第六章兽医生物制品制造新技术
实用生物技术《生物制品学》大纲
《生物制品学》教学大纲适用专业：生物技术专业(实用生物技术方向) 学分：4.0分理论学时：44 实验学时：20一、课程在教学计划中的地位、作用生物制品学是生物技术专业(实用生物技术方向)本科的一门专业选修课，本课程以动物免疫学、微生物学、动物药理、动物传染病、生物化学及生物工程学等学科为基础的综合性应用科学。
主要讲授传染病的免疫预防、诊断和治疗用生物制品的相关的基础理论、生产制造、质量检验和质量控制及保藏和使用。
通过学习使学生具有生物制品学的基本知识、基础理论和基本技能，为生物制品的生产制造、使用及传染病免疫预防、诊断和治疗打下良好基础。
二、本课程的教学目标本大纲是为满足畜牧业生产、建设、管理、服务第一线需要，通过本课程的学习，使学生在掌握生物制品学理论的基础上了解和掌握动物生物制品的工艺，掌握生产的基本原料、设备和基本技术，兽医生物制品的生产过程。
通过课程教学，培养学生观察、思考、分析问题的能力和实事求是，严肃认真的科学态度，使学生充分了解生物制品及制备，同时能利用所学知识解决生产中的一些实际问题，为社会培养技能性强的适用型人才。
三、课程基本要求、内容(一)基本要求要求学生掌握本课程的基本理论和基本技能，熟练掌握常用理论和方法，并通过实践技能训练及实验课，将理论与实践相结合。
注意启发式教学，努力反应本学科前沿的新成果、新动向。
掌握兽医生物制品的相关理论和制造的基本技术。
(二)课程内容第一章绪论①教学目的：要求学生掌握兽医生物制品的概念、应用、分类及命名原则，了解兽医生物制品的历史和发展趋势。
②教学内容：兽医生物制品学的分类、命名；兽医生物制品的发展简史和趋势。
③教学要求：重点使学生兽医生物制品的概念、如何按生物学性质的分类、了解兽医生物制品的命名原则、发展的历史和趋势。
难点疫苗按抗原性质的分类及各类之间的区别。
第二章生物制品的免疫学理论①教学目的：使学生了解生物制品的免疫学理论。
②教学内容：免疫学预防和治疗：免疫预防的途径、主动免疫和被动免疫、影响生物制品的作用因素和免疫失败。
兽医生物制品生产的基本技术
兽医生物制品生产的基本技术兽医生物制品生产的基本技术【知识目标】·熟悉① 兽医生物制品菌(毒)种的概念及保存；② 病毒增殖方法；③ 实验动物的分类及特点；④ 实验动物的概念；⑤ 实验动物的正确选择。
·理解① 细菌的生长繁殖规律；② 病毒的组织细胞培养。
·掌握① 细菌培养方法及培养基的制备；② 禽胚培养技术；③ 掌握实验动物的捕捉、保定和采血技术。
·了解① 兽医生物制品菌种、毒种的分类及选育与鉴定；② 细菌生长繁殖的营养要求；③ 实验动物的繁育与生产管理。
【能力目标】·能进行细菌培养、禽胚培养等操作；·能应用动物实验技术。
第一节菌种与毒种选育技术一、菌(毒)种的概念与分类菌(毒)种是国家的重要生物资源，世界各国对这项资源都极为重视，并设置各种专业性保藏机构，现在不少国家的菌种与毒种中心都采用计算机进行管理。
我国于1980年成立了兽医微生物菌种保藏管理中心，设在中国兽药监察所(简称中监所)，专门从事兽医微生物菌种的收集、保藏、管理、交流和供应。
(一)、菌(毒)种的概念兽医生物制品的菌种与毒种是指应用于兽医生物制品生产、检定和研究的细菌菌种、病毒毒种以及分类地位在原虫以下的生物种，主要指兽医生物制品生产、检定用的菌种与毒种。
(二)、菌(毒)种的分类兽医生物制品用的菌(毒)种，按其存兽医生物制品生产、检定过程中的用途可分为四类：1．生产用的菌(毒)种(1) 直接生产用的菌(毒)种生物秀—专心做生物！ｗｗｗ．ｂｂｉｏｏ．ｃｏｍ易生物－领先的生物医药商务平台ｗｗｗ．ｅｂｉｏｅ．ｃｏｍ生物秀论坛－学术交流，资源共享，互助社区ｗｗｗ．ｂｂｉｏｏ．ｃｏｍ／ｂｂｓ／直接用本微生物或其产物制备疫苗、类毒素、诊断抗原等生物制品，参与制品的加工与处理，如制备新城疫油佐剂火活疫苗的新城疫病毒，制造破伤风类毒素的破伤风棱菌，生产鸡白痢全血玻板凝集抗原的鸡白痢沙门氏菌等。
兽医生物制品学 教学大纲
