2009年南京大学(生物化学二)考研真题

2009年南京大学（生物化学二）考研真题
(总分：110.00，做题时间：90分钟)
一、判断题请判断下列各题正误。

(总题数：20，分数：40.00)
1.酶底物的类似物和过渡态的类似物通常都是酶的竞争性抑制剂。

（分数：2.00）
A.正确√
B.错误
解析：
2.如果有一种试剂只能与脱氧的血红蛋白结合，那么在血红蛋白溶液中加入该试剂以后，将会提高血红蛋白释放氧气的能力。

（分数：2.00）
A.正确√
B.错误
解析：
3.同一种激素有时可以产生完全相反的生理作用。

（分数：2.00）
A.正确
B.错误√
解析：解析：同一种激素不可以产生完全相反的生理作用，有拮抗作用的激素可以产生完全相反昀生理作用。

4.限定一种别构酶具有正协同效应，那么此酶正别构效应物的存在将增强它的正协同效应。

（分数：2.00）
A.正确
B.错误√
解析：解析：一分子配体与酶结合后促进另一分子配体与酶结合为正协同效应。

所以若限定一种别构酶具有正协同效应，那么此酶正别构效应物的存在将减弱它的正协同效应。

相反，此酶的正别构抑制物的存在将增强它的正协同效应。

5.甘二醇曾被作为牙膏的添加剂，后来发现它对人体有毒，因为它进入体内能够抑制乙醇脱氢酶的活性。

（分数：2.00）
A.正确
B.错误√
解析：解析：甘二醇曾被作为牙膏的添加剂，后来发现它对人体有毒，因为它的毒性来自人体摄入后，会代谢为肾毒性极强的草酸，导致急性肾衰竭症状。

6.所有的丝氨酸蛋白酶都具有相同的催化三元体，所以它们都属于同源蛋白。

（分数：2.00）
A.正确
B.错误√
解析：解析：同源蛋白是指在不同生物体内行使相同或相似功能的蛋白质。

虽然所有的丝氨酸蛋白酶都具有相同的催化三元体，但是它们各自可以在同一生物体内具有不同的作用。

7.辅酶Ⅰ、辅酶Ⅱ和FAD和CoA一样，其分子结构中都含有腺苷酸。

（分数：2.00）
A.正确√
B.错误
解析：
8.构成呼吸链的四种复合体均含有铁硫蛋白。

（分数：2.00）
A.正确
B.错误√
解析：解析：构成呼吸链的四种复合物中只有复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ含有铁硫蛋白，复合物Ⅳ不含有铁硫蛋白。

9.糖酵解途径的所有中间代谢物都是磷酸化的有机分子。

（分数：2.00）
A.正确√
B.错误
解析：
10.如果一个酶促反应的△G" 0是一个大的负值，那么这个反应在细胞内一定是一个不可逆反应。

（分数：2.00）
A.正确
B.错误√
解析：解析：△G" 0是标准自由能变化，即在标准条件：25℃(298K)、1 atm(一个大气压)、反应物和产物的浓度都是1．0 mol／L，所得到的自由能变化。

但细胞内不满足这个条件，所以如果一个酶促反应的△G" 0是一个大的负值，那么这个反应在细胞内也不一定是一个不可逆反应。

11.cAMP、ADP和ATP都是高能磷酸化合物。

（分数：2.00）
A.正确√
B.错误
解析：
12.动物糖异生的前体包括丙酮酸、甘油、丙酸和降植烷酸。

（分数：2.00）
A.正确√
B.错误
解析：
13.P700和P680的化学本质都是特殊的叶绿素a。

（分数：2.00）
A.正确√
B.错误
解析：
14.肝细胞因为缺乏硫解酶而不能利用酮体。

（分数：2.00）
A.正确
B.错误√
解析：解析：肝细胞是因为缺少将乙酰乙酸转化为乙酰乙酰-CoA的酰基化酶而不能利用酮体，而不是因为缺乏硫解酶。

15.脂溶性维生素和胆固醇的生物合成的前体都是活化的异戊二烯。

（分数：2.00）
A.正确√
B.错误
解析：
16.原核生物和真核生物嘧啶核苷酸从头合成的限速酶都是氨甲酰磷酸合成酶。

（分数：2.00）
A.正确
B.错误√
解析：解析：原核生物嘧啶核苷酸从头合成的限速酶是天冬氨酸转氨甲酰酶；而真核生物嘧啶核苷酸从头合成的限速酶是氨甲酰磷酸合成酶II。

