柱色谱法分离甲基橙和亚甲基蓝==
柱色谱法分离甲基橙和亚甲基蓝
柱色谱法分离甲基橙和亚甲基蓝实验目的1. 了解柱色谱的分离原理及应用。
2. 掌握柱色谱法的实验操作技术。
实验原理甲基橙和亚甲基蓝均为指示剂，它们的结构式如下:甲基橙亚甲基蓝由于甲基橙和亚甲基蓝的结构不同,极性不同,吸附剂对它们的吸附能力不同,洗脱剂对它们的解析速度也不同。
极性小，吸附能力弱，解析速度快的亚甲基蓝先被洗脱下来;而极性大，吸附能力强，解析速度慢的甲基橙后被洗脱下来，从而使两种物质得以分离。
本实验以中性氧化铝作为吸附剂，95%乙醇作为洗脱剂，先洗出亚甲基蓝，再用蒸馏水作洗脱剂把甲基橙洗脱下来。
主要装置装柱装样品亚甲基蓝先被洗脱甲基橙后被洗脱实验步骤1. 取口径10mm，长200mm洁净干燥的层析柱一支，在活塞处涂上一层薄薄的凡士林，向一个方向旋转至透明，竖直安装在铁架台上。
关闭活塞，向柱中倒入95%乙醇至柱高4/5处，通过一个干燥的玻璃漏斗慢慢地加入10g中性氧化铝，待氧化铝粉末在柱内有一定沉积高度时，打开柱下活塞，调节流速约1滴/秒，并用木棒轻轻敲打柱身下部，使氧化铝装填紧密。
装满100mm高度后在上面加一层石英砂(约5mm)。
在此过程中应始终保持吸附剂沉积面上有一段液柱。
2. 打开柱下活塞放出柱中乙醇，待液面降至刚好与石英砂平面相切时，立即关闭活塞，向柱内滴加10滴甲基橙和亚甲基蓝的混合物。
打开活塞，待液面降至刚好与石英砂平面相切时，用少量95%乙醇沿加样处冲洗柱内壁。
再打开活塞将液面降至与石英砂平面相切。
依上法重复操作直至柱壁和顶部的淋洗剂均无颜色。
3. 用95%乙醇作为洗脱剂，打开柱下活塞，控制流出速度为1滴/秒。
观察柱中色带下行情况。
随着色带向下行进逐渐分为两个色带，下方的为蓝色，上方为黄色。
当蓝色带(亚甲基蓝)到达柱底时更换接收瓶接收(在此之前接收的无色淋洗剂可重复使用)。
当蓝色带接收完后更换接收瓶接收空白带，并改用蒸馏水继续洗脱甲基橙。
当空白带接完后再换接收瓶接收黄色带(甲基橙)。
有机化学实验教案--6.柱色谱分离实验
重庆工业职业技术学院教案由于甲基橙和亚甲基蓝的结构不同,极性不同,吸附剂对它们的吸附能力不同,洗脱剂对它们的解析速度也不同,极性小、吸附能力弱、解析速度快的亚甲基蓝先被洗脱下来，而极性大、吸附能力强、解析速度慢的甲基橙后被洗脱下来，从而使两种物质得以分离。
本实验以硅胶为吸附剂，95%乙醇作为洗脱剂，先洗出亚甲基蓝，再用蒸馏水作洗脱剂把甲基橙洗脱下来。
甲基橙结构式亚甲基蓝结构式二、实验操作1.仪器锥形瓶、玻璃漏斗、色谱柱2.试剂柱层析硅胶、脱脂棉、乙醇（95%）甲基橙、亚甲基蓝。
H2O∶ 95 %乙醇 = 1∶ 1 (A 液)0. 2mol· L -1HCl∶ 95 %乙醇 = 1∶ 1 (B 液)3、装色谱柱：（1）取一支色谱柱，在柱子的收缩部塞一小团脱脂棉花将色谱柱垂直固定在铁架台上。
(2) 关闭活塞，向柱中倒入蒸馏水（也是洗脱剂，至柱体积的1/2）（3）填吸附剂：称取10g 硅胶于小烧杯中 ,加入 15mL 蒸馏水 ,用玻璃棒调好通过漏斗慢慢装入玻璃柱, 使其逐渐沉入底部。
用洗耳球敲打柱身使硅胶装填紧密，打开活塞，用小锥型瓶承接, 控制滴速为1 滴／秒,装完后在上面加一层脱脂棉（，操作时要注意吸附剂始终不能露出液面）。
4、加样：当液面刚好流至脱脂棉平面相切时，立刻关闭活塞，加入 5mL左右的A 液 ,当硅胶面又将要露出时 ,关紧活塞 ,用量筒准确加入 0. 50mL 以 A 液做溶剂的混合液(含甲基橙和亚甲基蓝各为 0. 400 g· L -1)5、洗脱：待此混合液将要渗入柱内时 ,立即用 A 液洗脱 ,此时可以观察到有鲜明的黄、蓝两条色带形成。
黄色的甲基橙色带随洗脱剂的加入不断下移 ,而其顶部蓝色带不移动 ,当黄色带到达柱底部时 ,更换接受器 ,全部收集此黄色带 ,洗脱时间约 10 min。
此后改用B 液做洗脱剂 ,这时可看到蓝色带开始下移 ,当亚甲基蓝色带到达底部时 ,更换接受器 ,全部收集此蓝色带 ,洗脱时间约 30 min。
亚甲基蓝-甲基橙混合指示剂测定三次采油用石油磺酸盐有效物含量
亚甲基蓝-甲基橙混合指示剂测定三次采油用石油磺酸盐有效物含量李柏林;牛瑞霞;程杰成【期刊名称】《大庆石油地质与开发》【年(卷),期】2004(023)003【摘要】以海明1622为滴定剂,以亚甲基蓝-甲基橙混合物为指示剂,采用两相滴定法,测定了三次采油用石油磺酸盐中有效物的含量.通过对影响滴定因素的考查,确定了滴定分析条件.结果表明:当亚甲基蓝与甲基橙的质量比为5:1,配成含有0.1%亚甲基蓝和0.02%甲基橙的混合指示剂,加量在4～8滴,可以明显地观察到终点颜色变化,其变化特点为上相由粉红色至蓝色,下相由蓝色至绿色.用该方法测定三次采油用石油磺酸盐有效物含量,终点清晰,干扰小,操作简便,重现性好,其相对标准偏差小于1.0%.【总页数】2页(P75-76)【作者】李柏林;牛瑞霞;程杰成【作者单位】大庆石油学院,黑龙江,大庆,163318;大庆石油学院,黑龙江,大庆,163318;大庆石油学院,黑龙江,大庆,163318;大庆油用有限责任公司技术发展部,黑龙江,大庆,163453【正文语种】中文【中图分类】TE357.46【相关文献】1.