【精品】植物组织培养快繁技术
植物组织培养快速繁殖技术应用
（4）移栽：在苗床（按照5 cm株距、8 cm行距）或钵中 用竹签打孔，将洗好的小苗插于孔中并将孔覆严，移栽完 毕用喷壶浇一遍水，以保证根系与基质充分接触。
5.苗期管理
（1）保持小苗的水分供需平衡：
在移植后5～7 d内，应给予较高的空气湿度条件，使叶面的 水分蒸发减少，尽量接近培养瓶的条件，让小苗始终保持挺拔的状 态。保持小苗水分供需平衡首先培养基质要浇透水，然后搭设小拱 棚，以减少水分的蒸发，并且初期要常喷雾处理，保持拱棚薄膜上 有水珠出现。
2.试管苗的特点
(1)生长细弱，角质层不发达； (2)叶片气孔数少，活性差； (3)叶绿体光合性能差； (4)根系不发达，吸收功能弱； (5)对逆境的适应性和抵抗能力差。
3.试管苗的驯化
驯化目的：提高试管苗对自然条件的适应性，促其健壮， 最终提高移栽成活率。 驯化原则：从温度、光照、湿度及有无杂菌等环境因素考 虑。驯化开始的数天内，创造与培养环境条件相似的条件； 后期则创造与预计栽培条件相似的条件，逐步适应。 驯化方法：即炼苗，将试管苗从培养间转移至驯化温室， 不开口自然光下放置7～10d，然后打开封口材料继续放置 1～2d。
（２）培养基中去掉细胞分裂素，加入适量的生长素。 （CTK/IAA比值低时有利于生根）
（３）生根培养基的蔗糖用量可适当减少，用1.5%～ 2%的浓度，以减少试管苗对异养条件的依赖。
(4）提高光照强度，促进光合作用。
（七）试管苗驯化与移栽
1.试管苗生存环境与自然环境的差异 2.试管苗的特点 3.试管苗的驯化 4.试管苗的移栽 5床准备：草本植物移栽于苗床（宽度1m，长度根 据温室跨度而定）中，直接在苗床中铺上栽培基质（如蛭 石、珍珠岩、草炭等），浇透水即可。木本植物移栽于塑 料营养钵中，将营养钵排于苗床中，钵中装填基质至距钵 上缘1 cm处，最后也浇透水。
植物组织培养中的快繁与脱毒技术及其应用
植物组织培养是一种重要的生物技术，它能够实现植物的快速繁殖、脱毒和基因转化。
在植物学研究和植物育种领域，植物组织培养技术的应用非常广泛。
本文将深入探讨植物组织培养中的快繁与脱毒技术及其应用，以帮助读者更深入地理解这一重要领域。
1. 快繁技术在植物组织培养中，快繁技术是指利用植物体的一小部分组织或细胞，通过体外条件培养，实现植物的快速繁殖。
这种技术可以大大提高繁殖速度，缩短繁殖周期，是进行新种质创制、遗传改良和疫病防治的重要手段。
快繁技术的主要方法包括离体培养、愈伤组织培养和微繁殖等。
1.1 离体培养离体培养是将植物体表层（如幼叶、幼茎）或内部组织（如胚乳、子叶）分离出来，移入含有适当营养盐和植物生长调节物的培养基中培养。
通过控制培养条件和添加合适的植物生长激素，可以诱导组织分化和再生形成新植株。
1.2 愈伤组织培养愈伤组织是植物在受到外界刺激或损伤后，经过细胞分裂和组织再生形成的一种未分化的组织。
愈伤组织培养是利用这种特殊组织进行快速繁殖的一种方法，通过控制培养条件和添加植物生长调节物，可以诱导愈伤组织再生形成新植株。
1.3 微繁殖微繁殖是利用植物的微小芽或胚珠进行快速繁殖的方法。
通过培养条件的控制和植物激素的添加，可以诱导微小芽或胚珠快速生长并形成新植株。
2. 脱毒技术在植物组织培养中，由于植物体内可能携带病毒、细菌等病原体，因此会影响到组织培养的效果。
脱毒技术是为了解决这一问题而出现的一种重要技术。
脱毒技术能够有效地清除植物体内的病原体，提高组织培养的成功率和繁殖效率。
