AB 5600 Analyst 软件应用培训教程

Analyst 软件应用培训教程

关于本教程的说明：

本教程为AB Sciex公司为在中国使用的客户培训的辅助材料。

本教程仅提供给经过AB Sciex公司培训合格的操作人员使用。

本教程内容仅限于Analyst 软件基本操作和应用部分。

本教程提供的分析方法仅对用户起参考作用。

本教程解释权在AB Sciex公司。

目录

1、定量分析简明流程

2、成功定量分析应注意的问题

3、定性分析原则与方法

4、LC-MS 实验经验与仪器维护常识

5、Analyst 软件操作简介：

Calculator 功能与使用

Library 功能与使用

部分Script 功能与使用

其他

6、Analyst 软件QTRAP 功能基本操作简介： QTRAP 扫描速度的校正

QTRAP 系统的扫描方式

QTRAP 系统IDA 指南

7、部分化合物液质分析参考方法和信息

8、压力单位转换表

LC-MS/MS 定量分析简明教程

首先确认仪器已经校准，气体、电压工作正常

一．溶液配制

分别将待分析化合物的标准物质配制成1～10 ppm (1～10ug/ml) 的溶液，用于注射泵连续进样，以优化质谱参数。

二．Q1 Scan ，确定母离子

a．选择或建立Project

建立一个新项目 (Project)： 点击Tools→Project→Creat Project，出现下图对话框，键入项目名称，点击“Add All”添加项目功能，点击OK，完成。

b. 硬件配制：激活MS 主机，如果是API2000、3200，硬件配置文件中的质谱主机中应选择Integrated Syringe Pump 。

c. 进入MS 的Manual Tuning 界面，并设置注射泵流速5～10ul/min 。

d．选择质谱扫描方式：Q1 Scan，设置扫描范围(应包含待分析的化合物)；根据化合物性质，选择扫描极性

e．手动调节DP、GS1 等参数，使喷雾平稳、待分析化合物信号灵敏度较高 f．MCA on ，点击Acquire，采集并存储20～50 张加和图谱(根据灵敏度)，并保存方法，例如：Q1.dam

g．在质谱图区域，点击右键－“Open File”打开图谱，局部放大，确定母离子的质荷比，准确到0.1amu 。，如下图，母离子m/z 应为609.3。

三．Product Ion Scan ，确定子离子

以第一步测得值为母离子，做Product Ion Scan（MS2），手动调节CE 等参数，使母、子离子都具有一定强度，一般以母离子的强度占图谱中基峰强度的1/3 到1/4 为宜。

MCA on ，点击Acquire，采集并存储20～50 张加和图谱，并保存方法，例如：609-MS2.dam。

在质谱图区域，点击右键“Open File”打开图谱，选择2 个最高的子离子，如上图中，选择195、397，局部放大，确定子离子的质荷比，准确到0.1amu， 则上面两个子离子为195.2、397.3。

四．MRM，优化质谱中与化合物相关的参数

以前两步选定的母离子、子离子，组成离子对，例如609.3/195.2，609.3/397.3 等，做MRM Scan，每个离子对的分析时间100 或200ms。

通过Edit Ramp ，分别优化Compound 项下的各参数，如DP、EP、CE、CXP 等：点击Edit Ramp ，选择要优化的参数→点击OK，出现该参数的优化窗口，可以根据需要改变该参数的优化范围(Start、Stop)和优化步长(Step)。不同参数需逐一优化。

然后保存方法，例如609-MRM.dam。

同样步骤，优化需要分析的另外化合物，分别保存方法。

五、将MRM 方法转化为液质联用方法

关掉所有质谱分析界面，将现有质谱体系灭活，激活液相色谱、质谱设备。

单击Acquire 中Build Acquire Method ，打开上面保存过的MRM 方法，右键 显示方法左边导引条中第一行Acquire Method，点击Add/Remove Device

Method 添加设备：色谱泵、自动进样器

选中方法左边导引条中第一行Acquire Method 参数页，设置色谱

同步。

设置色谱参数，分析时间一般为0.8～1min ，流动相组成和流量与实际样品分析时相同；修改质谱分析时间 (Duration ，一般设置0.8～1min) ，与色谱参数一致；设置GS1、GS2、TEM 初始值为40、40、400 左右，保存方法，例如：LC-MRM.dam。

六、源参数优化

将上面用过的样品溶液稀释100～1000 倍。

在Tune 项下，双击 Quantitative Optimization ，选择FIA 分析，根据向导进行自动优化。

注意：需要优化的各可选值之间用“;”分隔。

七．色谱条件优化

接好色谱柱，关掉Tune ，在Acquire 栏下调出上一步优化好的方法，根据色谱柱规格和待分析体系的复杂程度设置液相色谱分离和质谱分析时间，或编辑洗脱梯度，保存方法。

用新保存的方法平衡色谱柱，平衡时间为5～10 倍柱体积。色谱柱充分平衡后，设置Batch 进样，观察色谱峰形及保留时间是否合适，根据具体情况，调节流动相，优化色谱条件。

用空白提取液配制同样浓度标样，按上面方法进样，观察色谱峰形及保留时间是否合适，峰高有无变化，有无离子抑制现象，否则调节流动相，进一步优化色谱条件。

注意：等度洗脱，样品之间不需要再平衡色谱柱，若为梯度洗脱，则进下一针样品前色谱柱一定要充分平衡。

八．工作曲线制备

用空白提取液配制一系列不同浓度化合物的混合标样，按上一步方法，设置Batch 进样，例如，分别稀释浓度为0.1 µg/ml、0.2 µg/ml、0.4 µg/ml、0.8 µg/ml 和1.6 µg/ml 的混合标准溶液等。根据项目分析要求，有时也可只做单点校正，而不做多点线性。

将采集的数据，根据峰面积，做标准曲线。

根据检测项目要求，进一步考证方法的最低检测限、重现性、样品提取回收率等性能参数。