细胞培养用具的清洗、消毒方法
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要求：
1新配制的清洁液呈棕红色。当使用时间过久，清洁液的颜色变暗、发绿或混浊时，应弃 去（深埋地下），配制新的。
2配制、盛装清洁液的容器应防酸、耐热、有较大的开口，一般用瓷缸、玻璃制品或耐酸 塑料制品。
1•配制时应注意安全，须穿戴耐酸手套和围裙，并要保护好面部及身体裸露部分
2•配制过程中可使重铬酸钾溶于水中，然后慢慢加浓硫酸。并不停的用玻璃棒搅拌，使产 生的热量挥发，
（10min/次）-包装烘干（50C）-待使用
3、橡胶类具体操作： 新买/已用：用后立即用流水冲洗-洗涤剂浸泡3小时后刷洗（用纱 布或棉签）t自来水冲洗t5%稀盐酸浸泡过夜—双蒸水煮沸2~3次
10min/次）—包装烘干（50C）—待使用
4、镊子、剪刀
具体操作：
洗涤剂刷洗—自来水冲洗5~6次—75%医用酒精浸泡3小时—酒精
3•配制溶液应选择塑料制品
4•配成后清洁液一般为棕红色
已用：用后马上浸入洗洁精中浸泡一天7（带毒应浸入消毒水）—洗 涤剂刷洗后自来水冲洗（晾干或烘干50C）—浸酸（一天一夜）— 自来水冲洗25遍-蒸馏水洗5次-双蒸水洗3次（或再用单蒸水冲 洗5次）-干热灭菌（将温度升至150C后关闭烘箱密闭3h，待冷 却至常温）-待使用
1.新的初次使用的玻璃器皿，在生产及运输过程中，玻璃表面带有大量的干固的灰尘，且
具体以配置10000ml常用清洁液为例介绍如下操作：
1.先在搪瓷盆或塑料盆中加入蒸馏水8000ml,
2称取1000g重铬酸钾，用玻璃棒搅拌直至溶解（可加热以辅助溶 解），
3.待重铬酸钾液冷却后，缓慢加入1000ml浓硫酸，边加边用玻璃棒 搅动，以混合液温度不过快上升和不出现重铬酸钾结晶为度。
4•配好后倒入洗液缸中备用。
5.抗生素：主要用于培养用液灭菌或预防培养物污染。
常用的抗生素：青霉素（浓度是1OO^gml）
链霉素（100卩/ml）
附酸液配制：
酸液配制：重铬酸钾（g）：浓硫酸（ml）：蒸馏水（ml）
强清洁液63：1000:200
次强清洗液120：200：1000
弱清洁液（常用）100：100：1000
（危险！请勿单独配制此溶液）
玻璃表面常呈碱性及带有一些对细胞有害的物质等，用5%稀盐酸液浸泡过夜，以中和其中
的碱性物质
2.刷洗要适度，过度会损害器皿表面光泽度
3.清洁液对玻璃器皿无腐蚀作用，而其强氧化作用可除掉刷洗不掉的微量杂质。浸泡时器 皿要充满清洁液，勿留气泡或器皿露出清洁液面
4.浸泡时间：一般为过夜，不应少于6小时
5.最好用洗涤装置如用手工操作需流水冲洗十次以上，每次水须灌满及倒干净，然后用蒸 馏水清洗3-5次，晾干（或烘干）备用
棉球1擦拭—待使用
注意 :1.酒精棉球应用双蒸水配置
5、不锈钢除菌滤器
具体操作：
洗涤剂刷洗滤器—流水冲洗15min—蒸馏水冲洗2~3次（或浸泡
24h）—三蒸水冲洗2~3次（或24小时）—干燥—备用
6、金属滤网
具体操作：
自来水冲洗—蒸馏水冲洗—三蒸水冲洗—干燥—备用
二、消毒
1•紫外线：用于空气，操作台表面和不能使用其它法进行消毒的培 养器皿。消毒时间：30~60min（至少）
细胞培养用品的清洗与消毒
一、清洗
1、玻璃类
流程：浸泡-刷洗和烘干-浸酸-冲洗
要求：清洗后的玻璃器皿干净透明无油迹，水滴不成股流下
具体操作：
新买：5%稀盐酸浸泡过夜1—自来水冲洗—洗洁精刷洗2—自来水冲 洗（晾干或烘干50C）—浸酸（一天一夜）3~4—自来水冲洗25遍 -蒸馏水洗5次-双蒸水洗3次（或再用单蒸水冲洗5次）-干热 灭菌（将温度升至150C后关闭烘箱密闭3h，待冷却至常温）6-待 使用
6.或高压蒸汽灭菌（湿热法），容器水分烘干-牛皮纸包内、报纸包外将容器口扎紧-
121C,30min高压灭菌—待使用
7.用后立即浸入水中，要求完全浸入，不能留有气泡或浮在液面
2、塑料类
具体操作：
新买：一次性无菌塑料制品打开包装即ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ使用
已用：用后立即用流水冲洗-洗涤剂浸泡3小时后刷洗（用纱布或 棉签）—自来水冲洗—5%稀盐酸浸泡过夜—双蒸水煮沸2~3次
2.高压蒸气灭菌法（湿热）：15磅，121C,20min
培养用液、橡胶制品10磅lOmin
布类、玻璃制品、金属器械等15磅20min
3.干烤：160C,2h（适用于玻璃器皿等）
注意：消毒后不要立即打开箱门，以防止冷空气骤然进入引起玻璃炸裂，影响消毒效
果。