2.1 生物脱毒生物脱毒是利用生物制剂对植物体内的病原体进行清除的方法。
通过培养环境中添加含有特定菌株或真菌的生物剂，可以促进植物体内病原体的清除和组织的健康再生。
2.2 生理脱毒生理脱毒是利用植物自身的生理代谢特性进行脱毒的方法。
通过调节培养条件和添加特定的营养物质，可以激活植物的生理代谢活性，加速病原体的清除和组织的再生。
植物组织培养技术3-任务三 组培快繁技术
具体部位有哪些？
茎尖：对大多数植物来讲，茎尖是较好 的部位，由于其形态已经基本建成， 生长速度快，遗传性稳定，也是获得 无病毒苗的重要途径，但茎尖易受到 材料来源的限制，而采用茎段（一般 木本植物、较大的草本植物）可解决 培养材料的不足。
叶片：由于叶片的来源最有保证，因而 许多植物的组织培养以叶片为起始培 养物，如，玫瑰、海棠、矮牵牛和豆 瓣绿等许多植物。Βιβλιοθήκη 已离体培养植株 （试管苗）
❖ 多数情况下，应尽量使用温室或人工气候室控制 培养的植物材料作为外植体来源，减少培养过程 中的微生物感染概率。同时，生长在控制条件下 的植物可以保持培养料间的一致性，提高实验的 可重复性，也便于培养技术的规范。
❖ 某些多年生植物或特殊材料，必须取自自然生长 的植物，就需要尽可能避免使用那些生长过于潮 湿和不洁净环境中的植物。对于培养过程中可能 出现内生菌污染的材料，应尽量取生长旺盛期的 生长点部位作为起始培养的材料。
1、初代培养
初代培养时，常用诱导或分化培养基，即培养基中含有较多的细胞分 裂素和少量的生长素。初代培养建立的无性繁殖系包括茎梢、芽丛、 胚状体和原球茎等。根据初代培养时发育的方向可分为：
顶芽和腋芽的发育 这种繁殖方式不经过发生愈伤组织而再生。适 宜这种再生繁殖的植物，在采样时，只能采用顶芽、侧芽或带有芽的 茎切段，其他如种子萌发后取枝条也可以。茎尖培养可看作是这方面 较为特殊的一种方式。 不定芽的发育 在培养中由外植体产生不定芽，通常首先要经脱分 化过程，形成愈伤组织的细胞，然后经再分化。多数情况下它先形成 芽，后形成根。另一种方式是从器官中直接产生不定芽，如矮牵牛、 悬钩子等。 体细胞胚状体的发生与发育 它是由体细胞发生的。通过球形、心 形、鱼雷形和子叶形的胚胎发育时期，最终发育成小苗 。
《植物组织培养与快繁技术》PPT课件第1 - 质量工程
２．奠基阶段（３０年代中至５０年代末）：这 一阶段植物组织培养得到了迅速的发展，广泛运 用于生物学和农业生产。
经典的工作有：
• 1934年美国的植物生理学家White培养番茄的根 建立了活跃的无性系并能继代培养，在以后的 28 年间转接了 1600 代仍能生长。 1939 年他们首 先发现了B族维生素对植物生长的意义 • 1955 年， Miller 等首次从鲱鱼精子中分离得到 细胞分裂素，定名为激动素（Kinetin）
• 外植体： 用于组织培养的离体材料称为外植体 （explant）。 • 初代培养：外植体的第一次培养 • 继代培养：初代培养后的培养体转移到 新鲜的培养基中，并反复的多次移植、 培养，统称为继代培养。
• 愈伤组织：原指植物在受伤以后于伤
口表面长出来的一团无特定结构和功
能的细胞团，组织培养中则指在人工
二、植物组织培养的基本技术
• 洗涤技术：玻璃器皿洗涤、塑料器皿洗涤 • 灭菌技术（培养基、培养用具灭菌）：湿 热灭菌、干热灭菌、过滤灭菌、化学灭菌、 辐射灭菌等。
• 无菌操作技术：无菌室的消毒、材料的消 毒、接种等