甲基橙-靛红混合指示剂测定总碱度 [J], 唐晓岚2.柱色谱实验教学中甲基橙和亚甲基蓝的分离和测定方法 [J], 张枫;宋学英;卢映霞;朱莹;刘锰;刘永利3.百里酚蓝—亚甲基蓝混合指示剂测定十二烷基苯磺酸钠活性物含量 [J], 任苏明4.水质硫化物的测定:亚甲基蓝分光光度法和流动注射-亚甲基蓝分光光度法的比较[J], 梁时军;黄银春;夏亮;陈巧5.三维花形层状双金属氢氧化物对甲基橙和亚甲基蓝的去除 [J], ZHANG Ping;PAN Xuemei;WANG Qinyuan;SUN Zhaoyi;MA Ruonan因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
中学生奥赛化学实验培训-柱色谱
柱色谱一、基本原理：甲基橙和亚甲基蓝均为指示剂，它们的结构式如下： N N NaO 3S N(CH 3)2甲基橙 S N(H 3C)2N N +(CH 3)2Cl -亚甲基蓝由于甲基橙和亚甲基蓝的结构不同，极性不同，吸附剂对它们的吸附能力不同，洗脱剂对它们的解析速度也不同。
极性小、吸附能力弱、解吸速度快的亚甲基蓝先被洗脱下来，而极性大、吸附能力强、解吸速度慢的甲基橙后被洗脱下来，从而使两种物质得以分离。
本实验以中性氧化铝作为吸附剂，95％乙醇作为洗脱剂，先洗出亚甲基蓝，再用氨水作洗脱剂把甲基橙洗脱下来。
二、实验步骤:取口径10mm ，长200mm 的层析柱一根，固定在铁架上，向柱中倒入95％乙醇至柱高的1/2处，通过一个干燥的玻璃漏斗慢慢地加入层析用的中性氧化铝（约8g ），待氧化铝粉末在柱内有一定沉积高度时，打开活塞，用锥形瓶作接收瓶，控制液体流速约为1滴／秒，并用木棒或带有橡皮管的玻棒轻轻敲打柱身下部，使氧化铝装填紧密，装满100mm 高度后在上面加一层石英砂（约5mm ）。
操作时要注意吸附剂始终不能露出液面。
当乙醇液面刚好流至石英砂平面相切时，立即关闭活塞，向柱内滴加10滴甲基橙和亚甲基蓝的混合物（乙醇溶液），打开活塞，待液面降至石英砂层时用少量95％乙醇洗下附在管壁的色素（少量多次），然后用95％乙醇作为洗脱剂，控制流速约为1滴／秒，当亚甲基蓝色带刚洗出时，立即更换锥形瓶收集洗脱液，直至洗脱液无色。
更换锥形瓶，并改用3%氨水继续洗脱，当甲基橙色带刚洗出时，立即更换锥形瓶收集洗脱液，待甲基橙全部被洗脱下来，即分离完全。
量出不同颜色组分的体积，记录数据。
实验报告实验台号姓名一、实验步骤、实验现象、实验记录:二、数据记录：记录监考老师签字亚甲基蓝溶液的体积/mL甲基橙溶液的体积/mL三、思考题：1．.装柱不均匀或者有气泡、裂缝，将会造成什么后果？如何避免？2．极性大的组分为什么要用极性较大的溶剂洗脱？3．在氧化铝柱子上若分离下列各组混合物，哪一个组分先被洗脱下来？NH2NO2O2N NH2和(1)N N N N N N和(2)。
精细化工实验-柱层析分离甲基橙与亚甲基蓝
柱层析分离甲基橙与亚甲基蓝目的：1．理解柱层析分离有机化合物的原理及在精细有机分离中的应用；2．掌握柱层析分离的操作步骤；3．了解有机化合物层析分离的原理及应用。
原理：二十世纪初，人们就开始应用柱色谱法来分离复杂的有机物。
目前，仍是一种分离复杂有机化合物的有效方法。
柱色谱法涉及到被分离的物质在液相和固相之间的分配。
因此，可以把它看是一种固—液吸附色谱法。
固定相是固体，液体样品通过固体时，由于固体表面对液体中各组分的吸附能力不同而使各组分分离开。
图1 柱色谱柱法示意图柱色谱法是通过色谱柱(如图l)来实现分离的。
色谱柱内装有固体吸附剂(固定相)，如氧化铝或硅胶。
液体样品从柱顶加入，在柱的顶部被吸附剂吸附。
然后，从柱的顶部加入有机溶剂(作洗提剂)。
由于吸附剂对各组分的吸附能力不同，各组分以不同的速率下移，被吸附较弱的组分在流动相(洗提剂)里的百分含量比被吸附较强的组分要高，以较快的速率向下移动。
此过程与气相色谱过程相似。
各组分随溶剂以不同的时间从色谱柱下端流出，用容器分别收集之。
如各组分为有色物质则可以直接观察到不同颜色谱带，但如为无色物质，则不能直接观察到谱带。
有时一些物质在紫外光照射下能发出荧光，则可用紫外光照射。
有时则可分段集取一定体积的洗提液，再分组签定。
吸附剂选择吸附剂时，需考虑到以下几点：它不溶于所使用的溶剂；与要分离的物质不起化学反应，也不起催化作用等；具有一定的组成；一般要求是无色的；颗粒大小均匀。
颗粒越小，则混合物的分离程度越好，但溶液或溶剂流经柱子的速度也就越慢，因此要根据具体情况选择吸附剂。
最广泛使用的吸附剂是活性氧化铝，非极性的一些物质通过氧化铝的速率较极性物质为快。
有一些物质由于被吸附剂牢牢吸附，将不能通过。
活性氧化铝不溶解于水，也不溶于有机溶剂，含水的与无水的物质都可使用这种吸附剂。
吸附剂的吸附能力不仅取决于吸附剂本身，也取决于在色谱分离中所用的溶剂。
因此，对不同物质，吸附剂按其相对的吸附能力可粗略分类如下：(1) 强吸附剂：低水含量的氧化铝，活性炭。
