临床免疫学自身抗体检测及应用

第二十章自身抗体检测及应用

本章考点

1.概念

2.自身抗体的特性、概念

3.常见自身抗体的检测

4.自身抗体检测的临床应用

自身免疫：当机体免疫系统受某种因素作用使自身免疫耐受削弱或破坏时，免疫系统会对自身成分包括：正常或变性的组织、器官、细胞、蛋白质或酶类等自身抗原产生免疫应答反应，出现自身抗体或致敏淋巴细胞的这种现象称为自身免疫。

自身免疫性疾病：当某种原因使自身免疫应答过分强烈时，也会导致相应的自身组织、器官损伤或功能障碍，这种病理状态称为自身免疫性疾病。

自身抗体；血循环中针对自身组织、器官、细胞及细胞内成分的抗体称为自身抗体。

正常人血清中可有多种微量的自身抗体或致敏淋巴细胞，它能清除体内衰老细胞而起到免疫稳定的效应。

第一节自身抗体的特性

自身抗体是自身免疫性疾病的重要标志。每种自身免疫性疾病都伴有特征性的自身抗体谱。患者血液中存在高效价自身抗体是自身免疫性疾病的特点之一，也是临床确诊自身免疫性疾病的重要依据。

产生自身抗体的抗原包括以下几种：化学修饰的组织抗原；与自身组织成分存在交叉反应的外来抗原；隐蔽抗原；自身细胞HLA-DR抗原的表达以及低分化的组织抗原等，在一定条件下，均可刺激机体产生自身抗体。自身抗体与疾病的关系：某些自身抗体对某种疾病的诊断具有高度特异性，已经成为该病的血清标记性抗体或特异性抗体；某些自身抗体与疾病的活动性有相关性；少数自身抗体参与了免疫病理性损伤。

测定自身抗体的意义：自身免疫性疾病的诊断；疾病活动性的判断；疗效的观察；指导临床用药等。

第二节常见自身抗体的检测

自身抗体种类很多，这里只是简单介绍几种常见的自身抗体的检测。

一、类风湿因子

（一）概念

类风湿因子（rheumatoid factor，RF）是一种抗人或动物IgG分子Fc片段抗原决定簇的抗体，是以变性IgG为靶抗原的自身抗体。可与人或动物的变性IgG结合，而不与正常IgG发生凝集，最多见于类风湿性关节炎患者。

Rose等1984年在RA（rheumatoid arthritis）患者血清中发现RF。RF有IgM、IgG、IgA和IgE型，IgM型为主要类型。

（二）检测方法

1.胶乳凝集试验：以IgG吸附于聚苯乙烯胶乳颗粒上，如血清中含有RF，可与乳胶颗粒出现凝集反应。该法只能定性或半定量，灵敏度及特异性不高，只能检测IgM型RF。

2.速率散射比浊法：定量检测、准确、快速，准确性和敏感性高于胶乳凝集实验。也只能检测IgM型RF。

3.ELISA法：可检出不同Ig类型的RF，在酶标记抗体时，分别标记IgG、IgA或IgM。

（三）临床应用

RF主要见于类风湿，在类风湿性关节炎患者中的检出率很高，RF阳性支持早期RA的倾向性诊断，对年轻女性应进行RA和风湿热的鉴别；而对非活动期RA的诊断，需参考病史。但RF也像ANA一样，并不是RA独有的特异性抗体。在SLE患者约有50%RF阳性，在其他结缔组织病如SS、硬皮病、慢性活动性肝炎以及老年人中均可有不同程度的阳性率。部分正常人也可出现。但RF滴度或含量一般较低（<40IU／ml）。RF无严格特异性，不是RA的唯一诊断标准。RF阴性不能排除RA。

IgM型RF：>80IU／ml伴严重关节功能障碍者，提示预后不良。

IgG型RF：与患者滑膜炎、血管炎和关节的症状密切相关。正常人以及非RA患者中很难检出。

IgA型RF：10%RA可检出，为RA临床活动的指标，与骨质破坏以及关节炎症状的严重程度显著相关。

IgE型RF：在关节液、胸水中高于血清水平。

二、抗核抗体

抗核抗体（antinuclear antibody，ANA）是以自身真核细胞成分作为靶抗原的一组自身抗体的总称，泛指各种核成分的抗体，是一种广泛存在的自身抗体。迄今已发现20余种。性质主要是IgG，也有IgM、IgA、IgD和IgE，可与不同来源的细胞核起反应，无器官特异性和种属特异性。ANA主要存在于血清中，也可存在于胸水、关节滑膜液以及尿液等体液中。

ANA可见于多种疾病，主要存在于自身免疫性疾病患者血清中，如SLE、SS、MCTD、类风湿性关节炎等。也可见于慢性肝病、病毒感染以及正常老年人、妊娠妇女等。ANA阴性不能排除自身免疫性疾病的诊断；阳性也不一定是自身免疫性疾病。

由于细胞核成分的复杂性，不同成分的抗原性也不同；因此就会有多种不同类型的ANA。ANA在不同的疾病中呈现不同的组合，不同的疾病有自己的抗核抗体谱。有些ANA只是针对某一特定成分，只在某一疾病中出现，成为该病的血清标志性抗体。ANA是一个重要的筛选试验。

分类：按理化特性和抗原分布部位分为四大类。包括抗DNA抗体、抗组蛋白抗体、抗非组蛋白抗体、抗核仁抗体。

命名：

1.根据抗原化学名称命名：例如抗dsDNA、抗RNP。

2.以第一位检出患者命名：例如抗Sm、抗Ro、抗La抗体。

3.以相关疾病命名：例如抗SSA、抗SSB抗体。

（一）检测方法

由于ANA的复杂性及多样性，故测定方法繁多。目前ANA常用的方法有免疫荧光法、放射免疫法、ELISA、免疫双扩散、对流免疫电泳及免疫印迹技术等。

常用间接免疫荧光法（indirect immunofluorescence，IIF）作为总的ANA筛选试验。鼠肝常用于检测抗核抗体，但近十年来多被HEp-2细胞所代替，这是因为HEp-2细胞具有以下特点：人源性；细胞核大；分裂期细胞多；可大批量培养。当然，单个细胞不可能替代组织切片，所以鼠组织切片仍继续用于自身抗体的检测。

放射免疫法：常用于检测抗DNA抗体，有Farr法及过滤法。①Farr法的原理为用同位素标记DNA，被标记的DNA和被检血清的抗DNA抗体结合，经50%硫酸铵饱和液沉淀，然后比较沉淀物和上清液中的放射活性，从而得出DNA结合活性，一般结合率大于20%为阳性。②过滤法是在分离结合物时用纤维素酯薄膜滤器（孔径为0.45μm）进行过滤，游离的DNA被滤去而与抗体结合的复合物被阻留在滤膜上。

ELISA法：临床上主要是应用间接ELISA检测抗dsDNA抗体，其重复性及敏感性均较对流免疫电泳及双扩散为高。目前已有试剂盒供应。

免疫印迹（immunoblotting）法：先将混合抗原作凝胶电泳，分离开不同的区带，然后将这些带转印到硝酸纤维素膜上，最后用酶标抗体或放射性同位素标记抗体进行检测和分析。由于该试验不需纯化的单