实验报告---绿原酸标准曲线的绘制
实验二 高效液相色谱法测定未知溶液中绿原酸的含量
实验二高效液相色谱法测定金银花中绿原酸的含量【目的】1、学习高效液相色谱仪的结构及操作方法；2、掌握高效液相色谱法进行定性和定量的分析方法；3、掌握索氏提取法对目标物提取的方法。
【概述】高效液相色谱法是以液体作为流动相的重要的一种色谱分析法。
它选用颗粒很细的高效固定相，采用高压泵输送流动相，分离、定性及定量全部分析过程都通过仪器来完成。
除了有快速、高效的特点外，它能分离沸点高、分子量大、热稳定性差的试样。
根据使用的固定相及分离原理不同，—般将高效液相色谱法分为分配色谱、吸附色谱、离子交换色谱和空间排斥色谱等。
在分配色谱中，组分在色谱柱上的保留程度取决于它们在固定相和流动相之间的分配系数K:K=组分在固定相中的浓度/组分在流动相中的浓度显然，K越大，组分在固定相上的停留时间越长，固定相与流动相间的极性差值也越，因此，相应出现了流动相为非极性而固定相为极性物质的正相液相色谱法和以流动相为极性而固定相为非极性物质的反相液相色谱法。
目前应用最广的固定相是通过化学反应的方法将固定液键合到硅胶表面上，即所谓的键合固定烷)键合到硅胶基质上。
以极性溶剂(如相。
若将正构烷烃等非极性物质(如n—CN甲醇和水)为流动相，则可分离非极性或弱极性的化合物。
样品经进样系统注入到色谱仪，在色谱中进行分离分配，按时间顺序流出色谱柱，进入检测器，检测器将各组分的质量信号转变成电信号，得到色谱图，进行定性、定量分析。
【器材与试剂】1.器材（1）LC-20A型高效液相色谱仪（2）紫外检测器（3）计算机（4）打印机（5）20ul微量进样器（6）抽滤装置（7）色谱柱：250mm×4.6mm，n-C18柱（8）容量瓶（9）移液管（10）吸耳球（11）电子天平（12）量筒（13）滤膜（0.25μm）（14）注射器（15）过滤头（0.25μm）（16）索氏提取器装置（17）水浴锅（18）烧杯2.试剂（1）绿原酸标准品。
（2）甲醇（色谱纯）（3）乙腈（色谱纯）（4）磷酸（优级纯）（5）超纯水（6）金银花（7）乙醇【方法与步骤】1. 将干燥的金银花用粉碎机粉碎，准确称取8.000g，用滤纸包好，置于索氏提取器中，取90%的乙醇溶液90mL，先往索氏提取器中加90%的乙醇至与虹吸管相平，剩余液体加入圆底烧瓶中，对样品浸泡2h，然后在水浴锅上加热回流至无色，控制温度在80℃左右。
天然有机化学实验教学(实验绿原酸提取和预实验教学)
实验一天然有机成分的预实验实验目的：通过实验让学生了解中草药化学成分鉴别的基本原理，学会对各类化学成分检识的实验方法。
掌握天然有机成分鉴别的操作流程。
实验原理：中草药中所含的化学成分很多，在分离提取某种临床上有效的药物之前，一般可先通过简单的试验（预试验，简称预试），初步了解其中所含成分的情况，这样将有利于先用适用的方法进行有效成分的探索试验。
但必须指出，目前对中草药中成分的了解还很有限，随着时间的推移，必然会发现更多新类型的药用有效成分。
预试结果仅能供分离有效成分作参考。
检查中草药化学成分的预试方法，主要归纳为二类。
一类是系统预试法，即用简单的定性方法对中草药中的各类成分进行较全面的测定。
为此，往往要同一种中草药中进行十多种乃至更多种的常见化学成分的定性实验。
另一类是单项预试法，即根据工作的需要，有重点地检查某类成分。
例如为了寻找强心药物，就利用强心苷的化学反应或药物实验，从多种中草药检查强心苷的存在情况。
又如为了寻找甾体激素原料，则在多种中草药进行甾体皂苷及其苷元的定性反应等等。
为了达到这一目的，需要选用灵敏而准确的定性反应，或采用新的技术（红外、紫外光谱、核磁共振、质谱、圆二色谱等）以及选用药理实验测定生物效价相配合的方法。
在研究中草药有效成分的工作中，常用系统预试法首先对其所含的成分作进一步的了解。
这类方法一般多用粗提取物进行检查，由于某些定性反应有一定的局限性，故有时影响实验结果的正确判断。
如有的定性反应为几类成分所共有，呈正反应时就难以确定是哪类成分生产形成的。
同时由于成分之间的干扰，以及有时出现个别例外情况，所以虽有某类成分的存在，也可能呈负反应。
目前常用的系统预试法有在试管内进行预试和圆形滤纸层析的方法等。
实验方法与步骤：一、样品的制备1、酸性乙醇提取液：称取通过20目筛的中草药粉末10克，加入70毫升0.5%盐酸乙醇溶液，在水浴回流10分钟。
乘热过滤，得酸性提取液。
此滤液用以检查酸性成分、有机酸和生物碱等。
杜仲叶中绿原酸的提取分离及结构鉴定
杜仲叶中绿原酸的提取分离及结构鉴定杨秀芳;汪洋;马养民【摘要】研究杜仲叶中绿原酸的提取分离工艺并对其结构进行鉴定.通过正交试验,研究绿原酸最佳水提工艺,对柱层析纯化绿原酸的工艺路线进行初步探讨.水提法最佳工艺条件为:料液比为1:8,提取时间为70 min,提取温度为80℃,以热水作为溶剂提取杜仲叶2次,绿原酸得率为1.78％.先后利用D-101大孔吸附树脂、硅胶柱层析、SephadexLH-20凝胶柱层析对提取物进行分离得到绿原酸.杜仲叶中绿原酸的含量远大于其皮中的含量.【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2013(034)004【总页数】3页(P32-34)【关键词】杜仲叶;绿原酸;提取;纯化;结构鉴定【作者】杨秀芳;汪洋;马养民【作者单位】陕西科技大学教育部轻化工助剂化学与技术重点实验室,陕西西安710021;陕西科技大学教育部轻化工助剂化学与技术重点实验室,陕西西安710021;陕西科技大学教育部轻化工助剂化学与技术重点实验室,陕西西安710021【正文语种】中文杜仲（Eucommia ulmoides Olive）为杜仲科杜仲属植物，仅一属一种。
