DNA的琼脂糖凝胶电泳资料
琼脂糖凝胶电泳分离dna的原理
琼脂糖凝胶电泳分离dna的原理琼脂糖凝胶电泳是一种常用的DNA分离技术，它基于DNA的物理性质和电性质，将DNA按照长度分离出来。
琼脂糖凝胶是一种高分子量的碳水化合物，它可以形成均匀的凝胶，通过电泳，DNA可以在凝胶中缓慢地移动，而且不分解。
琼脂糖凝胶电泳的原理是在一个电场中，DNA带有负电荷，会受到电场的力而向正极运动。
琼脂糖凝胶中的孔隙大小是不一样的，因此DNA向前移动的速度是根据其长度决定的，长链的DNA比短链的DNA移动得更慢。
在凝胶中，DNA的移动还会受到阻滞，因为琼脂糖凝胶的直径很小，只有几纳米，DNA碰到凝胶的时候，就会被彻底阻拦，因而就会停止移动。
因为琼脂糖凝胶的孔隙大小不同，所以琼脂糖凝胶电泳可以将DNA 分离成不同长度的带状图谱。
这个图谱可以用来鉴定不同物种的DNA 是否不同，或者同一物种中是否存在基因型的不同。
这种技术也可以用于判定某种疾病的基因型。
例如，通过一种叫做多态性限制酶切法的技术，可以将染色体裂开，并将切割产生的DNA分别在琼脂糖凝胶中进行电泳分离，这样就可以分离出含有重要基因信息的DNA序列。
琼脂糖凝胶电泳的操作和使用是相对简单的。
首先，制备琼脂糖凝胶，将琼脂糖和缓冲液混合在一起，使其在恒定温度下凝胶，制作成所需大小的凝胶板。
接下来，将DNA和荧光染料混合在一起，并加入样品槽中，放置在琼脂糖凝胶上方。
加上电源，使电流通过样品，从而将DNA包围在凝胶中，等待移动完成，并观察带状图谱的结果。
需要注意的是，在琼脂糖凝胶电泳中，特别是在样品制备过程中，有几个因素需要重视。
首先是DNA的保护，在取样、处理和贮存时要非常小心，避免滋生细菌或其他微生物，而且也要防止DNA在环境中分解。
其次是荧光染料，它可以帮助检测DNA是否已经升华，但需要避免过量添加，以免影响分离效果。
最后，根据实验需求选择合适的缓冲液配方和琼脂糖比例，对于琼脂糖凝胶的制备也应该准确掌握，以保障实验效果。
琼脂糖凝胶电泳通过对DNA的长度进行分离，可以深入研究遗传信息、进化过程等科学领域，同时也是疾病基因研究和诊断的重要技术手段。
琼脂糖凝胶电泳-完整整理
基因组分析
分子诊断
用于分离和鉴定基因组DNA片段，如限制 性片段长度多态性分析、基因突变检测等 。
用于检测和鉴定基因突变、病原微生物DNA 等，如聚合酶链式反应（PCR）产物电泳、 单链构象多态性分析等。
基因克隆
测序
用于分离和纯化目的基模板，如末端测 序、全基因组测序等。
达差异。
04 琼脂糖凝胶电泳实验问题 与解决
常见问题
条带弥散
由于点样量过多或电压过高，导致条带弥散。
条带过宽
由于凝胶浓度不合适或样品浓度过高，导致 条带过宽。
条带拖尾
样品中蛋白质降解或核酸酶污染，导致条带 拖尾。
条带不亮
由于染料浓度过低或曝光时间过短，导致条 带不亮。
问题分析
条带弥散
可能是由于点样量过多或电压过高， 导致DNA在凝胶中扩散。
琼脂糖凝胶电泳-完 整整理
目录
CONTENTS
• 琼脂糖凝胶电泳介绍 • 琼脂糖凝胶电泳实验操作 • 琼脂糖凝胶电泳结果分析 • 琼脂糖凝胶电泳实验问题与解决 •凝胶电泳的定义
01
琼脂糖凝胶电泳是指在琼脂糖凝 胶中进行的电泳技术，主要用于 分离、鉴定和纯化DNA片段。
浓度比较
通过条带亮度，比较不同 样品中目标DNA片段的浓 度。
纯度评估
根据条带的亮度与背景噪 音的比例，评估DNA片段 的纯度。
结果应用
基因克隆
01
通过琼脂糖凝胶电泳检测目的基因是否被正确克隆到载体中。
突变分析
02
利用电泳结果判断是否存在基因突变或点突变。
基因表达分析
03
通过比较不同组织或细胞系中目的基因的表达水平，分析其表
01
条带分析
细胞基因组dna琼脂糖凝胶电泳
细胞基因组dna琼脂糖凝胶电泳下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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dna琼脂糖凝胶电泳实验报告
dna琼脂糖凝胶电泳实验报告DNA琼脂糖凝胶电泳实验报告引言：DNA琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分子生物学实验技术，用于分离和分析DNA 分子。
本实验旨在通过琼脂糖凝胶电泳技术，对DNA分子进行分离和鉴定，以便更好地了解DNA的结构和功能。
实验材料和方法：实验所需的材料包括琼脂糖凝胶、DNA标准品、DNA样品、缓冲液和电泳仪等。
首先，我们制备了琼脂糖凝胶，然后将DNA标准品和待测DNA样品与DNA加载缓冲液混合。
接下来，将混合液注入琼脂糖凝胶槽中，并进行电泳。
实验结果：经过电泳后，我们观察到琼脂糖凝胶上出现了一系列DNA条带。
根据标准品的条带迁移距离，我们可以推断出待测DNA样品的分子大小。
通过比较待测样品与标准品的条带迁移距离，我们可以进一步确定待测样品中的DNA分子的大小。
讨论：琼脂糖凝胶电泳是一种基于DNA分子大小的分离技术。
在琼脂糖凝胶中，DNA 分子会受到凝胶孔隙的阻碍，较大的DNA分子迁移速度较慢，而较小的DNA分子则迁移速度较快。
通过测量DNA分子的迁移距离，我们可以推断出其分子大小。
在实验中，我们使用了DNA标准品作为参照物，通过标准品的迁移距离，我们可以建立一个标准曲线，从而对待测样品中的DNA分子大小进行估计。
这种方法可以应用于DNA样品的定性和定量分析。
需要注意的是，琼脂糖凝胶电泳实验的结果受到多种因素的影响，如琼脂糖凝胶浓度、电场强度和电泳时间等。
因此，在进行实验时，我们需要控制这些因素，以确保实验结果的准确性和可靠性。
结论：通过DNA琼脂糖凝胶电泳实验，我们成功地分离和鉴定了DNA分子。
这项实验为我们进一步研究DNA的结构和功能提供了基础。
同时，琼脂糖凝胶电泳技术也广泛应用于生物医学研究、法医学和遗传学等领域，为科学研究和医学诊断提供了重要的工具和方法。
总结：DNA琼脂糖凝胶电泳是一种常用的DNA分离和鉴定技术。
通过电泳实验，我们可以分离不同大小的DNA分子，并通过测量其迁移距离来推断其分子大小。
质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳
