不同产地_商品规格及生长年限猪苓麦角甾醇及多糖的含量分析_夏琴

硫酸（ 95% ～ 98% ，四川西陇化工有限公司） ， 蒽酮（ 上海科丰化学试剂有限公司） ，提取用甲醇为 分析纯，乙醇（ 分析纯） ，液相用甲醇为色谱纯，实验 用水为超纯水。 2 方法与结果 2. 1 麦角甾醇含量测定〔1〕 2. 1. 1 色谱条件： 色谱柱为 Agilent C18 （ 250 mm × 4. 6 mm，5 μm） ； 流 动 相 为 甲 醇； 流 速 为 1. 0 mL / min； 检测波长为 283 nm； 柱温为 30℃ 。 2. 1. 2 标准曲线的制备： 取麦角甾醇对照品适量， 精密称定，加甲醇制成每 1 mL 含 50 μg 的溶液，即 得对照品溶液。分 别 精 密 吸 取 对 照 品 溶 液 8、10、 15、20、25 μL 注入高效液相色谱仪，测定，即得标准 曲线 y = 26. 096x + 40. 96，r = 0. 9997。
精密度良好。
2. 2. 6 稳定性试验： 精密吸取猪苓药材（ NJ-4） 粉
末制得的供试品溶液 1. 0 mL，按照“2. 2. 2”项下方
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Journal of Chinese Medicinal Materials 第 38 卷第 1 期 2015 年 1 月
2. 1. 3 供试品溶液的制备： 取猪苓样品粉末（ 过四 2. 1. 4 样品测定： 分别精密吸取各供试品溶液 20
号筛） 约 0. 5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加 μL，注入高效液相色谱仪，以标准曲线计算麦角甾
取对照品溶液各 1. 0 mL，置于 10 mL 具塞试管中，
于冰浴中精密加入蒽酮-硫酸 显 色 剂 4 mL，混 匀。
图 1 麦角甾醇对照品（A）和猪苓药材 样品（ B） HPLC 图 1. 麦角甾醇
以上溶液沸水浴 20 min，迅速于冰浴中冷却 10 min 后，于 625 nm 测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓 度为横 坐 标，绘 制 标 准 曲 线。得 回 归 方 程 为 y =
醇） 脱蛋白（ 混合物剧烈震荡 20 min，蛋白质变性成
胶状，存在于水相和溶剂相的交界面上，3 000 r / min
离心 10 min，分 去 水 层 和 溶 剂 层 交 界 处 的 变 性 蛋
白） ，重复 3 ～ 5 次至无蛋白层出现。
将溶液减压浓缩后加入 95% 乙醇使溶液中醇
浓度为 80% ，置 4 ℃ 冰箱中过夜，3 000 r / min 离心
结果显示，17 批猪苓样品中，四川南江栽培猪 苓样 品 的 麦 角 甾 醇 含 量 均 较 高，在 0. 07% ～ 0. 18% ； 四年生最高，达 0. 18% ； 其次，陕西略阳栽 培猪苓也较高，为 0. 14% ； 云南云龙、陕西太白及商 洛野生猪苓、河南西峡鸡爪苓的麦角甾醇含量最低， 为 0. 04% ～ 0. 06% ，不符合 2010 年版中国药典规
5. 409x + 0. 1797，r = 0. 9998，即葡萄糖含量在 30 ～ 120 μg / mL 范围内和吸收度呈良好的线性关系。 2. 2. 3 猪苓多糖的精制〔5〕： 取 60 ℃ 干燥至恒重的 猪苓药材细粉 100 g，加水 2 000 mL，煎煮 1. 5 h，滤 过，药 渣 再 重 复 提 取 1 次，滤 过，合 并 2 次 滤 液， 3 000 r / min 离心 10 min，取上清液减压浓缩至合适
10 min，冷冻干燥，得精制多糖。称重，得精制猪苓
多糖 1. 815 g，即得率为 1. 82% 。
2. 2. 4 供试品溶液的制备： 取 60 ℃ 干燥至恒重的
猪苓药 材 细 粉 0. 5 g，精 密 称 定，置 锥 形 瓶 中，加
80% 乙醇 80 mL，水浴加热回流 1 h，趁热滤过，残渣
用 80% 热乙醇洗涤 3 次，每次 10 mL，将残渣及滤纸
1. 54efgh FGHI 1. 70def DEFGH 1. 68 defg DEFGH 1. 80cde CDEFG 2. 03abc ABCD 2. 30a A 1. 10j J 1. 26ij IJ 2. 12ab ABC 2. 24a AB 1. 93bcd BCDE 1. 49fghi GHI 1. 89bcd BCDEF 1. 57efg EFGHI 1. 43ghi HIJ 1. 54fghi GHI 1. 28hij IJ
关键词 不同产地； 麦角甾醇； 猪苓多糖 中图分类号：Ｒ282. 6 文献标识码：A 文章编号：1001-4454（2015）01-0045-04 DOI：10. 13863 / j. issn1001-4454. 2015. 01. 012