三、 植物组织培养的步骤：
组织培养流程图
第三章 植物离体快速无性繁殖
和无病毒植株的培养
一、植物离体快速无性繁殖
（一）快速繁殖的概念
植物的快速繁殖又称微繁，指
将来自优良植株的茎尖，腋芽，叶片， 鳞片等器官、组织和细胞进行离体培 养，在短期内获得大量的遗传性一致 的个体的方法。
2. 快速繁殖的优越性：
（1）快速繁殖、短期满足大量需求 • 组织培养的最大优点在于短期内能用较少的材料 繁殖大量优质种苗，具有用材少、周期短、速度 快等特点。由于可人为控制培养条件，根据不同 植物不同离体部位的不同要求而提供不同的培养 条件，因此生长快，往往10—40天即为一生长周 期。所以，虽然植物组织培养需一定的设备及能 源消耗，但由于植物材料能按几何级数大量繁殖 生产，故还是成本低廉，利于工厂化生产，能及 时提供规格整齐一致的优质、无病菌的植物种苗。
植物快繁技术
植物快繁技术绪论1、植物组织培养：是指在无菌和人工控制的环境条件下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、组织、细胞及原生质体进行培养，使其再生细胞或完整植株的技术。
又称为植物离体培养。
2、无菌：是指使培养皿、器械、培养基和培养材料等处于无真菌、细菌、病毒等微生物的状态，以保证培养材料在培养器皿中正常生长发育。
3、外植体：植物组织培养中，使用的各种器官、组织和细胞统称为外植体。
4、愈伤组织：是指外植体因受伤或在离体培养时，其未分化的细胞和已分化的细胞进行活跃的分裂增殖而形成的一种无特定结构和功能的组织。
5、组织培养的特点（1）整个过程无菌（2）多数利用成分完全确定的人工培养基，植物材料处于异养（3）培养材料可以是器官、组织、细胞，处于离体状态，在不同水平表现细胞全能性（4）可形成克隆，或达到其他目的（5）在封闭容器中进行（6）环境温度、光照都是人为设定6、组织培养的研究类型（1）组织培养（2）器官培养（3）胚胎培养（4）细胞培养（5）原生质体培养7、植物组织培养的应用n 植物离体繁殖n 无病毒苗木培育n 培育新品种或创制新物种n 次生代谢物生产n 植物种质资源的离体保存n 人工种子8、植物组织培养的形成与发展▪1902年，Haberlandt发表了植物组织培养的第一篇论文，提出了植物细胞全能性的观点。
▪1934年，White首次建立了第一个活跃生长并能继代增殖的无性繁殖系。
▪1952年，Morel获得第一株植物脱毒苗▪1978年，Melchers获得了第一个属间体细胞杂种—“Pomato”。
第一章实验室及基本操作1、常用的灭菌方法n 高压蒸汽灭菌n 干热灭菌n 化学药剂灭菌n 紫外灯灭菌n 过滤除菌2、高压蒸汽灭菌法▪使用高压锅前添加足够水▪锅内气压太高会引起部分有机物的分解▪灭菌后气压表归零之前不要打开锅盖▪橡胶等有机物会因高温高压而变性▪不要堵塞排气孔，否则会引起危险3、无菌操作▪实验之前30min将超净工作台的紫外灯打开，进行灭菌。
(完整)植物组培高效快繁技术ppt精品PPT资料精品PPT资料
原理和方法
传统扦插：
由于生产所需条件简单， 不能对环境做较大改变，受环 境条件限制大，具有明显的季 节性，不能进行周年繁苗。
组培：
密封的试管或三角瓶作为培 养场所, 这是组培存在弊端的 根源所在, 也是形成严格消毒 杀菌等繁琐技术体系的必要所 在。透气差,再加上不透气的琼 脂培养基, 使根系缺氧造成根 量少而弱; 这些局限因子的存 在导致玻璃化苗的产生, 炼苗 成活率低, 移栽困难与感染病 菌造成死苗的现象。