具有扁平 结构，能嵌入到DNA碱基对间，对线状分子与开环分子影响较小而对超螺旋态的分子影响较大。
1.2
150bp～6kb
300bp～7kb
300bp~7kb
1.5
80bp~4kb
200bp~4kb
200bp~4kb
2.0
100bp~3kb
100bp~3kb
3.0
500bp~1kb
500bp~1kb
4.0
100bp~500bp
6.0
10bp～100bp
2、DNA电泳影响因素 主要分两方面：DNA分子特性和电泳条件。 （1）DNA分子大小 DNA分子越大在胶中摩擦阻力就越大，泳动也越慢， 迁移速率与线状DNA分子质量的对数值成反比。 （2）DNA分子构型 相同分子量质粒DNA，构型不同电泳时受的阻力不同，泳动速率不同。常规电泳中质粒DNA分子的3种构型泳动速率：超螺旋最快、线状次之，开环最慢。
3、DNA电泳上样缓冲液 主要作用如下： （1） 螯合Mg2＋，防止电泳过程中DNA被降解（2） 增加样品密度以保证DNA沉入加样孔内，一般上样缓冲液中加入一定浓度的甘油或蔗糖，这样可以增加样品的比重。大片段电泳中采用Ficoll（聚蔗糖），可减少DNA条带的弯曲和托尾现象。 （3）指示剂监测电泳的行进过程，一般加入泳动速率较快的溴酚蓝指示电泳的前沿，它的速率约与300bp的线状双链DNA相同。
1 2 3 4
不同类型琼脂糖分离DNA片段大小的范围
DNA的琼脂糖凝胶电泳
实验目的掌握琼脂糖凝胶电泳检测DNA的原理和方法。
一、实验原理DNA分子在pH值高于其等电点的溶液中带负电荷，在电场中向阳极移动。
DNA分子在电场中通过琼脂糖凝胶而泳动，除了电荷效应以外，还有分子筛效应。
由于DNA分子可片段的相对分子质量不同，移动速度也不同，所以可将相对分子质量不同或构象不同的DNA分离。
0.6~1.4%琼脂糖凝胶适用于3*106~11*106相对分子质量的DNA分子或片段的分离，所需DNA样品量为0.5~1.0ug。
琼脂糖凝胶电泳分离后的DNA可用溴化乙啶染色。
溴化乙啶分子可插入DNA双螺旋结构的两个碱基之间，形成一种荧光络合物。
在254nm波长紫外光照射下，呈现橙黄色的荧光。
用溴化乙啶检测DNA，可检出10-9g以上的DNA含量。
二、试剂与器材1、6×上样缓冲液：含0.25％溴酚蓝、0.25％二甲苯青、30％甘油的TBE 缓冲液。
2、5×TBE电泳缓冲液（0.45mol/L Tris-硼酸、0.01mol/L EDTA,PK=8.3):：称取54gTris碱，27.5g硼酸，3.7g EDTA-Na2溶于800ml蒸馏水中，定容至1000ml 使用时用蒸馏水稀释10倍成为0.5×TBE电泳缓冲液。
3丶琼脂糖4、溴化乙锭（EB）10mg/mL:取EB 0.10g，完全溶解于10mL水中，避免温室保存。
5丶DNA分子量标准品（DNA Marker)。
6丶DNA样品液三、操作方法琼脂糖胶液的制备：称取0.6g 琼脂糖，置于锥形瓶中，加入60ml0.5×TBE电泳缓冲液，置于微波炉或水浴中加热融化，取出摇匀即为1％琼脂糖凝胶液。
待凝胶液冷却却至60℃后加入溴化乙锭3μL，使其终浓度为0.5μg/mL。
胶板的制备在制胶槽内插入样品梳，将凝胶液倒入制胶槽中。
待胶凝固后，取出梳子，讲内槽放入电泳槽内，加入0.5×TBE电泳缓冲液至电泳槽中，使其没过凝胶表面1~2mm，排除加样孔中的气泡。
DNA琼脂糖凝胶电泳
DNA琼脂糖凝胶电泳一,实验原理琼脂糖凝胶电泳是分离和纯化DNA 片段的常用技术.把DNA样品加入到一块包含电解质的多孔支持介质(琼脂糖凝胶)的样品孔中,并置于静电场上.由于DNA分子的双螺旋骨架两侧带有含负电荷的磷酸根残基,因此在电场中向正极移动.在一定的电场强度下,DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应.具有不同的相对分子质量的DNA片段泳动速度不一样,因而可依据DNA分子的大小来使其分离.凝胶电泳不仅可分离不同分子质量的DNA, 也可以分离相对分子质量相同,而构型不同的DNA分子.在电泳过程中可以通过示踪染料或相对分子质量标准参照物和样品一起进行电泳而得到检测.相对分子质量标准参照物相对可以提供一个用于确定DNA片段大小的标准.在凝胶中加入少量溴化乙锭(ethidium bromide, EB),其分子可插入DNA的碱基之间,形成一种络合物,在254～365nm波长紫外光照射下,呈桔红色荧光,因此也可对分离的DNA进行检测.一般琼脂糖凝胶电泳适用于大小在0.2kb～50kb范围内的DNA 片段.本实验介绍琼脂糖凝胶的制备以及琼脂糖凝胶电泳在DNA片段分离中的应用方法.琼脂糖凝胶浓度（%）线状DNA分子分离范围（kb）0.3 5--600.6 1--200.9 0.5--71.2 0.4--61.5 0.2--32.0 0.1--2琼脂糖凝胶电泳是用于分离纯化和鉴定核酸的方法，根据琼脂糖的溶解温度，把琼脂糖分为一般琼脂糖和低熔点琼脂糖。
低熔点琼脂糖的熔点为62--65,溶解后在37下维持液体状态约数小时,主要用于DNA片断的回收、质粒与外源性DNA的快速连接等。
DNA在琼脂糖凝胶中的迁移速度与琼脂糖浓度、DNA分子量及其构象、电泳缓冲液、电场强度等因素有关，一般说来，DNA片断越大或者琼脂糖浓度越大，其迁移速率越大；而电场强度越高，其迁移速率越大。
不同浓度琼脂糖凝胶DNA分离范围见上图表。