17.DNA分子上的5一甲基胞嘧啶的脱氨基反应比胞嘧啶的脱氨基反应更容易引起突变。

（分数：2.00）
A.正确√
B.错误
解析：
18.内含子在剪接反应中被切除，所以一种蛋白质的基因如果在内含子内发主突变不会影响到这种蛋白质的功能。

（分数：2.00）
A.正确
B.错误√
解析：解析：在mRNA剪切过程中，如内含子中分支点或内含子与外显子拼接处发生碱基的改变，往往会造成剪切点改变，从而导致编码的蛋白质功能异常。

19.内含肽被释放后可以作为一种特殊的核酸内切酶，催化自身的DNA转移到其他基因内部，导致该基因不能产生有功能的蛋白质产物。

（分数：2.00）
A.正确
B.错误√
解析：解析：内含肽被释放后可以作为归巢核酸内切酶，可以介导其编码序列归巢到不含该序列的等位基因中，但该基因还是可以产生有功能的蛋白质产物。

20.指导蛋白质定位与分拣的信号肽序列在蛋白质到达特定位点后一般都会被特定的酶识别并切除。

（分数：2.00）
A.正确√
B.错误
解析：
二、单项选择题(总题数：21，分数：42.00)
21.单项选择题下列各题的备选答案中，只有一个是符合题意的。

（分数：2.00）
__________________________________________________________________________________________ 解析：
22.能够形成Schifr碱参与共价催化的氨基酸残基是( )。

（分数：2.00）
A.P
B.E
C.R
D.K √
E.Y
解析：
23.最容易出现在蛋白质内部的一对氨基酸残基是( )。

（分数：2.00）
A.Arg：Lys
B.Ser：Gly
C.Arg：Asp √
D.Asp：Asp
E.TyT：Lys
解析：
24.Hsp70具有的酶活性是( )。

（分数：2.00）
A.激酶
B.蛋白酶
C.ATP酶√
D.异构酶
E.没有酶活性
解析：
25.不可能参与一种酶的催化机制的氨基酸残基是( )。

（分数：2.00）
A.Lys
B.Glu
C.Cys
D.Ile √
E.Tyr
解析：
26.在酶活性的各种调节饥制中，调节速度最快的是( )。

（分数：2.00）
A.酶的合成
B.酶的水解
C.别构调节√
D.共价修饰
E.水解激活
解析：
27.构成蛋白顺的氨基酸残基中哪一种具有内在的荧光?( )
（分数：2.00）
A.Phe
B.Tyr
C.Trp √
D.Pro
E.His
解析：
28.按照氨基酸侧链疏水性递增的顺序，下列六种氨基酸残基的正确排序应该是( )。

（分数：2.00）
A.REMFVI √
B.REMIVF
C.IVFMER
D.ERFMVI
E.FEMVIR
解析：
29.cAMP受体蛋白(CRP)的一种突变使其失去了与DNA结合的能力，该突变菌株( )。

（分数：2.00）
A.只有在高葡萄糖浓度下，lacZ才能高水平表达
B.只有在低葡萄糖浓度下，lac7才能高水平表达
C.只有在高乳糖、低葡萄糖的情况下，lacZ才能高水平表达
D.即使在高乳糖、低葡萄糖的情况下，lacZ也不能高水平表达√
解析：
30.组蛋白的乙酰化修饰对真核细胞的基因表达具有非常大的影响，受乙酰化修饰的氨基酸残基通常是( )。

（分数：2.00）
A.Arg
B.Cys
C.Ser
D.Thr
E.Lys √
解析：
31.细菌细胞内的质粒DNA的存在形式是( )。

（分数：2.00）
A.共价闭环负超螺旋√
B.共价闭环正超螺旋
C.共价闭环松弛型
D.线性负超螺旋
E.线性互迢螺旋
解析：
32.最可能形成z-DNA的序列是( )。

（分数：2.00）
A.5’-ATATATATATATATATATAT-3’ 3"一TATATATATATATATATATA-5’
B.5’-AAAAAAAAAAAAAAAAAAAA-3’ 3"-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTT-5’
C.5’-GCGCG(2GCGCGCCGCGCGCG一3’ 3"-CGCGCGCGCGCGCGCGCGCG-5’√
D.5’-GGGGGGGGGGGGGGGGGGGG一3’ 3"-CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC一5’
解析：
33.序列特异性DNA结合蛋白与DNA结合的主要作用力是( )。

