兽医微生物学课件- 革兰氏阳性无芽孢杆菌
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革兰氏阳性无芽胞杆菌
第一节 李氏杆菌属
（Listeria）
本属细菌的共同特性:
1) G＋、无芽胞、无荚膜； 2) 20~25 ℃能运动、37 ℃不运动； 3) 需氧或兼性厌氧。
本属分为2群共7个种
第一群 第二群
产单核细胞李氏杆菌 L. monocytogenes
伊氏李氏杆菌
L. ivanovii
三、抵抗力
本菌对腐败和干燥环境有较强的抵抗力。 在饮水中可存活5d，在污水中可存活15d，在 深埋的尸体中可存活9个月。在病死猪熏制的 火腿中3个月后仍可在深部分离出活菌。对热 和直射光较敏感，70℃经5～15min可完全杀死。 对常用消毒剂抵抗力不强，0.5%甲醛数十分钟 可杀死。用10%生石灰乳或0.1%过氧乙酸涂刷 墙壁和喷洒猪圈是目前较好的消毒方法。本菌 可耐0.2%的苯酚，对青霉素很敏感。
的心内膜增生组织）。
肝脏涂片
Hale Waihona Puke Baidu
心内膜增生组织涂片
猪丹毒杆菌为G+纤细小杆菌， 常单在、V型成对或成丛排列
二、培养与生化特性
本菌为微需氧菌。pH在6.7～9.2范围内均可生长， 最适pH为7.2～7.6，生长温度为5~42℃，最适温 度为30～37℃。在普通琼脂培养基和普通肉汤中 生长不良，如加入0.2%～0.5%葡萄糖或5%～ 10%血液、血清则生长茂盛；在血琼脂平皿上经 37℃24h培养可形成湿润、光滑、透明、灰白色、 露珠样的圆形小菌落，并形成α溶血环。在麦康凯 培养基不生长。在肉汤中呈轻度浑浊，有少量白 色黏稠沉淀。不形成菌膜和菌环。
死该菌。 抗干燥能力强，在干粪中能存活两年以上。
四、抗原性
与多种细菌有共同Ag ，血清学诊
断无意义。
五、致病性
1.本菌为兼性胞内寄生菌，可穿越宿主的肠道屏 障、血脑屏障和血胎屏障。
2.可自然感染多种家畜：猪、马、牛、绵羊。 3.病畜表现神经症状、妊畜流产、血液中单核细
胞增多 。 4.鸡可全身感染，心肌坏死。 5.成人脑膜炎，新生儿脑膜炎。
五、致病机理与致病性
本菌通过消化道感染，进入血流， 而后定殖在局部或引致全身感染。已知 无致病力菌株对消化道上皮细胞黏附力 差，且易被吞噬细胞消化。但致病菌株 的黏附素及抗吞噬物质尚不清楚。
末发现外毒素，有些菌株产生的透明质 酸酶和唾液酸酶，后者可降解宿主细胞表面 的唾液酸，有助于细菌入侵。感染动物能产 生唾液酸酶抗体，已证实实验动物通过对该 酶的主动或被动免疫可获得保护。
二、培养特性
1、兼性厌O2，营养不高；对食盐耐受力很强。 4 ℃耐盐高达30.5%。
2、血液葡萄糖琼脂：圆形、光滑、淡蓝色、透 明、露滴状菌落，狭窄β溶血，有菌落下溶 血。
3、4 ℃可生长 —故称“冰箱菌”，生长温度145 ℃，最适温度30-37 ℃.