二,仪器及试剂1.仪器及耗材:水平电泳槽,电泳仪,凝胶成像分析系统,微波炉,微量移液器,透明胶带,点样或parafilm,100 ml或250 ml锥形瓶,量筒,吸头等.2.试剂及配制:50×TAE缓冲液的配制:2 mol/L Tris-乙酸,0.05 mol/L EDTA(pH 8.0)配制1000 mlTris 242 g冰乙酸 57.1 ml0.5 mol/L EDTA 100 ml加入600 ml去离子水后搅拌溶解,将溶液定容至1 L后.高温高压灭菌,室温保存.1×TAE缓冲液的配制:称量20 ml的50×TAE缓冲液,再加入980 ml的去离子水.溴化乙啶贮存液:10 mg/ml 溴化乙啶配制:100 ml称取1 g溴化乙啶,置于100 ml烧杯中,加入80 ml去离子水后搅拌溶解.将溶液定容至100 ml后,转移到棕色瓶中.室温保存.6×上样缓冲液:0.25%溴酚蓝,0.25%二甲苯青FF,30%甘油.配制:10 ml溴酚蓝 25 mg二甲苯青FF 25 mg甘油 3 ml用6×TAE缓冲液定溶至10 ml,分装成1 ml/管.-20℃保存.其它试剂:DNA样品,DNA Ladder ,琼脂糖三,操作步骤1. 制备1%琼脂糖凝胶(大胶用70ml,小胶用50ml):称取0.7 g(0.5g)琼脂糖置于锥形瓶中,加入70 ml(50ml)1×TAE,瓶口倒扣小烧杯.微波炉加热煮沸3次至琼脂糖全部融化,摇匀,即成1.0%琼脂糖凝胶液.2. 胶板制备:取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净,晾干,放入制胶玻璃板.取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好,形成模子.将内槽置于水平位置,并在固定位置放好梳子.将冷却到65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上,使胶液缓慢展开,直到整个玻璃板表面形成均匀胶层.室温下静置直至凝胶完全凝固,垂直轻拔梳子,取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中.添加1×TAE电泳缓冲液至没过胶板为止.3. 加样:在点样板或parafilm上混合DNA样品和上样缓冲液,上样缓冲液的最终稀释倍数应不小于1X.用10 ul微量移液器分别将样品加入胶板的样品小槽内,每加完一个样品,应更换一个加样头,以防污染,加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面.(注意:加样前要先记下加样的顺序).4. 电泳:加样后的凝胶板立即通电进行电泳,电压60-100V,样品由负极(黑色)向正极(红色)方向移动.电压升高,琼脂糖凝胶的有效分离范围降低.当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约1cm处时,停止电泳. (5)电泳完毕后,取出凝胶,用含有0.5 ug/ml的溴化乙锭1×TAE溶液染色约20 min,再用清水漂洗10 min.(6)观察照相:在紫外灯下观察,DNA存在则显示出红色荧光条带,采用凝胶成像系统拍照保存.四,常见问题及注意事项1.配琼脂糖时应使其完全熔化后方可制胶.2.琼脂糖凝胶易于破碎,操作时要轻缓.3.电泳时应注意电源线路,预防触电.4.溴化乙淀具有致癌作用,配制及使用时应带乳胶或一次性塑料手套.并在专门的实验室内使用.5.紫外线对人体有损伤作用,开灯时间不宜太长,注意防护.6.DNA带形状模糊:DNA加样过多;电压太高;凝胶中有气泡.7.质粒DNA的存在形式有3种,①共价闭环DNA(cccDNA),常以超螺旋形式存在;②开环DNA(ocDNA),此种质粒DNA的两条链中有一条发生一处或多处断裂,因此可以自由旋转从而消除张力,形成松弛的环状分子;③线状DNA,因质粒DNA的两条链在同一处断裂而造成.因此质粒DNA电泳的结果中有可能出现三条泳带,它们的泳动速度为: cccDNA > 线状DNA > ocDNA.添加来自TIANGEN的资料:1,琼脂糖:不同厂家＼不同批号的琼脂糖，其杂质含量不同,影响DNA的迁移及其荧光背景的强度,应有选择的使用.2,凝胶的制备:凝胶中所加的缓冲液应该与电泳槽中的相一致,溶化的凝胶应该及时倒入板中,避免倒入之前凝固结块,倒入板中的凝胶应该避免出现气泡,以免影响电泳结果.3,电泳缓冲液:为保持电泳所需的离子强度和PH,应经常更新电泳缓冲液.4,样品加入量:一般情况下,0.5CM宽的梳子可加0.5微克的DNA量,加样量的多少依据加样孔的大小及DNA中片断的数量和大小而定.当加样孔大时,样品上样量应相应加大,否则会造成条带浅甚至辨认不清楚;反之,则应该适当减少加样量,但是上样量过多会造成加样孔超载,从而导致拖尾或扩散,对于较大的DNA此现象更明显.5,DNA样品中盐浓度会影响DNA的迁移率,平行对照样品中应该使用同样的缓冲条件以消除这种影响.6,DNA迁移率取决于琼脂糖的浓度,迁移分子的形状及其大小.采用不同浓度的凝胶有可能分辨范围广泛的DNA分子,制备琼脂糖凝胶可根据DNA分子的范围来决定凝胶的浓度.小片断DNA的检测应采用聚丙烯酰胺凝胶电泳,以提高分辨率.。
琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA
琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。
对于分子量较大的样品，如大分子核酸、病毒等，一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。
琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段，其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低，但它制备容易，分离范围广，尤其适于分离大片段DNA。
普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb，利用脉冲电泳，可分离高达10^7bp的DNA片段。
琼脂糖凝胶电泳操作流程准备干净的配胶板和电泳槽注意DNA酶污染的仪器可能会降解DNA，造成条带信号弱、模糊甚至缺失的现象。
选择电泳方法一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以；如果需要分辨率高的电泳，特别是只有几个bp的差别应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳；用普通电泳不合适的巨大DNA链应该使用脉冲凝胶电泳。
注意巨大的DNA链用普通电泳可能跑不出胶孔导致缺带。
正确选择凝胶浓度对于琼脂糖凝胶电泳，浓度通常在0.5～2％之间，低浓度的用来进行大片段核酸的电泳，高浓度的用来进行小片段分析。
低浓度胶易碎，小心操作和使用质量好的琼脂糖是解决办法。