实验3 柱色谱分离染料和薄层色谱鉴定阿司匹林与咖啡因
实验三、柱色谱分离染料和薄层色谱鉴定阿司匹林与咖啡因自我实践实验：旋光度的测定一、目的1． 了解柱色谱和薄层色谱的原理2． 练习柱色谱和薄层色谱的操作二、原理 (略，见实验指导。
P72-74, P53-60)三、实验仪器色谱柱，50ml 烧杯（二只），10ml 量筒，短颈漏斗，长颈滴管(二支)，铁架台，烧瓶夹，双联球，高效薄层板（每组二块），层析缸，毛细管，镊子，紫外分析仪。
四、药品石英砂，氧化铝，95%乙醇，无水乙醇，混合染料(甲基橙、亚甲基蓝)，0.2mol/L 盐酸，咖啡因，阿斯匹林。
1,2-二氯乙烷/乙酸（12:1）展开剂。
五、实验操作步骤（一）甲基橙和亚甲基蓝两种染料的分离1.装柱固定色谱柱加约6克氧化铝 用双联球压实 加少量石英砂覆盖 打开活塞 2.加样加6滴混合染料 打开活塞 加少量乙醇 淋洗 （重复2-3次）（用长滴管） （短滴管约1管）3.洗脱用乙醇洗脱（速度慢可用双联球压出）直到蓝色物质全部洗出 小烧杯接收。
（约10mL ）待蓝色带完全洗脱后加少量0.2mol/L 盐酸 淋洗 （重复2-3次）用0.2mol/L 盐酸洗脱 （短滴管约1管） （约25mL ）小烧杯接收，直到红色物质全部洗出，速度慢用双联球压出。
4.注意事项：(1)柱要装的均匀，石英砂少量即可（约2-3毫米厚度）(2)缓慢加样，尽量不要碰在柱壁上。
(3)洗脱时，洗脱剂加入速度要慢，每次加入的量不要太多（二）薄层色谱1.点样距薄板一端约0.5cm处，用毛细管在一块薄层板上等距离分别点上乙酰水杨酸标样、咖啡因标样和阿加片提取液（乙酰水杨酸与咖啡因的混合样液）。
如图所示2.展开在层析缸中加入约5ml展开溶剂（1,2-二氯乙烷/乙酸（12:1））后，将薄板放入层析缸中，展开剂液面不得超过点样线。
当溶剂前缘距薄板顶端0.5cm时，取出薄板，作好标记，放在空气中自然晾干。
3.检出在紫外分析仪上，观察荧光的斑点，并描出斑点的位置，计算各样品的R f值。
柱色谱法分离甲基橙和碱性湖蓝BB
柱色谱法分离甲基橙和碱性湖蓝BB一、实验目的1、学习柱色谱法技术的原理和方法；2、掌握柱色谱技术分离甲基橙和碱性湖蓝BB的方法；3、掌握甲基橙的定量方法。
二、实验原理柱色谱有吸附色谱和分配色谱两种。
实验室中最常用的是吸附色谱，其原理是利用混合物中各组分在固定相上的吸附能力和流动相的解吸能力不同，让混合物随流动相流过固定相，发生反复多次的吸附和解析过程，从而使混合物分离成两种或多种单一的纯组分。
甲基橙为橙黄色的鳞状晶体或粉末，稍溶于水而成黄色，不溶于乙醇，用作pH值指示剂，变色范围3.1~4.4，其结构式为：碱性湖蓝BB又称为亚甲基蓝，可含有3~5个结晶水，三水合物是暗绿色结晶，其稀的乙醇溶液为蓝色，其结构时为：1、柱色谱装置色谱柱是一根下端具塞的玻璃管，柱高和直径比应为8：1。
在柱底部塞脱脂棉，上盖石英砂，中间是固定相，最上层再铺一层石英砂。
（如没有色谱柱，可用一根25mL酸式滴定管代替。
）2、装柱装柱前应先将色谱柱洗干净，进行干燥，在柱底铺一小块脱脂棉，再铺约0.5cm厚的石英砂，然后进行装柱。
装柱分为湿法装柱和干法装柱两种。
（1）湿法装柱将吸附剂（氧化铝或硅胶）用洗脱剂中极性最低的洗脱剂调成糊状，在柱内先加入约3/4高的洗脱剂，再将调好的吸附剂边敲边倒入柱中，同时，打开下旋活塞，在色谱柱下面放一个干净并且干燥的锥形瓶或烧杯，接收洗脱剂。
当装入的吸附剂有一定的高度时，洗脱剂下流速度变慢，待所有吸附剂全部装完后，用流下来的洗脱剂转移残留的吸附剂，并将柱内壁残留的吸附剂淋洗下来。
（注意若填装不紧密或留有气泡层等现象，会影响渗透速度和显色均匀。
但如果填装时过分敲击，又会因太紧密而流速太慢。
）在此过程中，应不断敲打色谱柱，以使色谱柱填充均匀并没有气泡。
柱子填充完成后，在吸附剂上端覆盖一层约0.5cm厚的石英砂。
在整个色谱柱过程中，柱内洗脱剂的高度始终不能低于吸附剂最上端，否则柱内会出现裂痕和气泡。
（加沙子目的是在加料时不致把吸附剂冲起，影响分离效果，若无沙子也可用玻璃毛或剪成比柱子内径略小的滤纸压在吸附剂下面。
柱色谱分离实验讲解
Column Chromatography
精品资料
一、实 验 目 的
了 解： 1. 柱色谱法分离有机物的 原理(yuánlǐ)。 2．固定相和流动相的选择 原则。
掌 握： 1. 色谱柱的填充方法。
2．柱色谱分离的基本操作。
精品资料
色谱法简介
色谱法亦称色层法，层析 法等，是分离，纯化和鉴定有 机化合物的重要方法(fāngfǎ) 之一，还可定量分析。
吸附剂装填紧密，排除气 泡(qìpào)。最终应使吸附剂的上 端平整，无凹凸面，无断层。
精品资料
• 装柱时应该注意均匀，不能有气泡，裂缝，否 则样品可能顺缝隙流动而不吸附，影响样品的 分离，应用(yìngyòng)质软的物体如吸耳球等 轻轻敲击柱身，促使吸附剂装填紧密，排除气 泡。最终应使吸附剂的上端平整，无凹凸面．
精Байду номын сангаас资料
三、实实验 验步 骤内: 容
