中药化学实验

中药化学实验 Prepared on 22 November 2020

“中药化学实验技术”实验教学大纲

实验 大黄中大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚

的提取、分离和鉴定

一 实验目的和要求：

（1） 掌握pH 梯度萃取法的原理和操作技术。 （2） 学习硅胶柱色谱法分离精制大黄素。

（3） 学习离心薄层色谱法、快速制备液相色谱法分离精制大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素

甲醚、大黄酚。

（4） 了解高速逆流色谱法的分离原理和方法。 （5） 学习羟基蒽醌类化合物的鉴定方法。 二 实验原理

大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，用于泻下、健胃、清热、解毒等。

自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一味很早就被各国药典所收载的世界性生药。大黄的种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatclm L ），药用大黄（R. officinale Baill ）及唐古特大黄（R. tangutium Regll ）的根茎及根，大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所形成的苷。羟基蒽醌苷元主要有下列五种

：

R 1 R 2

名 称

晶 形 熔 点 -H -COOH 大黄酸(Rhein) 黄色针晶 318~320℃ -CH 3 -OH 大黄素(Emodin)

橙色针晶 256~257℃ -H

-CH 2OH 芦荟大黄素(Aloe-emodin)

橙色细针晶 206~208℃ -OCH 3 - CH 3 大黄素甲醚(Physcion) 砖红色针晶 207℃ -H -CH 3 大黄酚(Chyrsophanol)

金色片状结晶

196℃

酸性强弱：

大黄酸＞大黄素＞芦荟大黄素＞大黄酚≈大黄素甲醚 极性强弱：

O

OH

OH

R 2

R 1

大黄酸＞芦荟大黄素＞大黄素＞大黄甲醚＞大黄酚 三 实验方法 1 酸水解

取大黄粉10g ，加20%的硫酸水溶液100ml ，直火加热1小时，过滤，滤饼水洗中性，干燥。 2 总羟基蒽醌苷元的提取

干燥的滤饼置索氏提取器中，加入乙醚，回流提取小时，得乙醚提取液。 3 pH 梯度萃取法分离大黄中的蒽醌苷元

分三次)

碱液 盐酸调（分三次）

沉 淀 (大黄酸)

碱液360ml(分四次)

沉淀

(大黄素) 碱液

1%NaOH60ml

(分四次) 沉淀

(芦荟大黄素) 碱液 乙醚液

(大黄酚+大黄素甲醚)

萃取效果以TLC 来确定。 4 五种羟基蒽醌苷元的分离精制 （1）大黄酸的精制

将%NaHCO 3萃取物干燥，干燥后的样品加冰醋酸10ml 加热使溶，趁热过滤，滤液静置，析出黄色针晶为大黄酸，过滤即得纯品。 （2）用硅胶柱色谱法分离精制大黄素

①装柱：取100－200目的硅胶约10g ，按干法或湿法装柱 ②加样：湿法或干法上样大黄素粗品。

③洗脱，鉴定，合并：用石油醚：乙酸乙酯（7：3）为洗脱剂洗脱，分段收集，用硅胶薄层跟踪检查。合并大黄素部分。

④放置析晶：大黄素部分适当浓缩，放置析晶，得纯品大黄素。 （3）芦荟大黄素的精制

盐酸调

PH梯度萃取法得到的芦荟大黄素沉淀过滤干燥，用10ml乙酸乙酯重结晶，得黄色针晶的芦荟大黄素纯品。

（4）用离心薄层层析法分离大黄酚和大黄素甲醚

①圆形硅胶薄层板的制备：硅胶G-CMC-Na（30g+75~%CMC-Na）

②进样：大黄酚和大黄素甲醚混合物

③洗脱：石油醚—乙酸乙酯

④鉴定：相同瓶合并，甲醇重结晶，得大黄酚、大黄素甲醚。

（5）用快速制备液相色谱法分离大黄酚和大黄素甲醚

吸附剂：硅胶

洗脱剂：石油醚—乙酸乙酯

鉴定：相同瓶合并，甲醇重结晶，得大黄酚、大黄素甲醚。

5 大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚的鉴定

(1) 颜色反应

大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚与碱及醋酸镁的颜色反应并与茜草素比较颜色的不同。

(2) 熔点测定

大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚

(3) TLC

大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚的薄层鉴定

(4) IR

用溴化钾压片法，测定大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚的红外光谱。

四实验指导

1．本实验要点及注意事项。

① PH梯度萃取的原理及注意事项。

②如何设计萃取分离方案的程序与方法。

③蒽醌化合物红外光谱的特点。

④分离萃取时一定注意乳化层的分出，不要混入，并且每步最好用新鲜乙醚，回洗碱水液。

⑤碱液的配制要准确。

⑥每步萃取时，利用色谱检查跟踪萃取效果，如未达到预想效果应及时纠正。

⑦硅胶色谱柱的装柱的操作，避免柱中存有气泡。

⑧索氏提取器的使用方法、原理、注意事项。

⑨用乙醚回流洗脱时应注意防火。

2．实验报告要求

①记录大黄总蒽醌的提取方法。

②总蒽醌的色谱检查结果（附色谱图）。

③记录总蒽醌的分离程序（包括溶剂用量），及各分离物粗品的色谱检查结果，与原设计有何出

入，原因何在

④记录大黄酚、大黄素甲醚、大黄素、大黄酸、芦荟大黄素的精制方法及色谱、红外光谱的鉴定

结果。