杜仲在我国研究和利用已有两千多年的历史[1]。
传统中医以皮入药，但树皮生长缓慢，种植10年～20年后才能剥皮，每年杜仲皮的增长量仅为0.4 kg左右，紧缺的药源无法满足人类的需求[2]。
为了保护和扩大药源，杜仲以叶代皮研究日益活跃，研究发现杜仲叶与皮有着相似的药理作用和化学成分，杜仲叶在临床上也具有较好的疗效[3]。
杜仲属于落叶乔木，杜仲叶具有廉价、采摘方便、可循环再生等特点。
这为杜仲叶的进一步利用奠定了物质基础，也为缓解紧缺的杜仲资源开辟了途径[4]。
杜仲叶中富含活性化合物绿原酸，绿原酸又称3－咖啡酰奎尼酸，是一种广泛分布于植物体内的苯丙素类物质。
经研究发现其具有抗菌、抗炎、保肝、利胆等多种功效，广泛的应用于医药、食品、日用化工等行业，对绿原酸的提取纯化为合理开发杜仲资源具有十分重要的意义[5]。
绿原酸标准曲线制备
双黄连口服液绿原酸含量测定
一、实验目的：
1.了解高效液相在药物检测中的应用
2.熟悉高效液相的基本使用及要求
3.掌握工作曲线含量测定法
二、试剂和仪器：
HPLC、甲醇、水、真空泵、超声处理器
三、实验步骤：
一.准备
流动相的处理
1.将瓶子装入适量的纯净水，利用超声处理器对瓶子进行洁净处理。
2.取适量的纯净水，以1%的比例加入冰醋酸，利用真空泵进行抽滤。
3.将混合的液体加入到已处理的洁净瓶子中。
二.开机处理
1.自检
2.排气处理
3.开电脑打开软件
4.连接仪器
5.设定条件，流动相：乙腈－0.4%磷酸溶液＝13：87；检测波长327nm，流速1mL/min。
6.基线稳定进样标准品1、2、3、4、5μL，样品10μL。
绘制标准曲线计算含量。
结果
标准品色谱图
uV
90000
80000
70000
60000
50000
40000
30000
20000
10000
min
标准品色谱图
uV
225000
200000
175000
150000
125000
100000
75000
50000
25000
min 标准曲线Y = aX + b a = 36995.06 b = 189499.4 R^2 = 0.9994021 R = 0.9997010
外标法曲线拟合类型:线性原点:未强制加权:无平均RF: 45052.70 RF SD: 4811.841 RF %RSD: 10.68047。
绿原酸含量测定
绿原酸提取与测定绿原酸（chlorogeni c acid）是一种从双子叶植物（如忍冬叶、咖啡豆、向日葵）的叶和果实分离得到的酚类,也是许多中草药（如杜仲、金银花、茵陈等）及中药复方制剂抗菌消炎、清热解毒的主要活性成分，目前已成为中草药制剂质量控制的主要指标之一。
绿原酸是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物。
它是一种由咖啡酸(caffeic acid)与奎尼酸(鸡纳酸,quini c acid,即1-羟基六氢没食子酸)缩合而成的缩酚酸,异名咖啡鞣酸,化学名3-O-咖啡酰奎尼酸(3-O-caffeoylquinic acid),分子式为C16H18O9,分子量:345.30，半水合物为针状晶体，110℃时变为无水化合物，易溶于水、乙醇、丙酮，微溶于乙酸乙酯，常温下呈淡黄色固体。
绿原酸在植物中分布广泛,从高等双子叶植物到蕨类植物均有报道，但含量较高的植物不多，主要存在于忍冬科忍冬属(Lonicera)、菊科蒿属(Artemisia)植物中，其中包括杜仲、金银花、向日葵、咖啡、可可树。
植物的不同品种、发育阶段、同一植株的不同部位、存放时间、生长环境等均能影响植物中绿原酸的含量。
以杜仲为例：叶中绿原酸的含量高于皮中含量数倍之多；用不同干燥方法对绿原酸含量的影响研究中,用阴干、晒干、直接烘干所测绿原酸含量分别是2.21%、2.17%和2.24%;鲜叶绿色含绿原酸3.52%,放臵1年后,叶色棕绿,绿原酸含量为2.47%。
由于绿原酸是极性较强的有机酸，易溶于醇、水，难溶于氯仿、乙醚,因此绿原酸的提取方法较多，有醇（甲醇、乙醇）溶法、水提醇沉、醇提铅沉、石灰乳沉淀法及聚酰胺柱层析法等。
下面介绍几种提取方法。
醇溶法：先用氯仿进行连续提取至流出液呈无色;再改用95%工业乙醇提取,提尽绿原酸;将所得乙醇提取液减压浓缩成浸膏,与干净细沙拌合后,用热水提取数次,使绿原酸转溶于水中,弃去残渣;所得水溶液用乙醚萃取,进一步除去脂溶性杂质;向脱脂后的水溶液中加入饱和无机盐溶液,至沉淀完全,并稍有过量为止。
HPLC(液相色谱)-绿原酸检测方法
HPLC-绿原酸检测方法2020版本药典有效成分测定参考2020版《中国药典》金银花项下绿原酸和木犀草苷测定的方法，采用高效液相色谱法测定其含量。
2.3.4.1 供试品溶液制备取本品粉末（过四号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，超声处理（功率250W，频率35kHz)30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液4ml，置5ml离心管中，摇匀，即得。
