针组。
CIRI 模型组和眼针组采用改良的线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血（MACO ）再灌注动物模型。
Western blot 检测大鼠缺血侧脑皮层IKK β、NF-κB 蛋白表达的变化。
结果与正常组及假手术组比较，模型组大鼠缺血侧脑皮层组织IKK β及NF-κB 蛋白水平均显示出高表达（P ＜0.01），眼针组同模型组相比，IKK β及NF-κB 蛋白表达则下调（P ＜0.01）。
结论眼针抑制脑皮层组织中IKK β及NF-κB 的表达，可能是眼针治疗CIRI 的主要作用机制之一。
〔关键词〕眼针；脑缺血再灌注；IKK β；NF-κB〔中图分类号〕R285.16〔文献标识码〕A〔文章编号〕1005-9202（2012）20-4419-03；doi ：10.3969/j.issn.1005-9202.2012.20.030Influences of eye acupuncture on the expressions of IKK βand NF-κB in rat brain after acute cerebral ischemia /reperfusionZHAO Dan-Yu ，WANG Yan-Jie ，MIAO Lan-Ying ，et al .College of Basic Medical ，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine ，Shenyang 110847，Liaoning ，China【Abstract 】Objective To evaluate the expressions of IKK βand NF-κB in cerebral ischemia-reperfusion injury （CIRI ）in rat brain cortex and eye acupuncture therapy on it.Methods Healthy male Wistar rats were randomly divided into normal ，sham ，CIRI model andeye acupuncture groups.Model of middle cerebral artery occlusion （MACO ）was established by improved suture method.Western blot meth-ods was performed to examine the protein expressions of IKK βand NF-κB in the ischemic brain cortex.Results Expressions of IKK βandNF-κB in CIRI model group were increased significantly （P ＜0.01）compared with those of normal group and sham group ，and which were decreased significantly （P ＜0.01）in eye acupuncture group.Conclusions Eye acupuncture therapy could reduce the expressions of IKK βand NF-κB in CIRI ，which may be one of mechanisms of eye acupuncture therapy for CIRI.【Key words 】Eye acupuncture ；Cerebral ischemia and reperfusion ；IKK β；NF-κB基金项目：国家重点基础研究发展计划（973计划）（No.2007CB512700）；辽宁省教育厅课题（No.L2010349）通讯作者：王德山（1951-），男，硕士，教授，主要从事中医药对消化道神经内分泌影响机制的研究。
大鼠脑缺血动物模型注意事项
大鼠脑缺血动物模型，死亡原因主要有以下几个方面：