兽医生物制品学Veterinary Biologicology一、课程基本情况课程编号：05130245课程总学时：32 (讲课32 ，实验0 ，上机0 ，实习0 ，课外学时0)课程学分：2课程分类：选修开设学期：春开课单位：动物医学院预防兽医系传染病微生物教研室适用专业：动物医学所需先修课：动物免疫学、兽医微生物学、家畜传染病学课程负责人：二、课程内容简介兽医生物制品学是动物医学专业的选修课。
本课程以兽医生物制品为核心，由兽医生物制品的基本知识、兽医生物制品的生产技术和生物制品制造实例三个部分所组成。
兽医生物制品的基本知识包括：兽医生物制品的概念及分类；我国兽医生物制品发展的历史与成就；兽医生物制品学的发展前景；灭活剂、保护剂与佐剂。
兽医生物制品的生产技术包括：兽医生物制品生产的基本程序和技术；兽医生物制品制造的新技术；兽医生物制品的质量监控。
生物制品制造实例包括细菌性疫苗、病毒性疫苗、诊断制剂和治疗制剂的制造过程和检验规程。
Veterinary Biologicology is an elective course for the students in College of Animal Medicine. This curriculum take the veterinary biological products as a core, which is composed of three parts namely the elementary knowledge of veterinary biologics, the manufacture technologies of veterinary biologics and the manufacture examples of several veterinary preparations. The first part includes the concepts and classifications of veterinary biologics, the development history and achievement about veterinary biologics in our country, the veterinary biologics prospects for development, and inactivators, protectors and immunologic adjuvants. The second part includes the main routines and technologies, the new technologies and the quality monitoring of veterinary biologics. The third part includes the manufacture process and examination standards of bacterium vaccine, virus vaccine, diagnosis preparations and treatment preparations.三、各部分教学纲要1、课堂讲授部分教学内容要点、基本要求及学时数(32学时)第一章兽医生物制品学绪论（2学时）兽医生物制品学的概念、发展简史以及在动物疫病防制中的作用，我国兽医生物制品研究和生产的现状、存在的问题以及解决问题的对策。
兽用新生物制品管理办法.doc
兽用新生物制品管理办法［失效］发文单位：农业部发布日期：1989-9-2执行日期：1989-9-2生效日期：2004-7-1第一章总则第二章新制品的分类和命名第三章新制品的研制要求第四章新制品的审批程序第五章新制品的生产第六章附则第一章总则第一条根据《兽药管理条例》第二十二条的规定，制定本办法。
第二条兽用新生物制品（以下简称新制品）系指我国创制或首次生产的用于畜禽等动物疫病预防、治疗和诊断的生物制品。
对已批准的生物制品所使用的菌（毒、虫）种和生产工艺有根本改进的，亦属新制品管理范畴。
