多重PCR方法检测锦鲤疱疹病毒基因
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中国动物检疫 ２ １ 年 第２ 卷 第 １ 期 ０１ ８ １
一３ ９一
多重 Ｐ Ｒ方法检测锦鲤疱疹病毒基 因 Ｃ
乌 日琴 陈 芳 张艺 宜 ｚ刘芸 莉 ２刘 中勇 ， 志雄 ， ， ， 林
（． 东出入境检验检疫局技术 中心， 东广州 ５０ ２；． １广 广 １６ ２ 华南农业大学动物科学系， 东广州 ５０４ ） ３ 广 １６ ２
Ｋ Ｖ病毒 Ｐ Ｒ检测结果与常规 Ｐ Ｒ检测结果基本吻合，在多重 Ｐ Ｒ检测体系中Ｋ Ｖ Ｔ Ｈ Ｃ Ｃ Ｃ Ｈ Ｋ基因片 段检测的灵敏度高于检验检
疫行业标准方法。结果表 明， 多重 Ｋ Ｖ病毒 Ｐ Ｒ检 测方法能够快速 、 Ｈ Ｃ 准确和灵敏地检测 Ｋ Ｖ病毒基 因。 Ｈ 关键 词： 测； 检 锦鲤疱疹病毒 ； 多重 Ｐ Ｒ Ｃ
中图分类号 ：８ ２ ６ ９ ６ ￥ ５ ．５ ． 文献标识码： Ａ 文章编号：０ ５ ９ ４ （０ １１ － ０ ９０ １ ０ － ４ Ｘ ２ １） １０ ３ － ５
Ａ ｕｔ ｌｘ Ｐ Ｒ ｓ ｙｆ ｒＳｍｕｔｎ ｏ ｓＤｅｅ ｔ ｎ ｏ Ｋｏ ｒ ｅ ｖｒ ｓＧｅｌ Ｍ ｌ ｐｅ Ｃ Ａｓａ ｉ ｌ ｅ ｕ ｔｃ ｏ ｆ ｉ ｉ ｏ ａ ｉ Ｈｅｐ ｓ ｉ ｌ ｕ ｏ
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Ａｂ ｌａｔ Ａ ｌｐｅ ｏｙ ｒｓ ｈ ｉ ｅ ｃｉｎ （ ｌ ＣＲ）ｗａ ｅ ｅｏ ｅ ｏ ｉ ｌ ｎ ｏ ｓ ｅｅｔ ｎｏ ｓ ｃ： ｍｕｔ ｌｘｐ ｌｍｅａｅｃ ａｎｒａ ｔ ｚ ｉ ｏ ｍｕｔ Ｐ ｉ ｓｄ ｖ ｌｐ ｄ ｆｒｓｍｕｔ ｅ ｕ ｌ ｄ ｔｃｉ ｆ３ＫＨＶ ｉ ｌ ａ ｙ ｏ ｖｒ ａ ＤＮＡ ｅ － ｓ ｇ
ｍｅ ｔ ｏ ｍｐ ｏ ｅ ｈ ｅ ｉｇ ｏ ｉ ｆ ＫＨＶ ｉ ｆｃ ｉ ｎ ３ ｅｓ ｆ ｐ ｍ ｅ ｓ ｗｅ ｅ ｄ ｓｇ ｅ ｔｒ ｅ ｎ ｓ ｅ ｉ ｃ ｅ ｕ ｎ ｅ ｏ ｉ ｔ ｒ ｓ ｉ ｒ ｖ ｔ ｄ ａ ｎ ｓｓ ｏ ｎ ｅｔ ． ｏ ｓ ｔ ｏ ｒ ｒ ｒ ｅ ｉ ｄ ａ ｇ ｔ ｇ ｐ ｃ ｆ ｓ ｑ ｅ ｃ ｓ ｆ ＫＨＶＳ Ｍ ｉ ｎ ｉ ｉ ｐ
