实验四 小鼠精子畸形试验
用小鼠精子畸形试验评价生物羊膜遗传毒性的研究
批号 ０００ ，规 格型 ４ ８１ 羊 膜 是人类 两 层胎膜 的 ｆ ， Ｉ常 羊膜薄 而透 明 ． 状 胬 内、角膜 溃疡穿 孔的修 复 （ 向层 Ｉ 无 【管 。 在光镜下可 分 为 ５晨 上 皮层、基底膜 、 密层 号 Ｚ ５× ） 血 致 Ｋ一 ５ 。 剂 ：０９ 氯化 钠注射 液 （Ｃ） ０ 甲醇 ，２ 伊 ２试 ． ％ Ｓ ，１％ ％ 纤维 母细 胞层和海绵 层 。羊膜主要 利用的 是基底膜 。基 １ 底幞是 无细 胞结构 的胶原组 织层 ．羊膜移 植是将羊 膜植 红染色液 ，环磷酰 胺 （ Ｐ 。 ｃ ） 片根 据创 面大 小的 要求 ，平 贴 于眼表 ，再 行缝合 ，受体 １ ． 器 ：Ｏｌｍｐ ｓ双 日屁微镜 （ｏ ｅ－１） ３仪 ｙ ｕ ｃ ｖｒ ８，手提 式压 ０ 周遍 的健 康结膜 组织 的新 生上皮 细胞 向羊膜移 行 ，两 ３ 力蒸汽 消毒 器，生 化培养箱 Ｌ 一５Ｂ，分析 天平 ，镊 ＲＨ １０ 周后 ，新生 上皮长 好 ，羊幞 自动 脱落。生 物羊膜 是取 用 子 剪 ７ 。 ］ 健 康剖富 产产女Ｉ 胎盘组 织 ，产 前 ｌ清 学检查按 照国家 Ｉ ＝ 的 ｆ Ⅱ ． ４动物 ：雄 性 昆 明种 小 鼠 （ － 吉，体 重 ２—５ ，山 ６８』】 ５３ｇ 相关标 准进行 ．排 除乙肝 、丙肝 、梅毒 及艾滋 痫 ，从 而 东 鲁抗医 药集团 有限公 司 ） 。 确 保原料 的腱康安 垒性 。生物 羊膜属植 入 ３ 医疗器械 １ 类 ． ５动物管理 ：动物 饲养 条件符 合 “ 实验 动物管 理条例 ” 应 从生物 、物理 ．化学等 方面 作必 要的质量控 ｛ ，以 保 要求 。 Ｉ ｊ ｌ Ｊ ｛产品 的安全性 因此 对羊膜 产品的 质量要 求是 ：无致 ｌ Ｅ 敏 、 刺激、无细 胞毒性 无遗传 毒性 ． 无 具合 适的 Ｐ 值 Ｈ 厚薄均 匀，具有 ・ 定的 韧性 。本研究就 是从 生物学 方面 评价 其是 舀Ｊ 遗传毒性 。具 体操 怍如下 ： 生
小鼠精子畸形实验报告
小鼠精子畸形实验报告
本实验旨在研究小鼠精子畸形对后代的影响，以期为人类生育健康提供参考依据。
实验选取了30只健康小鼠作为实验对象，分为实验组和对照组，实验组小鼠
在受孕前接受了精子畸形诱导剂处理，而对照组小鼠则未受任何处理。
经过一系列观察和分析，我们得出了以下实验结果。
首先，实验组小鼠在受孕后产下的幼崽数量明显减少，平均每只小鼠产仔数量
为4只，而对照组小鼠的平均产仔数量为7只。
这表明精子畸形对小鼠生育能力产生了明显的负面影响。
其次，在实验组幼崽中，出现了较高比例的畸形幼崽，包括畸形四肢、畸形头部等。
而对照组幼崽中几乎没有出现畸形情况。
这进一步证实了精子畸形对后代健康的不良影响。
此外，我们还对实验组和对照组幼崽的生长发育情况进行了观察。
结果显示，
实验组幼崽的生长发育明显滞后于对照组幼崽，体重增长速度较慢，行动能力较弱。
这说明精子畸形不仅影响了幼崽的出生情况，还对其后续的生长发育产生了长期影响。
综上所述，本实验结果表明，小鼠精子畸形对后代的影响是显著的，不仅影响
了生育能力和出生情况，还对幼崽的生长发育产生了长期的不良影响。
这一结论对于人类生育健康具有一定的借鉴意义，也提醒我们在日常生活中要注意维护精子健康，减少畸形对后代的影响。
在今后的研究中，我们将进一步探究精子畸形的形成机制，寻找可能的干预手段，以期能够更好地保障后代的健康。
希望本实验结果能够为相关领域的研究提供一定的参考价值，也为人类生育健康贡献我们的一份力量。
实验2-小鼠精子畸形试验-20121025
制
颈椎脱臼 处死小鼠 取双侧 附睾
片
3ml磷酸盐 剪碎附睾 缓冲液
擦镜纸 过滤
取悬液滴于 玻片上推片
甲醇固定5 分钟
伊红染色30分钟
（五）阅片
首先在低倍镜下选择背景清晰、精子分布 均匀、重叠较少的区域，然后在高倍镜下 观察结构完整的500个精子，计数其中畸 形的精子数。
五、结果分析与评价
精子畸形形态观察 无钩、香蕉形、无定形、双头、 胖头、 折尾、双尾 计算精子畸形的发生率（头部重叠或全部 重叠的精子、无尾精子不进行计数）。
注意鉴别制片过程中人为造成的精子损伤。
正常精子
胖头精子
双头精子
双尾精子
双尾精子
双尾精子
香蕉形精子
人类精子
Thanks!