注意高浓度的胶可能使分子大小相近的DNA带不易分辨，造成条带缺失现象。
适合的电泳缓冲液常用的缓冲液有TAE和TBE，而TBE比TAE有着更好的缓冲能力。
电泳时使用新制的缓冲液可以明显提高电泳效果。
注意电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，PH值上升，缓冲性能下降，可能使DNA电泳产生条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。
电泳的合适电压和温度电泳时电压不应该超过20V/cm，电泳温度应该低于30℃，对于巨大的DNA 电泳，温度应该低于15℃。
注意如果电泳时电压和温度过高，可能导致出现条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。
特别是电压太大可能导致小片段跑出胶而出现缺带现象DNA样品的纯度和状态是电压太大可能导致小片段跑出胶而出现缺带现象DNA样品的纯度和状态注意样品中含盐量太高和含杂质蛋白均可以产生条带模糊和条带缺失的现象。
琼脂糖凝胶电泳检测dna实验报告
琼脂糖凝胶电泳检测dna实验报告琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验报告。
实验目的，通过琼脂糖凝胶电泳技术检测DNA分子的大小和数量，以验证DNA的提取和纯度。
实验材料与方法：1. 实验材料，琼脂糖凝胶、TAE缓冲液、DNA样品、DNA分子量标准品、电泳槽、电泳仪等。
2. 实验步骤：a. 制备琼脂糖凝胶，按照比例将琼脂糖和TAE缓冲液混合煮沸后倒入电泳槽中，待凝固后形成琼脂糖凝胶。
b. 样品处理，将待测DNA样品加入适量的载体溶液，并在65°C水浴中恒温30分钟。
c. 电泳操作，将处理后的DNA样品和DNA分子量标准品加载至琼脂糖凝胶孔中，进行电泳操作。
实验结果与分析：经过琼脂糖凝胶电泳检测，观察到DNA样品在电场作用下向阳极迁移，形成明显的DNA条带。
通过对DNA条带的位置和长度进行分析，可以初步判断DNA的大小和纯度。
同时，与DNA分子量标准品进行比对，可以更准确地确定DNA的分子量。
实验结论：本次实验通过琼脂糖凝胶电泳技术成功检测了DNA样品的大小和纯度，验证了DNA的提取和纯度。
实验结果为后续的分子生物学研究提供了重要的数据支持。
实验注意事项：1. 实验过程中需注意琼脂糖凝胶的制备和电泳操作的细节，保证实验结果的准确性。
2. 实验后要及时清洗和消毒实验器材，保持实验环境的整洁和卫生。
实验改进方向：1. 可以尝试不同浓度的琼脂糖凝胶和不同电泳条件，寻找更适合本实验的操作参数。
2. 可以尝试其他DNA检测技术，与琼脂糖凝胶电泳技术进行对比，寻找更准确、高效的检测方法。
总结：琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验是分子生物学实验中常用的技术手段，通过本次实验的学习和实践，对该技术有了更深入的了解，并为今后的科研工作打下了坚实的基础。
希望通过不断的实验探索和改进，能够为科学研究做出更大的贡献。
以上为琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验报告内容，如有不足之处，欢迎指正。
dna琼脂糖凝胶电泳
DNA琼脂糖凝胶电泳介绍DNA琼脂糖凝胶电泳是一种常用的生物技术实验方法，用于分离DNA分子并确定其大小。
它基于DNA分子的电荷和大小不同，通过应用电场使DNA分子在琼脂糖凝胶中迁移，从而实现分离。
原理DNA琼脂糖凝胶电泳的基本原理是：DNA分子带负电荷，当置于电场中后，电场将使DNA分子向正电极移动。
然而，DNA分子在琼脂糖凝胶中的迁移速度取决于它的大小。
较长的DNA分子由于受阻力较大，迁移速度较慢，而较短的DNA分子迁移速度较快。
因此，琼脂糖凝胶电泳可以将DNA分子根据大小进行分离。
实验步骤1. 样品处理将待测DNA样品与凝胶电泳缓冲溶液混合，并加入负荷样品的染料来增加样品的重量和使其可见。
一般使用表现著名的溴化乙锭（Ethidium Bromide）来染色DNA分子。
2. 准备琼脂糖凝胶制备琼脂糖凝胶液，并根据实验需要将其倒入电泳槽中，并形成一个凝胶。
此过程需要使用琼脂糖凝胶制备缓冲液，一般为Tris–醋酸–EDTA缓冲液，简称TAE缓冲液。
3. 样品加载使用微量吸管或特殊的样品加载微孔将样品加载到琼脂糖凝胶上。
每个微孔能够承载一定量的样品，因此要根据样品的数量进行安排。
通常还会在凝胶上加载一个DNA分子大小标记（Marker）作为参考，以便确定未知样品的大小。
4. 电泳将凝胶放入电泳槽中，并将正负电极接入电源。
通过给定的电流和时间来进行电泳实验。
电流的选择取决于琼脂糖凝胶的密度和样品的大小范围。
5. 可视化和分析凝胶电泳完成后，通过紫外线照射或荧光成像系统来观察结果。
DNA分子在凝胶上能够与染料结合产生发光，从而可在琼脂糖凝胶上看到DNA分子的大小分布。
通过与已知DNA分子大小标记的对比，可以确定未知样品DNA分子的大小。
应用领域1. 分子生物学在分子生物学研究中，DNA琼脂糖凝胶电泳是一种常用的手段。
它可以用于检测DNA分子的大小、评估PCR反应的效果、验证基因敲除和插入等分子操作的成功性等。
DNA的琼脂糖凝胶电泳分析ppt课件
❖ 如果点样孔多余，将样点到中间，尽量避免边缘 效应 ，中间电场比较均匀 ；
❖ 做胶的缓冲液和跑胶的缓冲液浓度应该一致；
❖ 加样时不要太快，让其自然沉底，均匀分布在电 ห้องสมุดไป่ตู้孔内 ；
❖ 电泳开始时可以采用低电压使其跑出孔后，再调 高电压。
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
琼脂糖凝胶 0.3 0.6 0.7 0.9 1.2 1.5 2.0 浓度（％）
可分辨的线
10~ 7~ 6~ 4~ 3~
性DNA大小 60~5 20~1 0.8 0.7 0.4 0.2 0.1 范围（kb）
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