柱色谱操作：
•干法：10g 硅胶
(ɡuī jiāo)
•
+乙醇
•先用乙醇 (yǐ chún)
• 后用水 •操作
•组分颜色
装柱
加样
洗脱
收集
鉴定
•1mL样品 •加样操作 •0.5mL×2乙醇洗涤
精品资料
•组分颜色
仪器(yíqì)和试剂
• 1.仪器 • 锥形瓶、玻璃漏斗、色谱柱 • 2.试剂(shìjì) • 柱层析硅胶、脱脂棉、乙醇（95%）甲 • 基橙、亚甲基蓝。 • H2O∶ 95 %乙醇 = 1∶ 1 (A 液) • 0. 2mol·L -1HCl∶ 95 %乙醇 = 1∶ 1 (B 液)
洗脱剂的极性：溶解度 适中、不反应、易获取回 收
吸附剂的性质(xìngzhì)： 均匀、表面积大、不反 应、吸附能力不同
实验项目柱层析分离甲基橙和次甲基蓝染料
九、实验方法指示及注意事项
1．色谱柱一定要装填紧密。若柱中装填时留有气泡或各部分松紧不匀时，会
影响渗滤速度和显色的均匀。
2．加料时须沿柱壁绕圈加入，防止局部样品过多，或者把吸附剂冲起而影响分离效果。
3．在分离过程中，自始至终须使整个吸附剂浸泡在溶剂中。否则当柱中溶剂或溶液流干时，就会使柱身干裂，影响渗滤和显色的均一性。
装柱可以采用湿法或干法，干法装柱是将干吸附剂倒入ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ内，填装均匀，
然后加入少量溶剂。无论采用哪种装柱都不要使吸附剂有裂缝或气泡，否则影响
分离效果，一般说来湿法装柱较干法紧密均匀。
本实验采用湿法装柱。
1、色带有重叠现象，即柱内出现彩色色带，这是由于样品进入带较宽，扩散现象严重之故，但由于甲基橙与次甲基兰极性相差甚大，随着洗脱进行，基本上可以得到单一化合物。
1．从分子结构看出,甲基橙中含—SO3Na基团,它具有比次甲基兰更大的极性，因此在用乙醇洗脱时只有次甲基兰可被洗脱下来，极性较大的甲基橙必须用水作洗脱剂。
2．装柱的紧密与否,样品吸收带是否狭对柱层析分离影响颇大.
加入样品量不宜过大,否则会引起过载,分离效果不好,将含样品的溶液进入吸附柱时,必须待样品液全部被吸附剂吸附后,才能用少量洗脱剂洗涤,洗涤液又全部进入柱后,才能开始用大量溶剂洗脱,否则样品色带宽大,在洗脱过程中,会因扩散现象造成色带彼此重叠,使分离难以进行。色谱柱装填要紧密、均匀,疏松或不均匀的柱子均会引起涌流扩散现象,导致分离效果欠佳。
酸>醇,胺,硫醇>酯,醛,酮>烃 >卤化物,醚>烯>饱和烃
强吸附性的化合物要用强极性溶剂来洗脱。
作为洗脱剂的溶剂要求其具有一定极性,适合于被分离物的分离,体积尽量要小,此外要求易挥发,易除去(乙醚等挥发性太大的溶剂不合适)。
柱色谱分离染料实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除柱色谱分离染料实验报告篇一：柱色谱实验报告柱色谱分离实验报告篇二：色谱实验报告色谱实验报告项目一：气相色谱流出曲线的研究一：实验目的1、2、3、掌握气相色谱仪的基本结构及工作原理理解色谱流出曲线中各参数的表示方法掌握气相色谱中定性、定量分析方法二、实验原理气相色谱的固定相是涂布在载体表面的固定液，试样气体由载气携带进入色谱柱，与固定液接触时，气相中各组分便溶解在固定液中。
随着载气的不断通入，被溶解的组分又从固定液中挥发出来，挥发出的组分随载气向前移动时又再次被固定液溶解。
由于各组分在固定液中的溶解能力不同，随着载气的流动，各组分在两相间经过反复的溶解-挥发过程，经过一段时间，最终实现彼此分离。
色谱图是指被测组分从进样开始，经色谱柱分离到组分全部流过检测器后，所产生的响应信号随时间分布的图像。
色谱图上有一组色谱峰，每每个峰代表试样中的一个组分。
色谱流出曲线是以组分流出色谱柱的时间或载气流出的体积为横坐标，以检测器对各组分的电信号响应值为纵坐标的一条曲线。
三、仪器与试剂1、仪器气相色谱仪2、试剂乙醇、正丁醇四、实验步骤1、调试气相色谱仪2、分别进行进样3、进乙醇和正丁醇的混合物样品，分别记录保留时间五、实验记录1、色谱条件:50m柱经：320μm固定液：聚乙二醇载气：氮气检测器类型：fid检测器温度：150℃柱温：95℃气化室温度：165℃气体流量：载气30ml／min2、色谱图参数六：实验结果分析从实验结果所占百分比可以看出该实验出峰效果较明显，乙醇先出峰，正丁醇后出峰。
在做实验时我们应注意一些问题，比如说乙醇和正丁醇要按一定的比例来混合，柱温要设置合理，最低要高于正丁醇的沸点，也不能过高，否则会使组分不易分开；过低封效果会不明显。
另外进样时要快、准、稳，避免出现拖尾现象。
项目二：白酒中甲醇含量的测定一、实验目的1、2、掌握用外标法进行色谱定量分析的方法。
了解氢火焰离子检测器的性能和操作方法。
柱色谱分离染料实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除柱色谱分离染料实验报告篇一：柱色谱实验报告柱色谱分离实验报告篇二：色谱实验报告色谱实验报告项目一：气相色谱流出曲线的研究一：实验目的1、2、3、掌握气相色谱仪的基本结构及工作原理理解色谱流出曲线中各参数的表示方法掌握气相色谱中定性、定量分析方法二、实验原理气相色谱的固定相是涂布在载体表面的固定液，试样气体由载气携带进入色谱柱，与固定液接触时，气相中各组分便溶解在固定液中。