细胞工程
Cell engineering
植物非试管高效快繁技术
Technique of Efficient & Rapid Non-test tube Plant Cloning
目录
技术简介
植物非试管高效 快繁技术的特点
植物非试管快速 繁殖的流程
植物非试管高效快 繁技术产业化市场 前景
一、技术简介
6、多数植物利用植物非试管高效快繁技术培养到第2代 以后，4~11天即可获得完整再生植株，再生植株率达 90%以上，真正实现了高效快繁。
有些科属植物生根繁殖情况特殊，如鸡毛松、云杉、红豆杉、油 樟、岩桂、中国兰草、牡丹等生根持续时间较长。但仍然比试管 快繁和常育苗要快，综合快繁效率要高。
7、技术步骤少，所用时间短，极大地节约了综合生产成 本和提高了人员的生产效率。从微型材料开始繁殖，可 直接培育出在自然条件下生长的植株，不需任何移栽， 对多数植物仅需要15－60天的培育即可用于生产栽培， 而且植株均表现开花结果早，丰产性好。
背景
• 近40年来，真正面对大多数生产上急需、量大、价 格低廉的无性繁殖(vegetative propagation)种苗， 有些科属植物生根繁殖情况特殊，如鸡毛松、云杉、红豆杉、油樟、岩桂、中国兰草、牡丹等生根持续时间较长。
植物无糖组培快繁技术
探索无糖组培快繁技术在更多植物种类和应用领域中的潜 力，如濒危植物保护、种质资源保存、药用植物繁育等， 促进其在实践中的广泛应用。
THANKS
感谢观看
快速扩繁
无糖组培技术可以在短时 间内扩繁出大量的优质果 树和林木苗木，提高造林 和栽培的效率。
农作物脱毒苗的繁育与应用
脱毒苗生产
利用无糖组培技术，可以生产出 无病毒、无病原菌的农作物脱毒 苗，提高农作物的产量和品质。
病虫害防治
农作物脱毒苗具有较强的抗病抗 虫能力，可以有效减少农药的使 用量和频率，降低对环境的负面
技术原理与基本流程
基本流程 1. 选择适宜的外植体（如种子、幼苗、叶片等），进行消毒处理。
2. 将外植体接种到无糖培养基上，添加适量的激素和营养物质。
技术原理与基本流程
3. 在恒温、光照充足的培养室 内进行培养，定期观察并记录生
长情况。
4. 当植株生长至一定大小时， 进行炼苗处理，提高其适应外部
不受范围
技术优点与应用范围
农业生产
用于繁殖优良作物品种，提高农业生产效率 。
医药产业
用于繁殖药用植物，提取药物成分。
园林绿化
繁殖花卉、树木等观赏植物，丰富城市绿化 。
科研实验
用于植物生理、生化、遗传等方面的研究。
技术原理与基本流程
• 技术原理：植物无糖组培快繁技术基于植物细胞的全能性，即 植物细胞具有发育成完整植株的潜能。通过提供适宜的培养条 件和激素配比，可以诱导植物细胞或组织进行分裂、生长和分 化，最终形成完整的植株。
保持品种特性
无糖组培技术可以确保观赏植物幼 苗保持原品种的优良特性，提高观 赏价值。
果树与林木的优质苗木繁育
植物组织培养与快繁技术课件
（2）成熟胚培养：成熟胚培养是指将子叶期以后的胚进行离体培养。成熟胚已储备了能满足自身萌发和生长的养分，培养技术较为容易。
①材料的消毒与接种
健壮优良的个体自交种或杂交种子，常规消毒灭菌，剥离胚。
② 培养基与培养条件
培养基 大量元素和微量的无机盐为基本成分
谷氨酰胺作为氮源，可以促进胚生长 植物天然浸提物（YE）促进胚生长 硫氨素促进胚根的伸长 生长素低浓度促进胚的发育（胚根） 赤霉素促进有后熟作用的种子萌发
