活性磷检测方法

活性磷酸盐（磷钼蓝法）

一、传统方法原理

水样中的活性磷酸盐采用磷钼蓝法测定。活性磷酸盐在一定的酸性条件下可与钼酸铵作用，生成淡黄色的磷钼酸铵，但磷钼酸铵发色能力弱，在通常的磷浓度下显不出黄色来。磷钼酸铵可被还原剂抗坏血酸还原成发色能力很强的蓝色化合物——“钼蓝”，还原后的溶液在690nm处有较大吸收，可用比色法分析。

二、仪器及设备

1．分光光度计及配套比色皿

2．具塞比色管

3．容量瓶、移液管等常规实验室设备

三、试剂及其配制

1．硫酸溶液（1:2）：在不断搅拌下将浓硫酸缓缓倒入同体积蒸馏水中，冷却后盛于试剂瓶中。

2．酒石酸锑钾：溶解6g酒石酸锑钾于200ml水中，贮于聚乙烯瓶中，溶液变混浊时，应重配。

3．钼酸铵溶液（10%）：称取5g钼酸铵固体[(NH4)6Mo7O24·4H2O]，溶解后稀释至50ml，若溶液浑浊应取其澄清液贮于聚乙烯瓶中。

4．钼酸铵—硫酸混合试剂：45ml钼酸铵溶液与200ml硫酸溶液混合，加入5ml酒石酸锑钾溶液，混匀后贮于聚乙烯瓶中，此溶液避光保存可稳定数日，如发现混浊须重新配制。

5．抗坏血酸溶液：溶解20g抗坏血酸（C6H8O6）于200mL水中，盛于棕色试剂瓶中。此溶液4℃避光保存，可稳定1个月。

6．磷标准贮备液（0.2mg PO43--P/mL）：称取KH2PO4（AR，于115℃下烘1h）0.8790g溶于蒸馏水中，并转入1000ml容量瓶中定容。

7．磷标准使用液（2ug PO43--P/mL）：移取1.0ml标准贮备液于100ml容量瓶中定容。

四、测定步骤

1．绘制工作曲线

①取6个25ml具塞比色管，分别加入0、0.50、1.00、1.50、2.00、2..50ml

磷标准使用液，加水至标线，混匀。

②分别加入钼酸铵—硫酸混合试剂1ml，混匀后放置3min；再分别加入抗坏血酸溶液1ml，混匀后显色10min。

③用分光光度计在690nm波长处，于比色皿中对照蒸馏水测定上述溶液的吸光度E值（其中试剂空白吸光度为E0）。

④在坐标纸上，以吸光度E-E0为纵坐标，磷浓度为横坐标作图，得工作曲

线。

序列号 1 2 3 4 5 6

磷标准使用液体积（ml）0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50

浓度（ugPO43--P/mL）0.00 0.04 0.08 0.12 0.16 0.20

吸光度值E E0

E-E0

2．水样的测定(双样测定，取平均值)

①取25ml水样于比色管中。

②参照标准曲线绘制过程中的步骤②、③，显色并测定该水样的吸光度值

E w。

五、结果计算

由水样的测定值E w-E0查工作曲线，得该水样中活性磷酸盐的含量。

六、注意事项

1．显色后须在30min之内测定溶液的吸光度值，30min之后溶液的颜色将逐渐减退。

2．水样的含盐量对磷钼蓝的显色有影响。对于海水样品，上述从工作曲线上查得的数值尚需乘以适当的校正系数Ks，才能获得海水样品中活性磷酸盐磷的实际浓度。

3．由于磷钼蓝的摩尔吸光系数较小，比色时采用液层厚度较大的比色皿可提高测定的精确度。