随着载气的不断通入，被溶解的组分又从固定液中挥发出来，挥发出的组分随载气向前移动时又再次被固定液溶解。
由于各组分在固定液中的溶解能力不同，随着载气的流动，各组分在两相间经过反复的溶解-挥发过程，经过一段时间，最终实现彼此分离。
色谱图是指被测组分从进样开始，经色谱柱分离到组分全部流过检测器后，所产生的响应信号随时间分布的图像。
色谱图上有一组色谱峰，每每个峰代表试样中的一个组分。
色谱流出曲线是以组分流出色谱柱的时间或载气流出的体积为横坐标，以检测器对各组分的电信号响应值为纵坐标的一条曲线。
三、仪器与试剂1、仪器气相色谱仪2、试剂乙醇、正丁醇四、实验步骤1、调试气相色谱仪2、分别进行进样3、进乙醇和正丁醇的混合物样品，分别记录保留时间五、实验记录1、色谱条件:50m柱经：320μm固定液：聚乙二醇载气：氮气检测器类型：fid检测器温度：150℃柱温：95℃气化室温度：165℃气体流量：载气30ml／min2、色谱图参数六：实验结果分析从实验结果所占百分比可以看出该实验出峰效果较明显，乙醇先出峰，正丁醇后出峰。
在做实验时我们应注意一些问题，比如说乙醇和正丁醇要按一定的比例来混合，柱温要设置合理，最低要高于正丁醇的沸点，也不能过高，否则会使组分不易分开；过低封效果会不明显。
另外进样时要快、准、稳，避免出现拖尾现象。
项目二：白酒中甲醇含量的测定一、实验目的1、2、掌握用外标法进行色谱定量分析的方法。
了解氢火焰离子检测器的性能和操作方法。
柱色谱分离实验
灵敏度高 1(10-9)
可以检测出μg• g-1(10-6)级甚至ng• g-
级的物质量。
分析速度快 几分钟或几十分钟内可以完成一个试样 分析。
柱色谱法分离甲基橙和甲基蓝
实验原理
甲基橙和亚甲基蓝均为指示剂,它们的结构式如下所示:
甲基橙
亚甲基蓝
由于甲的解析速度也不同,极性小、吸附能
吸附剂装填紧密，排除 气泡。最终应使吸附剂的上 端平整，无凹凸面，无断层。
装柱
• 装柱时应该注意均匀，不能有气泡，裂缝 ，否则样品可能顺缝隙流动而不吸附，影 响样品的分离，应用质软的物体如吸耳球 等轻轻敲击柱身，促使吸附剂装填紧密， 排除气泡。最终应使吸附剂的上端平整， 无凹凸面．
三、实 验 内 容
实验步骤（续）
• 加样：当液面刚好流至脱脂棉平面相切时，立刻关闭活塞， 加入 5mL左右的A 液 ,当 硅胶面又将要露出时 ,关紧活塞 ,用量筒准确加入 0. 50mL 以 A 液做溶剂的混合液(含甲 基橙和亚甲基蓝各为 0. 400 g·L -1) 。
• 洗脱：待此混合液将要渗入柱内时 ,立即用 A 液洗脱 ,此时可以观察到有鲜明的黄、蓝 两条色带形成。黄色的甲基橙色带随洗脱剂的加入不断下移 ,而其顶部蓝色带不移动 , 当黄色带到达柱底部时 ,更换接受器 ,全部收集此黄色带 ,洗脱时间约 10 min。此后改 用B 液做洗脱剂 ,这时可看到蓝色带开始下移 ,当亚甲基蓝色带到达底部时 ,更换接受 器 ,全部收集此蓝色带 ,洗脱时间约 30 min。
浙江大学大化o实验理论考复习整理
大化o实验复习一、简单蒸馏&减压蒸馏沸点：101.325kPa，760mmHg，一个大气压下的沸腾温度。
液体沸点范围可代表其纯度。
蒸馏法需各组分沸点相差30°C以上才得到好的分离效果。
*蒸馏装置：热源，蒸馏瓶，温度计，冷凝管，接液管五部分。
蒸馏物体积是蒸馏瓶容积的1/3-2/3。
液体沸点高于140°C用空气冷凝管，低于140°C用直形冷凝管。
**蒸馏低沸点易燃气体，用带支管的接液头，支管接橡皮管通下水道。
玻璃仪器接口要严密，要蒸馏系统不可密闭，尾接管侧口保持开放。
前馏分：到沸点前，有沸点较低的液体先蒸出。
蒸馏速度以每秒挣出1-2滴为宜。
分馏可将沸点相差1-2°C混合物分开。
**回流比：单位时间内由柱顶冷凝返回柱中液体数量与蒸出量的比。
回流比大分馏效果好，但耗时长且样品损失大。
使用减压蒸馏：沸点较高的有机物至沸点前就发生分解氧化等反应。
沸点与压力相关：lgP=A+B/T。
压力降到10-15mmHg，每加1mmHg，沸点升高1°C。
毛细管（离管低1-2mm)：空气从毛细管进入烧瓶，成为液体沸腾汽化中心，并且搅拌作用。
瓶内液体不超过容积的1/2。
接收器选择能耐外压的蒸馏烧瓶。
不可用沸石、气泡会集中从沸石上冒出。
【毛细管作用已代替沸石】打开或关闭真空泵时，一定要使安全评活塞处处于打开状态。
冷却陷：防止压力计水银被污染。
**循环水泵：10mmHg 油泵：2-4mmHgCaCl2：去除气体中的水。
NaOH：去除酸性气体，防止腐蚀抽气机。
固体石腊：可以降低抽气机油的饱和蒸气压，提高抽气能力。
二、糖类旋光度的测定测旋光度：[α]tλ=α/(cL)，别忘了单位°【每100ml含1g旋光性物质的溶液在1dm样品管中得旋光度】旋光度作用：1、通过测定值和文献值对比，检查旋光性物质的纯度和含量2、研究旋光性物质的反应机理。
