山东大学微生物生理生化反应实验报告
生理性生化实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解细菌生理生化反应原理；2. 掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法；3. 了解生理生化反应在鉴别细菌中的意义。
二、实验原理通过测定微生物校内某些酶类的有无、对某些糖的利用能力、代谢产物的类型等来研究微生物的多样性。
某些细菌产生色氨酸酶，能分解培养基蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚，吲哚与对二甲基氨基苯甲醛发生反应，形成红色的玫瑰吲哚，为吲哚反应阳性。
微生物发酵葡萄糖成丙酮酸，2分子丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在碱性条件下与肌酸类物质反应，生成红色物质，为甲基红反应阳性。
三、实验方法1. 吲哚试验：将细菌接种于含有色氨酸的培养基中，加入吲哚试剂，观察颜色变化。
2. 甲基红试验：将细菌接种于含有葡萄糖的培养基中，加入甲基红试剂，观察颜色变化。
四、实验结果1. 吲哚试验：接种了大肠杆菌的试管在加入乙醚和吲哚试剂后，能在乙醚和液体培养基的交界面上产生红色环状物质，大肠杆菌的吲哚试验显阳性。
2. 甲基红试验：大肠杆菌甲基红试验阳性，即大肠杆菌在培养期仍维持酸性pH。
五、实验分析1. 吲哚试验失败原因分析：可能是因为乙醚加量太少，影响实验现象的观察；另一个可能的原因是大肠杆菌菌种有问题。
2. 甲基红试验结果分析：大肠杆菌在培养后仍能维持酸性，而产气杆菌则转化为非酸性末端产物。
六、实验结论1. 通过本实验，我们了解了细菌生理生化反应原理；2. 掌握了细菌鉴定中常见的生理生化反应方法；3. 认识到生理生化反应在鉴别细菌中的意义。
七、实验注意事项1. 实验过程中要严格按照操作规程进行，避免污染；2. 注意观察实验现象，记录实验数据；3. 分析实验结果，找出实验失败的原因。
第2篇一、实验目的1. 了解生理性生化实验的基本原理和方法。
2. 掌握常用的生理性生化指标及其检测方法。
3. 通过实验，学会使用生理性生化检测仪器，提高实验技能。
二、实验原理生理性生化实验是研究生物体内各种生化反应及其代谢过程的重要手段。
微生物生理生化反应
微生物生理生化反应实验原理通过测定微生物细胞内某些酶类的有无、对某些底物的利用能力、代谢产物的类型等来研究微生物代谢的多样性。
某些细菌产生色氨酸酶，能分解培养基蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚，当吲哚遇到含有对二甲基氨基苯甲醛试剂，形成红色的玫瑰红吲哚，为吲哚反应阳性。
V-P反应也称乙酰甲基甲醇试验。
微生物发酵葡萄糖产生丙酮酸，2分子丙酮酸脱羧形成乙酰乳酸，继续脱羧形成乙酰甲基甲醇，后者在碱性条件下与胍类、肌酸类物质反应，形成红色化合物，为V-P反应阳性。
有些细菌发酵糖类产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，使发酵液的pH下降到4.2以下，当加入甲基红试剂后，使发酵液变红色。
某种微生物能以某种糖类为碳源，产酸产气，则判断为发酵这种糖。
实验材料和方法：材料：培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖和蔗糖）、酚红半固体培养基、牛肉膏蛋白胨固体培养基；菌种：大肠杆菌（E. coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus arueus）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、变形杆菌（Proteus vulgaris）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、丙酮丁醇梭菌（Clostridium acetobutylicum）；试剂：V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、1.6%溴甲酚紫指示剂、抗生素；仪器及用具：酒精灯、接种环、超净工作台、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅、恒温水浴锅、试管、移液管、滴管、杜氏小管、记号笔等。
实验方法：1.V-P反应取5只装有葡萄糖蛋白胨水培养基的试管，以无菌操作分别接种大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形均、枯草芽孢杆菌菌液0.1mL至上述相应试管的培养基中，空白对照不接种。
置于37℃恒温箱中培养48小时。
取出培养物，分别从中取出2.5mL培养液，再加入等量V-P试剂，充分震荡后放置在37℃培养箱中温育30min。
微生物生理生化反应实验报告
山东大学实验报告2012年 12 月 4日姓名系年级 2011级生科2班组别四科目微生物学实验题目微生物的生理生化反应微生物的生理生化反应一、【实验目的】1. 证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
2.掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。
3.了解糖发酵的原理和在肠细菌坚定中的重要作用。
4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
5. 了解吲哚和甲基红试验的原理以及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。