1）动物体重的选择：预实验发现，体重越小，死亡率越高，动物体重<250g，由于血管长度和粗细程度的限制，线栓不易进入大脑中动脉；动物体重＞320g，血管变粗，线栓不能完全阻断大脑中动脉，模型复制成功率不是太高；大鼠体重在280～310g时，发现模型成功率上升，模型复制效果理想。
2）线栓质量：线栓头部的光滑程度决定了线栓能否保护血管的完整性，头部越光滑，越不易刺破血管，造成颅内出血。
我们将2.0号鱼线头部轻轻沾上玻璃胶，使头部大小均匀，既不刺破血管又可减小变异度。
3）手术方法的选择：我们选择阻断大鼠左侧脑血管的方法复制模型。
以此分离颈外动脉，经总动脉，颈内动脉，不分离翼腭动脉。
结扎颈外动脉，经总动脉，三血管分叉处剪2mm左右的小口，调整线栓进入方向，沿颈内动脉，避开翼腭动脉进入大脑中动脉。
4）术后围手术期间的护理：动物在术后48 h内的死亡率最高，如果能度过这段危险期则多能长期存活。
术后采取了以下护理措施：将动物安置在温暖的环境中（24℃左右），头部尽量保持平展，拔线后直至动物苏醒。
5）手术的熟练程度：动物长时间固定在手术台上，也会对成活率产生影响，提高手术的熟练程度，缩短手术时间，从而减少动物的损伤，手术时间一般保持在5min/只左右。
大鼠脑缺血模型的建立及小肠损伤机制探讨
小 口， 入栓 线 。收 紧丝 线 以 防止 其 中的栓 线 滑 插
出 和出血 ， 松开 动 脉夹 ， Ｃ Ａ经 ＩＡ将 栓 线 缓 慢 沿 Ｃ Ｃ 送 至颅 内 ， 阻 力 而 止 ， 微 回撤 。以 分 又 处 为 标 遇 稍 记， 栓线 插 入 长 度 约 为 １． ０ ５ｍｍ， 时 栓 ７ ５ｍｍ ４ ． － 此
王 怡平 ， 高 琳
（ 黑龙江护理 高等专科学校 ， 黑龙江 哈尔滨 １０ ８ ） ５ ０６
摘要 ： 目的
探 讨脑 缺血 对 小肠形 态 学的 影响 ， 临床 脑血 管病 患者 防止 小肠 病 变提 供 理 论 依据 。方 为
法 用线栓 法栓 塞 大鼠 右侧 大脑 中动脉 制备局 灶 脑梗 死模 型 ， 电子 显微镜 下 ， 察 脑缺 血４ｈ 小肠 的病 在 观 后
ｓ ａ ｔ ｔ ｅｗ ｓ ｈｃ ｅ ． ｏｌｔ ｅｌｎｒａｅ ｎ ｆ ｍ ｔ ｎｉ ｉｒｔ ｎａ ｅ ｅｅｒｌｓｈ ｍｉ ｍ ｌ ｉ ｅ ｉ ａ ｉｋｎ ｇｂｅ ｃｌｉｃｅｓｄａ ｄｉｌ ｍａ ｏ ｆ ａｉ ｆ ｒ ｒｂａ ｉ ｅ ａ ｏ ｃ ｓ ｎ ｌｎ ｓｎ ｔ ｎａ ｉ ｑｈ ｏ ｔ ｃ ｃ ．Ｃ ｎ ｌ ｉ ｕｏ
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资料 大鼠脑缺血再灌注模型的建立
大鼠脑缺血再灌注模型的建立首席医学网2009年10月27日16:34:55 Tuesday医师杂志征稿急救医师学术年会冠心病诊疗研讨会网站运营核心论文年内发表泌尿外科主任研讨世界神经内镜大会内蒙中医药超值牙科管理课程世界糖尿病大会神经病学国际论坛心血管介入研讨会欧洲放射学年会美国骨科年会中医药学术大会作者：先雄斌杨朝鲜作者单位：(泸州医学院神经生物学研究室，四川泸州646000)【关键词】脑缺血/再灌注;模型脑血管病具有发病率高、致残率高、死亡率高、复发率高和并发症多的特点，是中、老年人致死和致残的主要疾病。
缺血性脑血管病约占全部脑血管病人的70%～80%。
因此建立稳定的、可重复、损伤小的大鼠脑缺血再灌注模型具有极其重要的价值。
以往模型的建立〔1，2〕均缺乏详细操作过程及各操作细节的注意要点，因而建模的重复性和成功率相对较低。
本文成功制备了大量SD大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，现介绍如下。
1 对象与材料1.1 实验动物的选择由于SD大鼠具有成本低、种系纯合性好、抗感染能力较强，与人类的脑血管解剖相似,以及与Wistar大鼠比较,SD大鼠可见恒定的顶颞皮质梗死灶，梗死体积大于Wistar大鼠，变异较小，周边不完全坏死区(半暗带)所占体积明显小于Wistar大鼠等优点〔3〕,因此本文采用成年SD大鼠(第三军医大学实验动物中心),清洁级，体重250～320 g，雌雄不限。