测定旋光性物质的反应速率常数等。
实验项目柱层析分离甲基橙和次甲基蓝染料
吸附剂的活性根据其含水量而定。
吸附剂活性等级 含水量
Ⅰ 0%
Ⅱ 3%
Ⅲ 6%
Ⅳ 10%
Ⅴ 15%
所以为了提高吸附剂活性,可以用加热脱水的方法来获得。
⒉溶剂
化合物的吸附能力与它的极性成正比，具有较大极性基团的化合物，其在吸附剂上吸附能力较强。
氧化铝对各化合物的吸附性按以下次序递减：
装柱可以采用湿法或干法，干法装柱是将干吸附剂倒入柱内，填装均匀，
然后加入少量溶剂。无论采用哪种装柱都不要使吸附剂有裂缝或气泡，否则影响
分离效果，一般说来湿法装柱较干法紧密均匀。
本实验采用湿法装柱。
1、色带有重叠现象，即柱内出现彩色色带，这是由于样品进入带较宽，扩散现象严重之故，但由于甲基橙与次甲基兰极性相差甚大，随着洗脱进行，基本上可以得到单一化合物。
3．洗脱速度要保持在1滴/秒，速度过快，物料还来不及平衡，影响分离效果；过慢，会导致柱内扩散现象严重，均会影响分离效果。
六、实验数据记录
1．用95%乙醇洗脱分出蓝色色带，得次甲基兰
2．然后改用水洗脱分出黄色色带，得甲基橙
七、实验结果计算及曲线
⒈吸附剂
柱层析常用吸附剂有氧化铝,硅胶, 氧化镁,碳酸钙及活性炭等, 吸附剂要求颗粒大小均匀,越细分离效果越佳,但此时洗脱阻力也会增大,所以要选择颗粒大小合适的吸附剂.
4．一旦样品加入开始过柱后，必须保持洗脱剂的流速恒定，不得关闭活塞，否则将会造成被分离样品在分离过程中重新混合，严重影响分离效果。
实验项目：柱层析分离甲基橙和次甲基蓝染料
一、实验目的
1．了解柱色谱分离有机化合物的原理；
2．初步掌握色谱柱装填和洗脱的操作方法。
色谱分离技术实验思考题及实验指导
附件3-5色谱分离技术的演变和发展（张卫*****************.cn）一、本探究实验需要讨论的问题：A组：(1) 什么是色谱分离技术？它经历怎样的发展、演变过程？(2) 简要说明色谱分析方法的基本原理，固定相和流动相的作用分别是什么？(3) 柱色谱的色谱柱如何进行填充？填充过程中需要注意哪些问题？(4) 简述柱色谱常用的洗脱剂及其洗脱能力的次序，如何选择合适的洗脱剂？采用柱色谱分离甲基橙和次甲基蓝混合染料时，为什么先用95%乙醇溶液作为洗脱剂，再用去离子水做洗脱剂进行洗脱，如果两者换一下次序是否可以？为什么？(5) 设计实验：利用纸层析法进行植物色素的提取与分离任意采集叶片、果皮等有色植物适量，经过烘干、研磨、溶剂浸提、离心分离、点样、展开等操作，提取与分离植物色素。
设计要求：通过文献查阅，判断所选的植物色素样本所含的色素种类有哪些？可以选取哪些合适的提取和分离色素的有机溶剂？如何分离各种不同的色素？设计相应的实验方法和步骤，给出所用的试剂及仪器。
拟提供的试剂与仪器：石油醚、丙酮、乙醇、碳酸钙、烘箱、纸层析滤纸、表面皿、培养皿、研钵、离心机等；B组：(6) 常用的色谱分析方法有哪些？分别有怎样的特点和适用范围？(7) 薄层色谱中，最常用的固定相（吸附剂）有哪些？其颗粒的大小对于分离效果有何影响？影响固定相活性的主要因素有哪些？(8) 薄层色谱的分离效果的评价指标是什么？如何进行计算？若化合物本身无色，薄层色谱的色谱图中组分迁移产生的展开斑点位置如何确定？试举例说明两种常用的确定方法。
(9) 采用薄层色谱分离顺式偶氮苯和反式偶氮苯的混合物时，若分别采用20:1环己烷-乙酸乙酯和10:1环己烷-乙酸乙酯作为展开剂，展开效果有何不同？为什么？(10) 设计实验：利用纸层析法进行植物色素的提取与分离任意采集叶片、果皮等有色植物适量，经过烘干、研磨、溶剂浸提、离心分离、点样、展开等操作，提取与分离植物色素。
实验六 柱色谱 次甲基蓝与甲基橙的分离
4.甲基橙和次甲基蓝（亚甲基蓝）的结构式如上图，可以看到, 它们结 构中既有极性部分,又有非极性部分,亚甲基蓝溶于乙醇,而甲基橙不溶于 乙醇等有机溶剂, 但它们都可溶于水，实验室通常是用乙醇做溶剂进行 分离
三、实 验 装 置
层析柱装置
四、实 验 步 骤
1.选用直径1.5cm,长15cm的层析柱，垂直固定在铁架台上，夹子夹在柱的顶端。向柱 中加入乙醇至柱高的1/2，从柱的顶端用玻璃棒将少许棉花推到柱的底部，在棉花上可 加入一薄层石英砂 2.在小烧杯中称取约10g的氧化铝加入10-15ml乙醇调匀。 另外，预先将2g甲基橙和0.25g次甲基蓝溶于110ml乙醇中，备用。 3.打开柱下活塞，控制流出速度每秒一滴，将烧杯中氧化铝糊状物加进柱内，氧化铝 自然沉降，使填装紧密而均匀，当加至柱高的3/4时，用滴管吸取少量的乙醇轻轻冲洗 柱壁上的氧化铝，然后用玻棒敲击柱身，使柱面平整。事先剪好一张圆形滤纸覆盖在 氧化铝的面上。柱活塞下接一干净的锥形瓶，流下的乙醇反复套用。 4.当溶剂面刚好到达滤纸表面1mm时，立即用滴管加入1ml次甲基蓝和甲基醇的混合液。 当混合液面降至滤纸面1mm时用滴管吸取少量乙醇，淋洗粘附在柱壁上的溶液。用滴管 加入乙醇洗脱，控制流出速度。在整个洗脱过程中不要使柱干裂。在淋洗过程中可看 到色带的形成和分离。当蓝色的次甲基蓝色带到达柱底时，更换干净的接收器，收集 蓝色的色带。然后改为蒸馏水为洗脱剂更换接收器。当黄色的甲基橙色带到达柱底时， 再更换接收器，收集黄色的色带。