（ ＡＹ５ ８ ９ ）， ６ ５ ０ ＫＨＶ５９（ ４１ ８ ３ ａ ｄＫＨＶ Ｋ ｅ ｅ ＡＪ３ １ ２ ， ｉｈｗｅｅｆｅ ｕ ｎ ｌ ｓｄ ｉ ＣＲ ｓａ ｒｄ ｔｃｉｇＫＨＶ ｉａ ／ ＡＦ １ ０ ） ｎ Ｔ ｇ ｎ （ ５ ５ １ ） ｗｈｃ ｒ ｒ ｑ ｅ ｔ ｕ ｅ ｎＰ ｙ ａｓｙ ｆ ｅｅ ｔ ｏ ｎ ｖｒ ｌ
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摘
要：根据 对 已 道的 Ｐ Ｒ检 测方法灵敏 性评 价 ，以常用 Ｋ Ｖ 病毒 Ｐ Ｒ检 测的 目的基 因 Ｋ Ｖ ｐＩ 报 Ｃ Ｈ Ｃ Ｈ Ｓｈ 片段 （ Ｙ ６５０ 、 Ａ ５８９ ）
Ｋ Ｖ ／（ Ｆ １８３和 Ｋ Ｖ Ｔ Ｈ ５９Ａ ４ １０ ） Ｈ Ｋ基 因（ Ｊ３１２ 作为靶基 因， 计并选择 ３ Ａ ５５ １） 设 对特异性 引物建立的多重 Ｐ Ｒ检测体 系用 于 Ｋ Ｖ Ｃ Ｈ 病毒 多基 因的检 测。本研 究建立的 多重 Ｐ Ｒ体 系具有较 高的特异性 ，能够特异性扩增 出 Ｋ Ｖ ｐＩ Ｃ Ｈ Ｓｈ 片段 ２０ ｐＫ Ｖ ／ 片段 ９ ｂ 、Ｈ ５９ ４４ ｐ和 Ｋ Ｖ Ｔ ８ ｂ Ｈ Ｋ基 因片段 ４９ ｐ ０ ｂ ，对锦鲤和 鲤鱼 的另外 一种病毒 性病原 鲤春毒血症 病毒检 测结果为 阴性 。多重 Ｋ Ｖ病毒 Ｈ Ｐ Ｒ体 系检 测 Ｋ Ｖ ｐＩ Ｈ ５９ Ｋ Ｖ Ｔ Ｃ Ｈ Ｓｈ、 Ｖ ／ 和 Ｈ Ｋ基 因片段单 一模板 的检 测下限分别 为：０ ｇ １ 和 １０ Ｋ １ ｆ、０ ｆ ０ ｇ ０ 堙，在相 同模板 浓度 的 情况下， Ｈ Ｓｈ、Ｈ ５９ Ｋ Ｖ Ｔ Ｋ Ｖ ｐＩ Ｖ ／ 和 Ｈ Ｋ基 因片 同时被检 出的检 测下限为 １０ｇ 对 Ｋ Ｖ病毒 感染组织 的检 测结 果表 明， Ｋ 段 ０ ｆ。 Ｈ 多重
（． ａ ｇｏ ｇＩｓｅｔ ｎａｄＱｕｒ ｔ ｅＴ ｃｎ ｌｇ ｅｔｒＧｕｎ ｚ ｏ １６ ３ Ｃ ｉａ １ Ｇｕｎ ｄ ｎ ｐ ｃ ｏ ａａｉ ｅｈ ｏｏ ｙＣ ｎｅ， ａ ｇｈ ｕ５０ ２ ， ｈｎ ； ｎ ｉ ｎ ｎ ｎ
中国动物检疫 ２ １ 年 第２ 卷 第 １ 期 ０１ ８ １
一３ ９一
多重 Ｐ Ｒ方法检测锦鲤疱疹病毒基 因 Ｃ
乌 日琴 陈 芳 张艺 宜 ｚ刘芸 莉 ２刘 中勇 ， 志雄 ， ， ， 林
