禽呼肠病毒RT-LAMP可视化检测方法的建立

Ｎｏｏ ｔｍｉ Ｔ等 于 ２ ０ ０ ０年开发 了一 种新 颖 的恒
温 核酸 扩增 方法 ， 即环 介 导等温 扩增 法 （ｏ ｐｍｅ ｉ— １ｏ — ｄａ ｔｄｉ ｔｅｍａ ａ ｌｉａｉｎ Ｌ ｅ ｏ ｈ ｒ ｌ ｍｐｉｃ ｔ ， ＡＭＰ 。该 技术 特异 ｓ ｆ ｏ ）
炎， 在临 床上 与鸡 慢 性 呼 吸道 病 、 胃肠 道 吸 收 障 碍 、
作者简介 ： 王 莹 （９ ３ ， ， 东济 南人 ． 士研 究 生 ， １８ 一） 女 山 硕 主要 从 事 禽 病 防治 与 病 原 分 子 生物 学研 究 。 ＊通 讯 作 者
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Ｂ ｔ ＮＡ 聚合 酶 ， ６ ． ｓＤ 在 ３ ５℃恒 温条 件 下进行扩 增 ， 扩增后 加入 Ｓ Ｂ ｅ ｎ Ｉ染料 直接 或在 紫外灯 下观 察 Ｙ Ｒ Ｇｒｅ 判 定扩增 结果 。该 方 法 可 检 测 出 ＡＲＶ 标 准株 和 分 离株 ， 有 很 好 的特 异 性 ； 具 最低 能检 测 出 １个 拷 贝 的 ｐ １ 一 — １阳性 质粒 ， 感性 很 高 。该 方 法无 需特殊 仪 器 ， ＭＤ ８Ｔ Ｓ 敏 简便 ， 速 ， 用 于禽 呼 肠 病 毒 的 临床 快 速 检 快 适
测 。
关键 词 ： 呼肠病 毒 ； １ 因 ； — ＡＭＰ 禽 Ｓ 基 ＲＴ Ｌ
中 图 分 类 号 ：８ ２６ ９ ４ ￥ ５ ． ５ ． 文献标识码 ： Ａ
文 章 编 号 ： ０ ７５ ３ （ ０ ０ １ — ０ ９０ １ ０ —０ ８ ２ ｉ ） ２０ ０ — ５
禽 呼肠 病 毒 （ ｉ ｅ ｖｒ ｓ Ａｖａ ｒｏ ｉｕ ，ＡＲＶ） 呼 肠 病 ｎ 是 毒 科正 呼肠病 毒 属 的成 员 ， 感 染 鸡 、 鸡 、 、 、 可 火 鸭 鹅 禽类 及 多 种 野 鸟［ 。ＡＲＶ 主 要 引 起 关 节 炎 、 鞘 １ ］ 腱
测 的实时监 控 浊度仪 ， 以实现 对 Ｌ 可 ＡＭＰ扩 增 全 过 程的全 程 实 时 监 控［ ］ 此 外 ， ５ 。 还可 以 向产物 中加 入
收 稿 日期 ： ｏ ００ — １ ２ １ —４ ２ 基 金 项 目 ： 家 百 千 万人 才 工程 入 选 专 项 （ ４ ２ ０ ０ ； 科 字 ０ ９ ２ ２ 国 ９ ５ ０ ６ ３桂 ９１２）
动物 医学进展 ，０ ０ ３ （ ２ ：－ ３ ２ １ ， １ １ ） ９１
Ｐｒ ｇ ｅ ｓｉ ｅ ｅ ｉ ｒ ｅ ｉ ＲＴ Ｌ ～ ＡＭＰ可 视 化 检 测 方 法 的建 立
王 莹 ， 芝 勋 ， 谢 刘加 波。 庞耀 珊 。 邓 显 文 谢 志 勤 谢 丽基 ， ， ， ，
淀 ， 以可凭 肉眼 观 察 有无 白色混 浊 判 定 结果 。 目 所 前 ， ｔ 已利 用这 种特 性研 制 出专 门用 于 Ｌ Ｆ本 ＡＭＰ检
他免 疫 抑 制 性 疾 病 的 混 合 感 染 在 鸡 群 中 普 遍 存 在Ｌ ， ３ 导致鸡生 长缓 慢 ， 料报 酬 率低 和 影响 免疫 效 ］ 饲 果 ， 养禽业 造成 巨大 的经济损 失 。 给
心肝 病损 、 蓝冠 病 、 肉鸡 矮小 综 合 征 有一 定 联 系 ， 可 引起 中枢 神经症 状［ 和免疫 抑 制 。此 外 ， Ｖ 与其 ２ ］ ＡＲ
性 强 ， 敏度 高 ， 本 低 廉 ， 别 适合 在 现场 和 基 层 灵 成 特
部 门 应 用 。 由 于 反 应 产 生 副 产 物 焦 磷 酸 镁 白 色 沉
（． 西 大 学 动 物 科 技 学 院 ， 西 南 宁 ５ ００ ；． 西 兽 医研 究 所 ， 西 南 宁 ５ ０ ０ ） １广 广 ３０５２广 广 ３０ １
摘 要 ： 据 禽呼肠病 毒 （ Ｖ） ｓ 基 因序 列 设计 一套 ＲＴ Ｌ 根 ＡＲ 的 １ — ＡＭＰ引 物 ， 以样品 的 ｅ ＤＮＡ 为模 板 ， 用
Ｓ ａ ｅ ｙ Ｌ ｂ ｒ ｔｒ Ｊ Ｖ ｔｒｎ ｒ ｔ ｌｇ ｃ ｌＢ ｏｏ ｙ，Ｌ ｎ ｈ ｕＶ ｔ ｒ ａ ｙ Ｒｅｅ ｒｈ Ｉ ｓｉ ｔ ， ｔｔ ａ ｏ ａ ｏｙ ｏ 、 ｅｅ ｉａ ｙ Ｅ ｉ ｏ ｉ ｉｌｇ Ｋｅ ｏ ａ ａ ｚ ｏ ｅｅ ｉ ｒ ｓ ｃ ｎ ｔ ｕ ｅ ｎ ａ ｔ