五、注 意 事 项
1.棉花主要是拖住氧化铝，不宜塞得太紧，否则影响流出速度
2.氧化铝与乙醇混合均匀即可，切勿捣碎成黏糊状，这样会使流出速度减慢 3.层析柱填装紧密与否，对分离效果影响很大。若柱中留有气泡或各部分松 紧不均匀时，会谱—次甲基蓝与甲基橙的分离
柱色谱蒸馏
例如混合物中有A物质、 物质 物质， 例如混合物中有 物质、B物质，物质的量分 物质 别为n 别为 A、nB。 设A物质易解吸，被吸附较难（易溶解在溶剂中） 物质易解吸， 物质易解吸 A物质通过吸附 物质通过吸附——溶解交换， 溶解交换， 物质通过吸附 溶解交换 被吸附量∶解吸量=1∶9； 被吸附量∶解吸量 ∶ ； B物质易被吸附、而难解吸（难溶解在溶剂中） 物质易被吸附、 物质易被吸附 而难解吸（难溶解在溶剂中 B物质被吸附量∶解吸量=9∶1。 物质被吸附量∶解吸量 ∶ 。 物质被吸附量
0.1 nA 0.9 nB 0.01 nA 0.81nB 0.0001nA 0.6561nB 0.00117nA 0.26973nB 0.9 nA 0.1 nB 0.099 nA 0.171 nB 0.010935nA 0.062775nB 0.891nA 0.019nB 0.0987795nA 0.0102555nB 0.8890155nA 0.0011395nB
• 注意事项： • 1、不要蒸干。 不要蒸干。 不要蒸干 • 2、温度计的水银球应正对蒸馏烧瓶支管口 处。 • 3、烧瓶中加入2～3粒沸石，的目是 防止 暴沸。（忘记加沸石需等温度降下后再加） • 4、尾接管最后安装。
第二次实验 柱色谱、蒸馏
柱色谱
一、实验目的 1、了解色谱法的基本原理及柱色谱的一 、 般操作方法； 般操作方法； 2、学习用色谱分离法分离色素混合物。 、学习用色谱分离法分离色素混合物。
二 实验原理
色谱分析是根据物质在吸附柱（固定相） 色谱分析是根据物质在吸附柱（固定相） 吸附柱 吸附能力大小、 冼脱剂（流动相） 上吸附能力大小、在冼脱剂（流动相） 溶解能力大小不同 不同， 中溶解能力大小不同，达到分离物质 的目的。 的目的。
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柱色谱实验教学中甲基橙和亚甲基蓝的分离和测定方法
柱色谱是色谱分析方法中的一种,由于柱色谱能够较大量地有效分离和提纯有机化合物,所以广泛应用在化学分析,药物研究,天然物质提取,医学研究等领域。
在大学有机实验教学中,往往都设有柱色谱实验课。
在实验教材中,一般采用中性氧化铝为固定相分离甲基橙和亚甲基蓝的混合物[1～3 ],但此方法分离的色谱带有扩散现象,影响分离效果;且实验中只有定性观察,不进行定量操作。
在本实验中,我们改用硅胶为固定相,选用了新的样品溶剂和洗脱剂,在很大程度上抑制了色带扩散,而且色谱带分明,大大提高了分离效果。
在实验中还增加了定量测定的内容,通过计算回收率,可对同学们的实验情况进行评判,使你们能够认真收集分离物质,不断地提出问题,调动了你们做实验的积极性。
1 实验材料和方法
1. 1 材料分光光度计(岛津UV22201) ,玻璃色谱柱。
柱色谱用硅胶(100～140 目) ,甲基橙(指示剂) ,亚甲基蓝(指示剂) ,H2O∶95 %乙醇= 1∶1 (A 液) ,0. 2mol·L - 1HCl∶95 %乙醇= 1∶1 (B 液) 。
1. 2 甲基橙标准曲线的绘制
用A 液做溶剂,配制甲基橙系列标准溶液,在λmax = 450nm处测得甲基橙吸光度(表1) 。
1. 3 亚甲基蓝标准曲线的绘制
用B 液做溶剂,配制亚甲基蓝系列标准溶液,在λmax = 661nm 处测得亚甲基蓝吸光度(表1) 。
1. 4 甲基橙和亚甲基蓝的分离
在玻璃色谱柱( d = 1cm , l = 10cm)底部用脱脂棉轻轻塞紧,称取4g 硅胶于小烧杯中,加入15mL 蒸馏水,用玻璃棒调好。
在柱中先加入1/ 2 柱高的蒸馏水,打开活塞,在搅动下把糊状硅胶加入柱中,同时调整活塞使流速为1 滴/ s。
当柱中液面将要露出硅胶面时,加入5mL左右的A 液,当硅胶面又将要露出时,关紧活塞,用移液管准确加入0. 50mL 以A 液做溶剂的混合液(含甲基橙和亚甲基蓝各为0. 400 g·L -1) 。
待此混合液将要渗入柱内时,立即用A 液洗脱,此时可以观察到有鲜明的黄、蓝两条色带形成。
黄色的甲基橙色带随洗脱剂的加入不断下移,而其顶部蓝色带不移动,当黄色带到达柱底部时,更换接受器,全部收集此黄色带,洗脱时间约10 min。
此后改用B 液做洗脱剂,这时可看到蓝色带开始下移,当亚甲基蓝色带到达底部时,更换接受器,全部收集此蓝色带,洗脱时间约30 min。
表1 甲基橙标准曲线数据和亚甲基蓝标准曲线数据
甲基橙亚甲基蓝
ρ/ mg· L–1 A ρ/ mg· L – 1 A
0. 000 0. 000 0. 000 0. 000
1. 970 0. 165 1.