二、【实验仪器与试剂】菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、普通变形杆菌、产气肠杆菌培养基：培养基：固体淀粉培养基、固体油脂培养基（大分子水解试验）；葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基（内装有倒置的德汉氏小管）（糖发酵试验）；蛋白胨水培养基（吲哚试验）；葡萄糖蛋白胨水培养基；试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水、仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管三、【实验原理】1.在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主要是酶促反应过程，由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。
2.淀粉的水解：由于微生物对淀粉这种大分子物质不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用.胞外酶主要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,使其能被运输至细胞内.如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精,双糖和单糖；而淀粉遇碘液会产生蓝色，因此能分泌胞外淀粉酶的微生物，则能利用其周围的淀粉，在淀粉培养基上培养用碘处理其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈，据此可分辨微生物能否产生淀粉酶。
3.油脂的水解：在油脂培养基上接种细菌，培养一段时间后观察菌苔的颜色，若出现红色斑点，则说明此中菌可产生分解油脂的酶。
从土壤中分离纯化微生物
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糖发酵实验
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吲哚实验
甲基红实验
五、实验报告
1.将结果填入下表。“＋”表示阳性，“－” 表示阴性。
菌名
枯草芽孢 大肠杆菌 金黄色葡 铜绿假单
杆菌
萄球菌
胞菌
淀粉水解 试验
油脂水解 试验
五.实验报告
2.将结果填入下表。“+”表示产酸或产气，“-” 表示不产酸或不产气。
为阳性反应。
四、实验步骤
糖(醇)类发酵试验
编号： 在各试管上分别标明发酵培养基名称，所接种的菌名和组号，下 同。
接种： 取葡萄糖发酵培养基3支，按编号1支接种大肠杆菌，另1支接种 普通变形杆菌，第3支不接种，作为对照。同样取3支乳糖发酵培养基，1 支接种大肠杆菌，1支接种普通变形杆菌，第3支不接种，作为对照。
二、实验原理
细菌生化试验：在生活细胞中存在的化学反应称之
为代谢。代谢过程主要是酶促反应过程。各种微生物 在代谢类型上表现出很大的差异，反应出它们具有不 同的酶系和不同的生理特性，这些特性可被用作细菌 鉴定和分类的内容。用生化试验的方法检测细菌对各 种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种 属，称之为细菌的生化反应。
二、实验原理－－大分子物质的水解试验
淀粉水解试验 细菌对大分子的淀粉不能直接利用，须靠产生的胞外酶(淀 粉酶)将淀粉水解为小分子糊精或进一步水解为葡萄糖(或 麦芽糖)，再被细菌吸收利用，细菌水解淀粉的过程可通过 底物的变化来证明，即用碘测定不再产生蓝色。
油脂水解试验 脂肪水解后产生脂肪酸可改变培养基的pH，使pH降低， 加入培养基的中性红指示剂会使培养基从淡红色转变为深 红色，说明细胞外存在脂肪酶。
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生化反应设计实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握生化反应的基本原理和操作方法。
2. 通过实验验证不同生化反应的特性和规律。
3. 提高实验操作技能和数据分析能力。
二、实验原理生化反应是指生物体内发生的化学反应，主要包括酶促反应、非酶促反应等。
本实验选取了以下几种生化反应进行探究：1. 酶促反应：以淀粉酶催化淀粉水解为例，研究酶促反应的特性和影响因素。
2. 非酶促反应：以蛋白质变性为例，研究非酶促反应的特性和影响因素。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 淀粉酶- 淀粉- 碘液- 氢氧化钠- 蛋白质溶液- 乙醇- 硫酸铜- 水浴锅- 试管- 移液枪- 滴管- 研钵- 研杵2. 实验仪器：- 恒温水浴锅- 酶标仪- 紫外可见分光光度计- 精密天平- 移液枪- 试管架- 移液器四、实验方法1. 酶促反应实验：（1）将淀粉酶与淀粉按一定比例混合，加入适量水，置于恒温水浴锅中，在一定温度下反应一段时间。
（2）取一定量的反应液，加入碘液，观察颜色变化。
（3）以未加淀粉酶的反应液为对照组，分析酶促反应的特性和影响因素。
2. 非酶促反应实验：（1）将蛋白质溶液与氢氧化钠按一定比例混合，观察颜色变化。
（2）将混合液加入乙醇，观察沉淀形成情况。
（3）将沉淀加入硫酸铜溶液，观察颜色变化。
（4）以未加氢氧化钠的反应液为对照组，分析非酶促反应的特性和影响因素。
五、实验结果与分析1. 酶促反应实验结果：通过实验观察，加入淀粉酶的反应液颜色逐渐变浅，说明淀粉被水解。
在对照组中，未加淀粉酶的反应液颜色未发生变化。
这说明淀粉酶具有催化淀粉水解的作用。
2. 非酶促反应实验结果：通过实验观察，加入氢氧化钠的反应液颜色逐渐变深，说明蛋白质发生变性。
在对照组中，未加氢氧化钠的反应液颜色未发生变化。
这说明氢氧化钠可以导致蛋白质变性。
六、实验结论1. 酶促反应具有高效、专一性等特点，是生物体内重要的化学反应类型。
2. 非酶促反应也具有重要的作用，如蛋白质变性等。
生化反应实验报告
一、实验目的1. 了解生化反应的基本原理和实验方法。
2. 掌握常见生化试剂的使用方法。
3. 通过实验，观察和分析生化反应的现象，加深对生化反应的理解。
