第8讲 实验3 薄层板的制备及活化

朝上移至一个水平的平面上，阴干。
⑥ 把阴干后的板在105℃的烘箱中烘
30分钟。——活化。
⑦ 待板凉至室温后，置干燥器中保存
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关于配制CMC-Na：
先将称好的CMC-Na加入所需水量的8/10，让其充
分溶涨后,再加热煮沸,然后将剩余水慢慢加入.这样
在煮沸过程中不易形成颗粒,煮沸时间短. 溶液的浓度0.3-0.8%比较合适，实际操作中0.4 ％～0.5％最为实用， 浓度高：将来显色时如有加热过程板子容易发黑； 浓度低：铺的板子不结实，易掉渣，不易保存，点 样时易出洞。
② 取羧甲基纤维素（CMC-Na） 0.2g， 溶于25ml水中，在水浴上加热搅拌使 完全溶解，
③ 在三角烧瓶中把一份硅胶H和三份 CMC-Na溶液（0.8%）混合，并用力 振摇至少30秒。（混合均匀）
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ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
④ 将混合好的溶液倾倒在玻璃板上，
轻轻振动，使涂布均匀，水平放置 。
⑤ 铺好的板静置5分钟，然后把它们面
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分析
染料
二甲黄
苏丹红
靛酚蓝
原点至斑点中 心距离 原点至溶剂前 沿距离 Rf值 活度级别
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思考题
１、假如硅胶板在活化时出现裂板， 会是什么原因引起的？ ２、吸附剂的活度与吸附性强弱有何 关系？如被分离物质的极性大时，该 选择怎么活度的吸附剂？
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五、硅胶活度的测定
一般选用三种染料的薄层层析法进行 测定。 欧洲药典1969年记载用0.01%二甲基 黄、苏丹红、靛酚蓝的苯溶液各10μl 点滴于硅胶G或硅胶H薄层上，以苯为 展开剂，展开10cm（约20分钟），三 种染料应明显分离；
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① 点样与展开：取薄层板一块，在距 板的一端2cm处用铅笔轻轻划上起 始线并在距起始线10cm处划出前沿 线。 ② 在起始线上划上2-3个点样点，每点 间隔2cm，两侧点距边缘2cm。 ③ 用内径约1mm的平口毛细管轻轻点 上混合染料溶液，边点边用冷风吹， 原点直径应不超过2~3mm。
靛酚蓝
0.08±5%
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如Rf值＜标准值，表明硅胶的含水量 小（新鲜活化的硅胶板），吸附能力 强； 如Rf值＞标准值，表明硅胶的含水量 大（暴露在空气中时间较长的硅胶 板），吸附能力弱，活度级别为＞Ⅲ 级。
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靛酚蓝斑点接近于起始线；
二甲基黄斑点在薄层的当中；
苏丹红斑点位于两点之间， 则认为薄层板活性符合要求。
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三、仪器和试剂
玻璃板（5×10cm 或 2.5×7.5cm，洁净 且干燥） 薄层色谱用硅胶H
0.8% 羧甲基纤维素钠水溶液
层析缸、点样毛细管 混合染料：含二甲黄、苏丹红、靛酚蓝各 0.40mg/ml。展开剂：石油醚（A.R.）或 苯（A.R.）
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四、实验步骤
① 把玻璃板清洗干净并烘干；
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实验 三 薄层板的制备及活化
——硅胶板
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薄层色谱简介
薄层色谱中的吸附剂是铺在玻璃、塑料或 金属片或薄板上的较薄的、均匀的一层细 粉状物质，因支持剂的种类、制备方法和 选用溶剂的不同，可按吸附、分配或二者 结合的方式达到分离化合物的目的。 TLC中涂布的物质如硅胶、氧化铝、聚酰 胺等。硅胶是最常用的薄层色谱吸附剂。
取羧甲基纤维素（CMC-Na） 0.2g，溶 于25ml水中，在水浴上加热搅拌使完 全溶解，倒入烧杯中，加薄层层析用 硅胶（颗粒度10~40μm的约6~8g）。 混成均匀的稀糊，按照硅胶G薄层涂布 法制备薄层;（轻摇均匀涂布）
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或取0.8%羧甲基纤维纳10ml，倒入广口 瓶（高约10~12cm）中，然后逐步加入薄 层层析用硅胶3.3克，不断振摇成均匀的稀 糊； 把两块载玻片面对面结合在一起，这样每 片只有一面与硅胶糊接触，使薄片浸入硅 胶稀糊中，然后慢慢取出，分开二块薄片， 将未粘附硅胶糊的那一面水平放在一张清 洁的纸上，让其自然阴干，100℃下烘30 分钟。冷后于干燥器内备用。未消耗的硅 胶稀糊可贮存在广口瓶内，以供再用。