❖ 2、 50×TAE电泳缓冲液：称取242gTris碱 （即三羟甲基氨基甲烷， Tris为弱碱，在室 温（25℃）下，它的pKa为8.1；根据缓冲理 论，Tris缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0到 9.2之间。Tris碱的水溶液pH在10.5左右，一 般加入盐酸以调节pH值至所需值，即可获得 该pH值的缓冲液。但同时应注意温度对于 Tris的pKa的影响 ）， ，加H2O800ml，待 完全溶解后，加57.1ml冰乙酸， 100ml0.5mol/LEDAT（pH8.0），用H2O定 容至1000ml。临用前用H2O稀释成1×TAE 电泳缓冲液。
简述dna琼脂糖凝胶电泳的原理及其应用
简述DNA琼脂糖凝胶电泳的原理及其应用1. 原理DNA琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分离和分析DNA分子的方法。
它基于DNA分子在电场中的迁移速率与其分子大小的关系，通过在琼脂糖凝胶中进行电泳实验，将DNA分子按照大小进行分离。
在DNA琼脂糖凝胶电泳中，首先将琼脂糖粉末溶解成一定浓度的琼脂糖溶液，并加热使其溶解。
然后，将溶液浸泡在凝胶模板中，在溶液凝固前加入合适的电泳缓冲液。
凝胶模板通常是一个平板状的槽，中间有几个平行的凹槽，称为凝胶孔。
凝胶形成后，将待测的DNA样品混合与DNA加载缓冲液，并通过凝胶孔将混合物装入凝胶的孔中。
然后，将正负电极分别连接到凝胶上下两端的电泳缓冲液中，通过电极引导电场形成。
DNA分子会在电场的作用下从凝胶孔的上方向下迁移。
由于琼脂糖凝胶结构的特殊性质，DNA分子的迁移速率与其分子大小成反比，大分子迁移较慢，小分子迁移较快。
经过一段时间的电泳，DNA分子会在凝胶中形成一个带状分布。
根据DNA在凝胶中迁移的位置，可以判断DNA分子的大小。
通常，较小的DNA片段会迁移到凝胶的迁移前端，而较大的DNA片段会留在迁移过程中的后部。
可以根据这一原理进行DNA分子的定量分析和分离。
2. 应用DNA琼脂糖凝胶电泳广泛应用于分子生物学和遗传学研究中，具有以下几个主要的应用领域：2.1 DNA片段分析DNA琼脂糖凝胶电泳可以用于分析DNA的片段大小和含量。
通过在凝胶中电泳运行已知长度的DNA片段作为分子量标准，可以通过与这些标准片段对比，确定未知DNA片段的大小。
此外，通过测量不同片段在凝胶中的强度，可以估计DNA片段的相对含量。
2.2 基因型分析基因型通常由多个基因位点组成，每个位点上存在多个等位基因。
通过DNA琼脂糖凝胶电泳，可以将这些基因位点的DNA片段进行分离和分析。
通过比较样品与对照的电泳图谱，可以确定不同等位基因的存在与否，从而分析个体的基因型。
基因型分析在遗传学研究、法医学和疾病的分子诊断中具有重要作用。
琼脂糖凝胶电泳检测dna实验报告
琼脂糖凝胶电泳检测dna实验报告琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验报告引言：DNA是生物体中的重要遗传物质，通过检测和分析DNA可以揭示生物体的遗传信息。
琼脂糖凝胶电泳是一种常用的DNA分析方法，本实验旨在通过琼脂糖凝胶电泳技术检测DNA样品的大小和纯度。
实验材料与方法：1. 实验材料：- DNA样品- DNA标准品- TBE缓冲液- 碱基对应的引物- DNA扩增反应体系- 琼脂糖凝胶- DNA电泳仪2. 实验方法：1) 准备琼脂糖凝胶：a. 取适量琼脂糖粉末加入TBE缓冲液中，搅拌均匀。
b. 将混合液加热至溶解，然后冷却至室温。
c. 将琼脂糖凝胶液倒入电泳槽中，插入梳子，待凝固。
2) 准备DNA样品：a. 取DNA样品，加入适量的DNA扩增反应体系。
b. 在PCR仪中进行DNA扩增反应，得到待检测的DNA样品。
3) 进行电泳检测：a. 取一定量的DNA样品和DNA标准品，加入电泳槽中的样品槽。
b. 打开电泳仪，设定适当的电压和时间。
c. 开始电泳，观察DNA在琼脂糖凝胶中的迁移情况。
结果与讨论：通过琼脂糖凝胶电泳检测，我们可以观察到DNA样品在电场作用下在琼脂糖凝胶中的迁移情况。
根据DNA片段的大小，我们可以通过比较DNA样品与DNA标准品的迁移距离，确定DNA样品的大小。
在实验中，我们发现不同大小的DNA片段会以不同的速度迁移，较小的DNA片段迁移速度较快，较大的DNA片段迁移速度较慢。
这是因为琼脂糖凝胶的孔径大小会影响DNA片段的迁移速度，较小的孔径会使DNA片段迁移速度变慢。
此外，我们还可以通过观察琼脂糖凝胶中DNA样品的带状图案来评估DNA样品的纯度。
如果带状图案清晰且无杂带，说明DNA样品较纯；而如果带状图案模糊或有多个杂带，说明DNA样品可能存在杂质或降解。
总结：琼脂糖凝胶电泳是一种常用的DNA分析技术，通过观察DNA片段在琼脂糖凝胶中的迁移情况，我们可以确定DNA样品的大小和纯度。
这种技术在生物学研究和医学诊断中具有重要意义，可以帮助科学家们更好地理解生物体的遗传信息。
琼脂糖凝胶电泳实验报告
琼脂糖凝胶电泳实验报告一、实验目的琼脂糖凝胶电泳是分子生物学实验中常用的技术之一，其目的主要包括以下几个方面：1、分离和鉴定 DNA 片段：通过电泳可以将不同大小的 DNA 片段在琼脂糖凝胶中按照分子量大小进行分离，从而能够直观地观察到DNA 样品的组成和纯度。
2、检测 DNA 的质量：通过观察电泳图谱中 DNA 条带的亮度、清晰度和完整性，可以评估 DNA 样品的质量，判断是否存在降解、杂质污染等情况。
3、定量分析 DNA 浓度：结合已知浓度的 DNA 标准品，通过比较样品条带与标准品条带的亮度，可以对 DNA 样品的浓度进行大致的估算。
二、实验原理琼脂糖是一种从海藻中提取的线性多糖聚合物。
当琼脂糖溶液加热到沸点后冷却凝固，会形成网状的凝胶结构。
由于琼脂糖凝胶具有分子筛效应，DNA 分子在电场中会向正极移动，其迁移速度取决于 DNA 分子的大小和构象。
较小的 DNA 分子在凝胶中受到的阻力较小，迁移速度较快；较大的 DNA 分子受到的阻力较大，迁移速度较慢。
因此，不同大小的 DNA 分子在琼脂糖凝胶中会被分离成不同的条带。
在电泳过程中，通常使用溴化乙锭（EB）等荧光染料对 DNA 进行染色。
EB 能嵌入DNA 分子的碱基对之间，在紫外线照射下发出荧光，从而使 DNA 条带得以显现。