第三条凡从事新制品的研究、生产、检验、使用、监督管理的单位和人员，都必须遵守本办法。
第二章新制品的分类和命名第四条新制品按管理要求分为三类：第一类：我国创制的制品；国外仅有文献报道而未批准生产的制品。
第二类：国外已批准生产，但我国尚未生产的制品。
第三类：对我国已批准的生物制品使用的菌（毒、虫）种和生产工艺有根本改进的制品。
第五条新制品的命名要符合“生物制品命名原则”（见附录一）的规定。
第三章新制品的研制要求第六条新制品应经过实验室试验、田间试验、中间试制、区域试验等研究过程，取得完整的数据，提出制造及检验规程草案（有关试验数据要求见附录五）。
第七条实验室试验应包括菌（毒、虫）种的选育和鉴定，毒力、抗原性、免疫原性、稳定性、特异性试验和生产工艺，制品的安全性、效力（实验动物及使用对象动物）、免疫期和保存期试验等。
第八条田间试验应用3～5批实验室制造的新制品对生产条件下的使用对象动物进行试验，观察其安全性和效力。
第九条中间试制应按实验室生产工艺在生物药品厂或农业部认可的具备一定条件的中试车间试制5～10批（诊断制剂不少于3批）制品，定型生产工艺。
批量小且工艺复杂的诊断制剂，可在具备条件的实验室中间试制，批数同上。
第十条区域试验应用3批以上中间试制产品进行较大范围、不同品种的使用对象动物试验，进一步观察制品的安全性和效力。
兽医生物制品学教学大纲
兽医生物制品学教学大纲第一章绪论内容提要：本章主要讲述兽医生物制品学的概念及在预防疾病上的应用，兽医生物制品的分类、命名原则；兽医生物制品发展的历史、成就及前景。
教学目标：掌握兽用生物制品的概念、分类、应用，了解兽用生物制品的命名原则、兽医生物制品发展的方向。
计划课时：4学时1.1兽医生物制品学的概念与应用1.1.1兽医生物制品学的概念兽医生物制品的概念；兽医生物制品学的概念1.1.2兽医生物制品的应用免疫预防；诊断；治疗1.2兽医生物制品的分类与命名原则1.2.1生物制品的分类1.2.2生物制品的命名原则1.3我国兽医生物制品的发展历史及前景1.3.1兽医生物制品的发展简史1.3.2兽医生物制品的发展前景第二章生物制品的免疫学理论内容提要：主要讲述抗原与抗体、免疫系统与免疫应答、免疫血清学技术教学目标：掌握抗原抗体的概念。
主要的微生物抗体，免疫球蛋白；理解免疫应答的机制；掌握体液免疫应答细胞免疫应答；熟悉免疫学诊断与检测的常用技术。
计划课时：16学时2.1抗原与抗体2.1.1抗原抗原的概念、构成免疫原的条件、抗原决定簇、抗原的交叉性、主要抗原微生物2.1.2抗体免疫球蛋白与抗体、Ig的分子结构、Ig的主要特性与免疫学功能2.2免疫系统与免疫应答2.2.1免疫系统免疫器官、免疫细胞、细胞因子2.2.2免疫应答免疫应答的基本过程、体液免疫应答、细胞免疫应答、免疫耐受、免疫应答的机制2.3免疫血清学技术2.3.1直接凝集实验2.3.2间接凝集实验2.3.3酶联免疫吸附试验2.3.4免疫荧光试验2.3.5病毒中和试验2.3.6补体结合试验第三章灭活剂、保护剂与免疫佐剂内容提要：介绍灭活剂、保护剂、免疫佐剂、新型免疫佐剂教学目标：掌握灭活剂、佐剂、保护剂的概念、影响灭活剂作用的因素，理解灭活剂、佐剂、保护剂在兽用生物制品生产中的作用。
计划学时:6学时3.1灭活剂3.1.1灭火与灭活剂灭火与灭活剂的概念、灭火的类型、3.1.2常用的灭活剂的灭火机理与应用甲醛、烷化剂、苯酚、结晶紫、β-丙酰内酯3.1.3影响灭火作用的因素3.2保护剂3.2.1保护剂的组成及作用机理做成、作用机理3.2.2保护剂的种类3.2.3影响冻干保护剂效能的因素3.2.4常用的冻干保护剂不同微生物适用的保护剂、兽医生物制品常用的保护剂3.3免疫佐剂3.3.1佐剂的概念与作用机理3.3.2佐剂的分类3.3.3常规免疫佐剂铝盐类佐剂、油乳佐剂、蜂胶佐剂3.4新型免疫佐剂3.4.1细胞因子类佐剂概念与分类、作用特点、应用、重要的细胞因子3.4.2 CpGDNA概念及特点、免疫学活性、佐剂效应与应用前景3.4.3基因工程减毒素3.4.4其他新型免疫佐剂免疫刺激复合物、脂质体佐剂、MF59佐剂第四章兽医生物制品生产的基本技术内容提要：本章主要讲述菌（毒）种选育技术，细菌培养、病毒增值技术，疫苗制造流程，诊断、治疗制剂的制造技术以及冷冻真空干燥，干燥技术。