生长调节物质的影响 传粉子房：加入生长调节剂通常可以促进子房生长。 未传粉子房：必须加入生长调节剂。不同植物所要求的激素种类和配比各不相同。 单倍体的来源和发育途径 单倍体植株的来源和发育途径在不同的植株中各有不同。 大孢子和胚囊中的卵细胞、助细胞和反足细胞通过形成胚状体或愈伤组织两种途径产生单倍体植株。
附加成分
培养条件：光照：12h／d光照 温度：通常25－30℃
影响胚培养的因素
（1）胚龄 胚龄越大，成功率越高；胚龄越小，成功率越低。小于0.5mm的幼胚很难进行培养。心形胚时期以前，属异养期。 幼胚的培养的初期，处于异养阶段，需要提供完全的培养基。除通常需要的大量和微量无机盐外，还需要添加维生素、氨基酸和植物激素等，胚龄越小，培养基的成分就越复杂。 随着胚龄的增加,离体胚对外源营养的要求渐趋简单，自养期的胚能在基本的无机盐和蔗糖培养基上生长。
（2）培养基
无机盐 幼胚培养的培养基主要有MS(1962)、B5、Nitsch(1954)、Rijven(1952)、White(1963)、Rangaswang(1961)、Monnier(1978)等。 成熟胚培养Tukey(1934)、Cox(1943)、 White(1963)等。 碳水化合物 碳源，调节培养基渗透压，防止幼胚早熟萌发。 胚龄越小，要求的糖浓度越高。 成熟胚：2％蔗糖 幼胚培养：一般为6％－12％，可高到18％。在培养过程中，随培养时间增加，培养基的渗透压必须逐步降低。
植物组织培养技术第七章植物脱毒快繁技术
鉴定方法：
抗原的制备 →→抗血清的采收，分离→→ 把稀释的抗血清与未知的病毒植物的汁液在小 试管内混合→→根据沉淀反应来鉴定病毒种类。
植物无病毒苗的培育
3. 特点：
特异性高（这种抗血清是高度专一 性的试剂），测定速度快，一般几小时甚 至几分钟就可以完成。所以抗血清法成为 植物病毒鉴定中最有用的方法之一。
葡萄扇叶病毒
苹果花叶病毒
（二）茎尖培养脱毒
1、茎尖培养脱毒原理 2、培养基 3、茎尖培养方法 4、影响微茎尖培养的因素
①外植体大小 ②培养条件 ③外植体的生理状态
植物的去病毒技术，实质上就是采取不含 病毒颗粒或病毒颗粒含量甚少的0.1～0.5mm 带1～2个叶原基的茎尖作为外植体，进行微繁 殖，使其培养成完整的无病毒小植株的技术。
1、茎尖培养脱毒原理
病毒在植物体内分布不均匀，其数量随植株 部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域，病毒感染 的程度越低，生长点即分生组织（约0.1-1mm） 几乎不含或含病毒很少。
分生组织不带病毒，可能有4方面的原因：
1、植物体病毒的移动主要靠2条途径：一是通过维管 系统，而分生组织中尚未形成维管系统；二是通过胞间连 丝，但这条途径病毒移动速度非常慢，赶不上茎尖和根尖 细胞不断分裂和活跃的生长速度。
活，并加快分裂和生长。
A
B
C
低 温 生长区
热处理区 高 温
寄主无损伤
病原微生物被消除 寄主被杀死
2、热处理脱毒方法
(1)温汤浸渍处理 (2)热空气处理
（1）. 温汤浸渍处理 适用：休眠器官、剪下的接穗或种植的
材料
方法：50℃左右的温水中浸渍10min
至数小时
特点：方法简便易行，但易使材料受伤。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
植物组织培养快繁技术摘要：本文简要介绍植物组织培养的基本原理和方法，综述植物脱除病毒的热处理、茎尖培养和抗病毒药剂3种方法的原理、发展史和技术方法,并介绍了几种常用的病毒检测方法。