二、实验原理生化反应是指生物体内或生物体外，生物分子之间发生的化学反应。
这些反应是生命活动的基础，包括酶促反应、非酶促反应、氧化还原反应、酸碱反应等。
本实验主要涉及酶促反应和氧化还原反应。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌- 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基- 试剂：斐林试剂、双缩脲试剂、碘液、酚酞指示剂、硫酸铜溶液、氢氧化钠溶液、葡萄糖、蛋白质、淀粉2. 实验仪器：- 酒精灯、试管、试管架、烧杯、量筒、移液枪、滴管、试管夹、超净工作台、恒温培养箱四、实验步骤1. 酶促反应实验：（1）将葡萄糖蛋白胨水培养基分别接种枯草芽孢杆菌和大肠杆菌，置于恒温培养箱中培养24小时。
（2）取培养好的菌液，加入斐林试剂，观察颜色变化。
（3）取培养好的菌液，加入双缩脲试剂，观察颜色变化。
2. 氧化还原反应实验：（1）取淀粉溶液，加入碘液，观察颜色变化。
（2）取淀粉溶液，加入葡萄糖，观察颜色变化。
（3）取蛋白质溶液，加入硫酸铜溶液，观察颜色变化。
3. 酸碱反应实验：（1）取一定量的葡萄糖溶液，加入酚酞指示剂，观察颜色变化。
（2）向上述溶液中加入氢氧化钠溶液，观察颜色变化。
五、实验结果与分析1. 酶促反应实验结果：- 枯草芽孢杆菌菌液加入斐林试剂后，溶液变为红色，表明其含有葡萄糖氧化酶。
- 大肠杆菌菌液加入斐林试剂后，溶液无明显变化，表明其不含葡萄糖氧化酶。
- 枯草芽孢杆菌菌液加入双缩脲试剂后，溶液变为紫色，表明其含有蛋白质。
2. 氧化还原反应实验结果：- 淀粉溶液加入碘液后，溶液变为蓝色，表明淀粉存在。
- 淀粉溶液加入葡萄糖后，蓝色消失，表明葡萄糖与淀粉发生反应，生成葡萄糖淀粉。
- 蛋白质溶液加入硫酸铜溶液后，溶液变为蓝色，表明蛋白质存在。
实验六微生物的生理生化反应(精)
实验六微生物的生理生化反应一、实验目的：掌握细菌鉴定中常规生理生化反应的原理与方法。
二、实验原理：由于各种细菌具有不同的酶系统，所以代谢时利用的底物不同，或利用相同的底物而代谢产物不同，因此可利用不同的生理生化反应来鉴别不同的细菌。
常规的鉴别肠杆菌科细菌的生理生化反应有：1、大分子物质水解试验，包括淀粉水解试验和明胶水解试验。
如果细菌能利用淀粉大分子作为碳源，则淀粉被水解后菌落周围遇碘呈蓝色，不能水解淀粉时加入碘菌落周围有透明圈。
明胶如果能被细菌分解作为碳源，培养后明胶溶解，否则不溶。
2、糖发酵试验。
有的细菌发酵分解某些糖产酸产气，有的分解糖只产酸不产气，故可利用分解糖的能力来鉴别细菌。
如果细菌糖酵解产酸，加入溴甲酚紫指示剂培养液PH降低颜色由紫变黄，如果产气，德汉氏小管闭口端产生气泡。
3、吲哚、甲基红、伏-普、柠檬酸盐试验，主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌，吲哚试验由于实验室原料中蛋白胨色氨酸含量太低不做。
1) 甲基红试验（MR）：由于不同细菌糖酵解产生丙酮酸后分解产物不同，有些细菌可将其分解为甲酸、乙酸、乳酸等多种有机酸，加入甲基红指示剂后PH降至4左右而使培养液成红色。
2) 伏-普试验（VP）：即检测细菌代谢是否经过2，3-丁二醇途径，该途径为：丙酮酸——乙酰乳酸——乙酰甲基甲醇——2，3-丁二醇，代谢中间产物乙酰甲基甲醇被氧化为二乙酰，二乙酰培养基中含胍基物质反应成红色复合物。
1) 柠檬酸盐试验，有些细菌以柠檬酸盐作为唯一碳源生成碳酸盐，培养基PH升高成碱性，加入溴麝香草酚蓝指示剂后培养基由绿；变为蓝色。
三、实验用品（1）菌种：枯草杆菌1、大肠杆菌5，产气杆菌7。
（2）培养基：糖发酵培养基（乳糖）、淀粉培养基平板、明胶培养基试管、葡萄糖蛋白胨水培养基、柠檬酸盐培养基斜面。
（3）试剂:甲基红试剂、4%KOH、5%荼酚、碘液等。
（4）其他：恒温箱、接种针、酒精灯、标号笔等。
四、实验步骤：1、淀粉水解试验制淀粉固体培养基——倒平板——分区标记（菌种代号、组别、日期，下同）——接种——培养2天——观察（加碘液观察有无透明圈）。
生化反应鉴定实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解生化反应在微生物鉴定中的重要性。
2. 掌握常见生化反应的原理和方法。
3. 通过实验，对给定的微生物进行鉴定。
二、实验原理生化反应是指微生物在生长过程中，通过酶的催化作用，将营养物质转化为自身所需的物质，同时产生一些代谢产物。
这些代谢产物可以用来鉴定微生物的种类。
常见的生化反应包括糖发酵试验、吲哚试验、甲基红试验等。
三、实验材料与仪器1. 材料：- 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌等。
- 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂等。
- 试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水等。
- 仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管等。
2. 仪器：- 酒精灯- 接种环- 超净工作台- 恒温培养箱- 高压灭菌锅- 试管- 移液枪- 滴管四、实验方法1. 菌种培养：将菌种接种于葡萄糖蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。
2. 糖发酵试验：- 将培养好的菌种接种于糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖），置于恒温培养箱中培养24小时。
- 观察培养基颜色变化，记录发酵结果。
3. 吲哚试验：- 将培养好的菌种接种于蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。
- 加入吲哚试剂，观察颜色变化，记录结果。