兽医生物制品（黄淑坚）
兽医生物制品（黄淑坚）绪论一、生物制品与兽医生物制品1、生物制品：利用微生物及其代谢产物、寄生虫及其代谢产物、动物毒素→抗毒素、人或动物的组织、血液等经过加工处理制成用于人或动物相关疾病的诊断、预防、治疗的制剂。
2、兽医生物制品：专用于动物相关疾病的诊断、预防、治疗的制剂。
二、生物制品的发展史三、生物制品在生产中的应用1、诊断；2、预防；3治疗第一章常用兽医生物制品的种类（一）预防用兽医生物制品1、灭活苗（灭能苗）：利用物理或化学方法将病原微生物灭活使其丧失致病性和毒性加入佐剂制成；2、弱毒苗：利用物理、化学或微生物方法处理或传代微生物，使其失去致病性或仅造成隐性感染，大量繁殖后加入冻干保护剂制成；3、类毒素：细菌的外毒素经甲醛处理脱毒后免疫原性基本保持不变，加入佐剂制成（例：破伤风明矾沉降类毒素）；4、亚单位疫苗：通过物理、化学方法提取病原微生物表面保护性抗原，加入佐剂制成；5、合成肽疫苗：根据病原性微生物表面保护性Ag的氨基酸排列顺序，体外合成后加入佐剂制成；6、抗独特型抗体疫苗：根据免疫网络学说原理，利用第一抗体分子中的独特抗原决定簇（抗原表位）所制备的具有抗原的“内影像”结构的第二抗体。
该抗体具有模拟抗原的特性，故称之为抗独特型疫苗；7、基因工程苗：包括基因缺失苗（伪狂犬基因缺失苗）、基因表达疫苗；8、多联苗：利用多种微生物制成疫苗；9、多价苗：利用一种微生物多种血清型（或者血清亚型）制成疫苗；10、同源疫苗：一种微生物制成疫苗免疫动物后，用于预防该微生物强毒的感染与攻击，这种疫苗称为同源疫苗；11、异源疫苗：①用不同种微生物的菌（毒）株制备的疫苗，接种动物后能使其获得对疫苗中并未含有的病原体产生抵抗力；②用同一种中一种型（生物型或动物源型）微生物的菌（毒）株制备的疫苗，接种动物后能使其获得对异型病原体的抵抗力。
例：NDIV→PEG流行性腹泻;HTV→MDV鸡马立克病毒；猪瘟兔化弱毒苗→牛病毒性腹泻；表1-1 灭活疫苗与弱毒疫苗的比较种类优点缺点灭活疫苗比较安全，一般不发生全身性副作用，无返祖现象；有利于制备多价、多联等混合疫苗；制品稳定，受外界条件影响小，有利于运输、保存接种次数多、剂量大，免疫途径必须注射，不产生局部免疫；需要高浓度抗原物质，生产成本高。
新版兽医生物制品学
（4）合成肽疫苗
• 合成肽疫苗是一种仅含抗原决定簇的小肽; • 即用人工方法按天然蛋白的氨基酸顺序合成
保护性短肽，然后与载体蛋白连接后加佐剂 所制成的疫苗。
（5）转基因植物可食疫苗
• 利用分子生物学技术，将病原微生物的抗原 基因导入植物，并在植物中表达出活性蛋白;
• 人或动物食用含有该种抗原的转基因植物， 激发肠道免疫系统，从而产生针对相应病原 微生物的免疫能力。
目的基因表达
以获得的表达产物作为免疫原制成的疫苗， 称为基因工程亚单位疫苗。
例如： • 大肠杆菌菌毛基因工程亚单位疫苗 • 口蹄疫基因工程亚单位疫苗 • 乙型肝炎基因工程亚单位疫苗
（2）基因工程活疫苗
基因工程技术
病原微生物
删除其致病基因或部分片段
获得毒力丧失或降低的毒株
减毒彻底、不易力返祖、安全 遗传性能更稳定
血液制品(白蛋白、丙种球蛋白)
其他生物制品 —— 非特异性免疫制品(干扰素、胸腺肽)
微生态制品(促菌生)
2、按制备方法分类
普通制品 —— 利用一般生产方法制备的，
未经浓缩、纯化处理
精 制 品 —— 将原材料用物理或化学方法去除无效成分,
并进行适当浓缩
单价制剂 —— 只利用一种微生物的单一血清型
多价制剂 —— 利用一种微生物的若干血清型
第十三章 畜禽防疫
第一章 兽医生物制品概述
生物制品技术
• 是一种既古老而又充满时代信息的技术， 并与生命健康息息相关。
一、兽医生物制品的概念
根据免疫学原理，以微生物、寄生虫及其代 谢产物或免疫应答产物，以及动物组织等生物 材料为原料，通过生物学、生物化学或生物工