三、抵抗力
抵抗力一般，耐碱不耐酸。 55℃湿热40min、常用消毒药5～10min可杀
四、抗原结构与血清型
本菌最初被分为A、B、N型。现通用阿拉 伯数字为型号，用英文小写字母表示亚型，目 前共有25个血清型和1a、1b及2a、2b亚型。分 型是依据菌体可溶性的耐热肽聚糖的抗原性。
大多数菌株为1型和2型 (相当于以前的A 型和B型)，从急性败血症分离的菌株多为la型， 从亚急性及慢性病病例分离的则多为2型。
本属有3个种，致病的只包括1个种：猪 丹毒丝菌。
也称为“猪丹毒杆菌”、“猪丹毒丝状 杆菌” ；是猪丹毒的病原体，也可引起 人的“类丹毒”。
一、形态染色
1. G+细长小杆菌，0.2-0.4μm~0.5-2.5μm; 2. 无鞭毛，无芽胞，无荚膜 ； 3. 有形成长丝的趋势（陈旧培养物和慢性病猪
在加有5%马血清和1%蛋白胨水的糖培养 基中可发酵葡萄糖、果糖和乳糖，产酸不 产气；不发酵甘露醇、山梨醇、肌醇、水 杨素、鼠李糖、蔗糖、渔藻糖、棉实糖、 菊糖。产生H2S，不产生靛基质和接触酶， 不分解尿素。甲基红及VP试验阴性。
明胶穿刺生长特殊，沿穿刺线横向四周生 长，如试管刷状，但明胶不液化。
无害李氏杆菌
L. innocua
韦氏李氏杆菌
L. welshimeri
塞氏李氏杆菌
L. seeligeri
格氏李氏杆菌
L. grayi
莫氏李氏杆菌
L. murrayi
其中产单核细胞李氏杆菌 在动物疾病中较为重要
第一群 第二群
产单核细胞李氏杆菌 L. monocytogenes
伊氏李氏杆菌
L. ivanovii
2、分离培养
分离培养时可用含有0.2%(W/V)的葡萄糖或 5%～10%无菌马血清(W/V)的半固体琼脂培 养基。为提高分离率可采用含有1/100万结晶 紫、l/5万叠氮钠的10%马血清肉汤及琼脂平 板。也可在马丁肉汤中加入新霉素 (400ug/ml)或万古霉素 (70ug/ml)，抑制某些 杂菌生长。
无害李氏杆菌
L. innocua
韦氏李氏杆菌
L. welshimeri
塞氏李氏杆菌
L. seeligeri
格氏李氏杆菌
L. grayi
莫氏李氏杆菌
L. murrayi
产单核细胞李氏杆菌
也称为单核细胞增多性李氏杆菌。
家畜、家禽均可感染，鼠类是主要带菌者。
病畜表现神经症状、妊畜流产、血液中单核 细胞增多 。
本病为散发性，一般只有少数发病，但病死 率较高。
传染途径：消化道、呼吸道、眼结膜以及皮 肤破伤。饲料和水可能是主要的传染媒介。
一、形态与染色
1、G+ ，两端钝圆的短小杆菌，单在、呈Ｖ 字排列、或成从排列；
2、无芽胞、无荚膜， 3、20~25℃：4根周身鞭毛；
37 ℃：一般不产生鞭毛，或产生1根鞭毛。 4、R型菌多为长丝状。
本菌的细胞壁提取物P64是一种有效 的免疫原，猪体免疫试验表明，它与弱 毒疫苗具有同样有效的保护力。
用牛或马制备的抗猪丹毒血清可用 于紧急预防和治疗。
也可用青霉素治疗病猪。
3、细菌鉴定
主要考虑与李氏杆菌鉴别诊断，区别要点见本 章李氏杆菌有关内容。可用鸽子肌肉注射培 养物，死后取心血和脾脏涂片，染色、镜检， 并同时分离细菌。血清型鉴定时，将待鉴定 菌株的纯培养物加入1%甲醛灭活，经洗涤、 高压、离心处理后制成沉淀原，与模式菌株 的高免血清作琼脂扩散试验。
4、血清学诊断
2) 亚急性疹块型：体表皮肤出现疹块（指压褪 色），疹块稍突出于皮肤表面. 通常称为 “鬼打印”。