4. 甲基红试验：- 将培养好的菌种接种于蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。
- 加入甲基红试剂，观察颜色变化，记录结果。
五、实验结果与分析1. 糖发酵试验：- 大肠杆菌：发酵葡萄糖、乳糖，不发酵蔗糖。
- 金黄色葡萄球菌：不发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
- 枯草芽孢杆菌：不发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
- 变形杆菌：发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
2. 吲哚试验：- 大肠杆菌：吲哚试验阳性。
- 金黄色葡萄球菌：吲哚试验阴性。
- 枯草芽孢杆菌：吲哚试验阴性。
- 变形杆菌：吲哚试验阳性。
微生物生化实验实训报告
一、实验目的1. 理解微生物生理生化实验的基本原理和方法。
2. 掌握微生物生理生化实验的操作技能。
3. 通过实验，了解微生物的代谢特性，为微生物分类、鉴定及利用提供依据。
二、实验原理微生物生理生化实验是研究微生物生理生化特性的实验技术，通过对微生物代谢过程中产生的各种代谢产物进行分析，可以了解微生物的生理生化特性。
实验原理主要包括以下几个方面：1. 微生物代谢过程中，各种代谢产物具有不同的生物化学特性，可以通过特定的生化反应进行检测。
2. 通过微生物对各种底物的分解能力，可以了解微生物的酶系统及其功能。
3. 通过微生物的生理生化反应，可以鉴定微生物的种类。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、无菌操作台、显微镜、移液器、试管、培养皿、酒精灯等。
2. 试剂：葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、蛋白胨水、卢戈氏碘液、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水等。
四、实验内容1. 微生物生理生化实验一：微生物对糖类的分解实验（1）实验原理：微生物对糖类的分解能力与该菌是否含有分解某种糖的酶密切相关。
在含糖培养基中加入指示剂，若细菌分解糖则产酸或产酸产气，使培养基颜色改变，从而判断细菌是否分解某种糖或其他碳水化合物。
（2）实验方法：取某一种细菌的24h纯培养物分别接种到葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖等培养基内，37℃培养24h，观察结果并记录。
（3）结果分析：如果接种进去的细菌可发酵某种糖或醇，则可产酸，使培养基由紫色变成黄色，如果不发酵，则仍保持紫色。
如，发酵的同时又产生气体，则在微量发酵管顶部积有气泡。
2. 微生物生理生化实验二：微生物的吲哚和甲基红试验（1）实验原理：吲哚和甲基红试验是鉴定肠道细菌的重要方法。
吲哚试验检测细菌是否产生吲哚，甲基红试验检测细菌的代谢类型。
（2）实验方法：取某一种细菌的24h纯培养物分别接种到蛋白胨水中，加入吲哚试剂和甲基红试剂，观察结果并记录。
（3）结果分析：若产生吲哚，则在试剂中加入的固体石蕊纸条变红；若产生甲基红，则试剂颜色由黄色变为红色。
07实验七微生物生理生化反应观察
一.实验目的
初步了解微生物生化鉴定与分类的原理 与方法；掌握淀粉水解试验、明胶水解 试验、尿素水解试验（脲酶试验）、糖 发酵试验的原理和方法。
二. 原理：
1.某些细菌能够分泌一种胞外酶,即淀粉酶。 它可将淀粉水解为小分子的糊精、麦芽糖和 葡萄糖，再被细菌吸收利用。 淀粉遇碘液会产生蓝色，因此能产淀粉酶的 微生物在含淀粉培养基上培养后，由于淀粉 被细菌的淀粉酶水解，遇碘不在变蓝色，培 养基上菌体周围会出现无色透明圈。据此可 分辨微生物能否产生淀粉酶。
四、实验注意事项
淀粉水解实验，在观察时需要加卢革氏 碘液以便观察淀粉的水解情况； 接种均在无菌条件下操作； 生化管用砂轮切割玻璃后接种。
实验报告要求
写出生理生化试验测定结果，并对你的 实验现象进行分析。
4、葡萄糖发酵试验：每2人接种二支 葡萄糖生化管（一支接种大肠杆菌、一 支接种变形杆菌），37℃培养2天，观 察和记录每管培养前后颜色变化，得出 结论。 大肠杆菌和变形杆菌均是阳性。
5、乳糖发酵试验：每2人接种二支乳 糖生化管（一支接种大肠杆菌、一支接 种变形杆菌），37℃培养2天，观察和 记录每管培养前后颜色变化，得出结论。 大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产 气； 普通变形杆菌分解葡萄糖产酸产气，但 不能分解乳糖。
2.明胶水解实验：每2人接种二支明胶 生化管（分别接种大肠杆菌和金黄色葡 萄球菌），37℃培养2天，从37℃取出 即观察和记录各管的明胶水解情况，得 出结论。 大肠杆菌是阳性对照菌。
3.尿素水解实验：每2人接种两支尿素 生化管（分别接种变形杆菌和金黄色葡 萄球菌），37℃培养2天，观察和记录 每管培养前后颜色变化，得出结论。 变形杆菌是阳性对照菌。
细菌生化反应实验报告
一、实验目的1. 了解细菌生理生化反应的基本原理。
2. 掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。
3. 熟悉生理生化反应在细菌鉴别中的实际应用。
二、实验原理细菌生理生化反应是指细菌在生长代谢过程中，通过酶催化作用，将底物转化为产物的化学反应。
这些反应能够反映细菌的代谢类型和生理特性，从而用于细菌的鉴定。
常见的细菌生理生化反应包括吲哚试验、甲基红试验、V-P试验、糖发酵试验等。
三、实验材料与仪器1. 菌种：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌。
2. 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂。
3. 仪器：酒精灯、接种环、超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液枪、滴管。