1.2 器械和药品线剪1把、眼外科剪2把、弯镊4把、4#手术缝线、6×17三角形缝针、0.2 mm直径的尼龙线、游标卡尺1把、持针钳1把。
多聚 L 赖氨酸、戊巴比妥钠、速尿(20 mg/支)、硫酸庆大霉素(80 mg/支)等。
1.3 阻塞线的制备把0.2 mm直径的尼龙盘线剪成6 cm每段，一端靠近酒精灯火焰加热，并放于显微镜下观察，要求末端成光滑球面且直径不要大于0.30 mm。
过大者可能造成较难通过颈静脉孔，不光滑者可能刺破血管，导致蛛网膜下腔出血，且可引起血小板聚集和血栓形成，导致微血管循环的逐渐恶化。
大鼠MCAO模型制作学习
大鼠MCAO模型制作学习大鼠是常用的实验动物之一，在中风研究中，大鼠的MCAO（脑缺血再灌注）模型被广泛应用。
本文旨在介绍制作MCAO模型的步骤和必要的操作要点，以帮助读者更好地理解和应用该模型进行相关研究。
本文为第二版，相较于第一版，进行了更新和补充，以提供更详尽和准确的信息。
1.实验动物的选取在制作MCAO模型前，需要选择合适的实验动物。
一般情况下，成年雄性大鼠是最常用的模型动物。
选择同一品系和年龄相仿的大鼠，以减小实验结果的差异性。
2.麻醉和固定在操作前对大鼠进行全身麻醉，常用的麻醉药物有：45 mg/kg的氯丙嗪、35 mg/kg的阿托品和5 mg/kg的氯胺酮。
氯胺酮在操作过程中可以作为镇痛药物使用。
麻醉后，将大鼠固定在手术台上。
可以使用特制的外耳道委内瑞拉套和鼻鼻夹来固定大鼠的头部，以保证操作的准确性。
3.手术前准备首先，在头部的横纹上进行刮毛和消毒。
然后，注射青霉素（40,000 U）和伯氨喹（0.02 mg）以预防感染。
同时，使用外科剪刀剪开皮肤，将双眼收敛于外侧，暴露侧枕中动脉和颈内动脉。
4.暴露颈外动脉用外科剪刀剪开皮肤和筋膜，小心地将侧脖肌肉向后收拢，可以使用吸引器来辅助。
将剪开的筋膜用湿纱布或者胶布临时覆盖住。
5.分离颈外动脉和侧脑动脉用显微镊子小心地拉开组织，找到颈外动脉和侧脑动脉，将其两者之间的分支切断。
注意不要损伤到其他周围的组织。
6.模拟大脑缺血使用小血管夹或者线缚住颈外动脉，是的血流中断。
夹或者线的拇指静脉下方位置比较理想，但是要注意不要损伤到其他组织。
7.设定缺血时间一般情况下，将血流中断一小时可以模拟大脑缺血，如果需要模拟更严重的缺血，可以延长血流中断的时间。
8.再灌注当需要终止大脑缺血时，可以通过解开夹子或者拆除线来恢复大脑的血流。
再灌注后，动物会逐渐恢复意识并呈现异常的行为和生理反应，比如抽搐、四肢不协调等。
9.手术封口待实验结束后，用缝合线或者胶布将切口封闭。
局灶性脑缺血动物模型制作步骤及方法
局灶性脑缺血动物模型制作步骤及方法大脑中动脉(Middle cerebral artery, MCA)是人类脑卒中的多发部位，大脑中动脉闭塞(Middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型被普遍认为是局灶性脑缺血的标准动物模型，主要方法有线栓法、电凝法、光化学法和血栓栓塞法。
1线栓法(thread occlusion of the middle cerebral artery)(1)复制方法雄性SD大鼠，体重为250～300g。
经腹腔注射水合氯醛(350～400mg/kg体重的剂量)或戊丨巴丨比丨妥丨钠(50～60mg/kg体重的剂量)麻醉，仰卧位固定，剃除颈部毛发，手术区域皮肤常规消毒。
切开右侧颈部皮肤，钝性分离胸锁乳突肌和胸骨舌骨肌，显露右侧OCA及迷走神经。
结扎CCA、颈外动脉(exterial cerebral artery, ECA)及其分支动脉。
分离右侧颈内动脉(interial cerebral artery, ICA)，至鼓泡处可见其颅外分支翼腭动脉，于根部结扎该分支。
在ICA 近端备线、远端放置动脉夹，在ECA结扎点(距颈内、颈外动脉分叉5mm处)剪一小口，将一直径为0.22～0.249mm(4-0号)的尼龙线经ECA上剪口插入。
插入前加热处理使插入端变钝(也可在尼龙线头端用L-多聚赖氨酸涂抹后置肝素中浸泡，使成功率增高，梗塞面积恒定)，并做好进入线长度标记。