3) 慢性型：A.关节炎型，关节肿大、变形、纤 维素性渗出，变成胶冻样 ；B.心内膜炎，疣 状赘生物 。
六、微生物学诊断
1、显微镜检查 可采取高热期病猪耳静 脉血作涂片，染色、镜检。死后可采取心血 及新鲜肝、脾、肾、淋巴结等制成涂片，革 兰氏染色镜检。如发现少量典型杆菌，可初 步确诊。如为慢性心内膜炎病例，可用心脏 瓣膜增生物涂片，镜检。羔羊患关节炎病时， 可检查关节滑膜囊液。
免疫与治疗
本菌具有良好的免疫原性，目前我国应用 猪丹毒GC42或C4T(l0)弱毒菌株制成的冻干苗， 用20%铝胶生理盐水稀释后，在仔猪断奶后 接种5～7亿活菌，有良好的免疫力。若用 GC42加倍口服也有效。
应用灭活苗也有较好的保护效果。
世界卫生组织提出的猪丹毒灭活苗 的标准为：以干燥菌苗0.8mg接种小鼠， 免疫2～3周后，攻击强毒菌50%以上获 得保护，为1个单位，有效菌苗每毫升 必须含20个单位，猪接种60个单位以上， 免疫期6个月。
六、微生物学
1. 肝、脾、脑组织等涂片、革兰氏染色、镜 检，可见G＋的呈Ｖ字排列的小杆菌；
2. 病料乳剂接种在血液葡萄糖琼脂，可长出 露滴状菌落，β溶血；
3. 病料眼内接种家兔或豚鼠，1天后发生结 膜炎，不久就发生败血症死亡；妊娠2周 的动物被接种后可发生流产。
第二节 丹毒杆菌属
（Erysipelothrix）
可采用生长凝集试验诊断，是根据猪丹毒 杆菌在生长繁殖中能与该菌抗血清发生特异性 凝集设计的。即在含有抗猪丹毒血清的培养基 中接种被检组织液或纯培养物，置37℃培养18
～24h，观察有无细菌凝集。检测猪血清时， 不发病猪凝集价在1:20以下，发病或有免疫力 的猪凝集价在1:320以上。如检测患猪组织或分 离的待检菌，有凝集者即判为阳性。
经损伤的皮肤和消化道感染，也可经吸 血昆虫传播。以猪多发，叫猪丹毒；其 次是禽类，称禽丹毒；羊丹毒又称药浴 跛；人感染则称类丹毒（与链球菌所致 的丹毒相区别）；实验动物：鸽子、小 鼠（接种后2~5天死亡）。
猪丹毒
1) 急性败血症：体温升高，42℃，体表皮肤 发红(紫斑)，突然死亡，病程一般为3-4天， 病死率达80%。
第一节 李氏杆菌属
（Listeria）
本属细菌的共同特性:
1) G＋、无芽胞、无荚膜； 2) 20~25 ℃能运动、37 ℃不运动； 3) 需氧或兼性厌氧。
本属分为2群共7个种
第一群 第二群
产单核细胞李氏杆菌 L. monocytogenes
伊氏李氏杆菌
L. ivanovii
三、抵抗力
本菌对腐败和干燥环境有较强的抵抗力。 在饮水中可存活5d，在污水中可存活15d，在 深埋的尸体中可存活9个月。在病死猪熏制的 火腿中3个月后仍可在深部分离出活菌。对热 和直射光较敏感，70℃经5～15min可完全杀死。 对常用消毒剂抵抗力不强，0.5%甲醛数十分钟 可杀死。用10%生石灰乳或0.1%过氧乙酸涂刷 墙壁和喷洒猪圈是目前较好的消毒方法。本菌 可耐0.2%的苯酚，对青霉素很敏感。
的心内膜增生组织）。
肝脏涂片
Hale Waihona Puke Baidu
心内膜增生组织涂片
猪丹毒杆菌为G+纤细小杆菌， 常单在、V型成对或成丛排列
二、培养与生化特性
本菌为微需氧菌。pH在6.7～9.2范围内均可生长， 最适pH为7.2～7.6，生长温度为5~42℃，最适温 度为30～37℃。在普通琼脂培养基和普通肉汤中 生长不良，如加入0.2%～0.5%葡萄糖或5%～ 10%血液、血清则生长茂盛；在血琼脂平皿上经 37℃24h培养可形成湿润、光滑、透明、灰白色、 露珠样的圆形小菌落，并形成α溶血环。在麦康凯 培养基不生长。在肉汤中呈轻度浑浊，有少量白 色黏稠沉淀。不形成菌膜和菌环。