四、实验步骤1. 接种：将菌种接种于相应的培养基中，37℃恒温培养箱中培养24小时。
2. 吲哚试验：取少量培养液，加入吲哚试剂，观察颜色变化。
3. 甲基红试验：取少量培养液，加入甲基红试剂，观察颜色变化。
4. V-P试验：取少量培养液，加入V-P试剂，观察颜色变化。
5. 糖发酵试验：将不同糖类培养基分别接种菌种，观察颜色变化。
五、实验结果与分析1. 吲哚试验：大肠杆菌和产气肠杆菌呈现阳性反应，普通变形菌和枯草芽孢杆菌呈现阴性反应。
2. 甲基红试验：大肠杆菌和产气肠杆菌呈现阳性反应，普通变形菌和枯草芽孢杆菌呈现阴性反应。
3. V-P试验：大肠杆菌和产气肠杆菌呈现阳性反应，普通变形菌和枯草芽孢杆菌呈现阴性反应。
4. 糖发酵试验：大肠杆菌和产气肠杆菌对葡萄糖、乳糖和蔗糖均呈现阳性反应，普通变形菌和枯草芽孢杆菌对葡萄糖和乳糖呈现阴性反应。
六、实验结论通过本次实验，我们掌握了细菌生理生化反应的基本原理和实验方法。
通过对吲哚试验、甲基红试验、V-P试验和糖发酵试验的结果分析，我们可以初步判断出大肠杆菌和产气肠杆菌为阳性反应，普通变形菌和枯草芽孢杆菌为阴性反应。
这表明生理生化反应在细菌鉴别中具有重要的实际应用价值。
大肠杆菌营养缺陷型菌株的诱变及筛选 山大微生物大实验
山东大学实验名称：大肠杆菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选作者：姚健(201000140136)同组者：刘新强指导老师：林建群(教授)实验日期：2013年5月22日-6月1日微生物大实验报告大肠杆菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选山东大学生命基地班姚健 201000140136摘要：营养缺陷型菌株或称异养型（auxotroph）菌株是许多微生物生理生化以及遗传研究的重要菌株材料。
此类菌株不仅在生物研究方面有着很重要的作用，而且在生物工程和生物技术上都有很重要的作用。
营养缺陷型菌株的筛选也成为了微生物科学工作者必备的基本实验技能之一。
实验采用物理诱变非电离辐射紫外线（15W）为诱变剂，来对大肠杆菌诱发突变，并用抗青霉素法淘汰野生型（富集营养缺陷型），采用点植对照法检出营养缺陷型，划线复证后得到两株营养缺陷型菌，进行生长谱法鉴定，两个平板都长满了菌落，即没有预期的营养缺陷型菌株出现。
Abstract:Auxotrophic bacterias are very important materials in the microbial biochemical and genetical research.Auxotrophic bacterias are important to not only bioresearch but also biotechnology.The screening of auxotrophic bacterias has become one of scientists’ primary experimental skills.We use the ultravioley light as the mutagen to induce the mutation of the E.coli,then weed out the wild type by Penicillin resistance method to gather auxotrophic bacterias,next we check out the auxotrophic bacterias by spot planting.We get two auxotrophic bacterias by marking out，finally we test the type of auxotroph by auxanography.Each bacteria grew well everywhere in the plate indicating that t here’s no auxotrophic bacteria.关键词：大肠杆菌；营养缺陷型菌株；紫外线诱变；划线复证；生长谱测定；筛选Key words:Escherichia;auxotrophic bacteria；ultravioley mutation;marking out;auxanography;screening1引言筛选营养缺陷型菌株一般具有四个环节：诱变处理、营养缺陷性的浓缩、检出、鉴定缺陷型。
微生物心理生化反应实验报告
2.掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。 3.了解糖发酵的原理和在肠细菌坚定中的重要作用。 4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 5. 了解吲哚和甲基红试验的原理以及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。
二、【实验仪器与试剂】
菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、普通变形杆菌、产气肠杆菌 培养基：培养基：固体淀粉培养基、固体油脂培养基（大分子水解试验）；葡萄糖发酵培养基、乳糖
（1）吲哚试验：是用来检测吲哚的产生，在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白
胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。但并
非所有的微生物都具有分解色氨酸产生吲哚的能力，所以吲哚实验可以作为一个生物化学检测
的指标。大肠杆菌吲哚反应阳性，产气肠杆菌为阴性。 （2）甲基红试验（MR）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者进而被分解产生甲