（． 东出入境检验检疫局技术 中心， 东广州 ５０ ２；． １广 广 １６ ２ 华南农业大学动物科学系， 东广州 ５０４ ） ３ 广 １６ ２
Ｋ Ｖ病毒 Ｐ Ｒ检测结果与常规 Ｐ Ｒ检测结果基本吻合，在多重 Ｐ Ｒ检测体系中Ｋ Ｖ Ｔ Ｈ Ｃ Ｃ Ｃ Ｈ Ｋ基因片 段检测的灵敏度高于检验检
疫行业标准方法。结果表 明， 多重 Ｋ Ｖ病毒 Ｐ Ｒ检 测方法能够快速 、 Ｈ Ｃ 准确和灵敏地检测 Ｋ Ｖ病毒基 因。 Ｈ 关键 词： 测； 检 锦鲤疱疹病毒 ； 多重 Ｐ Ｒ Ｃ
中图分类号 ：８ ２ ６ ９ ６ ￥ ５ ．５ ． 文献标识码： Ａ 文章编号：０ ５ ９ ４ （０ １１ － ０ ９０ １ ０ － ４ Ｘ ２ １） １０ ３ － ５
Ａ ｕｔ ｌｘ Ｐ Ｒ ｓ ｙｆ ｒＳｍｕｔｎ ｏ ｓＤｅｅ ｔ ｎ ｏ Ｋｏ ｒ ｅ ｖｒ ｓＧｅｌ Ｍ ｌ ｐｅ Ｃ Ａｓａ ｉ ｌ ｅ ｕ ｔｃ ｏ ｆ ｉ ｉ ｏ ａ ｉ Ｈｅｐ ｓ ｉ ｌ ｕ ｏ
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摘
要：根据 对 已 道的 Ｐ Ｒ检 测方法灵敏 性评 价 ，以常用 Ｋ Ｖ 病毒 Ｐ Ｒ检 测的 目的基 因 Ｋ Ｖ ｐＩ 报 Ｃ Ｈ Ｃ Ｈ Ｓｈ 片段 （ Ｙ ６５０ 、 Ａ ５８９ ）
Ｋ Ｖ ／（ Ｆ １８３和 Ｋ Ｖ Ｔ Ｈ ５９Ａ ４ １０ ） Ｈ Ｋ基 因（ Ｊ３１２ 作为靶基 因， 计并选择 ３ Ａ ５５ １） 设 对特异性 引物建立的多重 Ｐ Ｒ检测体 系用 于 Ｋ Ｖ Ｃ Ｈ 病毒 多基 因的检 测。本研 究建立的 多重 Ｐ Ｒ体 系具有较 高的特异性 ，能够特异性扩增 出 Ｋ Ｖ ｐＩ Ｃ Ｈ Ｓｈ 片段 ２０ ｐＫ Ｖ ／ 片段 ９ ｂ 、Ｈ ５９ ４４ ｐ和 Ｋ Ｖ Ｔ ８ ｂ Ｈ Ｋ基 因片段 ４９ ｐ ０ ｂ ，对锦鲤和 鲤鱼 的另外 一种病毒 性病原 鲤春毒血症 病毒检 测结果为 阴性 。多重 Ｋ Ｖ病毒 Ｈ Ｐ Ｒ体 系检 测 Ｋ Ｖ ｐＩ Ｈ ５９ Ｋ Ｖ Ｔ Ｃ Ｈ Ｓｈ、 Ｖ ／ 和 Ｈ Ｋ基 因片段单 一模板 的检 测下限分别 为：０ ｇ １ 和 １０ Ｋ １ ｆ、０ ｆ ０ ｇ ０ 堙，在相 同模板 浓度 的 情况下， Ｈ Ｓｈ、Ｈ ５９ Ｋ Ｖ Ｔ Ｋ Ｖ ｐＩ Ｖ ／ 和 Ｈ Ｋ基 因片 同时被检 出的检 测下限为 １０ｇ 对 Ｋ Ｖ病毒 感染组织 的检 测结 果表 明， Ｋ 段 ０ ｆ。 Ｈ 多重