程学等方（法加b工i制o备lo的g一类ic生a物l制）剂。
第六章 诊断与治疗用兽医生物制品制造技术
免疫印迹法
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流式细胞仪
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流式细胞仪
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三、标记抗体
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1. 荧光素标记抗体
常用的荧光素有异硫氰酸荧光素（FITC）、 四乙基罗丹明（RB200）和四甲基异硫氰酸 罗丹明（TMRITC），其中FITC应用最广。
FITC分子中含有异硫氰基，在碱性（pH 9.0～9.5）条件下能与IgG分子的自由氨基 结合，形成FITC-IgG结合物，从而制成荧光 抗体。
40
2. 酶标记抗体技术
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酶标记抗体是用一定方法使抗体与酶共价结合， 利用抗体与抗原反应的特异性和酶催化反应的 高敏感性，通过酶专一性底物的显色反应来显 示样品中抗原的存在与否，从而对疾病做出诊 断。
用于抗体标记的酶有辣根过氧化物酶（HRP）、 碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等。
42
2. 酶标记抗体技术
二、抗病血清的制备 （一）动物的选择
1、抗病血清的制造既可用同种动物，也可用异种动物
用同种动物制造的血清
同源抗病血清
以抗病毒血清居多
用异种动物制造的血清
异源抗病血清
抗菌性和抗毒素血清为主
2、一般多选择大动物，这主要是考虑出血量问题 •实验室用：家兔、绵羊、鸡、豚鼠
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抗原、标准阳性血清、阴性血清由制标单位提供，按 说明书使用。
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受检血清应新鲜，无明显蛋白凝块， 无溶血 和无腐败气味。
洁净的玻璃板， 其上划分成4cm2的方格。
7
吸管或分装器， 适于滴加0.03 ml。
阳性对照 阳性
阴性对照
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阴性
第一节 诊断用生物制品制造技术
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（二）沉淀反应抗原
定义：沉淀试验抗原为胶体状态的可溶性抗 原，如细菌和寄生虫的浸出液、培养滤液、组 织浸出液、动物血清和白蛋白等。
生物制品制造新技术共46页文档
46、我们若已接受最坏的，就再没有什么损失。——卡耐基 47、书到用时方恨少、事非经过不知难。——陆游 48、书籍把我们引入最美好的社会，使我们认识各个时代的伟大智者。——史美尔斯 49、熟读唐诗三百首，不会作诗也会吟。——孙洙 50、谁和我一样用功，谁就会和我一样成功。——莫有两个……公平和实用。——伯克 7、有两种和平的暴力，那就是法律和礼节。——歌德
8、法律就是秩序，有好的法律才有好的秩序。——亚里士多德 9、上帝把法律和公平凑合在一起，可是人类却把它拆开。——查·科尔顿 10、一切法律都是无用的，因为好人用不着它们，而坏人又不会因为它们而变得规矩起来。——德谟耶克斯
兽医生物制品基本生产技术—兽医生物制品生产设备及污物处理
污物及尸体处理
1.污水处理 • 带毒污水→滤除粗渣→一级沉淀池→沉淀污水贮池
→臭氧或化学药品处理→接触池→检验合格→排放 →曝晒→专用鱼塘
污物及尸体处理
2.粪便残渣及垫草处理 发酵池堆积→密封→生物发酵→肥料
污物及尸体处理
