11 第七章 环境内分泌干扰物资料

2.男性精子异常且不育患者增加，男子女性化程度加剧
从1940年到1990年这50年间，人类的精子密度下降了50%
3.诱发女性生殖系统问题 性早熟、月经失调、子宫内膜炎症、不孕症、卵巢癌、乳 腺癌等增加
现在全球每年约有50万名妇女死于乳腺癌，且发病率以每年5％～20％ 的速度上升；20世纪60年代，美国女性一生中乳腺癌的发生几率仅为1/20 ，而20世纪90年代上升为1/8
人雌激素受体DNA
β-半乳糖苷酶结构基因上游雌激素反应元件
待测物质 有颜色显示 无颜色显示
2.标志基因鉴定 • (2) 质粒载体转染法
构建含有由雌激素、雄激素或视黄酸应答的DNA 加强元件的激素诱导控制下的莹虫酶基因的标志 质粒载体，然后将这些载体短暂转染入含有相应 受体的人类卵巢瘤BG-1细胞系中，显示它们同各 自激素反应诱导莹虫酶的能力 。
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（一）体内实验
动物实验的优缺点：
优点：1.最具真实性
2.最具说服力
缺点：1.实验过程繁琐 2.实验结果受动物年龄、性别、品系、个 体差别及取样误差等影响 3.对环境低浓度暴露不易获得正确结果
（二）体外实验
1.雌激素受体竞争性抑制法
基于ELISA的受体竞争结合法检测环境雌激素 方法：采用免疫测定介导受体竞争结合试验定量检测环境雌激素 将17β-雌二醇-BSA固定在微孔板上，环境雌激素与微孔板上的17β雌二醇-BSA竞争性的与雌激素受体结合，与微孔板上17β-雌二醇BSA结合的受体与雌激素受体的抗体、雌激素受体抗体的二抗形成 一个三明治形式的复合物，通过显色剂显色，最后用比色法对试 验结果进行定量。 结果：整个反应中环境雌激素浓度越高，溶液的吸光度值的变化 就越小，环境雌激素的浓度与吸光度值成负相关。
有机磷、有机氯农药可以诱导肝脏甾醇羟化酶、微粒 体酶，从而加速内源性激素的代谢和排泄。
艾氏剂和狄氏剂可使大鼠的谷丙转氨酶和醛缩酶的活 性升高 DDT对ATP酶有抑制作用。
(五) 影响机体免疫细胞对抗原的识别
人的免疫系统在环境激素的长期作用下，会 发生免疫失调和病理反应。
Pb、Hg可使机体产生过敏性发病综合症； 一些杀虫剂可引起免疫性溶血性贫血。
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研究范例Leon E. Gray, Jr et al. / TOXICOLOGICAL
SCIENCES 123(1), 206–216 (2011)
With the drug concentration increased, testosterone levels gradually decline.
环境中存在着一类化学物质，当进入动物体内之后
能起到干扰体内正常激素分泌的作用，从而影响生 1997年《掠夺未来》, 提出了内分泌干扰(endocrine 殖功能，导致恶性肿瘤的产生，这类化学物质即所 disrupting，ED)物质的概念。 谓的“外源性内分泌干扰物质”
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（二）内分泌干扰物的定义
内分泌干扰物质是指可通过干扰生物或人为保持自身 平衡和调节发育过程而在体内产生的天然激素的合成、 分泌、运输、结合、反应和代谢等，从而对生物或人 体的生殖、神经和免疫系统等的功能产生影响的外源 性化学物质。 —— 美国 EPA的定义 内分泌调节物：引起完好无损生物体或其后代中内分 泌功能变化不利影响的外源物质，它们主要是通过人 类的生产和生活排放到环境中的污染物，又可以称之 为环境激素。 ——欧盟定义
1.动物喂养实验
2.啮齿动物切除卵巢后子宫肥大实验或动情期
实验
（二）体外实验
1.雌激素受体竞争性抑制法
2.标志基因鉴定
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（一）体内实验
1.动物喂养实验
后代不育情况 EDCs
妊娠鼠 皮下注射 雄性子代 成年后睾丸发育情况
生殖腺损害情况
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2.啮齿类动物切除卵巢后子宫肥大实验或动情 期实验
通过测定EDCs对动物是否具有促进子宫生长 的作用来评价其雌激素活性。 该种实验直接作用于雌激素效应器，可以直 接显示化学物的类雌激素功能。