2.3.4.2 绿原酸的高效液相色谱检测方法(1) 标准品溶液的配制取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1ml含50µg的溶液，即得对照品溶液10℃以下保存。
(2) 检测条件色谱条件：色谱柱为安捷伦SB-C18柱（250mm×4.6mm，5µm）；流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液（13:87）；检测器为安捷伦G1314B可变波长紫外检测器；流速为1.0ml/min；柱温为25℃；检测波长为327nm；进样量为10µl。
用外标法进行定量。
(3) 标准曲线的绘制分别吸取绿原酸对照品溶液2、4、6、8、10、20µl注入高效液相色谱仪，记录峰面积，以进样量为横坐标X，色谱峰峰面积为纵坐标Y，绘制标准曲线，得回归方程Y = 830.69X -16.516(R2=1)。
(4) 精密度实验取同一浓度的对照品溶液每次进样10µl，连续进样6次，按上述色谱条件测定绿原酸含量，根据检测结果计算相对标准偏差（RSD）。
(5) 稳定性考察分别取同一浓度的对照品溶液10µl，每隔两小时进样一次，连续进样检测６次，根据结果计算相应的相对标准偏差（RSD），检测10小时之内绿原酸的稳定性。
(6) 重现性实验取同一批次的提取样品，在设定的HPLC条件下连续进样6次，测定绿原酸含量，计算标准偏差（RSD）。
实验报告---绿原酸标准曲线的绘制
绿原酸标准曲线的绘制一、实验目的1.1 熟练掌握用高效液相色谱仪测绿原酸含量的方法，绘制标准曲线；1.2 熟练掌握用紫外分光光度仪测绿原酸含量的方法，绘制标准曲线；二、原理2.1 绿原酸简介绿原酸(chlorogenic acid)是由咖啡酸(caffeic acid)与奎尼酸(鸡纳酸,quinic acid,即1-羟基六氢没食子酸)组成的缩酚酸,异名咖啡鞣酸,化学名3-O-咖啡酰奎尼酸(3-O-caf-feoylquinic acid),分子式:C16H18O9,分子量:345.30，是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物。
2.2 高效液相色谱仪的工作原理：高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。
储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。
三、试剂与仪器3.1 材料与试剂：绿原酸标准品；乙腈为色谱纯试剂，磷酸、甲醇、乙醇等试剂均为分析纯；3.2 主要仪器：高效液相色谱仪，分析天平，25ml、50ml棕色容量瓶，滴定管，10ml,25ml,50ml,100ml容量瓶各7个，1ml、2ml、5ml的移液管，紫外分光光度仪，比色皿；擦镜纸；注射器。
四、实验步骤4.1 用紫外分光光度法所测的绿原酸标准曲线紫外分光光度法：精密称取绿原酸标准品0.0055g，用80%的乙醇溶解，转移到100ml容量瓶中，加80%乙醇到刻度，混匀，制得标准母液。
精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0ml于25ml容量瓶中，加80%乙醇到刻度，混匀，此为标准系列溶液。
实验七 杜仲叶中绿原酸的提取
实验七杜仲叶中绿原酸的提取1【实验原理】定义：绿原酸(chlorogenic acid)是由咖啡酸(caffeic acid)与奎尼酸(鸡纳酸,quinic acid,即1-羟基六氢没食子酸)组成的缩酚酸,异名咖啡鞣酸,化学名3-O-咖啡酰奎尼酸(3-O-caf-feoylquinic acid),分子式:C16H18O9,分子量:345.30，是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物。
作用：其具有很强的药理活性，对消化系统，血液系统和生殖系统疾病有显著疗效。
同时，绿原酸是多种药材和中成药抗菌解毒、消炎利胆的主要有效成分和质量控制的重要指标。
分布：绿原酸在各类植物中的存在很普遍（高等双子叶植物到蕨类植物），金银花不同发育阶段绿原酸含量从花蕾到开放过程有逐渐下降之趋势,其含量6.07%～4.29%，当然，生态环境对其有影响。
绿原酸也是杜仲主要有效成分之一,最高(4.07%),在年周期中,杜仲叶中绿原酸含量以6月份含量最高,其次是11月份,5月份最低。
但含量较高的植物并不多见，对不同品种甘薯地上部分绿原酸的初步测定（李文芳等，2006）茎、叶分别含1.26%、5.22%，有较高的药用价值。
绿原酸的生物合成：绿原酸的提取：绿原酸的提取方法目前有水提醇沉、醇提铅沉、石灰乳沉淀法等。
绿原酸分子中含有5个羟基和1个羧基,使其在水中溶解度达4%。
从经济、适用和安全角度出发,在中药加工时多采用水为溶剂,加热煮沸提取,以便提高绿原酸的浸出率,但相应地增加其他水溶性成分如蛋白质、多糖、鞣质等杂质,可用传统的醇沉法除去。
醇沉过程中伴随吸附,致使绿原酸有不同程度的损失。
提取杜仲叶水提液中绿原酸时,分次醇沉比一次醇沉所得产品纯度高;当乙醇浓度最终为90%时,一次醇沉的损失率比分次醇沉较大。
水提石灰乳沉淀法:在水溶液中,加石灰乳使绿原酸生成钙盐沉淀,用稀酸分解,提取物中绿原酸得率较低,可能因为绿原酸是酯类,被强碱水解所致。