同时还对植物组织培养脱毒快繁技术的应用前景作了预测分析.关键词：茎尖培养；组织培养;快繁脱毒技术；病毒检测；应用前景正文：1植物组织培养研究概况1。
1研究简史自从1943年怀特(White）提出植物细胞“全能性”（Totipotency）学说及诸多后学者（Steward，1958，Guha和Marteshwari，1964）相继证实后，引发植物组织和细胞培养快繁技术的快速发展.我国的专家学者在20世纪70年代后也在此领域做了大量的研究和开发工作,创造了很多新方法、新技术,提出不少新成果,开拓了植物组织培养快繁技术的新局面.目前采用组织培养脱病毒快繁及离体快繁生产株苗的技术已发展相当成熟［2]。
脱毒株苗具有无杂菌、适应能力较强、繁育较快、质量优、抗性好、分蘖性强、繁殖系数高、大批量生产、周年供应、便于运输等优点，已得到有关专家的鉴定及高度评价和种植试验区、种植产区果农的认可。
例如脱毒马铃薯、脱毒红薯、脱毒生姜、脱毒大蒜、脱毒草莓、脱毒苗木、脱毒花卉等，已成为现代农民致富的新宠.1。
2植物组织培养和脱毒快繁的定义植物组织培养(Planttissueculture）是指在无菌的条件下,将离体的植物（根、茎、叶、花、果实、种子等）、组织（形成层、花药组织、胚乳、皮层等)、细胞（体细胞和生殖细胞）以及原生质体,培养在人工配制的培养基上,给予适当的培养条件，使其长成完整的植株。
由于培养物是脱离植物母体，在玻璃瓶中进行培养，所以也叫做离体培养。
其完整过程是：脱分化再分化生长外植体愈伤组织生长点或根茎叶完整植株发生胚状体在有些情况下,再分化也可不经愈伤组织阶段，而直接发生于脱分化的细胞。
植物组织培养脱毒快繁是人工在无菌条件下利用植物体的一部分,在人工控制的营养和环境条件下繁殖植物,脱除病毒得到无毒苗株，继而在大田快速繁殖的技术。
脱毒及离体快繁,这是目前植物组织培养应用最多、最广泛和是有效的一个方面。
主要是进行茎尖培养脱除病毒。
对于脱毒苗、新育成、新引进、稀缺良种、优良单株、濒危植物和基因工程植株等可通过离体快速繁殖，同时可不受地区和气候的影响，比传统的繁殖方法快数万倍.植物组织培养已发展成为一门富有生命力的学科.追究植物组织培养脱毒快繁技术的发展简史，在11世纪就出现的热处理脱毒法,最早解决一些作物的病毒病害问题。
20世纪50年代发展的植物组织培养技术为脱毒提供了一条有效途径。
现在植物的脱毒技术有多种，其中应用最广泛的有3种:热处理法、茎尖培养脱毒法、抗病毒药剂法，将不同的方法相结合起来应用效果更好，它们的脱毒原理各不相同.2脱毒技术及其原理2.1热处理法2。
1.1概述热处理法是利用病毒和寄主植物对高温的忍耐性的差异，使植物的生长速度超过病毒的扩散速度,得到一小部分不含病毒的植物分生组织，然后进行无毒个体培育.热处理法中,最主要的影响因素是温度和时间。
热处理可通过热水浸泡或湿热空气进行。
热水浸泡对休眠芽效果较好，湿热空气对活跃生长的茎尖效果较好，既能消除病毒又能使寄主植物有较高的存活机会。
热空气处理比较容易进行，把旺盛生长的植物移入到1个热疗室中，在35~40℃下处理一段时间即可,处理时间的长短，可由几分钟到数月不等[4].热处理的方法有恒温处理和变温处理,处理的材料可以是植株，也可以是接穗。
2.1。
2原理热处理脱毒是根据病毒与寄生细胞对高温的忍耐程度不同，选择适当的温度和处理时间,植物组织中的很多病毒被部分地或完全地钝化而可控制其的活动,但很少伤害甚至不伤害寄主组织,从而让植物细胞加快生长,使生长点附近不带病毒，从而达到脱毒的目的。