死该菌。 抗干燥能力强，在干粪中能存活两年以上。
四、抗原性
与多种细菌有共同Ag ，血清学诊
断无意义。
五、致病性
1.本菌为兼性胞内寄生菌，可穿越宿主的肠道屏 障、血脑屏障和血胎屏障。
2.可自然感染多种家畜：猪、马、牛、绵羊。 3.病畜表现神经症状、妊畜流产、血液中单核细
胞增多 。 4.鸡可全身感染，心肌坏死。 5.成人脑膜炎，新生儿脑膜炎。
五、致病机理与致病性
本菌通过消化道感染，进入血流， 而后定殖在局部或引致全身感染。已知 无致病力菌株对消化道上皮细胞黏附力 差，且易被吞噬细胞消化。但致病菌株 的黏附素及抗吞噬物质尚不清楚。
末发现外毒素，有些菌株产生的透明质 酸酶和唾液酸酶，后者可降解宿主细胞表面 的唾液酸，有助于细菌入侵。感染动物能产 生唾液酸酶抗体，已证实实验动物通过对该 酶的主动或被动免疫可获得保护。
二、培养特性
1、兼性厌O2，营养不高；对食盐耐受力很强。 4 ℃耐盐高达30.5%。
2、血液葡萄糖琼脂：圆形、光滑、淡蓝色、透 明、露滴状菌落，狭窄β溶血，有菌落下溶 血。
3、4 ℃可生长 —故称“冰箱菌”，生长温度145 ℃，最适温度30-37 ℃.
三、抵抗力
抵抗力一般，耐碱不耐酸。 55℃湿热40min、常用消毒药5～10min可杀
四、抗原结构与血清型
本菌最初被分为A、B、N型。现通用阿拉 伯数字为型号，用英文小写字母表示亚型，目 前共有25个血清型和1a、1b及2a、2b亚型。分 型是依据菌体可溶性的耐热肽聚糖的抗原性。
大多数菌株为1型和2型 (相当于以前的A 型和B型)，从急性败血症分离的菌株多为la型， 从亚急性及慢性病病例分离的则多为2型。
本属有3个种，致病的只包括1个种：猪 丹毒丝菌。
也称为“猪丹毒杆菌”、“猪丹毒丝状 杆菌” ；是猪丹毒的病原体，也可引起 人的“类丹毒”。
一、形态染色
1. G+细长小杆菌，0.2-0.4μm~0.5-2.5μm; 2. 无鞭毛，无芽胞，无荚膜 ； 3. 有形成长丝的趋势（陈旧培养物和慢性病猪
在加有5%马血清和1%蛋白胨水的糖培养 基中可发酵葡萄糖、果糖和乳糖，产酸不 产气；不发酵甘露醇、山梨醇、肌醇、水 杨素、鼠李糖、蔗糖、渔藻糖、棉实糖、 菊糖。产生H2S，不产生靛基质和接触酶， 不分解尿素。甲基红及VP试验阴性。
明胶穿刺生长特殊，沿穿刺线横向四周生 长，如试管刷状，但明胶不液化。
无害李氏杆菌
L. innocua
韦氏李氏杆菌
L. welshimeri
塞氏李氏杆菌
L. seeligeri
格氏李氏杆菌
L. grayi
莫氏李氏杆菌
L. murrayi
其中产单核细胞李氏杆菌 在动物疾病中较为重要
第一群 第二群
产单核细胞李氏杆菌 L. monocytogenes
伊氏李氏杆菌
L. ivanovii
2、分离培养
分离培养时可用含有0.2%(W/V)的葡萄糖或 5%～10%无菌马血清(W/V)的半固体琼脂培 养基。为提高分离率可采用含有1/100万结晶 紫、l/5万叠氮钠的10%马血清肉汤及琼脂平 板。也可在马丁肉汤中加入新霉素 (400ug/ml)或万古霉素 (70ug/ml)，抑制某些 杂菌生长。
无害李氏杆菌
L. innocua
韦氏李氏杆菌
L. welshimeri
塞氏李氏杆菌
L. seeligeri
格氏李氏杆菌