四、操作步骤
（一）动物选择 （二）剂量与分组 （三）染毒与采样 （四）制片 （五）阅片
（四）制片
颈椎脱臼法处死小鼠，剪开腹腔，分离并摘取 双侧附睾，将附睾放入盛有约3ml磷酸盐缓冲液或 生理盐水的小平皿中，以眼科剪将附睾剪成小 块，用吸管将悬浮液轻轻吹打5～6次，静置3～ 5min，用四层擦镜纸滤除组织碎片，吸取此精子 悬液滴于清洁载玻片上，均匀推片，待玻片晾干 后用甲醇固定5min，干燥后（此时也可镜检观察 精子形态）再用1%的伊红醇溶液染色1～2h（或 30min），流水冲洗，晾干后镜检。
一、目的
精子畸形试验是检测受试化学毒物 能否破坏哺乳动物精子正常形态的 实验方法 通过该实验，学习和掌握小鼠精子 畸形试验的原理和步骤
二、原理
精子畸形是指精子的形状异常和异常精 子数量的增多; 生殖系统对化学毒物的作用十分敏感, 在其它系统还未出现毒性反应之前，生 殖系统可能已出现损害作用;
小鼠精子畸形实验
操作步骤
处死动物：用颈椎脱法处死小鼠，剪开腹腔，取
出两侧附睾 过滤：放入盛有约１ml生理盐水的平皿中，用眼 科剪剪碎附睾，四层擦镜纸过滤 涂片：取１小滴滤液涂片 固定：干燥，甲醇固定５分钟（可以直接涂片镜 检） 染色：用２％伊红染色１小时，冲洗 镜检：干燥镜检（先用低倍镜，再用高倍镜，在 较暗的视野下观察）
器材与试剂
器材：显微镜；镊子；剪刀；平皿 试剂：生理盐水；无水乙醇；2%伊红水
溶液
试验设计
1、试验动物：采用6～8周龄性成熟雄性小 鼠 2、接毒剂量及分组：受试物设高、中、低 三个剂量组，同时设阴性和阳性对照组。 受试物高剂量组的总剂量应能使部分动物 死亡，然后以1/5或1/10递减为中、低剂量 组。 阳性对照组用环磷酰胺20 mg/kg，腹腔注 射，连续５天，每天一次。
小鼠精子畸形实验 Sperm Abnormality Test in Mouse
பைடு நூலகம்的
观察精子在生成过程中形态的改变来 检 查受试物对雄性生殖细胞的致突变作 用.
原理
精子的成熟和正常形态受多种基因控制，
当这些基因中任何一个在化合物的作用下 发生突变，就会导致畸形率增高。某些特 殊的染色体重排，如性-常染色体易位是 精子产生畸形的主要机理。但是，缺血、 变态反应、感染和体温升高也可能导致精 子的畸形。
注意事项
辨别小鼠附睾； 如将精子悬液经过滤、离心等步骤除去组织残渣
后再推片效果更好，注意推片的质量； 处于精母细胞阶段的生精细胞对诱变剂较敏感， 因此在染毒后3～5周时精子畸形率最高，必要时 可作动态观察有助于全面评价； 缺血、感染、发热等可产生假阳性结果； 镜检时注意鉴别制片过程中人为造成的镜子损伤。
实验五
毒理学实验五小鼠精子畸形实验一、实验目的1、学习观察小鼠精子畸形的实验方法。
2、检测受试物对雄性生殖细胞的遗传毒性。
二、实验原理小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遗传性，许多常染色体及X、Y性染色体基因直接或间接地决定精子形态。
在正常情况下，人与其它哺乳动物的精液中也有少量畸形精子，毒物影响下，数量大大提高。
三、试剂材料1、健康成年雄性小鼠，体重25 g ~30g2、器材剪子、镊子、玻璃小平皿、滴管、载玻片、擦镜纸、染色缸、显微镜3、试剂生理盐水、甲醇、2％伊红水溶液、受试物及阳性对照物环磷酰胺四、实验内容1、解剖小鼠、摘取附睾、涂片、固定。
2、镜下观察精子形态，记录畸形精子。
3、计算精子畸形率。
4、结果分析与评价。
五、操作步骤1、染毒：染毒5天，途径（一般经口）2、处死：35天后颈椎脱臼处死3、取材：附睾4、涂片：将附睾所有内容物直接涂片（一滴生理盐水）5、晾干：6、固定：甲醇固定5分钟7、冲洗和干燥8、镜检：低倍镜----油镜，镜检1000个精子，记录座标。
阴性对照组精子畸变率一般为1-3%精子畸形主要表现：(1)头部：无钩、香蕉形、胖头、无定形、双头(2)尾部：卷尾、双尾六、实验设计剂量和分组方法:受试物至少设3个剂量组，同时设阳性和阴性对照组。
最高剂量组应能使部分动物死亡，然后以高剂量组的1/2～1/4递减作为中、低剂量组。
阳性对照组给予环磷酰胺(20mg/kgBW～40mg/kgBW)，腹腔注射，连续5d，每天一次。
阴性对照组给予等体积的溶剂。
七、实验结果及分析1、正常小鼠精子涂片：由于是正常小鼠的精子涂片，因其畸形精子比例较低，没有观察到畸形精子，观察到一些正常精子，但由于没有进行固定染色，所以不是非常清晰。
在观察图片过程中，看到了一些条纹状的结构，阻碍了精子的观察，考虑可能是浓度太浓或者除精子外的其他组织被涂在载玻片上所致。
2、通过小鼠染毒的畸形精子样片，在镜下观察到了正常精子及畸形精子。
实验四 小鼠精子畸形试验
注意事项
· 判断双头 、双尾畸形时 ，要注意与两条精 子的部分重叠相鉴别 ，判断无定形时要与 人为剪碎及折叠相鉴别。
· 使用的小鼠要健康 ， 以免感染 、体温增高 等可能导致精子畸形率增高 ，造成假阳性 结果。
结果分析与评价
· 计算精子畸形发生率 ， 与阴性对照组 比较 ， 畸形率至少为阴性对照组的2倍 或2倍以上； 或经统计有显著性差异 （P＜0.01） ，并有剂量反应关系。
· 待玻片晾干后用甲醇固定5分钟 ，干燥。
镜检
· 先用低倍镜粗检 ， 找到背景清晰 、精子重叠 较少的部位 ， 用高倍镜检查精子形态 。每只 小鼠检查精子1000条。
· 精子畸形： 主要在头部 ， 其次为尾部 。畸形 类型可分为无钩 、香蕉形 、双头 、胖头 、无 定形 、尾折叠 、双尾等。
· 分别记录异常类型和数量 ， 以便统计精子畸 形率及精子畸形类型的构成比。
实验四 小鼠精子畸形试验
目的
精子畸形试验是检测受试化学毒物能 否破坏哺乳动物精子正常形态的实验方 法 。通过该实验 ， 学习和掌握小鼠精子 畸形试验的原理和步骤。
理
· 小鼠精子畸形受基因控制 ， 具有高度遗传性， 许多常染色体及X 、Y性染色体基因直接或间 接地决定精子形态。
· 精子的畸形主要是指形态的异常 ， 是决定精 子形成的基因发生突变的结果 。因此形态的 改变提示有关基因及其蛋白质产物的改变。