三、实验材料与设备1、实验材料DNA 样品：本次实验使用的是经过提取和纯化的λDNA 样品。
琼脂糖：选用高纯度的琼脂糖粉末。
电泳缓冲液：5×TBE 缓冲液（Tris硼酸EDTA），使用时稀释至1×TBE 工作液。
上样缓冲液（Loading Buffer）：含有甘油、溴酚蓝等成分，用于增加样品密度，便于样品沉入加样孔，并指示电泳进程。
核酸染料：溴化乙锭（EB）溶液。
2、实验设备电泳仪：提供稳定的直流电源，用于产生电场。
水平电泳槽：放置琼脂糖凝胶，容纳电泳缓冲液。
凝胶成像系统：用于观察和拍摄电泳结果。
DNA的琼脂糖凝胶电泳资料ppt课件
3）操作简单，电泳速度快，样品不需事先处理就可进 行电泳。
琼脂糖凝胶电泳的应用
用于分子量较大的样品，如大分子核酸、病毒等的电泳分 离。现广泛应用于核酸的研究中。
按相对分子质量大小分离DNA 的凝胶电泳技术，是分析 鉴定基因工程重组DNA 分子的重要实验手段。
是现在通用的许多分子生物学研究方法，如DNA核苷酸 序列分析、限制性内切酶片段分析等的技术基础，受到科 学界的高度重视。
二、试剂与器材
电泳仪
缓冲液 琼脂糖
凝胶槽
梳子
电泳槽
溴酚蓝
取液器
试剂
1、Tris-硼酸-EDTA缓冲液（TBE缓冲液），pH8.3：称取 10.78gTris，5.50g硼酸，0.93g EDTA-Na2溶于去离子水， 定容至1000mL。
图像的实时观测
三、操作方法
1、琼脂糖凝胶液的制备：称1g 琼脂糖，置于三角烧 瓶中，加入100mL TBE缓冲液，瓶口扣上一小烧杯， 加热至微沸，琼脂全部融化。取出摇匀，即为1%琼脂 糖。
注意 要完全融化混匀
2、凝胶板的制备
置水平板于工作台面上，将样品槽模板（梳子）插进水
平板上凹槽内，距一端约0.5cm。梳子底边与水平板表
四、实验结果
打印凝胶电泳图，贴于实验报告上，并对实 验结果进行讨论，分析所测未知DNA的大小。
五、课后研讨题
1、总结本实验操作的关键环节和注意事项。 2、实验所用DNA染料EB具有潜在的致癌性，查阅
资料，查找可替代EB的染料并说明优缺点。 3、查阅资料，举例说明DNA琼脂糖凝胶电泳的应
用和发展。
琼脂糖凝胶电泳检测DNA
琼脂糖凝胶电泳检测DNA1. 实验目的通过本实验学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术。
2. 实验原理DNA分子在琼脂糖凝胶电泳中泳动时有电荷效应和分子筛效应。
DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。
在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于DNA分子本身的大小和构型。
溴乙锭是一种荧光染料，这种扁平分子可以嵌入核酸双链的配对碱基之间，它与DNA的结合几乎没有碱基序列的特异性。
在高离子强度的饱和溶液中，大约每2.5个碱基插于一个溴乙锭分子。
与DNA结合的染料在紫外线下呈现橙色荧光。
3. 实验设备移液器，tip头，水平凝胶电泳槽，稳压电泳仪，微波炉，50ml三角瓶4. 实验试剂琼脂糖，1×TAE（Tris-乙酸0.04M，EDTA 0.001M，pH值为8.2），1mg/ml溴乙锭，上样缓冲液。
EB一般在凝胶或电泳缓冲液中的终浓度为0.5µg/ml，EB见光易分解，故应在棕色试剂瓶中于4℃条件下保存。
电泳缓冲液（50×TAE）：242 gTris，57.1 ml冰醋酸，100ml 0.5 M EDTA（pH=8.0）。
上样缓冲液的功能：增加样品的密度保证样品沉入加样孔内；使样品带有颜色便于简化上样过程；能明确显现样品在电泳胶上泳动位置。
溴酚蓝在琼脂糖凝胶中的迁移速率是二甲苯氰迁移速率的2.2倍，这一特性与琼脂糖浓度无关。
5. 实验步骤（1）用透明胶带将胶板的两端封好。
（2）称取0.16 g琼脂糖于50 mL三角瓶中，加入1×TAE 缓冲液20 mL，配配制0.8 %的琼脂糖凝胶，在微波炉中加热至琼脂糖完全溶解。
（3）待琼脂糖溶液冷却至60 ℃左右时，加入2 µL溴化乙锭（EB）充分混匀。
（4）在距底板0.5~1.0 mm的位置上放置梳子，将温热的琼脂糖凝胶倒入胶槽中，凝胶厚度在3-5 mm之间。
（5）凝胶完全凝固后（室温下30~40 min ），去掉透明胶，小心将胶板移至装有1Х TAE buffer的电泳槽中，轻轻拔去梳子，往电泳槽中注入1Х TAE 电泳缓冲液，没过胶面约1 mm 。
dna琼脂糖凝胶电泳
DNA琼脂糖凝胶电泳1. 简介DNA琼脂糖凝胶电泳（DNA agarose gel electrophoresis）是一种常用的分离和分析DNA片段的技术。
它利用琼脂糖凝胶作为分离介质，通过电场作用，将DNA片段按照大小进行分离。
这种技术广泛应用于基因测序、基因突变检测、DNA片段扩增等领域。
2. 原理DNA琼脂糖凝胶电泳的原理基于DNA的带负电荷特性和凝胶电泳的原理。
DNA分子是由带负电荷的核苷酸单元组成，当施加电场时，DNA会向阳极迁移。
琼脂糖凝胶是一种由聚糖组成的网状结构，可以形成孔隙，使得不同大小的DNA片段能够在凝胶中移动。
在琼脂糖凝胶中进行电泳时，首先需要制备琼脂糖凝胶。
通常使用琼脂糖粉末溶解在缓冲液中，并加热至溶解。
将溶解的琼脂糖倒入电泳槽中，并插入电泳槽两端的电极。
待琼脂糖凝固后，形成凝胶。
凝胶制备完成后，将待分析的DNA样品与DNA加载缓冲液混合，并加热至退变。
退变是为了使DNA样品中的双链DNA转变为单链DNA，便于在电泳过程中进行分离。
将退变后的DNA样品加载到琼脂糖凝胶孔上，并施加电场。
在电泳过程中，由于琼脂糖凝胶的孔隙结构不同大小，不同大小的DNA片段会以不同速率迁移。
较小的DNA片段会迁移得更快，而较大的DNA片段则迁移较慢。
通过控制电场强度和时间，可以使得不同大小的DNA片段达到预期的分离效果。
3. 实验步骤3.1 准备工作•准备琼脂糖粉末和缓冲液。
•准备电泳槽、电极和样品孔模具。
•配置DNA加载缓冲液。
3.2 制备琼脂糖凝胶•将适量的琼脂糖粉末加入缓冲液中，并加热搅拌至完全溶解。
•将溶解的琼脂糖倒入电泳槽中，插入电极，待凝固。