2.1。
3简史用热处理脱除马铃薯卷叶病毒（PLRV）是世界上脱除已知病毒最早的例子。
早在1889年，印度尼西亚爪哇人就把繁殖用的甘蔗切断放在50℃左右的热水中浸泡30min来防止枯萎病（现已知是病毒病)的发生。
现在世界许多国家在种植前仍使用这种方法处理甘蔗。
但是后来人们发现热水对植物的伤害大，Bake(1972）研究表明在热水处理中，由于植物组织经过淋洗，在水中长期浸泡常常会窒息死亡，并且这种处理也会打破或延长植物的休眠期.所以现在更常用的方法是将病毒感染的植物用35～38℃热空气处理14～28d或者更长时间进行脱毒[4］。
此法尤其适合处理生理干旱的材料和处于休眠状态的果树。
热处理脱毒法已应用多年，被世界多个国家利用.该项技术要求的设备条件比较简单，脱毒操作也比较容易.主要缺点是脱毒时间长，脱毒不完全，例如TMV这类杆状病毒就不能用这种方法脱除,因而该方法有一定的局限性。
2.2茎尖培养脱毒法2.2.1概述茎尖培养脱毒就是采取茎尖分生组织离体培养的方法获取无病毒试管苗，其方法是在解剖镜下，用锋利的解剖刀进行迅速准确地茎尖剥离，因为茎尖分生组织基本不带病毒，利用植物茎尖分生组织进行离体培养,再结合病毒检测,就可以获得无病毒的植株.茎尖培养中最主要的影响因素就是切取茎尖的大小，一般要求茎尖长度小于1mm。
技术上通常切取茎尖越小，脱毒效果越好，但是茎尖培养成活率变低。
曹为玉等研究发现葡萄茎尖长度与存活率成正相关，与脱毒率成反相关。
当切取茎尖长度为0.2~0。
3mm时，存活率为21％～38％，脱毒率为91.4％～97%；当切取0。
5mm以上时，存活率为75%～83％，脱毒率仅为70.6％～76.5%［8］。
茎尖培养脱毒法脱毒率高，脱毒速度快,能在较短的时间内得到较多的原种繁殖材料，但这种方法存在的缺点是植物的存活率低。
为了克服这一缺点，现在经常是将茎尖培养与热处理相结合来使用。
茎尖培养与热处理相结合之所以能够提高脱毒效果,是由于热处理可使植物生长本身所具有的顶端免疫区得以扩大，有利于切取较大的茎尖（在1mm左右），从而能够提高培养或嫁接的成活率。
如大樱桃置于45℃的恒温培养室内，培养35d,再切取0.2～0。
4mm的茎尖培养，平均脱毒率为98％。
2.2。
2原理茎尖培养脱毒的原理是植物体内病毒靠维管束系统移动,分生组织中没有维管束存在，病毒只靠胞间连丝移动，速度很慢,难以追上生长活跃的分生组织，所以旺盛生长的根尖、茎尖一般都无病毒或很少有病毒分布。
2.2.3简史White于1943年首先发现在感染烟草花叶病毒的烟草生长点附近病毒的浓度很低,甚至没有病毒.这一发现为茎尖培养脱除病毒提供了理论依据。
怀特(White，1934）在体外培养感染了TMV病毒的马铃薯根,并用枯斑寄主法测定了根不同部位的病毒含量，发现根尖部位的病毒含量比其他部位少,甚至不存在病毒。
Morel等1952年首先从感染了花叶病毒和斑萎病毒的大丽花植株上切取茎尖，通过组织培养获得了无病毒的大丽花，证明了前人假设的正确性.此后，人们采用茎尖培养技术相继获得了多种植物的无病毒植株。
现在茎尖培养脱毒法已经成为植物无毒苗生产中应用最广泛的一种方法。
据研究,植物体内某一部分组织器官不带病毒的原因是：分生组织的细胞生长速度快，病毒在植物体内繁殖的速度相对较慢，而且病毒的传播是靠筛管组织进行转移或通过细胞间连丝传递给其他细胞，因此病毒的传递扩散也受到一定限制，这样便造成植物体的部分组织细胞没有病毒。