猪苓为多孔菌科真菌猪苓 Polyporus umbellatus （ Pers. ） Fries 的干燥菌核，具有利水渗湿的功效〔1〕。 主要含多糖、麦角甾醇、酮类化合物、氨基酸及微量 元素等，其中甾醇类成分具有抑制膀胱癌和利尿的 作用，猪苓多糖具有免疫调节、抗肿瘤及降血糖等药 理作用〔2，3〕。本实验对四川、云南、陕西、河南 4 个 省份收集的 17 批猪苓药材进行麦角甾醇及多糖的 含量测定，分析比较不同自然生长环境、来源、生长 年限情况下的相对品质，为猪苓临床合理用药、中医 方剂配方计量以及影响药材有效成分含量的因素分 析等提供参考。 1 仪器与材料 1. 1 仪器 TECHCOMP UV-1100 型紫外可见分光 光度计（ 上海天美科学仪器有限公司） ，Agilent 1200 HPLC 高效液相色谱仪（ 美国安捷伦公司） ，SHZ-D 循环水式真空泵（ 巩义市予华仪器有限责任公司） ， DZKW-4 电 子 恒 温 水 浴 锅 （ 余 姚 长 丰 仪 表 厂 ） ， BP121S 电子天平（ 德国赛多利斯公司） 。 1. 2 材料 于 2013 年 2 月至 6 月分别从四川南 江、云南云龙、河南西峡、陕西略阳、陕西秦岭太白山 脉、陕西商洛 6 个产地收集野生及栽培猪苓样品共
摘要 目的： 考察 17 批不同产地猪苓麦角甾醇及多糖的含量，为猪苓的质量标准及种植生产提供一定的依 据。方法： 分别采用 HPLC 法测定麦角甾醇的含量； 水提醇沉法提取猪苓多糖，以葡萄糖为对照品，采用蒽酮-硫酸 比色法测定猪苓多糖含量。结果： 麦角甾醇以四川南江栽培猪苓样品含量较高，为 0. 07% ～ 0. 18% ； 四年生最高， 达 0. 18% ； 云南云龙、陕西太白野生猪苓及河南西峡鸡爪苓的麦角甾醇含量最低，为 0. 04% ～ 0. 06% ，低于中国药 典标准。多糖含量范围为 1. 10% ～ 2. 30% ，其中四川南江栽培三年生猪苓样品含量最高，为 2. 30% ； 南江栽培四年 猪苓的多糖含量最低，为 1. 10% 。同一产地样品，不同商品规格的猪苓麦角甾醇及多糖的含量差异很大： 猪屎苓的 麦角甾醇及多糖的含量均高于鸡爪苓； 栽培猪苓麦角甾醇的含量高于野生猪苓，多糖含量与野生相差不大。同一 产地（ 四川南江） 猪苓麦角甾醇及多糖随着生长年限的增长而变化。结论： 不同产地、不同商品规格及生长年限猪 苓药材中麦角甾醇及多糖的含量存在较大差异，猪苓药材的质量受自然环境、来源、生长年限的影响。在适宜产区 种植猪苓对保证猪苓药材质量和临床药效有积极的意义。
栽培两年生 栽培两年生 栽培三年生 栽培三年生 栽培三年生 栽培三年生 栽培四年生 栽培四年生 栽培五年生 野生多年生 野生多年生 野生多年生 栽培三年生 栽培三年生 栽培三年生 野生多年生 野生多年生
猪屎苓 猪屎苓 猪屎苓 猪屎苓 猪屎苓 猪屎苓 猪屎苓 猪屎苓 猪屎苓 鸡爪苓 猪屎苓 鸡爪苓 猪屎苓 鸡爪苓 猪屎苓 猪屎苓 猪屎苓
0. 09f E 0. 09f E 0. 12c C 0. 09f F 0. 12d D 0. 07g G 0. 18a A 0. 07g F 0. 10e D 0. 07h G 0. 06i H 0. 04kl JK 0. 10e E 0. 04k JK 0. 14b B 0. 04l K 0. 05j I
注： 同列不同小写字母表示在 P ＜ 0. 05 水平下存在显著性差异； 不同大写字母表示在 P ＜ 0. 01 水平下存在极显著性差异
定。同一产地样品，猪屎苓的麦角甾醇含量高于鸡
爪苓； 栽培猪苓的麦角甾醇含量高于野生猪苓。
2. 2 多糖含量测定
2. 2. 1 硫酸-蒽酮试剂的配制： 精密称取 20 mg 蒽
置烧瓶中，加水 80 mL，加热回流 1 h，趁热滤过，残
渣及锥形瓶用热水洗涤 2 次，每次 10 mL，合并滤液
与洗液，放冷，转移至 100 mBiblioteka 量瓶中，加水至刻度，摇匀。
2. 2. 5 精密度试验： 精密量取同一浓度的对照品
溶液 6 份，照“2. 2. 2”项下方法操作，分别测其吸光
度值。结果显示 ＲSD 为 1. 50% （ n = 6） ，表明仪器
17 批，经笔者李敏教授鉴定均为多孔菌科真菌猪苓 Polyporus umbellatus （ Pers. ） Fries 的 干 燥 菌 核。见 表 1。
无水葡萄糖对照品（ 批号： 110833-200503，供含 量测定用，中国食品药品检定研究院） ； 麦角甾醇对 照品（ 批号： MUST-12110704，质量分数≥98% ，中国 科学院成都生物研究所） 。
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体积，加 95% 乙醇，使其浓度达到 80% ，搅拌，置 4
℃ 冰箱中过夜，离心分离收集沉淀得粗多糖。
粗多糖溶于纯水中，采用 Sevage 法（ 氯仿-正丁
醇 = 5∶ 1，先加入氯仿，调 pH 至 4 ～ 5，随后加入正丁
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不同产地、商品规格及生长年限猪苓麦角甾醇 及多糖的含量分析