3.3 退变DNA样品•将待分析的DNA样品与DNA加载缓冲液混合，并加热至退变温度（通常为95°C）。
•快速冷却样品至4°C。
3.4 装载样品•在琼脂糖凝胶孔上注射适量的退变后的DNA样品。
•加载DNA分子量标记物到一侧孔隙作为参考。
琼脂糖凝胶电泳高中生物知识点
琼脂糖凝胶电泳高中生物知识点一、琼脂糖凝胶电泳的原理。
1. 基本原理。
- 琼脂糖凝胶电泳是一种用于分离、鉴定和纯化DNA或RNA片段的方法。
琼脂糖是一种从海藻中提取的多糖，当琼脂糖加热到90 - 100℃时溶解，冷却到35 - 45℃时形成凝胶。
- DNA和RNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，由于它们的磷酸骨架带有负电荷，在电场的作用下向正极移动。
其迁移速度主要取决于核酸分子的大小、形状以及琼脂糖凝胶的浓度等因素。
2. 分子筛效应。
- 琼脂糖凝胶具有多孔性，像一个分子筛。
较小的DNA或RNA分子在凝胶中能够更容易地穿过孔隙，迁移速度较快；而较大的分子受到孔隙的阻碍较大，迁移速度较慢。
- 例如，100bp的DNA片段比1000bp的DNA片段在相同条件下迁移得更快。
二、琼脂糖凝胶电泳的操作步骤（以DNA电泳为例）1. 制备琼脂糖凝胶。
- 根据要分离的DNA片段大小选择合适的琼脂糖浓度。
一般来说，低浓度（如0.7% - 1%）的琼脂糖凝胶适合分离较大的DNA片段（数千bp以上），高浓度（如2% - 3%）适合分离较小的DNA片段（100 - 1000bp）。
- 称取适量的琼脂糖，加入到电泳缓冲液（如TAE或TBE缓冲液）中，加热至琼脂糖完全溶解。
例如，要制备1%的琼脂糖凝胶，称取1g琼脂糖，加入到100mL的1×TAE缓冲液中，在微波炉中加热，期间要不时搅拌，直至琼脂糖完全溶解。
- 将溶解好的琼脂糖溶液倒入电泳槽的模具中，插入梳子，待凝胶冷却凝固（约20 - 30分钟）。
2. 加样。
- 在凝胶凝固后，小心拔出梳子，将电泳槽放入电泳仪中，加入电泳缓冲液，使缓冲液没过凝胶。
- 将DNA样品与适量的上样缓冲液（通常含有甘油、溴酚蓝等指示剂）混合。
上样缓冲液的作用是增加样品的密度，使样品能够沉入加样孔中，同时溴酚蓝等指示剂可以指示电泳的进程。
- 用微量移液器将混合好的样品小心加入到加样孔中。
3. 电泳。
实验二、DNA凝胶电泳
实验二、DNA凝胶电泳
二、琼脂糖凝胶电泳：
1．DNA分子大小：线性DNA分子在一定琼脂糖浓度内的迁移率与DNA分 子量的对数成反比。
2．琼脂糖浓度：小于0.5kb 的DNA片段所需的凝胶浓度为1.2-1.5%; 分离大于10kb 的DNA片段所需的凝胶浓度为0.3-0.7%; DNA片段大 小在两者之间的所需的凝胶浓度为0.8-1.0%。
3、DNA分子构象：对相同分子量的质粒DNA的三种构象，超 螺旋DNA移动最快，而线状双链DNA移动最慢。
4．电源电压：在低电压时，线性DNA片段的移动速率与所 加电压成正比，但电压增高，不同分子量的DNA片段的移 动速率将以不同幅度增加；片段越大，升高的幅度也越 大。因此电压增高，琼脂糖有效分离范围将缩小。一般 所加电压不得超过5V/cm.
箔或黑纸包裹容器，储于温室即可。 4、DNA分子量标准：
DNA/EcoR I/Hind III: DNA/EcoR I: 21.2, 7.4, 5.8, 5.6, 4.9和 2.5kb。 DNA/ Hind III: 23.1, 9.4, 6.6, 4.4, 2.3, 2.0, 0.56和 0.12kb.
实验二、DNA凝胶电泳
三、试剂： 1、5TBE缓冲液：Tris. 54g, 硼酸27.5g, 加入20ml
的0.5mol/L EDTA(pH8.0), 定溶至1000ml. 2、6上样缓冲液：0.25% 溴酚兰, 40%(w/v)蔗糖水溶液。 3、溴化乙啶（EB）溶液母液：将EB配制成10mg/L，用铝
实验二、DNA凝胶电泳
实验二、DNA凝胶电泳
一、概述
琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离和纯化DNA片段 的标准方法。其中，琼脂糖凝胶分离DNA片段大小范围较 广，不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从200bp至近50kb的 DNA片段。
DNA的琼脂糖凝胶电泳
电泳
加样完毕，将靠近样品槽一端连接负极， 加样完毕，将靠近样品槽一端连接负极，另 一端连接正极（千万不要搞错） 接通电源， 一端连接正极（千万不要搞错），接通电源，开 始电泳。在样品进胶前可用略高电压， 始电泳。在样品进胶前可用略高电压，防上样品 扩散。 样品进胶后， 应控制电压降不高于5 扩散 。 样品进胶后 ， 应控制电压降不高于 5 V／ cm(电压值 V 电泳板两极之间距离比 ) cm( 电压值V／ 电泳板两极之间距离比) 。 当染料 条带移动到距离凝胶前沿约lcm时 停止电泳。 条带移动到距离凝胶前沿约lcm时，停止电泳。
四、注意事项
溴乙锭是DNA诱变剂，配制和使用EB染色液时， 溴乙锭是DNA诱变剂，配制和使用EB染色液时， 应戴乳胶手套，并且不要将该溶液洒在桌面或地 面上。凡是沾污过溴乙锭的器皿或物品，必须经 专门处理后，才能进行清洗或弃去。 为使DNA完全酶解，需加入适量、足够的酶。太 为使DNA完全酶解，需加入适量、足够的酶。太 少反应不完全，太多则很费。由于每次购进的酶 浓度不可能相同，因此酶和DN A加入的体积不能 浓度不可能相同，因此酶和DN A加入的体积不能 固定，合适的酶量应该通过预试验来定。
实验五 DNA的琼脂糖凝胶电泳 DNA的琼脂糖凝胶电泳
一、实验原理
DNA分子在pH值高于其等电点的溶液中带负电荷， DNA分子在pH值高于其等电点的溶液中带负电荷， 在电场中向阳极移动。 在电场中向阳极移动。 DNA分子在电场中通过琼脂糖凝胶而泳动， DNA分子在电场中通过琼脂糖凝胶而泳动，除了 电荷效应以外，还有分子筛效应。由于DNA分子 电荷效应以外，还有分子筛效应。由于DNA分子 可片段的相对分子质量不同， 移动速度也不同 ， 可片段的相对分子质量不同 ， 移动速度也不同， 所以可将相对分子质量不同或构象不同的DNA分 所以可将相对分子质量不同或构象不同的DNA分 离。