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(三)环境内分泌干扰物的分类
天然雌激素 雌二醇、雌酮、雌三醇
天然 化学物
植物雌激素 真菌雌激素
EDCs
人工合成 化学物
大豆异黄酮 香豆雌酚 玉米赤霉烯酮 己烯雌酚、己烷雌酚 炔雌醇、炔雌醚等 二噁英、多氯联苯 双酚A、邻苯二甲 酸酯类等
人工合成的雌激素
环境化学污染物
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按照EDCs的干扰功能分类
（二）影响神经递质的传导，毒害神经系统
• EDCs影响大脑皮层、下丘脑、脑垂体等对激素的 调节作用，导致激素合成、释放、运输异常。 如有机磷农药能与体内胆碱酯酶结合，形成稳 定的磷酸化胆碱酯酶，使胆碱酯酶失去活性，丧失 分解乙酰胆碱的能力，造成体内胆碱的蓄积，从而 引起神经传导功能紊乱，出现一系列中毒症状。
，出生率下降； 1970年：安大略湖80%鸥鸟死亡； 1980年：佛罗里达鳄鱼发育异常； 1988年：北欧大批海豹死亡； 上世纪90年代早期：地中海大批海豚死亡
（二）对野生生物的危害
1998年发现多只北极熊生殖器官变异； 1994年4月，日本7条河流中的雄鲤鱼有1/4雌性化；
Missing back left leg
Effect of DEHP on testicular development.
Testis were malformation and stunting after DINP treatment
Left: Maternal treatment with corn oil 0.75 g/kg/day Right: Maternal treatment with DINP 0.75 g/kg/day
（六）致癌、致畸作用
• 一些环境激素可作用于染色体，使其数目或结构发生变化， 改变某些基因的序列，使得组织、细胞生长失控，产生肿瘤 ，如发生在生殖细胞，则可造成流产、畸胎或遗传性疾病； 胎儿出生后体细胞遗传物质的突变易引起肿瘤。
DEHP处理导致的子代小鼠无尾畸形 右边个体为对照组
箭头所示的红点处为 本应长尾的位置
Extra back right leg
Tail not absorbed
1996年夏天在明尼苏达州发现的畸形青蛙
三、环境内分泌干扰物的作用机制
• EDCs能干扰体内內源激素的合成、分泌、运输 、结合、代谢，影响内分泌系统的正常生理功 能，而内分泌系统紊乱又使免疫系统和中枢神 经系统受到伤害。
（一）影响机体正常内分泌功能的机制
这些化学品的效应与β-雌二醇（E2）等内源雌激素相似， 包括DDT、烷基苯酚、双酚A等
（一）影响机体正常内分泌功能的机制
2：与生物体内激素竞争靶细胞上的受体
通过竞争的结果，环境激素与靶细胞上的受体结 合，减少受体对天然激素的吸附或阻碍天然激素与受 体结合，从而减少了天然激素的作用。天然激素与受 体的结合受环境激素的阻碍，进而影响激素信号在细 胞、器官、组织的传递，导致机体功能失调。
研究范例Leon E. Gray, Jr et al. / TOXICOLOGICAL
SCIENCES 123(1), 206–216 (2011)
Dose-Response Assessment of Fetal Testosterone Production and Gene Expression Levels in Rat Testes Following In Utero Exposure to DEHP, DIBP, DIHP,DINP
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研究范例Leon E. Gray, Jr et al. / TOXICOLOGICAL
SCIENCES 123(1), 206–216 (2011)
Insl3:胰岛素样因子3 StAR:类固醇激素合成急性调节蛋白 Cyp11A:细胞色素P450亚家族成员
四、环境内分泌干扰物筛检方法
（一）体内实验
研究范例 L. Earl Gray Jr et al. / TOXICOLOGICAL
SCIENCES 58, 350–365 (2000)