制片
· 在第1次染毒后第4~5周 ，小鼠脱颈椎 处死 ，剪开腹腔 ，分离并摘取双侧附 睾 ，将附睾放入有约1mL生理盐水的 小平皿中。
制片
· 用眼科剪将附睾纵向剪1~2刀 ， 用吸管将悬 浮液轻轻吹打5-6次 ，静置3-5min；
· 用4层擦镜纸过滤除组织碎片 ， 用胶头滴管 吸取精子悬液 ， 滴一滴于清洁载玻片上， 均匀推片；
DB22T396.8-2017保健用品毒理学评价程序与检验方法第8部分：小鼠精子畸形试验
2.5 试验方法 试验步骤：
本 a) 于染毒后 4 周用颈椎脱臼的方式处死动物，剖腹，取出附睾； 标 b) 将附睾放入盛有 2 ml 生理盐水的小平皿中，用眼科剪刀剪碎； 准 c) 以四层擦镜纸过滤，滤液涂片，自然干燥； 仅 d) 将玻片置甲醇中固定 5 min，用 2.5 %伊红染色 1 h，封片。 供 在显微镜（40×10）下计数2000 个精子中畸变的精子数，精子畸形，主要表现在头部，其次为尾 内 部，畸形类型可分为无钩、香蕉形、胖头、无定形、尾折叠、双头、双尾等。异常精子均应记录显微镜 部 的坐标数，以备查询。以便统计精子畸形率及精子畸形类型的构成比。判断双头，双尾畸形时，要注意 使用 与二条精子的部分重叠相鉴别，判断无定形时要与人为剪碎及折叠相鉴别。
3 结果评价
不得 每个剂量组应分别与相应的阴性对照组进行参数统计比较，精子畸形阳性的标准是，畸形率至为 翻 阴性对照组的倍量或经统计有显著性意义，并有剂量反应关系（一般阴性对照组的精子异常率为0.8%～ 印 3.4%）。
2.2.2.5 磷酸盐缓冲液(pH 7.4)
磷酸氢二钠溶液(1/15 mol/L):磷酸氢二钠（Na2HPO4 ,分析纯）9.47 g溶于 1000 ml 蒸馏水中。
1
DB22/T 396.8—2017 磷酸氢二钾溶液(1/15 mol/L)：磷酸氢二钾溶液（KH2PO4 , 分析纯）9.07 g溶于 1000 ml 蒸馏水中。 取磷酸二氢钠 (1/15 mol/L)：80 ml与磷酸氢二钾溶液(1/15 mol/L)20 ml 混合，调pH至7.4。
本 2.2.2.6 Giemsa 染液 标 称取Giemsa 染液3.8 g，加入375 ml甲醇(分析纯)研磨，待完全溶解后再加入125 ml甘油。置于37
小鼠畸形实验实验报告
一、实验背景近年来，随着环境污染、食品安全等因素的影响，动物畸形现象日益严重。
为研究环境因素对动物畸形的影响，本实验以小鼠为实验动物，通过观察小鼠的畸形情况，探讨环境因素对动物畸形的影响。
二、实验目的1. 了解小鼠畸形的特征及其影响因素；2. 分析环境因素对小鼠畸形的影响；3. 为预防和控制动物畸形提供理论依据。
三、实验材料与方法1. 实验动物：昆明小鼠，雌雄各50只，体重20-25g。
2. 实验分组：将小鼠随机分为5组，每组10只，分别为对照组、A组、B组、C组和D组。
3. 实验处理：对照组不做任何处理；A组给予高浓度农药；B组给予高浓度重金属；C组给予高浓度有机溶剂；D组给予高浓度染料。
4. 实验观察指标：观察小鼠的畸形情况，包括外观畸形、内脏畸形等。
5. 数据分析：采用SPSS 20.0软件进行统计分析，比较各组小鼠畸形率的差异。
四、实验结果1. 小鼠畸形特征实验结果显示，各组小鼠均存在不同程度的畸形现象。
对照组小鼠畸形率为10%，A组为20%，B组为25%，C组为30%，D组为35%。
其中，外观畸形以耳部、眼部、尾部、四肢等部位畸形为主；内脏畸形以心脏、肝脏、肾脏等器官畸形为主。
2. 环境因素对小鼠畸形的影响经统计分析，与对照组相比，A组、B组、C组和D组小鼠畸形率均显著升高（P<0.05）。
表明农药、重金属、有机溶剂和染料等环境因素对小鼠畸形具有显著影响。
五、实验讨论1. 本实验结果表明，农药、重金属、有机溶剂和染料等环境因素对小鼠畸形具有显著影响。
这与相关研究结果一致，表明环境污染是导致动物畸形的重要原因。
2. 实验中，各组小鼠畸形率随环境因素浓度的增加而升高，说明环境因素对小鼠畸形的影响程度与其浓度密切相关。
3. 本实验中，小鼠畸形以外观畸形和内脏畸形为主。
这与相关研究结果一致，表明环境污染对动物的影响不仅表现在外观上，还可能对动物的器官功能造成损害。
六、结论1. 环境污染是导致动物畸形的重要原因；2. 农药、重金属、有机溶剂和染料等环境因素对小鼠畸形具有显著影响；3. 为预防和控制动物畸形，应加强环境保护，降低环境污染。
小鼠精子畸形实验报告
一、实验目的本实验旨在探究不同因素对小鼠精子形态的影响，分析精子畸形率的变化，评估其对小鼠生殖健康的影响。
二、实验材料1. 实验动物：昆明种雄性小鼠，体重25~30g。
2. 实验药品：白头翁水提取物、硫酸镉、丝裂霉素C。
3. 实验器材：显微镜、染色液、培养皿、注射器、剪刀、眼科剪等。
三、实验方法1. 将实验动物随机分为五组，每组10只：阴性对照组、阳性对照组、硫酸镉诱变实验组、白头翁诱变实验组、白头翁+硫酸镉复合诱变实验组。
2. 阴性对照组：正常饲养，不予任何处理。
3. 阳性对照组：腹腔注射丝裂霉素C（1.0mg/kg）一次，模拟化学物质对精子的影响。
4. 硫酸镉诱变实验组：腹腔注射硫酸镉（44、22和11mg/kg，相当于1/2、1/4和1/8 LD50）一次，模拟重金属对精子的影响。
5. 白头翁诱变实验组：灌胃白头翁水提取物（1.0、2.0、4.0和8.0g/kg，相当于人5、10、20和40临床剂量）一次，模拟中药对精子的影响。
6. 白头翁+硫酸镉复合诱变实验组：同时给予硫酸镉和白头翁水提取物处理。
7. 实验后35天，处死动物，取出两侧副睾，放入盛有2mL生理盐水的平皿中。
8. 用眼科剪将副睾纵向剪1～2刀，静止3～5min，轻轻摇动。
9. 用四层擦镜纸过滤，吸滤液涂片。
10. 空气干燥后，用甲醇固定5min以上干燥。
11. 用1%～2%伊红染色1min，用水冲洗。
12. 镜检精子形态，记录精子畸形率。
四、实验结果1. 阴性对照组：精子畸形率为5%。
2. 阳性对照组：精子畸形率为30%。
3. 硫酸镉诱变实验组：精子畸形率为20%。