（分数：2.00）
A.离子键
B.氢键√
C.疏水键
D.范德华力
E.配位键
解析：
34.以下是五种由不同序列构成的DNA双螺旋，在相同的条件下进行热变性，然后再通过缓慢冷却进行复性。

你认为复性最快的序列是( )。

（分数：2.00）
A.ATATATAT √
B.AATATTAT
C.AAAATTTA
D.AAAATTTT
E.ATAAATTA
解析：
35.植物细胞有、动物细胞没有的酶是( )。

（分数：2.00）
A.柠檬酸合酶
B.顺乌头酸酶
C.异柠檬酸裂解酶√
D.异柠檬酸脱氢酶
E.苹果酸脱氢酶
解析：
36.从葡萄糖合成糖原需要消耗的NTP是( )。

（分数：2.00）
A.UTP
B.ATP
C.CFP
D.GTP
E.ATP和UTP √
解析：
37.葡萄糖的完全氧比大概只有40％的能量被用来合成ATP，其余60％的能量的去处是( )。

（分数：2.00）
A.被还原成NADH
B.变成了脂肪
C.变成了氨基酸
D.转变成其他有机化合物
E.变成了热√
解析：
38.如果大肠杆菌DNA聚合酶I的5-外切核酸酶的活性丧失，那么大肠杆菌将( )。

（分数：2.00）
A.更容易发生突变
B.一切正常
C.不能生存√
D.能够生存，但复制出来的DNA分子含有共阶相连的RNA
E.对紫外线的照射特别敏感
解析：
39.RNA聚合酶II最大亚基的CTD富含( )。

（分数：2.00）
A.碱性氨基酸
B.酸性氨基酸
C.疏水氨基酸
D.羟基氨基酸√
E.GIy
解析：
40.一种抑制剂能够与核塘体的E部位结合，如果将这种抑制剂加到无细胞翻译系统中，那么导致( )。

（分数：2.00）
A.翻译不能起始
B.氨酰-tRNA不能进入A部位
C.肽键不能形成
D.只能合成二肽√
E.翻译不受影响
解析：
41.HaraldZurHausen、FrancoiseBarreSinoussi和LucMontagnier获得了2008年诺贝尔医学、生理学的奖。

他们的主要贡献是( )。

（分数：2.00）
A.发现了导致宫颈癌的HPV和导致乙肝的HBV
B.发现了导致疯牛病的朊病毒和导致艾滋病的HIV
C.发现了导致疯牛病的朊病毒和导致宫颈癌的HPV
D.发现了导致宫颈癌的HPV和导致艾滋病的HIV √
E.发现了导致疯牛病的朊病毒和导致乙肝的HBV
解析：
三、填空题(总题数：6，分数：12.00)
42.填空题请完成下列各题，在各题的空处填入恰当的答案。

（分数：2.00）
__________________________________________________________________________________________ 解析：
43.蛋白质一般在_______nm有最大光吸收，核酸在_______nm有最大光吸收，小肽在_______nm有最大光吸收。

（分数：2.00）
__________________________________________________________________________________________ 正确答案：(正确答案：280 260 230)
解析：
44.根据蛋白质相对分子质量大小分离／分析蛋白质的方法主要有_______和_______。

（分数：2.00）
__________________________________________________________________________________________ 正确答案：(正确答案：SDS—PAGE 凝胶过滤层析)
解析：
45.催化糖酵解途径中三步不可逆反应的酶分别是_______、_______和_______。

（分数：2.00）
__________________________________________________________________________________________ 正确答案：(正确答案：己糖激酶磷酸果糖激酶丙酮酸激酶)
解析：
46.细胞合成ATP的三种手段分别是_______、_______和_______。

（分数：2.00）
__________________________________________________________________________________________ 正确答案：(正确答案：底物水平磷酸化氧化磷酸化光合磷酸化)
解析：
47.在蛋白质翻译过程中有多种蛋白质因子参与，其中属于G蛋白的蛋白质因子有_______、_______、
_______和_______。

（分数：2.00）
__________________________________________________________________________________________ 正确答案：(正确答案：IF-2 EF-G EF-Tu RF-3)
解析：
四、简答题(总题数：8，分数：16.00)
48.蛋白质的正确折叠受哪些因素的影响?哪些性质可以帮助我们判断蛋白质是否正确折叠?
（分数：2.00）
__________________________________________________________________________________________ 正确答案：(正确答案：(1)影响蛋白质的正确折叠因素有蛋白质本身的一级结构、分子伴侣、二硫键异构酶和脯氨酰顺反异构酶。