绿色溶剂—标准曲线法测定油品酸值
绿色溶剂—标准曲线法测定油品酸值陆克平【摘要】提出了一种直接pH测定油品酸值的免滴定方法.这种方法基于水/醇为主体的溶剂,内含有机碱性试剂,能4mim内完全萃取油品中酸性物质,用pH复合电极直接测定油品酸值.溶剂组成为体积比1:1的异丙醇和水,内含0.05～0.20mol/L的N-甲基二乙醇胺(MDEA)和0.02mol/L硝酸钾,预调至pH 11.30±0.05.确定了标准曲线区间,可测定0.007 mg KOH/g以上油品酸值.本方法耗时少,操作简便,具有不使用有毒试剂,室温下萃取与检测以及无需空白试验的特点,已在日常分析中应用,结果令人满意.%A direct pH-metric method for determination of acid number in some petroleum oils has been developed, based on water-isopropanol solvents with organic alkaline reagent. In just 4 min, it is able to completely and rapidly extract the sum of acids from an oil test portion into the special reagent in the iso-propanol-water phase by combination glass pH electrode measurement without titration. The reagent consisting of N-Methyldiethanolamine(MDEA) and potassium nitrate(KNOs) dissolved in water(H2O) and isopropanol (2-PrOH)with the initial conditional pH 11.30±0. 05 [0. 05-0. 20 mol/L MDEA and 0. 02 mol/L KNO3 in the mixture of 50 % H2 O + 50 % 2-PrOH]. The limit of quantitation was 0. 007mg(KOH)/g. The advantages of the method include absence of toxic solvents, extraction and inspection of acid number at room temperature, and no need for preliminary neutralization of acid admixtures in a solvent.【期刊名称】《分析仪器》【年(卷),期】2013(000)001【总页数】6页(P43-48)【关键词】酸值;N-甲基二乙醇胺;石油醚;pH测定;石油产品【作者】陆克平【作者单位】中国石油化工股份有限公司安庆分公司检验中心,安庆246002【正文语种】中文油品酸值反映了石油及石油产品在开采、运输、加工及使用过程中对金属的腐蚀性及油品的精制深度或变质程度，在腐蚀性、传导性和油品的质量表征中检测频率较高，被广泛采用［1－4］。
实验方法汇总
可溶性蛋白、SOD 、POD 、CAT 、MDA 的测定一、磷酸缓冲液的配制：二、酶液的制备：称取0.5—1g （FW ）放入研钵中，加5×毫升PH=7.8的磷酸缓冲液，冰浴研磨，匀浆倒入离心管中，12000转冷冻离心20分钟，上清液（酶液）倒入试管中，置于0—4ºC 下保存待用。
三、可溶性蛋白的测定 1、试剂的配制:牛血清白蛋白标准液（100g/mL ）：精确称取0.0100g 牛血清白蛋白，用蒸馏水溶解后定容至100mL （4℃保存）。
考马斯亮蓝G-250染色液：取0.10g 考马斯亮蓝G-250，溶于50mL 95%的乙醇中，加入100mL 85%的正磷酸，再用蒸馏水定容到1000mL 。
过滤待用。
该试剂于常温下可保存1个月。
2、标准曲线制作0—1000μg/ml 标准曲线的制作取6支10ml 具塞试管，按下表取样。
盖塞后，将各试管中溶液纵向倒转混合，放置2min 后，在595nm 波长下比色，记录各管测定的光密度OD 值，并做出标准曲线。
表 0~1000μg/ml 标准曲线管号1 2 3 4 5 6 1000μg/ml 母液(ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 DH 2O(ml)1.00 0.8 0.6 0.4 0.2 0.0 G-250试剂(ml) 5 5 5 5 5 5 蛋白质含量(μg) 0 200 400 600 800 1000 2、样品测定取2支试管（10ml 具塞，作为3个重复），按下表加样：管号 空白 样品 样品 样品 待测样品(ml)0 0.08 0.08 0.08 DH 2O(ml) 1.00 0.92 0.92 0.92 G-250 5 5 5 5 OD5950 蛋白质含量3、计算结果样品中蛋白质含量（μg/gFW ）=1V W V X ⨯⨯ 其中X 为在标准曲线上查得的蛋白质含量，μg ；V 0为提取的总体积，ml ；V 1为测定蛋白质时所用的体积，ml ；W 为样品鲜重，g 。
