培养基的一般常用成分

（一）水

制备培养基必须使用纯净的，无微量金属，杀菌性和抑菌性化学物质的蒸馏水。注意，以加氯的水进行蒸馏所得的蒸馏水，即使在使用前通过离子交换树脂，也偶含有显著量的游离氯．所以应进行测试，如正联甲苯胺试验显色。测试后，以硫代硫酸钠中和后或进行重复蒸馏后才能使用。

（二）琼脂

琼脂俗称洋菜，英文名agar ，为由海藻类（主要足石花菜）提取出来的一种胶体多糖，即半乳聚糖水解后，产生半乳糖及少量五烷糖和有机硫。其化学性质系为一种不带侧链的半乳聚糖甙，含有90%右旋半乳糖和10％左旋半乳糖。在约每10个吡喃半乳糖单位有一个首位或次位的羟基被硫酸脂化。其阴离子脂组（-SO2 -OH ）主要是与钙结合，但也有少数是和镁、钠、或钾结合。

其制造方法，一般是在每年7-9 月收集海中石花菜，洗涤并经晒干后保存。于冬季冰冻开始时，按1：30 比例将干藻放入水中煮沸，然后加入硫酸少许并煮沸5-6 小时。过滤后待冷，用“漏子”推成粗条，再经日晒夜冻2-3 周后，即成条状琼脂。

除少数菌种外，绝大多数细菌都不能分解琼脂，因而琼脂在培养某中无营养价值，只是在液体培养基中凝结成半固体或固体培养基而已。

国外商售琼脂一般比较纯净，国内琼脂则含有杂质较多，故在使用前应先用冷水浸泡洗涤后才能使用。

供细菌培养使用的品质优良的琼脂应具有下列特性：

( l ）凝固点不超过2 ℃，通常范围在34～38 ℃。

( 2 )1L 的1.5%琼脂，在蒸汽浴中重新完全溶化，不超过45 分钟。

( 3 ）在98 ℃能完全溶解子水。

( 4 ）在45 ℃仍保待足够的液态，以利于试验时的混合均匀。

( 5 ）与水的结合水平至少在50%以上，以保证完全的溶解性。

（6）含水量不超过原重17%。

( 7 ）燃烧残余物不超过3 %。

（8）金属最高允许含量，铅0.0005%，铁0.001%，镁0.1%，钙0.2%，钠0.4%，并不得含有抗菌物质。

( 9 ）透明度：在蒸馏水中加热溶解后，呈微乳白色透明凝块。无混浊沉淀及微粒。

( 10 ）凝胶强度：即在1.5%琼脂平板1cm2表面上于20秒钟内使其破坏的最小重量(g)。优良琼脂应在300-400克。

在实际应用中，一般均将琼脂做成按0.5%的差距，递增至3%的生理盐水琼脂平板，然后用接种环或接种针试行划线涂布，以决定该批琼脂实际使用的浓度。

（三）蛋白胨和蛋白质水解物

蛋白质分子在水解过程中生成一系列的产物。这些产物按其复杂程度而分的次序是；月示，胨，多肽，最后产物是氨基酸。有些氨基酸在早期的水解过程中就可裂解出来。

月示和胨并不是均性的化学实体，而是原始蛋白质分子断片的混合物。月示和胨在组成上及大小上各不相同，将其归于一类仅权是因为都表现有某些共同的特性之故。在各种断片中，当溶液被硫酸铵半饱和时沉淀而出的称为初级月示，被硫酸铵全饱和时沉淀而出的称为次级月示。而胨则不发生沉淀。月示仍表现有胶体性质，但已有逐渐减少的趋势。待蛋白质分子分解至胨的阶段时，胶体性质已完全消失。因此，胨除去硫酸铵饱和时不发生沉淀外，还可以扩散透过火棉胶薄膜，也不呈现蛋白质某些特殊的沉淀反应。

因为月示和胨都是原始蛋白质分子断片的非均相混合物，因此不同的制备方法将使月示和胨在组成上及性质上有所差异。这些差异决定于用作原始材料的蛋白质的本质，水解方法以及用于分离各种产物的方法。因此，市售的各种蛋白胨在组成上是互有差别的，所以在使用时应对各种蛋白胨和蛋白质水解物的成分及其特点有所了解，依据使用的目的和要求加以选用。