扎紧备线，松开动脉夹，将尼龙线经ECA、ICA分叉处送入ICA，向前进入17～19mm时会有阻挡感，说明栓线已穿过MCA，到达大脑前动脉的起始部，堵塞MCA开口，造成脑组织局部缺血。
1～3h后可缓慢退出尼龙线实施再灌注。
(2)模型特点线栓法的优点为：无须开颅，动物损伤小，MCA闭塞效果较为理想，目前该模型被认为是惟一能观察到再灌流的局灶性脑缺血模型，近年来较为常用。
注意点：线选择极为重要，较细时不容易穿到MCA，且缺血不明显；较粗时缺血重，容易造成实验动物的死亡。
吡拉格雷钠对脑缺血再灌注损伤模型大鼠神经功能的改善作用及机制研究
吡拉格雷钠对脑缺血再灌注损伤模型大鼠神经功能的改善作用及机制研究【摘要】本研究旨在探讨吡拉格雷钠对脑缺血再灌注损伤模型大鼠神经功能的改善作用及其机制。
首先建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型，然后给予吡拉格雷钠干预，并通过神经功能评估方法来检测神经功能的改善情况。
实验结果显示吡拉格雷钠能显著改善神经功能，同时探究表明其可能通过减少炎症反应、抑制氧化应激和减少细胞凋亡等机制来实现神经功能的保护作用。
吡拉格雷钠在改善大鼠脑缺血再灌注损伤模型神经功能中发挥重要作用，为进一步研究及临床应用提供了有益参考。
【关键词】吡拉格雷钠, 大鼠, 脑缺血再灌注损伤, 神经功能, 保护机制, 炎症反应, 氧化应激, 细胞凋亡.1. 引言1.1 研究背景脑缺血再灌注损伤是一种常见的脑血管疾病，常见于心脏骤停、心肌梗死等病症，其发病机制涉及脑细胞缺血、缺氧以及再灌注时的氧化应激、炎症反应等多种病理生理过程。
脑缺血再灌注损伤对神经功能造成严重影响，甚至可导致临床上的脑卒中、认知障碍等疾病。
本研究旨在探究吡拉格雷钠对脑缺血再灌注损伤模型大鼠神经功能的具体改善作用及潜在机制，为进一步明确吡拉格雷钠在脑血管疾病治疗中的临床应用提供实验依据。
1.2 研究目的本研究旨在探究吡拉格雷钠对脑缺血再灌注损伤模型大鼠神经功能的改善作用及其机制。
具体目的包括但不限于以下几点：1. 确定吡拉格雷钠在脑缺血再灌注损伤模型大鼠中的神经保护作用，评估其对神经功能的影响；2. 探究吡拉格雷钠的作用机制，包括是否通过减少炎症反应、抑制氧化应激和减少细胞凋亡等途径实现神经保护；3. 提供实验依据，为吡拉格雷钠在临床应用中对脑缺血再灌注损伤患者提供有效的治疗方案；4. 深入理解吡拉格雷钠对神经功能的改善机制，为相关疾病的治疗提供新的思路和理论支持。
2. 正文2.1 大鼠脑缺血再灌注损伤模型的建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型是一种常用的动物模型，用于模拟脑缺血再灌注损伤的病理过程。
线栓法大鼠脑缺血再灌注模型(MCAO)制备方法
线栓法大鼠脑缺血再灌注模型制备前言相信不少神经内科的研究生都作过或将要作大鼠线栓模型，都有一个从查文献了解方法到跟师兄、师姐学习再到自己体会摸索直至熟练的过程，在模型制作的过程中可能的经历了从模型不成功的郁闷到熟练后成功的喜悦（我们是有这样的感觉）。
为了缩短各位将要作或刚开始作MCAO模型的战友的摸索过程，提高模型制作的成功率，我们愿意将自己的经验与大家分享，相信各位战友看过后将对制作大鼠线栓模型有更深的认识，并以其为乐趣，同时欢迎各位熟练的战友与我们交流经验。
第一部分线栓模型制备理论及经验⒈ 插线法局灶性脑缺血模型简介八十年代 Koizumi 和 Longa 创用了不开颅的大鼠 MCA 可逆性脑梗塞模型，此后，应用插线法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的方法不断改进和完善，已渐趋成熟，目前该法已逐渐取代开颅法而成为最流行的方法。
该模型先阻断颈外动脉（ECA）及其分支，且阻断翼腭动脉（PPA），以切断颅外来源的侧副循环血流。
从 ECA 插入尼龙线，经颈内动脉（ICA）到大脑前动脉（ACA），机械性阻断大脑中动脉（MCA）发出处的血供来建立大脑中动脉缺血模型。
此模型可在无麻醉状态下拔出尼龙线，恢复血流，实现再灌注。