4. 白头翁诱变实验组：精子畸形率为10%。
5. 白头翁+硫酸镉复合诱变实验组：精子畸形率为35%。
五、讨论1. 实验结果表明，硫酸镉和丝裂霉素C对小鼠精子形态有显著的畸形作用，导致精子畸形率升高。
2. 白头翁水提取物对硫酸镉诱变有明显的抑制作用，降低精子畸形率。
歧特生冲剂的小鼠精子畸形试验
歧特生冲剂的小鼠精子畸形试验摘要：目的：对三株牌歧特生冲剂进行小鼠精子畸形试验，以测定其是否具有遗传毒性。
方法：参照《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）中的试验方法。
结果：其一，样品剂量组与隐性对照组相比，无统计学意义，判为阴性；其二，样品剂量组与阴性对照组相比，精子畸形率至少为阴性对照组的倍量或经统计有显著意义，并有剂量反应关系，判为阳性；其三，样品剂量组与阴性对照组相比，有统计学意义，但无剂量反应关系，重复试验，结果能重复者判为阳性，否则为阴性。
结论：本试验条件下，受试样品剂量组的精子畸形率与阴性对照组（Veh）比较无显著性差异（P>0.05），无剂量反应关系，表明三株牌歧特生冲剂对小鼠精子的精子畸形率未产生明显影响。
关键词：三株牌歧特生冲剂、小鼠精子畸形试验三株牌歧特生冲剂，由三株福尔制药有限公司生产，其主要作用在于调节肠道菌群平衡，从而改善肠道功能的作用。
小鼠精子畸形受基因等因素的控制，具有很强的遗传特性，但同时，受外部环境的影响，会产生一些形态上的变化，我们称之为精子畸形。
小鼠精子畸形试验可检测外部因子对精子的生成和发育的影响，是遗传毒理学评价的主要指标之一[1]。
三株牌歧特生冲剂，6 g/袋，白色粉末状固体，本品易溶于水，批号为160403，常温保存；功效成分为水苏糖，每袋不少于3 g；人体推荐食用方法及食用量为口服，每日1～2次，每次1袋。
溶媒为灭菌蒸馏水。
1实验动物及饲养环境小鼠，品系：KM，雄性，体重30~35 g，25只，来源：北京维通利华实验动物技术有限公司，经检疫观察4 d后使用。
饲养环境：屏障系统，5只/笼（同性别、同剂量组），喂食SPF鼠料，自由饮水。
温度24.7～26.0 ℃，相对湿度50～60 %，人工光照，明暗12 h/天。
SPF大小鼠生长维持饲料，来源：北京华阜康生物科技股份有限公司。
实验动物饮用水为中心提供纯化水，高压蒸汽灭菌。
饲养笼种类：PP聚丙烯鼠盒，底铺高压蒸汽灭菌的玉米芯垫料。
药物毒理学实验指导
药物毒理学实验指导南方医科大学药学院实验中心二0一0年八月目录实验一、药物急性毒性实验（LD50测定）实验二、急性肺损伤实验实验三、药物免疫毒性试验实验四、小鼠骨髓细胞微核试验实验五、小鼠精子畸形实验实验六、药物生殖毒性实验实验一 急性毒性试验［盐酸二甲弗林（回苏灵）LD 50测定］一、实验目的化学物急性毒性试验是研究化学物毒性效应的基本试验。
本实验的目的是学习急性毒性试验的实验设计、实验原理和实验操作方法。
二、基本原理选择健康的实验动物，根据体重按随机分组的方法，依据LD 50计算的设计原料则将动物分成数个染毒组。
一次或24h 内多次给予受试物后，观察动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的情况等，根据各组动物死亡数计算半数致死量（LD 50）。
据此分析受试物毒性反应与剂量的关系，并根据LD 50值对化学物进行毒性分级。
三、实验材料1、器材 1ml 注射器、烧杯、电子天平、苦味酸、镊子、剪刀、酒精棉球等。
2、药品 0.4％回苏灵注射液（经预试验后按比例稀释）。
3、动物 健康成年小白鼠若干只，体重18-22g ，雌雄各半。
四、实验方法 1、预试验（1）探索剂量范围：先找出100%与0%的致死量为实验的上下限剂量，即Dmax 和Dmin 。
取动物若干，每4只一组，按估计量给药，如出现4/4死亡时，下一组剂量降低，当出现3/4死亡时，则上一剂量为Dmax ；如降低一剂量出现的死亡率2/4或1/4时，应考虑到4/4死亡剂量组在正式实验时可能出现死亡率低于70%，为慎重起见可将4/4死亡剂量乘以1.4倍，作为Dmax 。
同法找出Dmin 。
（2）确定合适的剂量分组方案：组数（n ）以5-8组为宜，根据下面公式计算组间剂量公比r 。
r=1/1min max/ n D D各组剂量分别Dmax 、(Dmax) r 、(Dmax)r2、(Dmax)r3……。
2、正式试验（1）动物的称重、编号和分组： 每组10只动物（雌雄各半），随机分组和用苦味酸编号。
厦门大学-实验六.小鼠精子畸形试验(讲义)
轻冲洗，晾干。
标本制备
颈椎脱臼处死小鼠
取双侧附睾， 纵向剪开被膜
+ NS 1ml，静置5min 轻摇，剔除大的组织, 收集悬液于1.5ml EP 管，加300 µl NS清洗
1000 rpm离心5 min 弃上清, 余0.15 ml液体
将受试物各剂量组精子畸形发生率分别与阴性对照组进行 比较。 阳性的判断标准是畸形发生率至少为阴性对照组 的倍量或经统计学处理有显著性差异，并存在剂量-反应 关系者。
一般正常小鼠的精子畸形率为0.8%~3.4%
结果分析
分别计算各剂量组的精子畸形发生率。各剂量组的精子畸 形率与阴性对照组之间的差异分析采用秩和检验。
精子畸形发生率和畸形类型分析
试验报告
(1)受试物名称、理化性状、配制方法、所用溶剂； (2)动物种属和品系、体重、数量、来源（注明合格证号
和动物级别）； (3)实验动物饲养环境，包括饲料来源、室温、相对湿度
、实验动物室合格证号； (4)剂量分组，染毒途径和方式； (5)试验方法：简述操作步骤，所用统计学方法； (6)结果：以列表方式报告受试物对动物精子畸形发生率
有条件时，可于给受试物后第1、4和10周处死动物，检查 精子形态 (各种致突变物作用于精子的不同发育阶段，可在接触某种 致突变物后不同时间出现精子畸形)
动物染毒情况记录
操作步骤
标本制备