细菌都能利用糖类作为碳源和能源,但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异.有些细菌能分 解某种糖产生有机酸(如乳酸,醋酸,丙酸等)和气体(如氢气,甲烷,二氧化碳等);有些细菌只产酸不产气.例 如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气。产酸后再加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且 德汉氏小管中会收集到一部分气体。若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且 德汉氏小管中无气体。 5.IMVC 实验主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌。
分解才能被微生物吸收利用.胞外酶主要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,使其能 被运输至细胞内.如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精,双糖和单糖；而淀粉遇碘液会产生蓝色，因此 能分泌胞外淀粉酶的微生物，则能利用其周围的淀粉，在淀粉培养基上培养用碘处理其菌落周围不 呈蓝色，而是无色透明圈，据此可分辨微生物能否产生淀粉酶。 3.油脂的水解：在油脂培养基上接种细菌，培养一段时间后观察菌苔的颜色，若出现红色斑点，则说 明此中菌可产生分解油脂的酶。 4. 糖发酵试验：糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应,在肠道细菌的鉴定上尤为重要.绝大多数
实验6-微生物的生理生化反应
实验六微生物的生理生化反应1、实验目的探究菌株在碳源同化、氮源利用、乙醇发酵和抗生素效价分析等方面不同的生长特性，观察并简要分析不同微生物的生理生化特征及其形成机理。
2、实验过程简述2.1 培养基与试剂准备2.1.1碳源同化培养基准备碳源为葡萄糖、半乳糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、棉籽糖、蜜二糖、纤维二糖、海藻糖、松三糖、可溶性淀粉、α-甲基葡萄糖苷的YNB 培养基，放入一根杜氏管。
2.1.2氮源同化培养基准备氮源为硫酸铵，尿素，蛋白胨，硝酸钾，无氮源YNB 的固体、液体培养基。
2.1.3 乙醇发酵用种子培养基：YPD 培养基2.1.4乙醇发酵用发酵培养基葡萄糖，酵母粉，蛋白胨，尿素，磷酸二氢钾，硫酸镁，氯化钙。
2.1.5抗生素效价测定用培养基：LB 培养基2.1.6青霉素：用pH 6.0 磷酸缓冲液配制，浓度为100 mg/ml，0.22μm 孔径过滤灭菌。
2.2 微生物的碳源同化和发酵1、从菌体斜面接一环菌于1 ml 无菌水中，室温静置2 h。
2、取200 μl 菌悬液，分别转接于含杜氏管的小试管中，静置培养48 h。
3、每24 h 观察记录生长和产气情况。
4、根据实验结果判断不同菌株对不同碳源的同化或发酵。
2.3 微生物的氮源利用1、从菌体斜面接一环菌于1 ml 无菌水中，室温静置2 h。
2、取200μl 菌悬液，分别转接于上述培养基小试管中，30℃或37℃静置培养48 h。
3、各取20μl 菌悬液，分别划线于不同氮源的固体平板上，待菌液被吸收后，培养皿倒置，静置培养48 h。
4、每24 h 观察记录生长情况，48 h 测定液体培养物的OD 600。
5、根据实验结果判断不同菌株对不同氮源的利用能力或偏好性。
2.4 酵母菌的乙醇发酵1、种子液培养：将酿酒酵母从菌种斜面上接一接种环至YPD 种子培养基中，30℃，200rpm，培养18 h。
2、乙醇发酵：按照10%（v/v）的比例将培养好的种子液接入100 ml 发酵培养基中，用无菌塑料布将封口密封，30℃，静置培养，每24 h 手摇1 次，发酵3-4 d。
实验九、十 微生物的生理生化反应
3．产硫化氢试验
某些菌能分解含硫的有机物或无机物产生硫化氢（H2S），H2S 遇金属盐类，如铅盐、铁盐等，则形成黑色的硫化铅或硫化铁 的沉淀物。从而可断定H2S的产生与否。 其测定方法有两种： 一种是用含有柠檬酸铁铵的培养基穿刺培养，看是否有黑 色沉淀（本实验采用）； 另一种是在盛有液体培养基的试管中接种菌以后，在试管 的棉塞下吊一片醋酸铅试纸，经培养后看醋酸铅试纸是否变黑。
实验步骤：
（1）取葡萄糖蛋白胨水培养基四支，一支接种大肠杆菌，第二 支接自己分离的大肠杆菌，第三支接枯草杆菌，第四支不接 种，作空白对照。在各试管上标明菌名和组别，置37℃培养 24小时。
大肠杆菌，自己分离的大肠杆菌，枯草杆菌，空白对照。
（2）培养后取出，沿管壁加入甲基红指示剂3～4滴上层呈红色 者为阳性。
6．淀粉水解试验
某些细菌可以产生能水解培养基中淀粉的淀粉酶
（胞外酶），使淀粉水解为麦芽糖和葡萄糖，再被细 菌吸收利用。淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。
实验步骤：
（1）淀粉培养基在水浴中融化后，冷至50℃，以无菌操作 制成平板。用接种环取少量枯草杆菌在平板的一边划“+” 字 形接种（或点种），另取少量大肠杆菌菌在平板的另一边 接种，在各培养皿底部标明菌名和组别。置37℃温箱中培 养16～20小时。
1.糖发酵试验：
糖发酵试验是常用的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤 为重要，绝大多数细菌都能利用糖类作为能源及碳源，但是细 菌的分解糖类的能力上有相当大的差异，某些菌能使某些单糖 或双糖分解，并产酸（乳酸、醋酸、丙酸等）和气体（甲烷、 氢、二氧化碳），或者只产酸而不产生气体。酸和气体的产生 与否，可以由培养后试管指示剂的颜色变化和小套管内气泡的 有无来判定。当发酵产酸时，指示剂溴甲酚紫由紫色（pH6.8） 变为黄色（pH5.2）。