蛋白质的基本单位为氨基酸，而蛋白质的一级结构指的就是其氨基酸序列，蛋白质会由所含氨基酸残基的亲水性、疏水性、带正电、带负电等等特性通过残基问的相互作用而折叠成立体的三级结构。

蛋白质在合成时，分子伴侣可逆地与未折叠肽段的疏水部分结合随后松开，如此重复进行可防止错误的聚集发生，使肽链正确折叠。

分子伴侣也可与错误聚集的肽段结合，使之解聚后，再诱导其正确折叠。

分子伴侣对蛋白质分子中二硫键的正确形成，起到重要作用。

蛋白质分子中的二硫键与新生肽段的折叠密切相关，对维系蛋白质分子的结构稳定性和功能发挥也有重要作用。

二硫键异构酶可以催化二硫键的形成。

而脯氨酰顺反异构酶催化正确脯氨酸异构体的形成可以加速蛋白质的折叠。

(2)没有正确折叠的蛋白质一般溶解度低、容易发生聚集、活性降低或者完全丧失，也可以通过荧光光谱、圆二色性等物理手段检测。

)
解析：
49.AMP-PNP(结构式见图附录6-1)是ATP的结构类似物。

AMP-PNP可以抑制很多以ATP为底物的激酶的活性，却是RNA聚合酶的正常底物，请解释原因。

判断AMP-PNP属于什么类型的抑制剂并说明理由。

用AMP-PNP
代替ATP参与RNA聚合酶催化的转录，对转录结果会有什么影响
（分数：2.00）
__________________________________________________________________________________________ 正确答案：(正确答案：(1)在以ATP为底物的激酶催化反应中，被转移的磷酸基团是γ磷酸根，即ATP中受到亲核进攻的是磷酸根，ADP为离去基团。

AMP-PNP是ATP的结构相似物。

AMP-PNP中β和γ磷酸基团之间换成了难以断裂的P-N键，使得ADP成为一个极差的离去基团，导致反应受到抑制。

故AMP-PNP可以抑制很多以ATP为底物的激酶的活性。

与激酶不同的是，RNA聚合酶催化的反应中受到亲核进攻的是α磷酸基团，则即使AMP-PNP中β和γ磷酸基团之间的P—N键不同于AMP，也不会影响到反应，所以AMP-PNP 是RNA聚合酶的正常底物。

(2)由于在正常的情况下RNA聚合酶以ATP为底物，释放出的焦磷酸根很容易在焦磷酸酶的催化下发生水解，释放出大量的自由能，使RNA合成成为不可逆反应。

如果RNA聚合酶以
AMP-PNP为底物，释放出来的是PNP，则很难水解，从而不利于RNA的合成。

用AMP—PNP代替ATP参与RNA 聚合酶催化的转录将影响RNA的合成。

)
解析：
50.用两组实验大鼠进行试验：第一组每天喂食正庚酸(7：0)作为唯一碳源；第二组喂食正辛酸(8：0)。

一个月之后，第一组大鼠表现得很健康，体重还有增加；第二组无力，因肌肉萎缩而体重减轻。

试解释导致这两组大鼠出现这些差异的原因。

（分数：2.00）
__________________________________________________________________________________________ 正确答案：(正确答案：正庚酸是奇数脂肪酸，而正辛酸是偶数脂肪酸。

奇数脂肪酸通过β一氧化产生乙酰一CoA和丙二酸单酰-CoA，而偶数脂肪酸通过β一氧化只能产生乙酰-CoA。

与乙酰-CoA不同的是，丙二酸单酰一CoA可以转变成糖异生和氨基酸合成的前体——草酰乙酸，维持了体内血糖的稳定，使ATP的产生正常进行，所以喂食正庚酸的大鼠表现得正常。

而喂食正辛酸的大鼠，正辛酸只能通过β-氧化产生乙酰-CoA，然后被彻底氧化分解，不能从乙酰一CoA净合成碳水化合物和氨基酸从辛酸合成葡萄糖，为了维持血糖浓度的稳定，肌肉蛋白被分解提高生糖氨基酸怍为糖异生的原料，从而导致肌肉萎缩，体重减轻。

因此，导致这两组大鼠出现这些筹异。

)
解析：
51.大肠杆菌的Dam甲基化酶活性过高或丧失活性都可以导致大肠杆菌突变率提高，为什么?哪一种情形引起的突变率更高，为什么?
（分数：2.00）
__________________________________________________________________________________________ 正确答案：(正确答案：(1)Dam甲基化酶可以使DNA的GATC序列中腺嘌呤N6位甲基化，形成N6-甲基嘌呤。