1994 年 Huang 等[55]首次将线栓技术应用于小鼠局部永久性脑缺血模型。
1997 年 Hara等[56]将线栓技术改进后应用于小鼠局部暂时性脑缺血模型。
此后不断有学者借助于显微技术和多功能生理监测手段建立小鼠局部线栓脑缺血模型[57,58]。
国内蒋晓帆等[59]，王芙蓉等[60]也对该方法进行了研究。
线栓法具有不开颅、效果肯定、可准确控制缺血及再灌注时间的优点，用于研究神经元对缺血的敏感性、耐受性，药物疗效观察以及再灌注损害和治疗时间窗较为理想，同时也具有对全身影响小、动物存活时间长的特点，适于慢性脑损伤的研究。
控制好易变因素，可避免实验结果的不稳定性。
但线栓造模也并非完美无缺，存在着下列不足：①线栓造模过程是非直视下的手术，血流是否完全阻断不能即刻得知。
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大鼠脑缺血模型
大脑中动脉阻塞 (middle cerebral artery occlusion，MCAO) 是目前最常用的局灶性脑缺血模型,MCAO 模型先阻断颈外动脉（ECA）及其分支，且阻断翼腭动脉（PPA），以切断颅外来源的侧副循环血流。
从ECA插入尼龙线，经颈内动脉（ICA）到大脑前动脉（ACA），机械性阻断大脑中动脉（MCA）发出处的血供来建立大脑中动脉缺血模型。
此模型可在无麻醉状态下拔出尼龙线，恢复血流，实现再灌注。
线栓法具有不开颅、效果肯定、可准确控制缺血及再灌注时间的优点，用于研究神经元对缺血的敏感性、耐受性，药物疗效观察以及再灌注损害和治疗时间窗较为理想，同时也具有对全身影响小、动物存活时间长的特点，适于慢性脑损伤的研究。
控制好易变因素，可避免实验结果的不稳定性。
1.实验动物
SPF级Wistar大鼠，健康，雄性，体重为250g-300g。
2.实验分组
实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。
3.主要试剂
2，3，5-Triphenyltetrazolium chloride（sigma）
4.建模方法
1.15%水合氯醛麻醉大鼠，颈部备皮，消毒，插入肛温探头，保持体温在37±0.5℃。
2.颈部正中切口，暴露右侧颈总动脉，颈内动脉和颈外动脉。
使用6-0丝线在距离颈总动脉分叉4mm 处结扎颈外动脉远心端，在颈外动脉穿入另一根6-0丝线，在靠近颈总动脉分叉处打一个活结。
3.使用动脉夹夹闭颈总动脉。
在距离颈总动脉分叉处3mm处的颈外动脉上剪一个小口，将一根头端处理过的0.33mm直径的尼龙线从小口中插入，进入颈内动脉，并向内插入大脑中动脉，尼龙线的插入深度距离颈总动脉分叉处约16±1mm。
4.缺血后90min拔掉线栓，用6-0丝线结扎外动脉近心端，用3-0丝线缝合颈部伤口，活力碘消毒伤口，将大鼠放在加热垫上，待清醒后放入恒温抚养箱饲养。
5.术后24h，对小鼠进行神经功能评分，然后腹腔注射15%水合氯醛麻醉大鼠，取大脑进行TTC染色和病理染色
5.模型的评价
1.神经功能缺失体征评分
参考Longa及Bederson的5分制法在动物麻醉清醒后24h进行评分，分值越高,说明动物行为障碍越严重。
0分:无神经损伤症状
1分:不能完全伸展对侧前爪
2分:向对侧转圈
3分:向对侧倾倒
4分:不能自发行走,意识丧失
2.TTC染色
麻醉大鼠后，取大鼠脑组织，放入-20℃冰箱冷冻30min。
用PBS配置1% TTC（W/V），37℃水浴至TTC溶解，将冻好的脑组织切片，置于10ml TTC溶液中，37℃恒温孵育10min。
不时翻动脑片，使组织均匀染色。
正常脑组织染色后呈鲜红色，而梗死区呈苍白色。
3.病理学评价
取脑后用4%多聚甲醛溶液固定，蔗糖溶液脱水后，经OCT包埋做冰冻切片，切片10um，做尼氏染色，可做梗死面积的评价。
尼氏体（Nissl body）：是胞质内的一种嗜碱性物质，广泛见于各种神经元，但其形状大小和数量则各有差异。
在生理情况下,尼氏体大而数量多,反映神经细胞合成蛋白质的功能较强,在神经元受损时,尼氏体的数量可减少甚至消失。
图1. TTC染色图（白色表示梗死组织，红色表示正常组织）
武汉云克隆诊断试剂研究所。