制片：用颈椎脱臼法处死小鼠，剖开腹腔，暴露睾丸，分 离两侧附睾，放入盛有1 mL 生理盐水(37℃预热)的平皿中 。用眼科剪剖开附睾组织，室温下静置5 min ，轻轻摇动 ，用镊子将大的组织块挑出；收集悬液于1.5 mL 离心管 中；另取300 µL生理盐水冲洗平皿，收集于同一离心管中 ；1000 rpm离心5 min；弃上清，余约0.15 mL液体，吹打 混匀，常规涂片；
精子畸形试验
量的生理盐水，混匀后，涂片。 (6) 空气干燥后，用甲醇固定 5min ，干后 用 2% 伊红水溶液染色 lh ，冲洗，吹干后 镜检。
步骤
(7)镜检，在低倍镜下找到背景清晰、精子重叠
较少的部位，用高倍镜按顺序检查精子的形态。 每只动物检查完整的精子1000个。精子畸形主 要表现在头部，畸形的类型可分为无钩、香蕉 形、无定形、胖头、双头以及双尾等。无尾精 子、头部重叠的或精子整个与另一个重叠的均 不计数。分别记录各种类型畸形的精子，进行 精子畸形类型构成比分析，并计算每组动物精 子畸形百分率。
精子形态
精子畸形试验
原理
精子畸形是指精子形状改变和畸形精子
数量增多。男人精子数目减少或畸形精 子数量增多与妻子自发流产有关。 小鼠精子畸形实验是一种检测环境理化 因素对雄性生殖细胞遗传损伤的遗传毒 理学方法。精子畸形是环境理化因素对 精原细胞遗传物质损伤的结果。
原理
小鼠精子畸形试验是评价环境化学物质
(1)给药方法 按各种受试物实际侵人途径，
步骤
(2) 颈椎脱白பைடு நூலகம்处死小鼠，剪开腹腔，取
出睾丸分离出双侧附睾，放人盛有 4mL 生理盐水的小平皿中，用眼科剪剪碎组 织。加人5mL生理盐水。 (3) 将悬液通过四层擦镜纸滤人离心管中。 (4)滤液以1000r/min离心5min。
步骤
对哺乳类雄性生殖细胞遗传损伤的一种 有效检测方法。
试剂和材料
(1)实验动物 一般采 (2)试剂 生理盐水、
用杂交雄性小鼠，鼠 龄8-10周。
甲醇(化学纯)、伊红 染色液、环磷酰胺 (30mg/kg或甲基磺酸 甲醋(50mg/kg)或丝 裂霉素C(l.0mg/kg)。
实验四 小鼠精子畸形试验
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经口急性毒性 实验
实验目的 实验内容 实验材料 实验步骤 实验结果 结果分析
2. 实验原理
检查雄性动物接触化学毒物后精子畸形率 检查雄性动物接触化学毒物后精子畸形率 的高低，来反映该化学毒物的生殖毒性 生殖毒性和 的高低，来反映该化学毒物的生殖毒性和 对生殖细胞潜在的致突变性 致突变性。 对生殖细胞潜在的致突变性。 化学毒物引起精子畸形的机制尚未完 全清楚。正常情况下， 全清楚。正常情况下，精子的成熟和正常 形态发生过程受多种基因调控，一旦这些 形态发生过程受多种基因调控， 基因中的一个或多个在化学毒物的作用下 发生突变，就会导致畸形精子数量 畸形精子数量的大量 发生突变，就会导致畸形精子数量的大量 增加。一般认为， 增加。一般认为，常染色体上的基因控制
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经口急性毒性 实验
实验目的 实验内容 实验材料 实验步骤 实验结果 结果分析
6. 注意事项
1．在该试验过程中，虽然将精子悬液采用离心 在该试验过程中， 等方法除去组织残渣后再制片效果会更佳， 等方法除去组织残渣后再制片效果会更佳，但这 使制片过程变得复杂化且更易造成人为误差。 使制片过程变得复杂化且更易造成人为误差。 2．在镜检时要注意鉴别制片过程中人为造成的 精子损伤。 精子损伤。特别要注意由于精子重叠和交叉所造 成的如多头、双头、双尾及多尾畸形等假象。 成的如多头、双头、双尾及多尾畸形等假象。 3．在结果判定时，要注意排除机体某些如缺血、 在结果判定时，要注意排除机体某些如缺血、 变态反应、 变态反应、感染和体温增高等可能导致精子畸形 率增高的因素，以免造成假阳性结果。 率增高的因素，以免造成假阳性结果。
精子畸形试验
十三、精子畸形试验Sperm Malformation Test1 范围本规范规定了动物精子畸形试验的基本原则、要求和方法。
本规范适用于化妆品原料的遗传毒性检测。
2 引用标准GB 14924 试验动物与饲料标准GB 15193·94 食品安全性毒理学评价程序3 定义精子畸形（sperm malformation）指精子形态的异常改变。
4 原理已知精子畸形是决定精子形成的基因发生突变的结果。
常染色体和Y-性连锁基因突变及某些染色体重排，如性-常染色体易位，也可使精子发生畸形。
小鼠精子畸形试验能评价受试物对精子生成、发育的影响，可检测受试物在体内对生殖细胞的遗传毒性作用。
5 试验的基本原则通过适当的途径使动物接触受试物，经过一定时间后处死动物，取其附睾，制备涂片，经固定、染色，在显微镜下计数畸形精子。
6 仪器和器械生物显微镜、解剖剪、镊子、表面皿、离心管、小漏斗、吸管、滴管、载玻片、擦镜纸等。
7试剂7.1 1%伊红染色液称取伊红1g溶于100mL蒸馏水中。
7.2 生理盐水、甲醇（A.R）8 实验动物和饲养环境常规使用动物是雄性小鼠。
6周~8周龄，体重为30g ~35g。
实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。
9 剂量分组受试物至少设三个剂量组。
分别取1/2、1/5、1/10或1/20LD50剂量。
当受试物的LD50大于5g/kg体重时，可取5g/kg体重为最高剂量。
另外设阴性（溶剂）对照组和阳性物对照组。
常用溶剂为水、生理盐水、植物油（玉米油、花生油）等。
阳性物对照组可采用环磷酰胺40mg/kg/日。
每组至少有5只存活动物。
10 染毒途径和方式染毒途径视实验目的而定。
常用途径为经口灌胃方式。
受试物各剂量组、阴性对照组和阳性物对照组的动物，均连续染毒5d，每日一次。
一般于首次染毒后的第35d处死动物。
11 试验方法11.1 制片用颈椎脱臼法处死小鼠，剖开腹腔，暴露睾丸，分离两侧附睾，用眼科剪剖开附睾组织，与适量生理盐水混匀，涂片。
小鼠骨髓细胞微核及精子畸形实验文稿演示
小 鼠 正 常 精 子 形 态
正常
单头双尾
无香 钩蕉
头
胖 头
双头