绿原酸的提取实验报告
一、实验目的1. 掌握绿原酸的提取方法；2. 熟悉绿原酸提取过程中相关操作技术；3. 了解绿原酸在植物源天然产物中的应用。
二、实验原理绿原酸是一种天然多酚类化合物，具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤、降血糖血脂等生理活性。
绿原酸的提取方法主要有水提法、回流提取法、超声提取法、微波辅助提取法、酶法等。
本实验采用超声提取法提取植物源天然产物中的绿原酸。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：杜仲叶、金银花等植物源天然产物；2. 试剂：绿原酸标准品、甲醇、无水乙醇、盐酸等；3. 仪器：超声波提取器、分析天平、离心机、分光光度计、恒温水浴锅等。
四、实验方法1. 标准曲线的绘制（1）配制绿原酸标准溶液：准确称取绿原酸标准品10mg，用甲醇溶解并定容至10mL，得到浓度为1mg/mL的标准溶液；（2）取6个试管，分别加入0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL标准溶液，用甲醇定容至2mL；（3）以标准溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 绿原酸提取（1）称取杜仲叶粉末2g，置于锥形瓶中；（2）加入10mL甲醇，超声提取30分钟；（3）提取液离心分离，取上清液；（4）用分光光度计在波长327nm处测定吸光度；（5）根据标准曲线计算绿原酸含量。
3. 绿原酸提取工艺优化（1）以超声提取时间为自变量，分别设定20、30、40、50分钟，考察超声提取时间对绿原酸提取率的影响；（2）以甲醇浓度为自变量，分别设定60%、70%、80%、90%，考察甲醇浓度对绿原酸提取率的影响；（3）以料液比为自变量，分别设定1:10、1:15、1:20、1:25，考察料液比对绿原酸提取率的影响。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制根据实验数据，绘制标准曲线，得到线性方程为：y = 0.017x + 0.0013，相关系数R² = 0.996。
2. 绿原酸提取根据实验数据，杜仲叶中绿原酸含量为0.50mg/g。
金银花中绿原酸的提取及检测_乌兰.
下,随着球磨时间的增加,其剪切应力显著下降。
用幂方程τ=k γm (其中k 为稠度系数;m 为流动特征指数对曲线进行拟合,结果如表2所示。
由拟合结果可知,在不同温度下,相关系数R 2在0.9850~0.9993之间,这说明方程与曲线有较好的相关性。
同一样品的稠度系数k 随着温度的升高而减小,说明温度升高可以减小体系的稠度,增强淀粉糊的流动性。
在同一温度下随着球磨时间的增加,稠度系数k 显著下降,流动指数m 则是呈现增加的趋势,说明球磨后的绿豆淀粉更趋近于牛顿流体。
3结论上述实验结果表明,机械球磨方法可以有效地将绿豆淀粉非晶化,球磨一定时间后淀粉颗粒的偏光十字消失,X -射线衍射曲线的尖峰衍射特征逐渐减弱,绿豆淀粉颗粒的结晶结构受到严重破坏。
球磨处理后绿豆淀粉糊的流变特性在不同浓度和温度下发生了变化,绿豆淀粉糊随着球磨时间的延长稠度系数k 不断减小,而流动特征指数m 则不断增大,说明球磨处理后绿豆淀粉糊趋向于牛顿流体的特征。
参考文献:[1]Shinji Tamaki,Makoto Hismatsu,Katsunori Teranishi,et al.Structural change of maize starch granules by ball-mill treatment[J].S tarch,1998, 50(8:342-348.[2]Shinji Tamaki,Makoto Hisamatsu,Katsunori Teranishi,et al. Structural change of potato starch granules by ball-mill treatment[J].S tarch,1997,49(11:431-438.[3]胡飞,陈玲,李琳.马铃薯淀粉颗粒在微细化过程中结晶结构的变化[J].精细化工,2002,19(2:114-117.[4]Sherman P.Food texture and rheology[M].New York:Aca-demic Press,1979.[5]Prentice J H.Measurements in the rheology of foodstuffs [M].London:Elsevier Applied Science Publishers,1984.[6]胡飞,李平凡,陈玲.微细化马铃薯淀粉流变性质的研究[J].粮食与饲料工业,2002,(7:41-43.[7]二国二郎.淀粉科学手册[M].王微青,等,译.北京:轻工业出版社, 1990.31-43,163-167.[8]Mohd Nurul I Muhd,Azemi B M N,Manan D M A.Rheo-logical b ehaviour o f s ago(Metroxylon s agu s tarch p aste[J].Food Chemistry,1999,64:501-505.收稿日期:2004-07-14*通讯作者基金项目:天津市教委科研项目(20039902作者简介:乌兰(1976-,女,硕士研究生,研究方向为食品科学、天然产物开发。