蛋白胨的主要用途是供给细菌需要的氮源。为制备各种培养基最常使用的成分之一。

蛋白胨之的特点为：(1）易溶于水；（2）不因受高热而凝固（加热至130℃也不凝固），且可被细菌直接利用以助生长；( 3 ）系两性电解质，故有缓冲作用。

水解动物蛋白质的酶类有动物消化腺，如胃蛋白酶和胰蛋白酶等。植物蛋白质最常用的为木瓜酶，此外还有分解酵母时用的自溶酶等。

胃蛋白酶分解蛋白质的结果，能得到含有蛋白分子较大碎片的产物（月示和胨），具有显著的双缩脲反应，此外还有较少量的低级多肽类和游离氨基酸。在这种蛋白胨中生长素很少，故不宜单独用作培养基，必须和肉浸液等混合使用。胰蛋白酶消化的蛋白制品的特点是其成分中有很多游离的氨基酸，特别是色氨酸，低级的多肽类，含蛋白胨和蛋白月示较少，所以其营养价值比胃蛋白酶所消化蛋白质的粗制品要高得多，比肉浸液加蛋白胨也要好得多，因大多数细菌在生长时最易利用游离的氨基酸，其次才是蛋白胨。

近年来国外商售蛋白胨品种增加很多，各种牌号也日新月异。

1.胰化酪蛋白胨 Peptone from Casein,trypsin digested(E.Merek)

本品为胰朊酶消化酪朊所得的蛋白胨。为淡黄色细纯如砂的粉末。在105 ℃干燥失重不超过5%，含磷1-1.5%可凝固性蛋白，也不含有可发酵性的碳水化合物。由于其色氨酸含量高，故多用于靛基质试验。

2 ．胰化肉蛋白胨 Peptone from meat,trypsin digested( E . Merck )

本品为胰朊酶消化肉所得的蛋白胨。通常用量为1%。为淡黄-淡棕色粉末，具特殊臭味。105 ℃干燥失重不超过5%。硫酸化灰分不超过7%。氯化钠含量不超过l%。肌酸酐不少于0.8%，磷不少于0.5-1.0%，总氮量不少于13-15%。不能检出可凝固蛋白。

3 ．胃化肉蛋白胨 Peptone from meat,Pespindigested( E · Merck )

本品为胃朊酶消化肉所得的蛋白胨。为黄至淡棕色粉末。105 ℃干燥失重和硫酸化灰分分别不超过5%和8%。氯化钠含量少于0.5%，磷不多于1%，总氮量不超过13.5-14.5%。检查不出可凝固蛋白。

4 ，胰化明胶蛋白胨Peptone from gelatin,pancreatically digested ( E. Merck )

本品为胰液消化明胶所得的蛋白胨。可用于细菌培养基和食品添加剂。因其胱氨酸和色氨酸含量低并且没有可发酵的碳水化合物，故很适合制备不良营养性培养基之用。为白至黄色粉末。105 ℃干燥失重和硫酸化灰分均不超过75。总氮量不少于14.5%。无可凝固蛋白。

5 ，植物蛋白胨Peptone from Soybean Meal,Papain-digested ( E . Meack )

本品为木瓜酶消化脱脂大豆粉所得蛋白胨。由于其营养物质丰富并含有高浓度碳水化合物和维生素，特别是硫胺素，此外，其巯基含量也高，故对某些营养要求严格的细菌如奈氏菌群和梭状芽孢杆菌属可用为优良的培养基础。并很适于真菌和酵母的培养和在酒厂中乳酸杆菌常规检验。因其碳水化合物含量高，故不能用于细菌发酵试验。本品为淡黄粉末。105 ℃干燥失重不超过5%。总氮量9-10%。无可凝固性蛋白。

6 ．酪朊胰水解物，无磺胺对抗物Casein Hydrolysate,pancreatic,free from sulfonamide antagonists( E. Merck )

本品系用能获得高含量游离氨基酸的高度无破坏性酶分裂工艺从酪朊得到的水解物，因其无磺胺对抗物（PABA ) 故主要用于磺胺敏感试验培养基。本品为淡黄色细粒粉。105℃干燥失重不超过7%。硫酸化灰分不超过10%。氮含最至少12%。无易发酵的碳水化合物，易溶于水。常用量0.3%。

7 ．酪朊酸水解物，无维生素Casein Hgdrolysat,acid-hydrolysed,Vitamin-Free ( E.Nerck )

本品为盐酸消化酪朊所得的水解物。在加工中维生素和其它生民促进物均被大量破坏，因此，特用于微生物学维生素检验的培养基制备。通常用量约15g / L ，但用于

Mueller-Hinton琼脂则为17.5g 。本品为淡黄色粉状、易溶于水。在105℃干燥失重要多5%，硫酸化灰分不超过5%，氯化钠含量约25%，氮不低于7%。

8 ．酪朊酸水解物 Casein Hgdrolysate(E.Meck )

本品也是盐酸消化酪朊的水解物，但保留一定程度的维生素和促生长物质，故可较广泛应用。特别用于白喉杆菌，破伤风杆菌和链球菌的毒素和链菌酶生产的培养。

9.肝酶化水解物Liver Hgdrolgsate,enzymaticr ( E 、Merckk )