根据这个原理，可以利用茎尖培养来培育无病毒苗木。
2.3抗病毒药剂法2。
3.1概述抗病毒药剂法,这是一种新的脱毒方法，运用一些抗病药剂的作用影响病毒RNA的复制形成，干扰病毒的正常生长，从而达到除去病毒的目的.常用的抗病毒化学药物有三氮唑核苷(病毒唑），5—二氢尿嘧啶（DHT）和双乙酰-二氢-5—氮尿嘧啶（DA-DHT）。
这些药物常常通过直接注射到带病毒的植株上，或者加到植株生长的培养基上。
这种方法一般要与茎尖培养相结合应用。
经过抗病毒药剂处理的嫩茎，切取茎尖，再进行组织培养,就会提高脱毒率和成活率。
采用病毒抑制剂与茎尖培养相结合的脱毒方法，可以较容易的脱除多种病毒，而且这种方法对取材要求不严,接种茎尖可大于1mm，易于分化出苗,提高存活率。
2.3。
2原理抗病毒药剂法的作用原理是抗病毒药剂在三磷酸状态下会阻止病毒RNA帽子结构形成而达到除去病毒的效果。
2。
3。
3简史罗晓芳等于1996年曾在培养基中加入病毒唑,脱除了2种苹果潜隐病毒[1］。
除了以上3种脱毒方法以外，花药培养法、茎尖嫁接脱毒、愈伤组织培养法、胚珠培养法也可用于植物组织培养快繁脱毒.3脱毒效果的检测方法经过脱毒处理的植株是否还存在病毒，必须经过病毒学检测才能确定。
可靠的病毒检测方法与建立有效的脱毒方法同等重要。
传统上一直沿用的检测方法是目测法,但是这种方法无法剔除潜隐性病毒。
后来出现的指示植物法，扩大了检测范围.近年来随着生物科学的快速发展，免疫学方法、分子生物学方法等许多先进的理化技术的应用，促进了病毒检测技术的改进与发展。
下面简要介绍几种检测脱毒苗的方法。
3。
1植株直接测定法直接观察植株茎叶有无某种病毒引起的可见症状，是最简单的测定方法。
不过，由于某些寄主植物感染病毒后需要较长的时间才出现症状，有的并不能使寄主植物出现可见的症状，因而无法快速检验。
3.2指示植物法此法最早是美国的病毒学家Holmesl929年发现的。
利用病毒在其他植物上出现症状的特征，作为鉴别种类的标准。
当原始寄主的症状不明显时，就可用指示植物法，这是因为指示植物比原始寄主更容易表现症状.具体做法是将病叶研磨，把汁液接种到寄主植物上，对于木本植物，是将原始寄主嫁接到指示植物上。
指示植物法简便易行，成本低，但它灵敏性差，所需时间长，难以区分病毒种类。
3。
3血清学方法抗血清鉴定法要进行抗原的制备（包括病毒的繁殖,病叶研磨和粗汁液澄清等），抗血清的采收、分离等.血清可分装到小玻璃瓶中，贮存在-15～—25℃的冰冻条件下。
测定时,把稀释的抗血清与未知的病毒植物在小试管内混合，这一反应导致形成可见的沉淀,然后根据沉淀反应来鉴定病毒。
此法灵敏度高,获得检测结果迅速，是目前检测病毒的一种最好方法.此外，PCR微量板杂交法[5］、蛋白质电泳法、嫁接检测法、电子显微镜检定法、病毒症状学诊断法等也可以用来检测植物病毒。
4植物组织培养脱毒快繁技术应用前景的简述植物组织培养技术在作物上主要用于育种和良种繁殖，其次用于无性繁殖作物的脱毒和快繁以及种质的保存等，可见植物组织培养脱毒快繁技术对于农作物苗木的生产具有极其重要的地位。
一些农作物或是花卉植物等因长期的栽培和种植，植物体内被侵染携带病毒、种性退化现在能利用组织培养及快繁脱毒方法开发出的植物脱毒新品种有马铃薯、甘薯、生姜、大蒜、草莓、罗汉果、棕榈、剑麻、香蕉、甘蔗以及花卉植物等几百种再生植株.目前这种技术已得到了广泛应用,前景及范围非常广阔。