3.动物尸体处理 （1）焚烧法 • 在焚烧容器内使动物尸体进行氧化反应或热解反应。 • 直接焚烧：在富养条件下，借助辅助燃料的热量对死亡动
污物及尸体处理
（3）生物发酵法 在死亡动物反应器中，加入生物菌种以及秸秆等辅料，产
生生物反应，使死亡动物分解。 适用范围小，处置速度较慢，对病原体杀灭不彻底。
设备，将分装ห้องสมุดไป่ตู้口朝上送入旋转台。
兽医生物制品的生产设备
（2）多头自动分装机 有3个以上分装头，分装速度每小时达5000瓶以上。
兽医生物制品的生产设备
（3）胶塞定位机 是实现冻干自动加塞的关键设备，作用是将已经灭菌处
理的胶塞在苗瓶口部精确定位。
兽医生物制品的生产设备
（4）自动灌装半加塞联动机 • 适用于冷冻干燥制品在冻干前灌装、半加塞工序，其工
12000r/min，容量小，很少用作专门的乳化设备。
兽医生物制品的生产设备
（2）胶体磨 用于疫苗与佐剂的乳化，以生产油乳剂灭活疫苗。
兽医生物制品的生产设备
（3）高压匀浆泵 一种制备超细液-液乳化物或液-固分散物的通用设备，
是胶体磨的替代产品。
高压匀浆系统
兽医生物制品的生产设备
•4.分装与包装设备 •（1）理瓶旋转工作台 ➢ 是输送经灭菌的分装瓶进行疫苗分装的作业流水线的第一个
作程序是将灭菌瓶传送到转盘上，由送瓶转盘送入间隙 运动的星形拨盘上进行定位分装、半加塞，然后装入冻 干盘内。
兽医生物制品电子教案
兽医生物制品电子教案第一章绪论第一节兽用生物制品的概念与命名原则一、兽用生物制品与兽用生物制品技术（一）兽用生物制品的概念兽用生物制品：是根据免疫学原理，利用微生物、寄生虫及其代谢产物或免疫应答产物制备的一类物质。
这类物质专供相应疾病的诊断、预防和治疗之用。
狭义上讲，兽用生物制品主要指疫苗、免疫抗血清及诊断制剂；广义上讲，兽用生物制品还应包括各种血液制剂、抗生素、非特异性免疫制剂等。
由此可见，兽用生物制品的含义和内容也将随着科学技术的发展而成为兽用保健制品。
（二）兽用生物制品技术概念与内容兽用生物制品技术：兽用生物制品技术是在动物微生物、免疫学、动物传染病的基础上，采用生物学、生物化学及生物工程等技术和方法，研究和制备兽用生物制品，用以解决动物疫病防治的一门新兴应用技术。
主要内容包括两个方面：1是兽用生物制品的生物学，即研究病原微生物及宿主的关系。
2是研究兽用生物制品的工艺学、制造、保藏、使用方面的内容。
二、兽用生物制品的命名原则农业部规定的《兽医新生物制品管理办法》有10条原则1、命名原则：明确，简练，科学。
2、不用商品名和代号。
3、一般制品为：动物名称+病名+制品名称，如猪瘟兔化弱毒疫苗。
4、共患病不列出动物名：如破伤风类毒素或抗毒素。
5、疫苗名称要规范，主动免疫的菌苗，疫苗统称为疫苗。
6、分活疫苗和死疫苗。
7、同一类不同毒株的疫苗，全称后面加括号注明，如猪丹毒活疫苗（GC42）--是哈尔滨兽研所通过豚鼠370代选育后，再通过雏鸡42代选育成的弱毒疫苗。
猪丹毒活疫苗（G4T10）是江苏兽研所，将370代的菌，再通过培养基里加锥黄素，50代选育的。
8、联苗：动物名称+若干病名+X联苗，如猪瘟、猪丹毒、猪肺疫三联疫苗。
简称猪三联。
9、多价苗：动物名+病名+若干血清型+X价疫苗，如仔猪黄白痢K88，K99，P987三价弱毒疫苗。
10、生物制品制造方法不注明，属企业秘密。
第二节兽用生物制品的分类及应用一、兽用生物制品的分类兽用生物制品种类繁多，只有进行分类，才便于学习和实践中使用和区别，常规的分类有两种，1是按性质和用途分类；2是按物理和制造进行分类，下面先讲第一种分类方法。
WD
•1、兽医生物制品有什么作用？有哪些种类？•2、简述生物制品的命名原则•3、灭活剂的灭活机制机理是什么？影响灭活的主要因素有哪些？•5、什么冻干生物制品要加保护剂？• 6.生物制品制造新技术包含哪些技术？有何特点？•7.生物制品用强、弱菌（毒）种应具备哪些基本标准？•8.概述生物制品菌（毒）种的筛选程序和内容。
•9.概括生物制品弱菌（毒）种的选育途径和常用方法。