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山东大学实验报告2015年 12 月 7日姓名黄新迪系年级2014级生科3班组别5 同组者高岩、国文洁、梁萧科目微生物学实验题目微生物的生理生化反应微生物的生理生化反应一、【实验目的】1. 证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
2.掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。
3.了解糖发酵的原理和在肠细菌坚定中的重要作用。
4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
5. 了解吲哚和甲基红试验的原理以及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。
二、【实验仪器与试剂】菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、普通变形杆菌、产气肠杆菌培养基：培养基：固体淀粉培养基、固体油脂培养基（大分子水解试验）；葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基（内装有倒置的德汉氏小管）（糖发酵试验）；蛋白胨水培养基（吲哚试验）；葡萄糖蛋白胨水培养基；试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水、仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管三、【实验原理】1.在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主要是酶促反应过程，由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。
2.淀粉的水解：由于微生物对淀粉这种大分子物质不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用.胞外酶主要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,使其能被运输至细胞内.如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精,双糖和单糖；而淀粉遇碘液会产生蓝色，因此能分泌胞外淀粉酶的微生物，则能利用其周围的淀粉，在淀粉培养基上培养用碘处理其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈，据此可分辨微生物能否产生淀粉酶。
3.油脂的水解：在油脂培养基上接种细菌，培养一段时间后观察菌苔的颜色，若出现红色斑点，则说明此中菌可产生分解油脂的酶。
4. 糖发酵试验：糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应,在肠道细菌的鉴定上尤为重要.绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源,但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异.有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸,醋酸,丙酸等)和气体(如氢气,甲烷,二氧化碳等);有些细菌只产酸不产气.例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气。
产酸后再加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。
若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。
5.IMVC实验主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌。
（1）吲哚试验：是用来检测吲哚的产生，在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。
但并非所有的微生物都具有分解色氨酸产生吲哚的能力，所以吲哚实验可以作为一个生物化学检测的指标。
大肠杆菌吲哚反应阳性，产气肠杆菌为阴性。
（2）甲基红试验（MR）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者进而被分解产生甲酸，乙酸和乳酸等多种有机酸，培养基就会变酸，使加入培养基中的甲基红指示剂由橙黄色转变为红色，即甲基红反应。
大肠杆菌为阳性，产气肠杆菌为阴性。
四、【实验步骤】1.淀粉水解实验（1）倒平板：按照淀粉培养基配方配制固体淀粉培养基，灭菌，待培养基冷却至50℃左右，在酒精灯火焰旁倒平板，每组两个平板。
（2）用记号笔在平板底部划成四部分。
（3）接种：在无菌操作台上，将枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌分别在不同的部分点种，如图一所示，注意仅用接种针接触极少面积的培养基，在平板的反面对应部分贴上标签，标签上分别写上菌名，以免混淆。
（4）培养：将平板倒置，在28℃温箱中培养两天。
（5）观察：取出培养基，观察各种细菌的生长情况，打开平板盖子，滴入少量卢戈氏碘液于平板中，轻轻旋转平板，使碘液均匀铺满整个平板，观察培养皿中菌落周围是否有无色透明圈，若有无色透明圈出现，说明淀粉已经被水解，为阳性，反之则为阴性。
记录实验结果。
图一：淀粉水解试验接种示意图图二：油脂水解试验接种示意图2.油脂水解试验（1）倒平板：按照油脂培养基配方配制固体油脂培养基，灭菌，待培养基冷却至50℃左右，充分振荡，使油脂均匀分布，在酒精灯火焰下倒平板，每组两个平板。
（2）用记号笔在在平板底部划成四部分。
（3）接种：在无菌操作台上将枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌分别划十字线接种于平板相对应部分的中心，如图二所示，并贴好标签，标签上注明菌种的名称。