L. grayi
莫氏李氏杆菌
L. murrayi
产单核细胞李氏杆菌
也称为单核细胞增多性李氏杆菌。
家畜、家禽均可感染，鼠类是主要带菌者。
病畜表现神经症状、妊畜流产、血液中单核 细胞增多 。
本病为散发性，一般只有少数发病，但病死 率较高。
传染途径：消化道、呼吸道、眼结膜以及皮 肤破伤。饲料和水可能是主要的传染媒介。
一、形态与染色
1、G+ ，两端钝圆的短小杆菌，单在、呈Ｖ 字排列、或成从排列；
2、无芽胞、无荚膜， 3、20~25℃：4根周身鞭毛；
37 ℃：一般不产生鞭毛，或产生1根鞭毛。 4、R型菌多为长丝状。
本菌的细胞壁提取物P64是一种有效 的免疫原，猪体免疫试验表明，它与弱 毒疫苗具有同样有效的保护力。
用牛或马制备的抗猪丹毒血清可用 于紧急预防和治疗。
也可用青霉素治疗病猪。
3、细菌鉴定
主要考虑与李氏杆菌鉴别诊断，区别要点见本 章李氏杆菌有关内容。可用鸽子肌肉注射培 养物，死后取心血和脾脏涂片，染色、镜检， 并同时分离细菌。血清型鉴定时，将待鉴定 菌株的纯培养物加入1%甲醛灭活，经洗涤、 高压、离心处理后制成沉淀原，与模式菌株 的高免血清作琼脂扩散试验。
4、血清学诊断
2) 亚急性疹块型：体表皮肤出现疹块（指压褪 色），疹块稍突出于皮肤表面. 通常称为 “鬼打印”。
3) 慢性型：A.关节炎型，关节肿大、变形、纤 维素性渗出，变成胶冻样 ；B.心内膜炎，疣 状赘生物 。
六、微生物学诊断
1、显微镜检查 可采取高热期病猪耳静 脉血作涂片，染色、镜检。死后可采取心血 及新鲜肝、脾、肾、淋巴结等制成涂片，革 兰氏染色镜检。如发现少量典型杆菌，可初 步确诊。如为慢性心内膜炎病例，可用心脏 瓣膜增生物涂片，镜检。羔羊患关节炎病时， 可检查关节滑膜囊液。
免疫与治疗
本菌具有良好的免疫原性，目前我国应用 猪丹毒GC42或C4T(l0)弱毒菌株制成的冻干苗， 用20%铝胶生理盐水稀释后，在仔猪断奶后 接种5～7亿活菌，有良好的免疫力。若用 GC42加倍口服也有效。
应用灭活苗也有较好的保护效果。
世界卫生组织提出的猪丹毒灭活苗 的标准为：以干燥菌苗0.8mg接种小鼠， 免疫2～3周后，攻击强毒菌50%以上获 得保护，为1个单位，有效菌苗每毫升 必须含20个单位，猪接种60个单位以上， 免疫期6个月。
六、微生物学
1. 肝、脾、脑组织等涂片、革兰氏染色、镜 检，可见G＋的呈Ｖ字排列的小杆菌；
2. 病料乳剂接种在血液葡萄糖琼脂，可长出 露滴状菌落，β溶血；
3. 病料眼内接种家兔或豚鼠，1天后发生结 膜炎，不久就发生败血症死亡；妊娠2周 的动物被接种后可发生流产。
第二节 丹毒杆菌属
（Erysipelothrix）
可采用生长凝集试验诊断，是根据猪丹毒 杆菌在生长繁殖中能与该菌抗血清发生特异性 凝集设计的。即在含有抗猪丹毒血清的培养基 中接种被检组织液或纯培养物，置37℃培养18
～24h，观察有无细菌凝集。检测猪血清时， 不发病猪凝集价在1:20以下，发病或有免疫力 的猪凝集价在1:320以上。如检测患猪组织或分 离的待检菌，有凝集者即判为阳性。
经损伤的皮肤和消化道感染，也可经吸 血昆虫传播。以猪多发，叫猪丹毒；其 次是禽类，称禽丹毒；羊丹毒又称药浴 跛；人感染则称类丹毒（与链球菌所致 的丹毒相区别）；实验动物：鸽子、小 鼠（接种后2~5天死亡）。
猪丹毒
1) 急性败血症：体温升高，42℃，体表皮肤 发红(紫斑)，突然死亡，病程一般为3-4天， 病死率达80%。