•10.细胞培养方法有哪些种类？有何特点？•11.细菌和病毒培养各有哪些基本技术？•12.简述菌苗和病毒性灭活苗疫苗制造流程。
•13.诊断液应具备哪些特性？诊断液有哪些基本种类。
•14.何谓佐剂？免疫佐剂有哪些种类？佐剂加强免疫反应的机理是什么？•15,举出1～2种常规免疫佐剂，分别说明其特点和应用现状？•16.举出1～2种新型免疫佐剂，分别说明其特点和应用前景？•17.什么是细胞因子？有何作用特点？•18.、兽医生物制品企业常用的灭菌与净化设备有哪些？主要技术性能是什么？•19.、生产冻干兽医生物制品需要哪些设备？冷冻干燥设备包含哪些基本系统？•20、生物制品生产和使用中有哪些重要冷藏和冷藏运输设备？如何选择使用？•21、兽医生物制品企业应具备哪些废弃物处理设施？简述其处理原理。
•22..试述我国兽用生物制品生产菌种、毒种、虫种的管理。
•23..试述我国兽用对新生物制品和进口兽医生物制品的管理要求。
•24.无菌或纯粹检验、安全检验和效力检验的基本要点•25..什么是半成品检验和成品检验，其主要内容有哪些？•26.举出3~4种常用的兽医生物制品保护剂。
•27.常用的保护剂和灭活剂的种类。
•28.制备高免血清和卵黄抗体的基本过程是什么？•29.简述高免血清作用特点和使用注意事项。
•30.冷冻真空干燥的基本原理和意义是什么？•1、兽医生物制品有什么作用？有哪些种类？•是根据免疫学原理，利用微生物、寄生虫及其代谢产物或免疫应答产物制备的一类物质，专供相应的疫病诊断、治疗或预防之用。
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学的特性保持不变。
第二节 生物技术诊断制剂
一、重组表达抗原 采用DNA重组技术制备。 优点：（1）用于常规方法无法制备的 诊断抗原；（2）用于制备高危险病原 体（如人兽共患病变异体）的诊断抗原。
体外诊断试剂用基因工程重组抗原
二、核酸图谱分析 包括核酸电泳图谱、核酸酶切图谱、寡核苷酸指纹图谱 分析等所使用的生化试剂及分子生物学试剂。在流行病学研 究方面具有重要价值。
体外重组DNA的技术主要包括3个基本环节： 基因的分离 、基因的重组 、基因的转化和表达 。
二、优越性 研究、开发和生产新疫苗的3个基本要素: 安全性、有效性、成本低产量高。
用重组DNA技术研制的基因工程疫苗除了能保证 其具有用传统方法制备的疫苗一样的免疫原性以 外，其最大的优越性是安全性和经济效益好。前 者包括对接种疫苗的对象和生产疫苗人员的安全； 后者则主要由于基因工程疫苗的高产量和低成本
的抗体，即杂种抗体。
2.重构抗体（reshaped antibody）——改型抗体 3.单链抗体（single chain antibody）：是由VL区氨基酸序列与VH区氨基酸序列经肽 连接物连接而成。 4.单区（域）抗体（single domain antibody）：指VH或VL，其分子大小仅为完整抗体 的1/12。 5.噬菌体抗体（phage antibody）：是将已知特异性的抗体分子的所有V区基因在噬 菌体中构建成基因库，用噬菌体感染细菌，模拟免疫选择过程，具有相应特异性的 重链和轻链可变区即可在噬菌体表面呈现出来。 6.催化抗体（catalytic antibody）：是通过化学和免疫学相结合的方法，人工构建的 具有某种持异性催化作用的单制品制造新技术
目标
生物制品制造新技术的主体。 生物制品制造新技术生产疫苗、抗体的类型 及基本要点。
以淋巴细胞杂交瘤技术和重组DNA技术为主体。 主要为疫苗和诊断制剂。
内容 第一节 基因工程疫苗 第二节 生物技术诊断制剂
第三节 抗体工程技术
第一节 基因工程疫苗 一、概念 是指用重组DNA技术研制的疫苗。
第三节 抗体工程技术
一、单克隆抗体（monoclonal antibody ，McAb ）
是指由一个B细胞分化增殖的子代细胞（浆细胞）产生的针对单一
抗原决定簇的抗体。这种抗体的重链、轻链及其V区独特型的特异性、
亲和力、生物学性状及分子结构均完全相同。