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（1）硅胶G薄层
取硅胶G或硅胶GF一份，置烧杯中加 水约3份混合均匀（加水量根据实际情 况自行调整），放置片刻； 随即用药匙取一定量，分别倒在一定 大小的玻璃片上（或倒入涂布器中， 推动涂布），均匀涂布成0.25~0.5mm 厚度，轻轻振动玻璃板，使薄层面平 整均匀；
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④ 挥干溶剂，将薄层板置于放有苯的 层析缸中，展开至前沿线时，取出， 挥干溶剂，划出实际前沿线。
⑤ 观察斑点的位置，测量计算出二甲 黄、苏丹红、靛酚蓝的Rf值，判断 活度。
（相关活度级别可查询有关资料）
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苯展开则应分成三个斑点，合格的硅胶粘 合薄层，其Rf值分别为： 染料名称 二甲黄 苏丹红 Rf值(cm) 0.58±5% 0.38±5% Ⅱ~Ⅲ级 5%~15% 活度级别 水份含量
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二、薄层板的制备
1．不加粘合剂的薄层涂布法
（1）氧化铝薄层 （2）纤维素薄层 （3）聚酰胺薄层
2．加粘合剂薄层的涂布法
（1）硅胶G薄层 （2）硅胶（H）羧甲基纤维钠（CMC-Na） 薄层
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（1）氧化铝薄层
将吸附剂置于薄层涂布器中，调节涂布器的高度， 向前推动，即得均匀薄层。 本实验主要用下述简易操作涂布薄层，取表面光 滑，直径统一的玻璃一支，依据所制备薄层的宽 度、厚度要求，在玻璃棒两端套上厚度为 0.3~1mm的塑料圈或金属环，并在玻璃棒一端一 定距离处套上较厚的塑料圈或金属环，以使玻璃 棒向前推动时能保持平行方向，操作时，将氧化 铝粉均均地铺在玻璃板上，匀速向前推动。
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当此类吸附剂的含水量增加时，吸附 剂的活性点被水中羟基占据的数目增 多，因此，自由活性点减少，吸附剂 的活度变小，吸附力也变小，于是被 吸附物质的Rf就变大。
因此, 为了使薄层板的水分含量相对 一致, 使用对薄板进行活化可以使Rf 值具有较好的重现性。
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（2）硅胶(H) CMC-Na薄层
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可以通过比较斑点的Rf值，或将未知 样品与对照品在同一板上展开至同样 高度，对样品进行初步的鉴定。 还可通过比较可见斑点的大小进行半
定量的判断。
还可以通过光密度测量法实现定量测 定。
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一、目的要求
1．掌握薄层板的制备及薄层层析的 操作方法； 2．掌握吸附剂活度测定的原理及方 法； 3．会应用薄层层析法检测识中草药 化学成分。
在水平位置放置，待薄层发白近干， 于烘箱中105℃活化0.5~1小时，冷后 贮于干燥器内备用。
活化温度和时间可依需要调整，一般 检识水溶性成分或一些极性大的成分 时，所用薄层板只在空气中自然干燥， 不经活化即可贮存备用。
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物质之所以能在吸附剂（以硅胶、氧化铝 或正相键合硅胶为例）的薄层上分离，是 因为吸附剂的表面及其孔隙的表面存在许 多活性点，被吸附物质（极性或可极化的 物质）的量及被吸附的牢固程度在其它条 件一定的条件下取决于活性点的强度（单 位面积的表面能量）及数目（单位质量的 表面积）， 单位质量吸附剂所含活性点的数目越多、 活性点的强度越大，则吸附剂的活度越高， 即，对物质（极性或可极化的物质）的吸 附能力越强，被吸附物质的Rf值就越小。
点样点
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国内青岛海洋化工厂出售薄层层析用的硅 胶在吸附剂名称之后加几个字标明的意思 是： 硅胶G（G是Gypsum石膏的缩写。表示 加了石膏），硅胶H（H表示不加石膏）， 硅胶GF254（表示加石膏和波长254显绿 色荧光的硅酸锌锰）。 硅胶GF365（表示加石膏和波长365nm显 黄色荧光的硫化锌镉）。
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（2）纤维素薄层
一般取纤维素粉1份加水约5份，在烧
杯中混合均匀后，倒在玻璃板上，轻 轻振动，使涂布均匀，水平放置，待 水分蒸发至近干，于100±2℃干燥 30~60分钟即得。
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（3）聚酰胺薄层
取锦纶丝经一系列加工使其完全溶解成透 明胶状溶液。 将此溶液适量倒在水平放置的洗净的玻璃 片上，并自然向周围推匀，厚度约0.3mm, 薄层太厚时，干后会裂开。 完全固化后变不透明白色，再放数小时后， 泡在流水中洗去甲酸，先在空气中晾干， 后在烘箱中0℃恒温加热活化15分钟，冷后 置干燥器中贮存备用。