110 0. 292
3. 939 0. 326 1. 666 0. 420
5. 909 0. 477 2. 221 0. 547
7. 878 0. 635 2. 776 0. 678
9. 848 0. 784 3. 331 0. 799
甲基橙的吸光度&浓度方程为A = kρ。
其中k = 0. 0804mg - 1·L。
亚甲基蓝的吸光度&浓度方程为A = kρ,其中k = 0. 2445mg - 1·L。
2 数据处理
把收集到的甲基橙溶液用A 液定容到25mL 的容量瓶中,并在450nm 处测定吸光度A值,甲基橙的回收率可从下公式计算得到:回收率% = ( A ×25 ×10 - 3) / ( km) 。
其中k = 0.0804mg - 1·L , m 为甲基橙在混合物上样中的实际量(mg) 。
把收集到的亚甲基蓝溶液用B 液定容到100mL 的容量瓶中,并在661nm 处测定吸光度A 值,亚甲基蓝的回收率可从下公式计算得到:回收率% = ( A ×100 ×10 - 3) / ( km) 。
其中k = 0. 2445mg - 1·L , m 为亚甲基蓝在混合物上样中的实际量(mg) 。
表2 甲基橙和亚甲基蓝回收率
实验号甲基橙A 回收率亚甲基蓝A 回收率
1 0. 629 97. 8 % 0. 476 97. 3 %
2 0. 628 97. 6 % 0. 474 96. 9 %
3 0. 630 97. 9 % 0. 478 97. 8 %
4 0. 633 98. 4 % 0. 476 97. 3 %
5 0. 62 9 97. 8 % 0. 479 98. 0 %
平均值97. 9 % 97. 5 %
3 讨论
(1) 柱色谱在分离样品时,一般要求柱高和直径之比是8∶1。
分离同样量的甲基橙和亚甲基蓝混合物需中性氧化铝6g[1 ]采用本实验方法需硅胶4g就能达到同样的分离效果。
(2) 在进行此实验前,需把待分离的混合物甲基橙和亚甲基蓝溶于溶剂中,下面是它们的结构式:
可以看到,它们结构中既有极性部分,又有非极性部分,通常实验教材提供的方法是用乙醇做溶剂,在实际实验时,导致甲基橙色带分散。
原因之一是,虽亚甲基蓝溶于乙醇,而甲基橙
不溶于乙醇等有机溶剂,但它们都可溶于水[4 ]。
本实验改用A液溶解样品的好处是:一方面能使混合物样品充分有效地溶解;另一方面,柱色谱实验时要求溶解样品的溶剂极性和溶解度不能太大,也不能太小,前者影响样品与吸附剂的吸附,后者使柱中样品色带分散。
实验证明:用A 液为溶剂,既增加了溶解度,又调整了极性,使甲基橙和亚甲基蓝能集中洗脱下来。
(3) 实验教材中以中性氧化铝做固定相,首先用95 %乙醇做洗脱剂
洗脱出亚甲基蓝,然后换用0. 1 mol·L - 1HCl 把甲基橙洗脱下来[1 ],或者换用水洗脱[2 ,3 ]。
结果它们的色带分散,不清晰,洗脱体积大。
原因是甲基橙(p k a = 3. 4)和亚甲基蓝(p k a1 = 4. 52 ,p k a2 = 5. 85)[4 ]都属于偏酸性物质,氧化铝对它们的吸附性大,需较长时间才能洗脱下来,因而产生扩散现象,使色带难于观察,也影响了分离后的处理工作。
本实验换用适用于分离酸性物质的硅胶做固定相,用A 液做洗脱剂,洗脱次序被重新调整,首先集中洗脱出甲基橙,之后改用B 液做洗脱剂,集中洗脱亚甲基蓝,从而保证这两种物质充分有效地分离。
(4) 亚甲基蓝被硅胶吸附后,只能用乙醇-水的电解质溶液方可使亚甲基蓝从硅胶柱上洗脱。
这一现象的解释为:亚甲基蓝分子中有一部分结构相当于季铵盐,以离子态存在,仅用水或极性较强的有机溶剂洗脱不能使它从偏酸性硅胶上解吸,而单独用电解质水溶液虽然增强了电解质的离子与亚甲基蓝分子中的季铵离子部分的作用力,但与亚甲基蓝结构中的非极性部分作用力弱,故洗脱能力弱,这样单独用电解质水溶液也达不到有效洗脱的目的,所以只有在有机溶剂中加些电解质水溶液,才能同时满足上述要求。
电解质可以选用HCl、NH4Cl、NH4NO3、(NH4) 2SO4、NaCl、Na2SO4、ZnSO4、Na2CO3等物质,因为亚甲基蓝结构中有Cl-,考虑到不带入杂质离子,所以选用B 液做亚甲基蓝的洗脱剂。
(5) 在柱色谱实验教学中,由于缺少对学生实验情况的评判标准,学生实验开始时较认真,当混合物在柱中被分离开,认为达到了实验要
求, 往往就不仔细收集柱中分离出的物质。
我们针对这一方面的不足,设计用移液管定量上样,对收集到的物质测定吸光度,然后根据标我们针对这一方面的不足,设计用移液管定量上样,对收集到的物质测定吸光度,然后根据标准曲线,计算每一种物质的回收率。
由于本实验在装柱、上样、洗脱和收集等项操作之外还训练学生的定量操作,对于培养他们实验中精益求精的科学态度,起到了较好的效果。