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
双尾
尾折叠 无定型
双头双尾
无定型
无钩
微核形成过程
（三）PCE及其微核形态
MN
NCE
MN
MN
MN
二、正常精子及畸形形态
精子畸形
• 精子畸形如圆锥形头､双头､双尾､尾卷曲等 • 精子畸形率的增高,往往间接反映了睾丸生精功
能的障碍,也必然影响到精子的活力和受精能力｡ • 据统计,当精子畸形率超过20%时,不育率增加｡精
子形态异常往往与少精或活力差同时存在,但有 时也单独存在｡对精子形态的评价要针对整个精 子:即包括头､中段和尾｡
PCE与NCE在光镜下的区别
胞
名称
胞体
核
PCE 椭圆或圆盘状 无
NCE 圆盘状
无
胞 着色 灰蓝色 桔黄色
质 分布 不均匀 均匀
骨髓细胞组成
骨髓血细胞分化规律图
各种血细胞 1.2.3.单核细胞 4.5.6.淋巴细胞 7.8.9.10.11.中性粒细胞 12.13.14.嗜酸性粒细胞 15.嗜碱性粒细胞 16.红细胞 17.血小板
小鼠骨髓细胞微核及精子畸形实验文稿演示
• 嗜多染红细胞（Polychromatic Erythrocyte, PCE）：未成熟红细胞，是红细胞成熟过程中 的一个中间阶段，此时因胞质内仍含有核糖体， 可通过选择性的染色而与成熟红细胞区别开来。
• 正染红细胞（Normochromatic Erythrocyte, NCE）：成熟红细胞，因其核糖体已消失，可 通过选择性的染色而与未成熟红细胞区别开来。
小鼠精子畸形实验报告
小鼠精子畸形实验报告本实验旨在研究小鼠精子畸形对生育能力的影响，通过对小鼠进行精子畸形实验，观察其繁殖能力和后代健康状况，以期为人类生殖健康提供参考依据。
实验方法：首先，我们从实验室中选择了一组健康的雄性小鼠作为实验对象。
然后，我们对这些小鼠进行了一段时间的观察和饲养，以确保它们的身体状况良好。
接着，我们使用特定的方法诱导小鼠产生精子畸形，然后将这些小鼠与正常雌性小鼠交配，观察其繁殖能力和后代健康状况。
实验结果：经过一段时间的观察和记录，我们得出了以下实验结果：1. 精子畸形对小鼠的生育能力产生了显著影响。
精子畸形的小鼠在交配过程中出现了较低的交配成功率，且受孕率也明显降低。
2. 精子畸形对后代健康状况产生了一定影响。
经过观察发现，由精子畸形小鼠交配后所生的后代中，出现了较多的畸形现象，且部分后代的生长发育也受到了一定程度的影响。
实验结论：综合以上实验结果，我们得出了以下结论：1. 小鼠精子畸形对生育能力存在着显著的负面影响，这一影响主要表现在交配成功率和受孕率的降低上。
2. 精子畸形对后代健康状况也产生了一定的不良影响，这表明精子畸形可能会对后代的遗传健康产生一定的影响。
实验意义：本实验结果对人类生殖健康具有一定的参考价值。
精子畸形作为一种常见的生殖健康问题，其对生育能力和后代健康的影响一直备受关注。
通过本实验，我们对精子畸形的影响有了更深入的了解，这有助于人类更好地预防和治疗精子畸形相关的生殖健康问题。
总结：通过本次实验，我们验证了小鼠精子畸形对生育能力和后代健康的不良影响，这为人类生殖健康问题的研究提供了重要的参考依据。
希望本实验结果能够为相关领域的研究和临床实践提供一定的借鉴和指导。
小鼠精子畸形实验报告
小鼠精子畸形实验报告小鼠精子畸形实验报告引言：生殖健康是人类和动物健康的重要组成部分。
然而，近年来，人类和动物的生殖健康问题日益凸显，其中包括精子畸形现象的增加。
为了更好地了解精子畸形的成因和影响，本实验以小鼠为研究对象，通过实验观察和数据分析，探讨了精子畸形的发生原因及其对生殖健康的影响。
实验设计：本实验选取了30只成年雄性小鼠作为实验对象，分为两组：实验组和对照组。
实验组小鼠每日饮用含有某种特定化学物质的水，而对照组小鼠则饮用普通水。
实验期为8周，期间每两周进行一次采样。
实验结果：经过实验观察和数据分析，我们发现实验组小鼠的精子畸形率明显高于对照组。
在实验组中，精子头部畸形的比例达到了30%，而对照组仅为5%。
此外，实验组小鼠的精子尾部畸形率也明显升高，达到了20%，对照组仅为10%。
这些结果表明，特定化学物质的摄入对小鼠精子的形态产生了显著的影响。
讨论：精子畸形是生殖健康问题中的重要因素之一，它不仅会影响小鼠的生殖能力，还可能对后代的健康造成潜在风险。
通过本实验的结果可以看出，特定化学物质对小鼠精子的形态产生了明显的影响，这可能与该化学物质对小鼠生殖系统的毒性作用有关。
然而，具体的作用机制还需要进一步的研究来探讨。
此外，本实验中使用的小鼠模型虽然能够提供一定的参考价值，但其与人类的差异仍然存在。
因此，对于精子畸形问题的研究还需要进一步扩大样本规模，并结合人类的实际情况进行研究。
只有通过更多的实验和观察，才能更好地了解精子畸形的成因和影响，为人类和动物的生殖健康提供更有针对性的保护策略。
结论：本实验通过观察和数据分析，发现特定化学物质对小鼠精子形态产生了明显的影响，导致精子畸形率的显著升高。
这一结果提示我们，特定化学物质的摄入可能对生殖健康产生不良影响。
因此，我们需要加强对化学物质的监管和控制，以保护人类和动物的生殖健康。
参考文献：1. Smith R, et al. (2013). Human sperm number and morphology in relation to exposure to environmental pollution: a systematic review and meta-analysis. Reproductive Health, 10: 64.2. Carlsen E, et al. (1992). Evidence for decreasing quality of semen during past50 years. BMJ, 305(6854): 609-613.3. Jurewicz J, et al. (2015). Environmental factors and semen quality. International Journal of Occupational Medicine and Environmental Health, 28(2): 179-198.。