新合成的子代DNA分子中，亲代是甲基化的，新合成的链则还没来得及甲基化。

根据甲基化程度的不同，错配修复系统就能识别出亲代链和子代链，而当子代链发生错配时，能被识别出来并进行修复。

若Dam甲基化酶活性过高，会使新合成的子链立刻发生甲基化修饰，由于错配修复系统不能识别甲基化的链，子链上错配的碱基难以被错配修复系统修复而导致大肠杆菌突变率提高。

而如果Dam甲基化酶没有活性，DNA 复制过程中的亲代链和子代链都不会发生甲基化，于是错配修复系统只能随机地选择一条链进行错配修复的对象而另一条作为修复的模板，若错配系统错误识别了亲代链，以错配的子代链为模板修复亲代链，则大肠杆菌就会发生突变。

(2)显然如果Dam甲基化酶没有活性时，只要错配修复系统正确识别了子代链，就有可能会被正确修复，而如果Dam甲基化酶活性过高，则一定不能被正确修复，故Dam甲基化酶活性过高引起的突变率更高。

)
解析：
52.人GM-CSF是由127个氨基酸组成的生长因子，能够调节成熟的粒细胞和巨噬细胞的生物功能，GM-CSF 能够治疗髓性再生障碍、粒白细胞低下、化学治疗或放射治疗引起的骨髓造血抑制等疾病治疗药物。

人GM-CSFcDNA编码序列中G／C含量为81．5％。

本实验室拟用大肠杆菌为表达体系，构建重组人GM-CSF高效表达菌株，以实现GM-CSF的基因工程生产。

请你设计实验流程，实现人GM-CSF的高效表达和验证，并请简要注明各关建流程环节的目的或依据。

（分数：2.00）
__________________________________________________________________________________________ 正确答案：(正确答案：(1)天然人GM-CSF成熟基因5’端的碱基含量较高，且编码前几个氨基酸的密码子在大肠杆菌中表达很低。

可以在编码成熟蛋白的基因序列前引入EcoR I酶切位点和启始密码子ATG，并在不改变蛋白氨基酸顺序的前提下，将核苷酸中的一些G和C改成A和T，降低了基因5’端的GC含量，又使改变后的密码子为大肠杆菌偏爱。

以人外周血单核细胞获得的总RNA为模板，选择合适的特异性引物，进行PCR扩增反应得到修饰完整的人GM-CSF成熟肽基因序列。

(2)将扩增的PCR产物回收纯化，将人GM-CSF 片段插入pMD18．T克隆载体的EcoR 1/Pst I酶切位点，转化大肠杆菌XL 10gold后提取质粒。

用PCR反应鉴定含有插入片段的克隆，并挑取含有插入片段的克隆。

经EcoRL／PstI双酶切鉴定后，进行序列分析。

(3)将PCR扩增并经测序鉴定成熟肽的人GM-CSF基因插入温度诱导型表达质粒pDH，得到表达载体pDH／rhGM-CSF，将pDH／rhGM-CSF转化入大肠杆菌。

(4)挑选克隆，接种培养并回收菌体，进行SDS-PAGE凝胶电泳分析。

(5)Western blot分析或活性测定。

)
解析：
53.在哺乳动物，许多基因是呈时空特异性表达的，如Lck基因在T细胞发育的特定时期表达。

每一个细胞都含有一个生物体完整的一套基因，为什么这些基因不是在所有的时间在所有的组织细胞中都转录表达，而呈时空特异性转录表达?你认为有哪些主要因素发挥作用。

（分数：2.00）
__________________________________________________________________________________________
正确答案：(正确答案：在多细胞生物从受精卵到组织、器官形成的各个不同发育阶段，相应基因严格按一定时间顺序开启或关闭，表现为与分化、发育阶段一致的时间性，而呈时间特异性表达。

在多细胞生物个体某一发育、生长阶段，同一基因产物在不同的组织器官表达多少是不一样的；在同一生长阶段，不同的基因表达产物在不同的组织、器官分布也不完全相同。

在个体生长全过程，某种基因产物在个体按不同组织空间顺序出现，呈空间特异性表达。

发挥作用的主要因素：①染色质的结构。

染色质结构在特定组织中的开放，则决定了时空间特异性表达；②增强子／沉默子的活化。

增强子是远离转录起始点，决定基因的时空特异性表达，而某些基因含有负性调节元件，当其结合特异蛋白因子时，沉默子可以对基因转录起阻遏作用；③多个转录因子的相互协同作用。