RP—HPLC法测定复方金银花颗粒中绿原酸的含量
RP—HPLC法测定复方金银花颗粒中绿原酸的含量目的：建立高效液相色谱法测定复方金银花颗粒中绿原酸含量的方法。
方法：采用Agilent C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱，甲醇-水-冰醋酸（20：80：1）为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长为324nm。
结果：绿原酸在77.28μg～772.8μg的范围内呈良好的相关性，相关系数为0.9998，平均回收率分别为99.10%，RSD为0.39%。
结论：本方法操作准确、简便、快速，可有效用于复方金银花颗粒的质量控制。
标签：RP-HPLC法复方金银花颗粒绿原酸含量测定复方金银花颗粒是由金银花、连翘和黄芩3味中药制成的复方制剂，具有清热解毒、凉血消肿之功效，主要用于风热感冒、喉痹、乳蛾、目痛、牙痛及痈肿疮疖等症的治疗[1]。
本品已收载于5卫生部药品标准6中药成方制剂第十册，其质量标准只有性状、鉴别、常规检查及含量测定，含量测定项分别对黄芩苷和连翘苷进行考察并将其作为评价指标，通过大量文献及相关资料表明金银花中的绿原酸也是有效成分之一，具有广泛的抗菌作用[2-3]。
所以本研究将对复方金银花中绿原酸的含量进行测定，以确保本品的内在质量[4]。
1 材料与方法1.1 实验材料1.1.1 仪器和设备高效液相色谱仪：美国安捷伦（1）1200紫外检测器；美国安捷伦（2）1200紫外检测器；Meltter AE240双量程电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司），AB204-E电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；紫外分光光度计UV-2401（日本岛津）。
1.1.2 试剂与试药绿原酸对照品（批号：110753-200413 规格：约20mg，供含量测定用），购自中国食品药品检定研究院；甲醇为色谱纯，乙酸为分析纯，水为重蒸水。
（）（）1.2 实验方法1.2.1 系统适用性试验及色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸（20：80：1）為流动相；检测波长为324nm。
高效液相色谱法测定苹果、青椒等水果蔬菜中绿原酸的含量
试验研究
现代园艺
2014 年第 6 期
4、图 5、图 6、图 7 所示，绿原酸在 12min 内得到了很好 的分离。
图 1 乙醇含量对吸光度的影响
2.2 检测波长的选择 用 UV-Vis 在 190~900nm 下对标准物质进行扫描
(见图 2) ，绿原酸在 330nm 附近均有最大吸收，灵敏度 较高并且噪音较小，所以波长选用 330nm。
：苹果；青椒；西红柿；茄子；绿原酸；高效液相色谱法
绿原酸 ( Chloro genic acid) 是一种多酚类化合物， 由一分子咖啡酸( Caf feic acid) 和一分子奎尼酸( Quinic acid，1- 羟基六氢没食子酸) 缩合脱水而成的缩酚酸, 异 名 咖 啡 单 宁 酸 ， 化 学 名 3-O- 咖 啡 酰 奎 尼 酸 (3-O-caffeo ylquinic acid)，分子式: C16H18O9，分子量: 354.30，是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产 生的一种苯丙素类化合物。绿原酸具有广泛的抗炎、抗 病毒、抗菌作用及保肝利胆等方面的药理作用[1]，绿原 酸还具有补肾、利尿、增强机体免疫作用[2]。绿原酸的降 压及抗肿瘤作用体现在蔬菜、水果中的多酚类绿原酸 可通过抑制活化酶来抑制致癌物黄曲霉毒素 B1 和苯 并[a] 芘的变异原性；绿原酸还可通过降低致癌物的利
. 用A率ll从而R功效显
著、毒副作用小的特点引起了人们的关注和研究，使绿 原酸成为目前医药、食品界研究的焦点化合物[3]，因此 对绿原酸的深入研究具有重要意义。
目前，绿原酸的含量测定方法主要有高效液相色 谱法等[4]、紫外可见分光光度法[5]、高效毛细管电泳法[6]、 薄层色谱扫描法[7]。在这些测定方法中，高效液相色谱 法的优点是准确、高效、受其他成分影响小。用高效液 相色谱法对果蔬中绿原酸的分析报道较少，为此，本文 用高效液相色谱法测定了苹果、青椒、茄子和西红柿中 的绿原酸含量水平，揭示了其中的绿原酸含量，该法具 有准确率高、重现性好、快捷简便等特点。 1 材料与方法 1.1 材料与仪器
绿原酸等四种物质采用不同进样方法制订HPLC标准曲线的比较
绿原酸等四种物质采用不同进样方法制订HPLC标准曲线的比较目的：比较高效液相色谱法制作标准曲线时，对照品稀释法和不同进样量法的异同。
方法：采用高效液相色谱法，以绿原酸、连翘酯苷B、毛蕊花糖苷和木犀草苷对照品作为研究对象，采用对照品稀释法和进样不同体积法，测定峰面积，计算标准曲线。
结果：木犀草苷两种方法结果线性关系良好，而绿原酸、连翘酯苷B、毛蕊花糖苷仅稀释法线性关系良好。
结论：建议采用稀释法测定标准曲线，不同进样量法需慎重。
