常用培养基的配方
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常用培养基的配方
Pleasure Group Office【T985AB-B866SYT-B182C-BS682T-STT18】
伊红美蓝培养基
原理
一般用来鉴定大肠杆菌。
伊红为酸性染料,美蓝为碱性染料。
当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色,再与美蓝结合形成紫黑色菌落,并带有绿色金属光泽。
在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色,伊红和美蓝不能结合,故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培养基上不生长。
常用的伊红美蓝乳糖培养基,可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌。如果有大肠杆菌,因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸,菌体带H+,故菌落被染成深紫色,从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽。
用伊红美蓝培养基鉴定水中大肠杆菌
步骤如下:
①制作伊红美蓝培养基,趁热注入培养皿中,凝成平板,待用。
②用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水,按1:10稀释。
③取毫升稀释液接种于伊红美蓝培养基上。用平板划线分离法进行分离。
④将划线后的培养皿倒置37℃温箱中培养18~24小时。培养基中会出现大肠杆菌菌落,菌落中心呈暗蓝黑色,发金属光泽。
⑤将菌落接种于斜面培养基上(由营养琼脂培养基制成)。
蛋白胨 10g
乳糖 10g
磷酸氢二钾 2g
琼脂 20~30g
蒸馏水 1000ml
2%伊红水溶液 20ml
%美蓝水溶液 13ml
储备培养基的制备
先将琼脂加至900ml蒸馏水,加热溶解,然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨,混匀使之溶解,再以蒸馏水补足至1000ml,调整PH为~。趁热用脱脂棉或绒布过滤,再加入乳糖,混匀后定量分装于烧瓶内,置高压蒸汽灭菌器内以115℃灭菌20min,贮存于冷暗处备用。
制法
将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中,校正PH,分装于烧瓶内,121℃高压灭菌15min备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂,冷至50~55℃,加入伊红和美蓝溶液,摇匀,倾注平板。
麦康凯培养基
原理
1.全称麦康凯琼脂或是麦康凯
2.一种用于分离鉴定的培养基,杆菌在其上呈红色或,有的菌落只是中间红色。
配置方法
蛋白胨17g
脙胨3g
猪胆盐(或牛、羊胆盐) 5g
氯化钠?
5g琼脂?
17g蒸馏水1000mL
乳糖10g
%结晶紫水溶液 10mL
%中性红水5mL
麦康凯-制法
1 将蛋白胨、胨、胆盐和氯化钠溶解于400mL中,校正。将琼脂加入600mL加热溶解。将两液合并,分装于烧瓶内,121℃灭菌15min备用。
2 临用时加热溶化琼脂,趁热加入乳糖,冷至50~55℃时,加入结晶紫和中性红水溶液,摇匀后倾注平板。
注:结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌。
吲哚试验
吲哚(indol)试验有些细菌如大肠埃希菌、变形杆菌、霍乱弧菌等能分解培养基中的色氨酸生成吲哚(靛基质),经与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用,生成玫瑰吲哚而呈红色,是为吲哚试验阳性。
LB培养基
配方
1g提取物0.5g1g-2g 100ml
LB培养基-LB培养基条件
LB培养基-固态培养基
LB固体培养基1L和液体一样,加15g琼脂粉,一定要在温度降下之前加好抗生素,并且倒好板。
LB固体培养基倒板
1.配制:100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉
2.抗生素的加入:高压灭菌后,将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴中,待培养基温度降到55℃时(手可触摸)加入抗生素,以免温度过高导致抗生素失效,并充分摇匀。
3.倒板:一般10ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后,打开盖子,在紫外下照10-15分钟。
4.保存:用封口胶封边,并倒置放于4℃保存,一个月内使用。
牛肉膏蛋白胨培养基(营养琼脂)
配方
10g;3g ;5g;15~20g;1000mL;
制法
将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内,加入15%氢氧化钠溶液约2mL,校正pH 至~。加入琼脂,加热煮沸,使琼脂溶化。分装烧瓶,121℃高压灭菌15min。
注:此培养基可供一般细菌培养之用,可倾注平板或制成斜面。如用于菌落计数,琼脂量为%;如作成平板或斜面,则应为2%。
甲基红试验
甲基红试验-化学属性
甲基红(Methyl Red)试验
肠杆菌科各菌属都能发酵,在分解葡萄糖过程中产生,进一步分解中,由于糖代谢的途径不同,可产生乳酸,、醋酸和甲酸等大量酸性产物,可使培养基PH值下降至以下,使甲基红变红。
甲基红试验-试验方法
挑取新的待试纯培养物少许,接种于通用培养基,培养于36±1°C或30°C(以30°C较好)3~5天,从第二天起,每日取培养液1ml,加甲基红指示剂1~2滴,阳性呈鲜红色,弱阳性呈淡红色,阴性为黄色。迄至发现阳性或至第5天仍为阴性、即可判定。甲基红为酸性指示剂,pH范围为~,其pK值为。故在以下,随酸度而增强黄色,在以上,则随碱度而增强黄色,在或上下接近时,可能变色不够明显,此时应延长培养,重复。
尿素酶
某些能产生尿素酶,分解尿素产生大量的氨,使培养基变碱。将待检菌接种于含有尿素的培养基中,35℃孵育18~24h,观察结果。红色为阳性,不变为阴性。主要用于肠杆菌科变形、普罗威登菌属、克雷伯菌属及假单胞菌属的鉴定。
明胶液化
gelaune liquefaction指把的现象。
明胶液化-它的特征
这种能力可因细菌种类不同而有显着差异,因此很早以来就被用来作为、的一种特征。明胶液化-适应范围
、、属均具有能力,而大肠杆菌就无这种液化能力。由于明胶是在热水中溶解胶原(collagen)而成的,因此,它是由产生于体外的蛋白酶进行分解的。用血清或蛋清清蛋白代替明胶也可看到大致相同的现象。