单克隆抗体与多克隆抗体（polyclonal antibody ）比较
①用于常规多价抗原的免疫学 检测、易出现交叉反应 ； ②用于紧急预防及治疗各种微 生物、外毒素引起的疾病
只识别一种抗原决定簇的同一亚 类Ig，其分子结构纯一，独特性 完全相同
①作为第一抗体，用ELISA、放免、 免疫酶联等方法检测微量抗原， 可避免交叉反应• ； ②将肿瘤特异性McAb与药物连 结，用于治疗肿瘤
基因工程抗体制备的基本过程是首先从杂交瘤或免疫脾细 胞、外周血淋巴细胞、肿瘤浸润淋巴细胞中提取总 RNA，
逆转录成cDNA，再经 PCR 分别扩增出抗体的重链和轻链
可变区（VH 和VL）基因，按一定的方式将 VH 和 VL 基因 克隆到表达载体中，在宿主细胞中表达并折叠成有功能的 抗体分子，筛选出高表达的细胞株，再用亲和层析等手段 纯化其表达产物。
用
途
二、基因工程抗体（genetic engineering antibody ）
又称重组抗体。采用DNA重组技术，根据研究者的意图
在基因水平上对 Ig 分子切割、拼接或修饰，导入受体细胞， 表达产生新一代抗体。
1.嵌合抗体（chimeric antibody）：是指同一抗体分子中含有不同种属来源抗体片段
三、核酸探针（DNA probe ）
用放射性同位素、地高辛、生物素、荧光素等标记核酸分
子或其片段的一条链作为核酸探针，与处理样本中存在的互补
链结合为双链，成为核酸杂交，包括DNA-DNA杂交、DNARNA杂交、RNA-RNA杂交，可用于特定基因的检测和基因转 录活性的研究。
四、聚合酶链反应（polymerase chain reaction， PCR）
性 状 多克隆抗体 多株B细胞及其子代细胞 人或动物免疫血清，恢复期血 清 0.1～1.0mg/mL血清 单克隆抗体 单株B细胞及其子代细胞 B细胞杂交瘤的小鼠腹腔（或上 清液） 0.5～5.0mg/mL小鼠腹水 产生抗体的细胞 来 源 有效抗体含量
抗体成分及性质
能识别多种抗原决定簇的各类 及各亚类Ig
特异抗原的基因工程菌，大量生产亚单位疫苗，如重组亚
单位疫苗（genetic engineering vaccine） 。
四、质量控制
• 基因工程疫苗安全性要求：DNA重组后的基因产物无致病性、无毒 性，也没有因基因工程操作而引起的有害因素，或潜在的危险性。 • 基因工程疫苗有效性要求：保证DNA重组后表达的蛋白质具有良好 的抗原性。检验方法包括可用与特异抗体的结合能力的体外试验 （如免疫印染和酶联免疫反应），以及疫苗诱导的体液和细胞免疫 反应能抵抗攻击的免疫保护力等体内方法。 • 基因工程疫苗稳定性和可重复性：以同样的方法可进行重复生产 和制造，并且在特定的条件下，疫苗的各种遗传学、生物学、免疫
是DNA体外扩增技术，即以单链DNA为模板，在DNA聚合 酶的作用下引物沿5’→3’方向不断延伸，利用4种dNTP合成新 的互补DNA链，然后在高温下变性为单链，再在低温下使引物 DNA片段与其复性，并在DNA聚合酶的作用下开始新一轮DNA 合成，经如此反复循环（变性－退火－延伸）30－60次左右就 可在短时间内将目的DNA扩增数百万倍。
所带来的经济效益。
三、种类
1.通过基因突变或缺失的方法获得减毒活疫苗，如基因 缺失苗；或者将外源基因克隆到已获批准在临床使用的
细菌或病毒的载体中去制备成新的减毒活疫苗，如重组
活载体疫苗（genetic engineering live vetor vaccine） 。
三、种类
2.将外源基因克隆到大肠杆菌或酵母中去表达基因产物， 然后通过分离和纯化而获得特异的蛋白质，即制备能表达
高质量引物的设计和合成、PCR扩增条件的选择等是保证
PCR敏感与特异的关键因素。
五、基因芯片（genetic chip）
是指将许多特定的寡核苷酸片段或基因片段作为探针，有
规律地排列固定于支持物上，然后与待测的标记样品中的基因 按碱基配对原理进行杂交，在通过激光共聚焦荧光检测系统等 对芯片进行扫描，并配以计算机系统对每一探针上的荧光信号 作出比较和检测，从而迅速得出所要的信息。