标签：高效液相色谱法；线性；对照品稀释法；不同进样量法[JP2]在建立药品质量标准时，分析方法需经验证；在药品生产工艺变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订时，质量标准分析方法也需进行验证。
线性是药品质量标准分析方法验证的必需项目之一[1]。
在建立中药含量测定方法时，高效液相色谱法是最常采用的方法。
常用的标准曲线制作方法有两种，一是配置一系列浓度的标准物质，以峰面积对被测物质浓度进行线性拟合[2-8]；另外一种方法是同一对照品溶液，进样不同体积，以峰面积对被测物质进样量（μg）进行线性回归计算[9-15]。
本研究采用绿原酸（1）、连翘酯苷B（2）、毛蕊花糖苷（3）、木犀草苷（4）四个对照品（结构式见图1）按上述两种线性制作方法进行试验，比较二者的异同。
结果显示，4个对照品溶液按照对照品稀释法试验，线性关系均良好；采用不同进样量法试验，仅木犀草苷线性关系良好，绿原酸、连翘酯苷B、毛蕊花糖苷三个化合物随进样量增大，峰面积响应值偏低，线性关系呈类抛物线型。
[JP]1仪器与材料11仪器安捷伦1260型高效液相色谱仪（二极管阵列检测器，二元泵，自动进样器，脱气机）；MSA125P型电子天平（赛多利斯）。
[JP2]12材料绿原酸对照品（批号：[KG-*3/5]110753-201314）、连翘酯苷B （批号：[KG-*3/5]111811-201102）、木犀草苷（批号：[KG-*3/5]111720-201408）购自中国食品药品检定研究院；毛蕊花糖苷（批号：[KG-*3/5]M-011-150318北京中科质检生物技术有限公司）。
金银花中绿原酸的不同提取方法比较
检"#测Jia n yan J ia n ee金银花中绿原酸的不同提取方法比较李泽昱，孟小玲,马秀琴，李欠!(甘肃农业大学农学院，甘肃兰州730070)摘要：绿原酸是金银花的主要有效成分，也是其质量控制指标。
本研究采用煎煮法和乙醇回流提取法分别提取金银花中的绿原酸，运用紫外分光光度法测定其浓度，以绿原酸得率来比较两种提取方法的优劣。
结果表明：乙醇回流提取法较好,绿原酸得率为7.2%，煎煮法则是2.6%。
关键词:金银花;绿原酸;回流提取法；煎煮法中图分类号：R284.2文献标识码:B文章编号：1003-6997(2019)16-0048-03金银花为忍冬科多年生半常绿缠绕性木质藤本植物忍冬(Lonieera japonica Thunb)的干燥花蕾或带初开的花，呈小棒状，多为黄白色，表面有柔毛,气清香。
《中华人民共和国药典［2015版)金银花项下仅有忍冬一种，把红腺忍冬(L.hypoglauca Miq.)、灰毡毛忍冬(L.macranthoides Hand.-Mass.)等单列为山银花⑴。
忍冬在我国分布范围广泛，除新疆、青海、黑龙江等地外，大部分地区均能自然生长。
忍冬生长具有很强的适应性，对气候和土壤选择性不严格，生长适宜温度在20-30F，常生长于山坡灌木丛或疏林中，在海拔1500m的地方也可栽培。
金银花的主产地为河南和山东，是河南的地道药材，又称为“密银花”叫金银花中含有挥发油类3)、黄酮类⑴、有机酸类BI-10V三祜类B11C等多种化学成分。
现代研究证明，金银花具有解热抗炎、抑菌抗病毒、抗氧化、抗过敏、利胆保肝、降血糖、血脂和止血等多种药理作用〔11-哄绿原酸是金银花的主要有效成分之一，具有多种药理作用。
雷玲等问研究表明:绿原酸具有一定的抗内毒素作用。
徐跃成㈤对常见的几种致病菌进行绿原酸抑菌试验，结果表明:绿原酸对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有明显的抑菌作用。
在研究金银花抗氧化作用时，发现绿原酸能清除羟自由基和DPPH 自由基，是起抗氧化作用的主要物质倒。
绿原酸测定实验报告
一、实验目的1. 掌握高效液相色谱法（HPLC）测定绿原酸含量的基本原理和操作方法。
2. 通过实验，验证所建立的方法的准确性和可靠性。
3. 学习绿原酸在不同样品中的含量测定。
二、实验原理绿原酸是一种天然存在的有机化合物，属于咖啡酰奎尼酸衍生物，具有多种生物活性。
本实验采用高效液相色谱法（HPLC）测定绿原酸含量。
HPLC是一种分离分析技术，通过高压泵将样品溶液注入色谱柱，利用不同物质在固定相和流动相之间的分配系数差异，实现样品中各组分的分离，并通过检测器检测，得到各组分的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 绿原酸标准品- 样品（如金银花、苍耳子等）- 甲醇、乙腈等有机溶剂- 水为纯净水2. 实验仪器：- 高效液相色谱仪（HPLC）- 色谱柱（如C18柱）- 检测器（如紫外检测器）- 电子天平- 移液器- 烧杯、容量瓶等四、实验方法1. 标准溶液的配制：- 称取一定量的绿原酸标准品，用甲醇溶解并定容至一定体积，配制成标准溶液。
2. 样品溶液的制备：- 称取一定量的样品，用甲醇溶解并定容至一定体积，得到样品溶液。
3. HPLC分析：- 色谱柱：C18柱- 流动相：乙腈-水（体积比：90:10）- 检测波长：327nm- 柱温：30℃- 流速：1.0mL/min- 进样量：10μL4. 数据处理：- 根据标准曲线计算样品中绿原酸的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的绘制：- 以绿原酸标准品的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品中绿原酸含量的测定：- 根据标准曲线，计算样品中绿原酸的含量。