4.75%酒精：主要用于操作者的皮肤，操作台表面及无菌室内的壁面 处理，一般要求为70%~75%的乙醇，用蒸馏水配制
1新配制的清洁液呈棕红色。当使用时间过久，清洁液的颜色变暗、发绿或混浊时，应弃 去（深埋地下），配制新的。
2配制、盛装清洁液的容器应防酸、耐热、有较大的开口，一般用瓷缸、玻璃制品或耐酸 塑料制品。
1•配制时应注意安全，须穿戴耐酸手套和围裙，并要保护好面部及身体裸露部分
2•配制过程中可使重铬酸钾溶于水中，然后慢慢加浓硫酸。并不停的用玻璃棒搅拌，使产 生的热量挥发，
（10min/次）-包装烘干（50C）-待使用
3、橡胶类具体操作： 新买/已用：用后立即用流水冲洗-洗涤剂浸泡3小时后刷洗（用纱 布或棉签）t自来水冲洗t5%稀盐酸浸泡过夜—双蒸水煮沸2~3次
10min/次）—包装烘干（50C）—待使用
4、镊子、剪刀
具体操作：
洗涤剂刷洗—自来水冲洗5~6次—75%医用酒精浸泡3小时—酒精
3•配制溶液应选择塑料制品
4•配成后清洁液一般为棕红色
已用：用后马上浸入洗洁精中浸泡一天7（带毒应浸入消毒水）—洗 涤剂刷洗后自来水冲洗（晾干或烘干50C）—浸酸（一天一夜）— 自来水冲洗25遍-蒸馏水洗5次-双蒸水洗3次（或再用单蒸水冲 洗5次）-干热灭菌（将温度升至150C后关闭烘箱密闭3h，待冷 却至常温）-待使用
1.新的初次使用的玻璃器皿，在生产及运输过程中，玻璃表面带有大量的干固的灰尘，且
具体以配置10000ml常用清洁液为例介绍如下操作：
1.先在搪瓷盆或塑料盆中加入蒸馏水8000ml,
2称取1000g重铬酸钾，用玻璃棒搅拌直至溶解（可加热以辅助溶 解），
3.待重铬酸钾液冷却后，缓慢加入1000ml浓硫酸，边加边用玻璃棒 搅动，以混合液温度不过快上升和不出现重铬酸钾结晶为度。
4•配好后倒入洗液缸中备用。
5.抗生素：主要用于培养用液灭菌或预防培养物污染。
常用的抗生素：青霉素（浓度是1OO^gml）
链霉素（100卩/ml）
附酸液配制：
酸液配制：重铬酸钾（g）：浓硫酸（ml）：蒸馏水（ml）
强清洁液63：1000:200
次强清洗液120：200：1000
弱清洁液（常用）100：100：1000
（危险！请勿单独配制此溶液）
玻璃表面常呈碱性及带有一些对细胞有害的物质等，用5%稀盐酸液浸泡过夜，以中和其中
的碱性物质
2.刷洗要适度，过度会损害器皿表面光泽度
3.清洁液对玻璃器皿无腐蚀作用，而其强氧化作用可除掉刷洗不掉的微量杂质。浸泡时器 皿要充满清洁液，勿留气泡或器皿露出清洁液面
4.浸泡时间：一般为过夜，不应少于6小时
5.最好用洗涤装置如用手工操作需流水冲洗十次以上，每次水须灌满及倒干净，然后用蒸 馏水清洗3-5次，晾干（或烘干）备用
棉球1擦拭—待使用
注意 :1.酒精棉球应用双蒸水配置
5、不锈钢除菌滤器
具体操作：
洗涤剂刷洗滤器—流水冲洗15min—蒸馏水冲洗2~3次（或浸泡
24h）—三蒸水冲洗2~3次（或24小时）—干燥—备用
6、金属滤网
具体操作：
自来水冲洗—蒸馏水冲洗—三蒸水冲洗—干燥—备用
二、消毒
1•紫外线：用于空气，操作台表面和不能使用其它法进行消毒的培 养器皿。消毒时间：30~60min（至少）
细胞培养用品的清洗与消毒
一、清洗
1、玻璃类
流程：浸泡-刷洗和烘干-浸酸-冲洗
要求：清洗后的玻璃器皿干净透明无油迹，水滴不成股流下
具体操作：
新买：5%稀盐酸浸泡过夜1—自来水冲洗—洗洁精刷洗2—自来水冲 洗（晾干或烘干50C）—浸酸（一天一夜）3~4—自来水冲洗25遍 -蒸馏水洗5次-双蒸水洗3次（或再用单蒸水冲洗5次）-干热 灭菌（将温度升至150C后关闭烘箱密闭3h，待冷却至常温）6-待 使用
6.或高压蒸汽灭菌（湿热法），容器水分烘干-牛皮纸包内、报纸包外将容器口扎紧-
121C,30min高压灭菌—待使用
7.用后立即浸入水中，要求完全浸入，不能留有气泡或浮在液面
2、塑料类
具体操作：
新买：一次性无菌塑料制品打开包装即ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ使用
已用：用后立即用流水冲洗-洗涤剂浸泡3小时后刷洗（用纱布或 棉签）—自来水冲洗—5%稀盐酸浸泡过夜—双蒸水煮沸2~3次
2.高压蒸气灭菌法（湿热）：15磅，121C,20min
培养用液、橡胶制品10磅lOmin
布类、玻璃制品、金属器械等15磅20min
3.干烤：160C,2h（适用于玻璃器皿等）
注意：消毒后不要立即打开箱门，以防止冷空气骤然进入引起玻璃炸裂，影响消毒效
果。
4.75%酒精：主要用于操作者的皮肤，操作台表面及无菌室内的壁面 处理，一般要求为70%~75%的乙醇，用蒸馏水配制