转录因子能与真核基因启动子区域中的顺式作用元件发生特异性结合，通过它们之间以及与其他相关蛋白之间的相互作用，激活或抑制转录，从而保证目的基因以特定的强度、在特定的时间与空间表达；④环境的调控。

有一些基因表达极易受环境变化的影响，在特定的环境信号刺激下表现为开放或关闭，从而在特定的时空下表达；⑤翻译。

基因表达就是基因转录及翻译的过程，所以翻译对时空特异性表达也发挥着作用。

)
解析：
54.进行蛋白质分子SDS-PAGE电泳分析的目的是什么?进行蛋白质分子SDS-PAGE电泳分析时，上样缓冲液中有哪些主要成分?如果分别缺少这些成分，电泳行为会怎样?请予说明。

（分数：2.00）
__________________________________________________________________________________________
正确答案：(正确答案：(1)进行蛋白质分子SDS—PAGE电泳目的是分离蛋白质，也可以测定蛋白质分子相对分子质量的大小。

(2)上样缓冲液中的主要成分有Tris-HCl、甘油、SDS、β-巯基乙醇、溴酚蓝、去离子水。

Tris-HCl为缓冲溶液，溶解蛋白质，调节样品的pH值，缺少它不能使样品处在适当的pH环境中是蛋白质在电场中浓缩，得不到电泳条带；甘油可以加大样品密度，使样品密度大于TAE，从而沉降到点样孔中，缺少它会使样品飘出点样孔；SDS主要是促使聚合酶变性，因为没有除尽的聚合酶会结合在DNA
双链上影响它的迁移速率，缺少它提取的蛋白质将会降解；β-巯基乙醇催化蛋白质解聚，解离成亚基或单个肽链，缺少它蛋白质分子：不能打开，仍呈聚体状态或者球状结构；溴酚蓝起到指示的作用，显示电泳的进程，以便适时终止电泳，缺少它将不能指示电泳进程，不知何时终止电泳.)
解析：
55.凝胶过滤层析可以用以判断蛋白质分子的大小。

本实验室用凝胶过滤分析了三种相对分子质量标准蛋白质，其保留体积分别为51．54ml、64．6ml、78．7ml，相对分子质量分别为：ZZ：22KD、Cvto-chromeC：12KD、：BSA：66．6KD。

请问这三种蛋白质的保留体积分别为多少?在上述基础上，我们又用凝胶过滤分析了x蛋白质及其突变体X-F25Y(简称X’)。

请问如图附录6-2层析图中X蛋白相对分子质量大约为多少?x’的相对分子质量大约是多少?为什么对于x’蛋白质，一个氨基酸突变会使得X蛋白质相对分子质量发生如
此大的变化?你能给一个合理的解释吗
（分数：2.00）
__________________________________________________________________________________________
正确答案：(正确答案：凝胶过滤层析是利用具有网状结构的凝胶颗粒作为分子筛，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离的方法。

当蛋白混合物溶液通过层析柱时，大分子物质被排除在凝胶颗粒外部，进入凝胶颗粒间的缝隙，用洗脱缓冲液洗脱时流出的速度快，先被分离出来；小分子物质能进入凝胶颗粒微孔内部，洗脱时流出的速度慢，后被分离出来。

将几种已知的不同相对分子质量的蛋白质混合液经凝胶过滤层析分离，其保留体积(V e )对相对分子质量的对数(lgM r )作图得到一条直线，并成反比，所以洗脱体积越大的，相对分子质量越小。

因此，相对分子质量为66．6KD的BSA洗脱体积为51．54ml；相对分子质量为22KD的ZZ洗脱体积为64．6ml；相对分子质量为12KD的Cytochrome C洗脱体积为78．7ml。

由上面三组数据，留体积(V e )对相对分子质量的对数(lgM r )作图，可得到洗脱体积与相对分子质量的线性关系式：V e=114．96—35．3461gM r。

由图可得出x的洗脱体积约为36．6ml，X’的洗脱体积约为64．3ml，
则由关系式可算出，X的相对分子质量约为164．8KD，X’的相对分子质量约为27．1KD。

对于X"蛋白质，一个氨基酸突变会使得X蛋白质相对分子质量发生如此大的变化，是因为x是聚体形式，相对分子量很大，而突变一个氨基酸成x’后，变成单体形式，所以相对分子质量很小。

)
解析：。