3. 结果分析：- 通过对比样品与标准品的峰面积，验证所建立的方法的准确性和可靠性。
六、实验结论1. 本实验采用高效液相色谱法测定绿原酸含量，方法简便、准确、可靠。
2. 通过实验，成功测定了金银花、苍耳子等样品中绿原酸的含量。
3. 本实验结果为绿原酸在中药领域的应用提供了参考依据。
七、实验注意事项1. 实验过程中，应注意样品的保存和预处理，避免绿原酸的降解。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
绿原酸标准曲线的绘制
一、实验目的
1.1 熟练掌握用高效液相色谱仪测绿原酸含量的方法，绘制标准曲线；
1.2 熟练掌握用紫外分光光度仪测绿原酸含量的方法，绘制标准曲线；
二、原理
2.1 绿原酸简介
绿原酸(chlorogenic acid)是由咖啡酸(caffeic acid)与奎尼酸(鸡纳酸,quinic acid,即1-羟基六氢没食子酸)组成的缩酚酸,异名咖啡鞣酸,化学名3-O-咖啡酰奎尼酸(3-O-caf-feoylquinic acid),分子式:C16H18O9,分子量:345.30，是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物。
2.2 高效液相色谱仪的工作原理：
高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。
储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。
三、试剂与仪器
3.1 材料与试剂：绿原酸标准品；乙腈为色谱纯试剂，磷酸、甲醇、乙醇等试剂均为分析纯；
3.2 主要仪器：高效液相色谱仪，分析天平，25ml、50ml棕色容量瓶，滴定管，10ml,25ml,50ml,100ml容量瓶各7个，1ml、2ml、5ml的移液管，紫外分光光度仪，比色皿；擦镜纸；注射器。
四、实验步骤
4.1 用紫外分光光度法所测的绿原酸标准曲线
紫外分光光度法：精密称取绿原酸标准品0.0055g，用80%的乙醇溶解，转移到100ml容量瓶中，加80%乙醇到刻度，混匀，制得标准母液。
精密吸取1.0、
2.0、
3.0、
4.0、
5.0、
6.0、
7.0、
8.0、
9.0、10.0ml于25ml容量瓶中，加80%乙醇到刻度，混匀，此为标准系列溶液。
将标准溶液在200～400nm波长范围内扫描，测定绿原酸的最大吸收波长，在最大波长处测定吸光度。
以绿原酸标准品的浓度为横坐标，以其吸光度为纵坐标绘制标准曲线，求出相应的回归方程。
4.2 用高效液相色谱仪所测的绿原酸标准曲线
高效液相色谱法(本方法参照《中国药典( 2005 版) 》) 。
色谱柱: C18ODS(250 mm ×4. 6 mm, 5μm) ;流动相:乙腈20. 4%磷酸溶液(13z 87) ;检测波长为327 nm;柱温: 20℃;进样量: 10μL。
标准曲线制备:准确称取绿原酸对照品20 mg,置50 mL棕色容量瓶中,加60%甲醇适量,超声溶解并稀释至刻度,摇匀,分别准确移取1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL、7 mL,置25 mL棕色容量瓶中,用60%甲醇溶解并稀释至刻度,得一系列绿原酸标准溶液,按上述色谱条件,进样10 μL, 测定峰面积, 以峰面积积分值(Y)为纵坐标、绿原酸含量(X)为横坐标绘制标准工作曲线,计算并得回归方程。
五．结果与讨论
5.1用紫外分光光度法所测的绿原酸标准曲线
5.1.1绿原酸标准品的波长扫描
绿原酸标准品的波长扫描如下图所示，可知绿原酸的最大波长为328nm。
5.1.2由定量测量所得的绿原酸的浓度和吸光度的关系
如下表所示：
由此可绘制绿原酸标准曲线，如下图所示：
以杜仲绿原酸标准溶液的浓度和吸光度进行线性回归，得回归方程y=0.0461x+0.0089,R2=0.9987。
表明绿原酸含量在4.4-22ug/ml范围内与吸光度线性关系良好。
4.2 用高效液相色谱仪所测的绿原酸标准曲线
4.2.1 测量所得的绿原酸的浓度和锋面积的关系
如下表2所示：
4.2.2 绿原酸标准品的色谱图
0.0
2.5 5.07.510.012.515.017.5min
050
100
150
200mV
检测器 A:327nm
2.566
7.240
8.864
11.08
图3 绿原酸标准品的色谱图
4.2.3绘制绿原酸标准曲线 如下图4所示：
图4 绿原酸标准曲线
以杜仲绿原酸标准溶液的浓度和峰面积进行线性回归，得回归方程
y=31742x-337890,R2=0.9986。
表明绿原酸含量在16-112ug/ml范围内与峰面积线性关系良好。
六. 总结
通过紫外分光光度法可知：
(1) 绿原酸的最大波长为328nm;
(2) 其以绿原酸标准品的浓度为横坐标，以其吸光度为纵坐标绘制标准曲线，求出相应的回归方程为：y=0.0461x+0.0089 R2=0.9987
通过高效液相色谱法可知：
以峰面积积分值(Y)为纵坐标、绿原酸含量(X)为横坐标绘制标准工作曲线,计算并得的回归方程为：y=28698x-183879 R2=0.9985。