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6、大小未知的待测DNA溶液
器 材
1、水平板型电泳槽
2、直流稳压电泳仪
3、微量移液枪 4、凝胶成像系统：可发射紫外光，通过电脑进行凝胶 图像的实时观测
三、操作方法
1、琼脂糖凝胶液的制备：称1g 琼脂糖，置于三角烧
瓶中，加入100mL TBE缓冲液，瓶口扣上一小烧杯，
加热至微沸，琼脂全部融化。取出摇匀，即为1%琼脂 糖。
例如：普通琼脂凝胶电泳，很难分离大于50kb的DNA 分子。 如何研究超大片段DNA？
琼脂糖凝胶电泳分离后的DNA可用溴化乙啶（EB） 染色。 溴化乙啶分子可插入 DNA双螺旋结构的两个碱基之 间，形成一种荧光络合物。在 254nm 波长紫外光照 射下，呈现橙黄色的荧光。 用溴化乙啶检测DNA，可检出10-9g以上的DNA含量。
琼脂糖凝胶电泳的优点
1）琼脂糖凝胶结构均匀，含水量大（98%～99%）， 近似自由电泳，样品扩散度较自由电泳小，对样品吸 附极微，因此电泳图谱清晰，分辨率高，重复性好。 2）琼脂糖呈透明状，无紫外吸收，电泳后的样品可直 接用紫外检测；电泳后区带易染色，样品易洗脱，便 于定量测定。 3）操作简单，电泳速度快，样品不需事先处理就可进 行电泳。
不同大小、不同形状和不同构象的DNA 分子 在相同的电泳条件下（如凝胶浓度、电流、 电压、缓冲液等），有不同的迁移率，所以 可通过电泳使其分离。
DNA在电场中的迁移率的影响因素
1）DNA的分子大小、形状、构象。
2）琼脂糖的浓度。
3）所加电压。 4）嵌入的染料。 5）电泳缓冲液的组成。
待凝固完全后，用滴管在梳齿附近加人少量缓冲液
润湿凝胶，双手均匀用力轻轻拔出样品槽模板，则在胶 板上形成相互隔开的样品槽。将凝胶连同水平板放入电
泳槽平台上。倒入TBE缓冲液直至浸没过凝胶面2-3mm。
注 意 勿使样品槽破裂
3、加样
将待测DNA样品液与5×Loading Buffer以4：1的体
积比混合，用移液枪分别加人到凝胶板的加样槽内。每 个糟加10μL左右。
二、试剂与器材
电泳仪
缓冲液 琼脂糖
凝胶槽
梳子 电泳槽
取液器
溴酚蓝
试 剂ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
1、Tris-硼酸-EDTA缓冲液（TBE缓冲液），pH8.3：称取 10.78gTris，5.50g硼酸，0.93g EDTA-Na2溶于去离子水， 定容至1000mL。
2、琼脂糖： 1g 溶于TBE缓冲液中加热配成100mL。 3、0.05%溴酚蓝-50%甘油溶液（5×Loading Buffer ） ： 取一定量的0.1%溴酚蓝水溶液，与等体积甘油混合而成。
DNA的琼脂糖凝胶电泳
1. 酶切 （1）酶切体系
酶切体系（µL） DDW Buffer EcoRI DNA 13 2 1 4 对照体系（µL） 14 2 0 4
（注意：各组分加入顺序：DDW, Buffer, EcoRⅠ, DNA。）
（2）37℃水浴40 min
2.琼脂糖凝胶电泳
一、实验原理
电泳（electrophoresis）是荷电溶质或粒子在电场作 用下发生定向泳动的现象。
电泳分离是利用荷电溶质在电场中泳动速度的差别进
行分离的方法。
根据其载体介质的不同可分醋酸纤维薄膜电泳、聚丙
烯酰胺凝胶电泳、琼脂糖凝胶电泳等。
核酸的分离和鉴定通常采用琼脂糖凝胶电泳。
DNA分子在 pH值高于其等电点的溶液中带负 电荷，在电场中通过琼脂糖凝胶向阳极移动。
TBE缓冲液，pH8.3
4 、 0.5 μg/mL 溴化乙啶染色液：称取 5mg 溴化乙啶，用去 离子水溶解，定容至100mL。从中取1mL，用无离子水稀 释至100mL。（有毒，戴手套，通风柜内进行。）
5、DNA Marker
DL2,000TM DNA Marker （TaKaRa公司）
本 Marker为已含有1×Loading Buffer的DNA溶液 可取5μL直接电泳
琼脂糖凝胶电泳的应用
用于分子量较大的样品，如大分子核酸、病毒等的电泳分 离。现广泛应用于核酸的研究中。 按相对分子质量大小分离DNA 的凝胶电泳技术，是分析 鉴定基因工程重组DNA 分子的重要实验手段。 是现在通用的许多分子生物学研究方法，如DNA核苷酸 序列分析、限制性内切酶片段分析等的技术基础，受到科 学界的高度重视。
5、染色
将电泳后的胶取出，小心推至溴乙锭染色液中， 室温下浸泡染色30min。
特别注意： 溴化乙锭是DNA诱变剂和致癌物质，配制和使用EB 染色液时，应戴乳胶手套，不要将该溶液洒在桌面或地 面上。凡是沾污过溴化乙锭的器皿，必须经专门处理后， 才能进行清洗或弃去。
6、观察与拍照
小心地取出凝胶置托盘上，并用水轻轻冲洗胶表 面的溴化乙锭溶液，再将胶板推至凝胶成像系统的 样品板上，在紫外灯下进行观察。
注 意 要完全融化混匀
2、凝胶板的制备
置水平板于工作台面上，将样品槽模板（梳子）插进水
平板上凹槽内，距一端约 0.5cm。梳子底边与水平板表 面保持0.5-1mm的间隙。待琼脂糖冷至 65℃左右，小心
地倒入托盘内，使凝胶缓慢地展开在水平板表面形成一
层约3mm厚均匀胶层。静置0.5小时。 注 意 液内不存有气泡
加样时，使样品集中沉于槽底部。
DNA Marker取5μL直接进行加样。
点样时应注意哪些问题？
点样位置：靠近负极一端凝胶凹槽
注意移液枪枪头不要损坏凝胶槽
点样后在凹槽内移液枪不能倒吸 点样后不能再移动电泳槽位置
4、电泳
加样完毕，将靠近样品槽一端连接负极，另一端连
接正极，接通电源，开始电泳。 样品进胶后，应控制电压降不高于 5V／cm(电压值 V／电泳板两极之间距离比)。当溴酚蓝条带移动到距离 凝胶前沿约lcm时，停止电泳。
DNA 存在的位置呈现橘红色荧光，肉眼可观察 到清晰的条带，拍照记录下电泳图谱。
四、实验结果
打印凝胶电泳图，贴于实验报告上，并对实
验结果进行讨论，分析所测未知DNA的大小。
五、课后研讨题
1、总结本实验操作的关键环节和注意事项。
2、实验所用DNA染料EB具有潜在的致癌性，查阅
资料，查找可替代EB的染料并说明优缺点。 3、查阅资料，举例说明DNA琼脂糖凝胶电泳的应 用和发展。