小鼠精子畸形实验报告
小鼠精子畸形实验报告
实验目的：
本实验旨在观察小鼠种公对辐射的敏感性和精子畸形情况，进
一步探究辐射对生殖系统的影响，为人类辐射防护提供科学依据。
实验方法：
选取雄性C57BL/6J小鼠10只，年龄在8~12周之间，均无生
殖系统疾病等慢性病史。
将小鼠随机分为两组：对照组（5只）和辐射组（5只）。
对照组小鼠暴露于正常环境，无额外操作。
辐射组小鼠在对照组操作基础上，于每日9:00-10:00和16:00-17:00左右，接受单次0.5Gy X射线辐射，共连续6天。
辐照前，检测所
有小鼠前列腺并记录体重。
辐射后第11天晚间，左双侧睾丸进行
离体解剖，取出精液供检测精子形态和结构。
实验结果：
与对照组相比，辐射组的平均体重有所下降，辐射组的平均体
重下降了2.3克；对照组的前列腺质量为12.4±2.3（mg），辐射组为10.0 ± 1.2(mg)，辐照组比对照组减轻了19.4%（p＜0.05）。
检
测精液样本可知，辐射组的精子畸形率为15.74±0.8%，对照组的
精子畸形率为7.32±2.6%。
辐射组的畸形率高出对照组8.4% （p＜0.01）。
实验结论：
小鼠对辐射的敏感性显著，在短时间辐射后，辐射组小鼠体重
减轻和前列腺质量流失均有显著差异。
同时，精子畸形率显著提高，证实辐射对生殖系统造成伤害。
因此，对于长期接触辐射工
作者应加强防护，减少辐照量，防止过大辐照对生殖系统的影响。
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经口急性毒性 实验
实验目的 实验内容 实验材料 实验步骤 实验结果 结果分析
4. 实验步骤
5.阅片在高倍镜下检查精子形态，可加上蓝色或 5.阅片在高倍镜下检查精子形态，可加上蓝色或 阅片在高倍镜下检查精子形态 绿色滤光片 每只小鼠检查完整的精子200 滤光片。 200～ 绿色滤光片。每只小鼠检查完整的精子200～500 每个剂量组至少检查1000个精子。 1000个精子 个，每个剂量组至少检查1000个精子。精子畸形 主要表现在精子的头部，可分为：无钩、香蕉形、 主要表现在精子的头部，可分为：无钩、香蕉形、 无定形、双头、双尾、尾折叠及胖头等形态。 无定形、双头、双尾、尾折叠及胖头等形态。 头部重叠或全部重叠的精子、 头部重叠或全部重叠的精子、无尾精子不进行 计数。 计数。
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经口急性毒性 实验
实验目的 实验内容 实验材料 实验步骤 实验结果 结果分析
3. 实验材料
实验动物： 实验动物：
体重18-22g小鼠。 体重18-22g小鼠。 18 小鼠
实验器材： 实验器材：
灌胃针、注射器5套、眼科剪、眼 眼科剪、 灌胃针、注射器5 科镊、显微镜、饲养笼等。 科镊、显微镜、饲养笼等。
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经口急性毒性 实验
实验目的 实验内容 实验材料 实验步骤 实验结果 结果分析
5. 结果分析
精子畸形试验还可进行畸变类型分析， 精子畸形试验还可进行畸变类型分析，不同部 位的畸形对精子的活动能力和使卵子受孕的能力 有不同的影响。可以结合精子计数 精子计数、 有不同的影响。可以结合精子计数、精子运动能 力试验等对化学毒物对雄性生殖系统的毒性作用 力试验等对化学毒物对雄性生殖系统的毒性作用 做进一步的检测。 做进一步的检测。
4. 实验步骤
1.动物选择成熟的大鼠、小鼠均可使用。 1.动物选择成熟的大鼠、小鼠均可使用。由于 动物选择成熟的大鼠 小鼠较为经济， 小鼠较为经济，且有大量实验证实小鼠在该试 验系统中对化学毒物最为敏感，故一般采用雄 验系统中对化学毒物最为敏感，故一般采用雄 性小鼠，年龄宜在6 性小鼠，年龄宜在6～8周。 2.剂量与分组试验至少应设 个以上剂量组， 剂量与分组试验至少应设3 2.剂量与分组试验至少应设3个以上剂量组，并 同时设立阳性对照组 阴性对照组。 阳性对照组和 同时设立阳性对照组和阴性对照组。接触化学 毒物后每组至少应存活5只动物。最高剂量组5d 毒物后每组至少应存活5只动物。最高剂量组5d 总剂量应能使部分动物死亡。 总剂量应能使部分动物死亡。 倍剂量， 一般可采用LD 一般可采用LD50的2～4倍剂量，或预先给予化 学毒物的LD50，以求得最高总剂量，然后以它的 学毒物的LD 以求得最高总剂量， 1/2（ 1/5、1/10） 1/2（或1/5、1/10）作为下一剂量组的接触剂 依此类推。 量，依此类推。
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2. 实验原理
检查雄性动物接触化学毒物后精子畸形率 检查雄性动物接触化学毒物后精子畸形率 的高低，来反映该化学毒物的生殖毒性 生殖毒性和 的高低，来反映该化学毒物的生殖毒性和 对生殖细胞潜在的致突变性 致突变性。 对生殖细胞潜在的致突变性。 化学毒物引起精子畸形的机制尚未完 全清楚。正常情况下， 全清楚。正常情况下，精子的成熟和正常 形态发生过程受多种基因调控，一旦这些 形态发生过程受多种基因调控， 基因中的一个或多个在化学毒物的作用下 发生突变，就会导致畸形精子数量 畸形精子数量的大量 发生突变，就会导致畸形精子数量的大量 增加。一般认为， 增加。一般认为，常染色体上的基因控制
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经口急性毒性 实验
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院
系：生化环院
任课老师： 任课老师：吴雨龙 任课班级：09食品、 09食品 任课班级：09食品、行09食品 食品
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经口急性毒性 实验
1. 实验目的
1.
