临床PCR实验室的分区设计及工作流程

（3）应在标本制备区、扩增及产物分析区等相对有可能 出现“污染物”的区域安装排风扇或其它排风和有效的装置， 以使空气按试剂准备区标本制备区扩增（及产物分析） 区方向流动。
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临床PCR实验室的工作流程
试剂准备区
标本制备区
扩增区
产物分析区
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试剂准备区
PCR实验室中最为“洁净”的区域，不应有任何核酸的存 在，包括试剂中所带的标准品和阳性对照。
如果不在标本接收区分离血清（浆）标本，只 是简单的接收，则就不需要分离血清（浆）用 离心机、生物安全柜、加样器及其消耗品。
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理想的PCR实验室分区设计模式A
产物分析区
扩增区
标本制备区
试剂准备区
空气流向
空气流向 缓冲间
空气流向 缓冲间
空气流向 缓冲间
专用走廊
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工作流向
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理想的PCR实验室分区设计模式B
试剂准备 区
空气流向
其他实验室
其他实验室
空气流向
走廊
走廊
其他实验室
空气流向+
其他实验室
其他实验室
其他实验室
标本制备
区
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临床PCR实验室设计的一般原则
各区独立
注意风向 因地制宜
“十六字口诀”
方便工作
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产物分析区
扩增区
标本制备区
试剂准备区
空气流向
传递窗
空气流向
传递窗
空气流向
每次扩增后，可使用可移动紫外灯对 扩增热循环仪进行照射。
扩增仪应定期进行校准。
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产物分析区
产物分析区是临床基因扩增检验的最后一个工作 区域，也是需要打开扩增后反应管进行扩增产物 分析检测的地方。是PCR实验室“最不洁净”的 区域。
仪器设备可有：电泳仪、凝胶成像系统、测序仪、 （酶标仪和洗板机）、核酸杂交仪、恒温设备等。
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临床标本的接收
通常的工作流程：标本采集 血清分离
编号 保存或检测
应在四个测定区域之外的地方或区域内接 收
接收的标本应收集在原始容器中 在核酸提取时带入至标本制备区
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标本的接收区的仪器设备要求
如果在标本接收区分离血清（浆）标本，有1 台分离血清（浆）用离心机、1台生物安全柜、 1台冰箱、加样器及相应一次性经高压处理的 消耗品如带滤芯吸头、标本接收编号记录本以 及记号笔等即可。
加样时，先加提取的核酸模板样本，每加完一个即盖好盖 子，然后加阳性质控核酸模板，再就是标本制备阴性质控 和仅含按样本一样稀释的主反应混合液的扩增阴性质控， 这样做的目的是，最大可能地测出以前扩增产物的交叉污 染。
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扩增区
热循环仪的电源应专用，并配备一个 不间断电源（UPS）或稳压电源。
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标本制备区
仪器设备主要有生物安全柜、超净台、加样器、 高速台式（冷冻）离心机、加热模块或水浴箱、 冰箱等。生物安全柜不应放在实验室门口等易受 人员走动影响的地方，也不应直对分体式空调。
主要是用于核酸样本的提取，标本的制备应在生 物安全柜内进行，可防止标本气溶胶的扩散。
加样器吸头必须带滤芯。
所有实验用洁净物品如离心管、吸头等的存放和准备处。 商品试剂盒： 75%乙醇、焦碳酸二乙酯（DEPC）处理水、
NaOH等可能需要自配 自制试剂：一次较大量配制，然后分装成小瓶保存，每次
检测时，取出一小瓶使用，未用完的即弃掉，不再使用。 仪器设备主要有加样器、天平、离心机和冰箱等，最好配
备超净工作台。
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临床PCR实验室最有效的防“污染”措施
实验室的“通风” 次氯酸钠溶液的使用 1mol/L HCl溶液的使用 紫外照射 无水乙醇溶液？
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传递窗
空气流向
缓冲间
缓冲间
缓冲间
专用走廊
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工作流向
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符合基本要求的临床PCR实验室的条件
（1）试剂准备区、标本制备区和扩增及产物分析区等三 个或四个区域在物理空间上，必须是完全相互独立的，各 区域无论是在空间还是在使用中，应始终处于完全的分隔 状态，不能有空气的直接相通。
（2）各区的可移动的仪器设备及各种物品包括实验记录 本、记号笔、试管架及清洁用具等必须专用。
析区
空气流向 门
门
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扩增和产 物分析区
空气流向
其他实验室
试剂准备区
空气流向
其他实验室
其他实验室
走廊
走廊
其他实验室
空气流向
标本Hale Waihona Puke Baidu备区
其他实验室
其他实验室
其他实验室
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标本制备区
空气流向+
空气流向
试剂准备区
门
门
扩增及产
物分析区
空气流向++
门
门
扩增和产 物分析区 空气流向++
其他实验室
产物分析区
扩增区
标本制备区
试剂准备区
空气流向
空气流向 缓冲间
空气流向 缓冲间
空气流向 缓冲间
专用走廊
工作流向
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A
扩增区
门 产物分析区
标本制备区 门
门 试剂准备区
门
外走廊
门
B
扩增及产物 分析区
标本制备区 门
试剂准备区 门
门
外走廊
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门
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标本制备区
空气流向
空气流向
试剂准备区
门
门
扩增及产物分
临床PCR实验室的分区 设计及工作流程
卫生部临床检验中心 李金明
Tel.010-58115053 Email: ljm63hn@yahoo.com.cn 2010.1.12-13福州
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临床基因扩增检验实验室的设计
依据：卫生部颁发的《临床基因扩 增检验实验室管理暂行办法》（卫 医发[2002]10号）
使用加热模块时，如在模块孔中填入二氧化硅细
砂，然后将标本管置于细砂中温育，可得到较为
一致的温育温度。
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标本制备区
经高温温育后的标本，应冷至室温后再离心。
标本制备的全过程中都应戴一次性手套，并经常 更换（感觉有污染时）。
设备都应定期或在有明显已知污染后，使用中性 消毒剂如异丙醇、戊二醇等或10%次氯酸钠溶液 消毒，使用10%次氯酸钠溶液消毒后，应再用 70%乙醇洗涤去除残留的次氯酸钠。
生物安全：洗眼器，并配备一个急救箱，箱内可
放置75%酒精、络合碘、棉签、创可贴等必要的
急用药具。
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扩增区
扩增反应体系的配制和提取核酸的加入，可在标本制备区 也可在本区内进行，关键是要防止产物的污染。如果空间 允许的话，也可在一个独立的区域内进行。
采用“巢式”PCR方法的第二轮扩增的加样，必须在本区 进行。