Perinatal Exposure to the Phthalates DEHP, BBP, and DINP, but Not DEP, DMP, or DOTP, Alters Sexual Differentiation of the Male Rat
（一）影响机体正常内分泌功能的机制
3：有些内分泌干扰物可产生类似雌激素的效应，却 与雌激素受体的信号传递途径无关。 芳烃受体（AhR）即为性激素受体外的一种信号传 递途径，它可以与许多环境污染物如二恶英和呋 喃结合，产生抗雌激素活性，包括增加雌激素代 谢（降低内源雌激素水平）、降低雌激素受体ER 的结合活性以及降低ER介导的基因表达等。
(三)作用于生物体的生殖腺，影响性激素分泌
• 金属铅和许多农药都对睾丸有较强的毒性作用； • 在雌性生殖系统中，环境激素可以影响卵泡的发育 和成熟、性激素的合成与释放。
有机氯农药能使鸟类产蛋数目减少，蛋壳变薄和胚 胎不易发育。
(四) 作用于生物体的肝脏肾脏
环境毒物通过影响肝肾代谢功能，改变体内的激 素水平。
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control
DINP
Compared to control testes, this DINP-treated male right testes display atrophic tubules that lack any evidence of spermatogenesis. In addition, the lumen of both the left and right caudae epididymidis from this male contain cellular debris and reduced numbers of sperm.
④糖皮质激素干扰物
②甲状腺干扰物
EDCs
……
⑤胰岛素干扰物
③雄激素干扰物
⑥肾上腺皮质激素干扰物
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按 照 对 的 认 识 程 度 分 类
EDCs
二、环境内分泌干扰物的危害
生殖异常 致癌致畸
其他 如阻止植物固氮
危害
动物雌性化现象
免疫毒性
神经毒性
(一)对人体健康的影响
1.男婴出生率下降
自20世纪70年代以来，加拿大男婴的出生率下降了0.22%，美国下降了 0.1%。
1.与受体直接结合
（1）与雄激素受体结合，表现出抗雄激素效应
烯菌酮、杀虫剂［N-（3、5-二氯苯基）-1、2-二甲基环 丙烷-1、2-二甲酰亚胺］和p、p’-DDE[2,2-双-(对氯苯基 )-1,1-二氯乙烯]
（一）影响机体正常内分泌功能的机制
1.与受体直接结合
（2）雌激素受体（ER）介导的反应
生态毒理学 (Ecotoxicology)
第七章 环境内分泌干扰 物毒理学
主讲教师：刘 薇 大连理工大学 环境学院
内容
一、环境内分泌干扰物的分类
二、环境内分泌干扰物的危害 三、环境内分泌干扰物的作用机制
四、环境内分泌干扰物的筛检方法
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一、环境内ur Stolen Future”提出。
3.细胞增殖实验
人乳癌细胞（MCF-7）增殖实验
实验原理
MCF- 7：激素依赖性细胞系，加入雌激素后诱导细胞增殖。 实验结果判断 比较在加入10%血清后的培养液中，加或不加 E2 或类雌激素 物质培养后的细胞数量。
(一)对人体健康的影响
4. 对发育的影响 胎儿和婴儿出现先天性畸形、发育不全和痴呆的 病例增加。 5. 引起人的神经系统功能障碍、智力低下。 6. 可损害人体免疫系统，降低免疫力。 7. 诱发肿瘤发生
日本米糠油事件中PCBs（多氯联苯）受害者的惨状
（二）对野生生物的危害
上世纪50年代：英国水獭种群数量下降； 1952年：佛罗里达鹰的数量下降； 上世纪60年代：蜜歇根湖貂类丧失生殖能力
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2.标志基因鉴定
（1）酵菌转基因获得的性激素受体表达实验 主要检测雌激素受体结合依赖性转录和转录活性。 此法是用具有完整的人雌激素受体DNA的表达质粒和带有 β-半乳糖苷酶结构基因上游的雌激素反应元件的标志质 粒转化酵母菌—酿酒酵母菌形成激素依赖性转录活化因子 ，然后加入雌激素或待测的物质培养当雌性物质结合到受 体上激活相应的激素反应元件合成β-半乳糖苷酶，利用 酶-底物法检测其活性。