（4）培养：将平板倒置，在28℃温箱中培养两天。
（5）观察：取出平板，观察菌苔颜色，如果出现红斑点，说明脂肪水解，为阳性反应。
记录实验结果。
3.葡萄糖发酵实验（1）培养基的配制：按照糖发酵培养基配置葡萄糖发酵培养基，分装至试管中，用胶头滴管往德汉氏小管中注满培养基，再把德汉氏小管倒置放入试管中，注意不要让德汉氏小管中进入空气，每组五只试管，灭菌。
（2）接种：待培养基冷却至常温时，在无菌操作台上，取葡萄糖发酵培养基试管2支接入大肠杆菌，再取两只接入普通变形杆菌，接种后轻摇试管，使其均匀，防止倒置的小管进入气泡，第五支不接种，作为对照。
在各试管外壁上贴上标签，标签上分别标明发酵培养基的名称和所接种的细菌菌名。
（3）培养：把接种后的试管放在试管架上，把试管连同试管架放入培养箱中于28℃下培养两天。
（4）观察：观察各试管颜色变化及德汉氏小管中有无气泡，并记录实验结果。
4.乳糖发酵实验（1）培养基的配制：按照糖发酵培养基配置乳糖发酵培养基，分装至试管中，用胶头滴管往德汉氏小管中注满培养基，再把德汉氏小管倒置放入试管中，注意不要让德汉氏小管中进入空气，每组五只试管，灭菌。
（2）接种：待培养基冷却至常温时，在无菌操作台上，取乳糖发酵培养基试管2支接入大肠杆菌，再取两只接入普通变形杆菌，接种后轻摇试管，使其均匀，防止倒置的小管进入气泡第五支不接种，作为对照。
在各试管外壁上贴上标签，标签上分别标明发酵培养基的名称和所接种的细菌菌名。
（3）培养：把接种后的试管放在试管架上，把试管连同试管架放入培养箱中于28℃下培养两天。
（4）观察：观察各试管颜色变化及德汉氏小管中有无气泡，并记录实验结果。
5.吲哚试验（1）培养基的配制：按照蛋白胨水培养基配方配制培养基，分装至试管中，每组五只试管，在高压蒸气锅内灭菌。
（2）接种：待培养基冷却后，在无菌操作台上将大肠杆菌接入2支蛋白胨水培养基，产气肠杆菌接入2支蛋白胨水培养基，剩余一只试管不接种，作为空白对照，贴好标签。
（3）培养：把接种后的试管放在试管架上，把试管连同试管架放入培养箱中于28℃下培养两天。
（4）观察：往培养后的蛋白胨水培养基内加入3~4滴乙醚，摇动数次，静置1min，待乙醚上升后，沿试管避徐徐加入2滴吲哚试剂。
在乙醚和培养物之间产生红色环状物为阳性反应。
观察加入试剂后试管内的颜色反应并记录实验结果。
6.甲基红试验（1）培养基的配制：按照葡萄糖蛋白胨水培养基配方配制培养基，分装至试管中，每组五只试管，在高压蒸气锅内灭菌。
（2）接种：待培养基冷却后，在无菌操作台上将大肠杆菌接入2支葡萄糖蛋白胨水培养基，产气肠杆菌接入2支葡萄糖蛋白胨水培养基，剩余一只试管不接种，作为空白对照，贴好标签。
（3）培养：把接种后的试管放在试管架上，把试管连同试管架放入培养箱中于28℃下培养两天。
（4）观察：培养两天后后，将每支葡萄糖蛋白胨水培养基培养物内加入2滴甲基红试剂，培养基变为红色者为阳性，变为黄色者为阴性。
观察试管内的颜色变化，并记录实验结果。
五、【实验结果及分析】实验结果记录淀粉水解试验:表1.淀粉水解试验结果(“+”表示阳性，“—”表示阴性)油脂水解试验:表2. 油脂水解试验结果(“+”表示阳性，“—”表示阴性)葡萄糖发酵培养基：表3. 葡萄糖发酵试验结果（“+”表示阳性，“—”表示阴性）乳糖发酵培养基:表4. 乳糖发酵试验结果（“+”表示阳性，“—”表示阴性）吲哚试验:表5.吲哚试验结果（“+”表示阳性，“—”表示阴性）甲基红试验:表6. 甲基红试验结果（“+”表示阳性，“—”表示阴性）淀粉分解实验结果油脂分解实验结果葡萄糖发酵实验结果乳糖发酵实验结果甲基红实验结果吲哚实验结果六、【注意事项】1.淀粉水解试验中，观察各种细菌生长情况时，滴入少量卢戈氏碘液于平板中，应轻轻旋转平板，使碘液均匀铺满整个平板。
2.油脂水解试验中，制备固体油脂培养基时，应充分摇荡，使油脂均匀分布。
3.接种前要用记号笔做好标记，接种时要对号接种，以免接错菌种，造成混乱。
4.糖发酵试验中，接种后要轻缓摇动试管，使其均匀，防止倒置的小管进入气泡。
否则会造成假象，得出错误的结果。
5.吲哚试验中，注意加入3~4滴乙醚，摇动数次，静置1min，待乙醚上升后，再沿试管壁徐徐加入2滴吲哚试剂。
否则就会观察不到在乙醚和培养物之间产生的红色环状物。
6.甲基红试验中，应该注意甲基红试剂不要加得太多，以免出现假阳性。
7.在使用酒精灯时要特别注意，避免酒精灯爆炸。
8.接种均在无菌条件下操作，接种完毕以后用灭菌好的棉花塞住管口防止污染。
七、【思考题】1.你怎么样解释淀粉酶是胞外酶而非胞内酶？答：淀粉是大分子物质，进入细胞十分困难，甚至需要触及高耗能的胞吞作用。
因而通过胞外酶的作用，将淀粉水解为葡萄糖后运入细胞，较方便高效。
试验中菌苔周围出现透明圈，说明培养基内淀粉被水解，可推测是细菌细菌将淀粉酶分泌到胞外所致，因此为胞外酶。
2.不利用碘液，你怎样证明淀粉水解的存在？答：淀粉水解为葡萄糖才能被细胞利用，因此可以换用斐林试剂。
呈阳性者则说明产生了葡萄糖，淀粉被水解；阴性者说明淀粉未被水解。
3.假如某种微生物可以有氧代谢葡萄糖，发酵试验应该出现什么结果？答：由于产生的CO2溶于水的量少且碳酸酸性若，因此颜色不变化，仍为紫色。
德汉氏小管中有气柱。
4.讨论IMViC试验在医学检验上的意义。
答：可以鉴别某些疾病是由大肠杆菌还是产气肠杆菌引起的。
5.解释在细菌培养中吲哚检测的化学原理，为什么在这个试验中用吲哚的存在作为色氨酸酶活性的指示剂，而不用丙酮酸？答：有些细菌产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚和丙酮酸。
吲哚与对二甲基氨基甲醛结合，形成红色的玫瑰吲哚。
但并非所有的微生物都具有分解色氨酸产生吲哚的能力，因此吲哚试验可以作为一个生物化学检测的指标。
因为丙酮酸是生物体呼吸作用的产物，无论是有氧还是无氧，都会产生丙酮酸，因而无法作为色氨酸酶活性的指示剂进行区分。
同时吲哚能通过有明显颜色变化的化学反应观测到，而丙酮酸不能，所以试验中用吲哚的存在作为色氨酸酶活性的指示剂，而不用丙酮酸。