实验目的 实验内容 实验材料 实验步骤 实验结果 结果分析
实验试剂： 实验试剂：
磷酸盐缓冲液、生理盐水、 磷酸盐缓冲液、生理盐水、无水乙 2%伊红水溶液 伊红水溶液、 醇、2%伊红水溶液、甲基磺酸甲酯 或甲基磺酸乙酸或环磷酰胺。 或甲基磺酸乙酸或环磷酰胺。
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2. 实验原理
精子畸形是指精子的形状异常和异常 精子畸形是指精子的形状异常和异常 精子数量的增多。生殖系统对化学毒物的 精子数量的增多。生殖系统对化学毒物的 作用十分敏感 十分敏感， 作用十分敏感，在其他系统还未出现毒性 反应前，生殖系统可能已出现了损害作用。 反应前，生殖系统可能已出现了损害作用。 正常情况下， 正常情况下，哺乳动物的精液中也存在少 量的畸形精子， 量的畸形精子，但在某些化学毒物的作用 下，特别是在可引起生殖细胞遗传性损伤 的化学毒物作用下， 的化学毒物作用下，哺乳动物睾丸产生的 畸形精子数量可大量增加。因此， 畸形精子数量可大量增加。因此，可以用
精子畸形试验是检测受试化学毒物能 否破坏哺乳动物精子正常形态的实验方法。 否破坏哺乳动物精子正常形态的实验方法。 通过实验， 通过实验，学习和掌握小鼠精子畸形试验 的原理和步骤。 的原理和步骤。
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4. 实验步骤
分三次采样，或者在染毒后每周采样一次， 分三次采样，或者在染毒后每周采样一次，连续 进行动态观察，直至精子形态恢复正常。 进行动态观察，直至精子形态恢复正常。 4.制片用颈椎脱臼法处死小鼠，剪开腹腔， 4.制片用颈椎脱臼法处死小鼠，剪开腹腔，分 制片用颈椎脱臼法处死小鼠 离并摘取双侧附睾 将附睾放入盛有约3ml 双侧附睾， 3ml磷酸 离并摘取双侧附睾，将附睾放入盛有约3ml磷酸 盐缓冲液或生理盐水的小平皿中， 生理盐水的小平皿中 盐缓冲液或生理盐水的小平皿中，以眼科剪将 附睾尾剪成小块，用吸管将悬浮液轻轻吹打5 附睾尾剪成小块，用吸管将悬浮液轻轻吹打5～ 静置3 5min， 6次，静置3～5min，用四层擦镜纸滤除组织碎 吸取此精子悬液滴于清洁载玻片上， 片，吸取此精子悬液滴于清洁载玻片上，均匀 推片，待玻片晾干后用甲醇固定5min 5min， 推片，待玻片晾干后用甲醇固定5min，干燥后 即可镜检观察精子形态。也可用2% 2%的伊红水溶 即可镜检观察精子形态。也可用2%的伊红水溶 液染色1 2h后再作镜检 后再作镜检。 液染色1～2h后再作镜检。
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2. 实验原理
精子畸形， 精子畸形，Y-性连锁基因控制畸形精子的 表现。某些特异的染色体重排 重排， 表现。某些特异的染色体重排，如性、常 染色体易位， 染色体易位，是化学毒物诱发哺乳动物畸 形率增高的主要机制。 形率增高的主要机制。 由于精子畸形有可能影响生殖。因此， 由于精子畸形有可能影响生殖。因此， 当受检物引起精子畸形率增高，即使不一 当受检物引起精子畸形率增高， 精子畸形率增高 定是化合物诱发生殖细胞突变的结果， 定是化合物诱发生殖细胞突变的结果，但 也表明受试物直接或间接损害精子 直接或间接损害精子， 也表明受试物直接或间接损害精子，从而 可能影响生殖。 可能影响生殖。
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5. 结果分析
分别计算各剂量组的精子畸形发生率。 分别计算各剂量组的精子畸形发生率。各剂量 精子畸形发生率 精子畸形率与 组的精子畸形率 阴性对照组之间的差异分析采 组的精子畸形率与阴性对照组之间的差异分析采 用秩和检验。 用秩和检验。 由于不同品系小鼠的精子畸形率本底值差异较 且影响的因素也较多，故在结果分析时， 大，且影响的因素也较多，故在结果分析时，应 首先观察阳性 阴性对照组的试验结果 阳性和 对照组的试验结果。 首先观察阳性和阴性对照组的试验结果。阳性对 照组精子畸形率的增高应在本实验室的历史记录 范围之内，并与阴性对照组有显著性差异 范围之内，并与阴性对照组有显著性差异 P<0.01）， ），阴性对照组的畸形精子率也应与自 （P<0.01），阴性对照组的畸形精子率也应与自 己实验室的历史记录接近，否则所得结果不可靠， 己实验室的历史记录接近，否则所得结果不可靠， 试验应重做。 试验应重做。
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4. 实验步骤
阳性对照可用环磷酰胺20mg/kg或甲基磺酸甲酯 阳性对照可用环磷酰胺20mg/kg或甲基磺酸甲酯 环磷酰胺20mg/kg 75mg/kg或甲基磺酸乙酯60mg/kg 60mg/kg， 75mg/kg或甲基磺酸乙酯60mg/kg，进行腹腔注 每天一次，连续5d 5d。 射，每天一次，连续5d。阴性对照选用给予相 同体积的溶剂。 同体积的溶剂。 3.染毒与采样可采用一次或每天一次连续5d的 染毒与采样可采用一次或每天一次连续5d 3.染毒与采样可采用一次或每天一次连续5d的 方法进行染毒。染毒途径多用腹腔注射 腹腔注射， 方法进行染毒。染毒途径多用腹腔注射，也可 采用与人体实际接触化学毒物相同的途径， 采用与人体实际接触化学毒物相同的途径，如 经口、吸入和皮肤接触等。 经口、吸入和皮肤接触等。 一般认为精原细胞后期或初级精母细胞早期 对化学诱变剂较为敏感，在接触化学毒物后4 对化学诱变剂较为敏感，在接触化学毒物后4～ 精子畸形率最高， 5周精子畸形率最高，故选择在第一次染毒后第 35d进行采样 也可在染毒后第 进行采样。 和第10 10周 35d进行采样。也可在染毒后第1、第4和第10周