液体菌种的制作难点

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液体菌种培训教材(节选五)

2010年4月10日

（五）液体菌种的制作难点

1.试管的选择：生产液体菌种时，试管的选择非常重要，有好多的人就是在试管的选择上出问题，总是做不出专用母种。在生产上，我们要求试管一是自己新生产的，再一个就是存放时间短的。长期存放的、上面长霉菌的，一定不能用。

2.三角瓶专用母种的制作：三角瓶专用母种其实很好做，就是有些人不求甚解，以为接上种就可以，其实这样是永远都不会生产出三角瓶的。这里面的操作细节一定要掌握。

3.发酵罐的制作细节：发酵罐其实很好操作，只是做为一个最后的环节，它要求的是细节。操作规程上说的那些是对的，只是要想做得好，最好是学习一下。由老师亲自做一次，注意哪个地方应该特别小心，也就是细节要特别小心，可保成功率。

4.接种技术：接种技术对于固体来说应该没什么的，可以在液体菌种上，是有说法的。特别是一些特别品种，在接种时应该特别注意。

5.栽培料的含水量和接种量的控制：这一项没做好，是好多人做液体菌种失败的一个重要原因。需要一些计算公式和方法。

液体菌种制作与士兵用枪射击是一个道理，其实一般的人也会射击，可是要想一枪毙命，正中眉心，就不是一般人能做到的了，要经过系统的学习和训练。理论上说的是一回事，实际上做的又是一回事。

正常情况下，经过系统培训的人，在做液体菌种时，成功率应该在95%以上。能熟练掌握试管的制作、搅拌器和摇瓶机的液体菌种制作技术，能自己一个人操作液体菌种发酵罐、懂得不同品种的接种技术。经常做的人，应该在98%以上，甚至更高。这里面除了技术外，还有设备的问题。（未完待续）

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液体菌种培训教材(节选四)

2010年4月10日

三、液体菌种的制作过程及方法

（一）试管种的生产：液体菌种对试管的纯度要求很高。所以要自己会做试管种。

试管种的制作其实很简单，在我们要用种的前三个月，到市场上去看哪个菇符合要求，就买回来（也可以用自己保存的试管种均可）。在接种箱内进行常规气雾（最好是高锰酸钾和甲醛）消毒，30分钟后，开始分离。分离时先将用具消毒，然后用手把菇体分开，用镊子夹一小块菇肉（不同的菇取种位置不同），放到试管里。塞上棉塞就行了。这样的成功率一般在80%以上。在菌丝生长阶段，要经常观察菌丝的生长情况。对菌丝生长不整齐的，有污染的，全部淘汰。只留下没什么问题的，长满试管后，再取特定部位进行转管（见实操）。菌丝长到**cm 时，从菌丝生长的尖端提取一小块，一般地认为，取****大小就可以了，不过从试验上看，提得**效果越好。平菇一般提二次就可以了，提到五次，基本上与脱毒菌种效果差不多。别的品种要多些，最多不超过五次，都可以达到提纯的目的。

（二）三角瓶专用母种生产：专用母种分固体和液体两种。

从生产技术上看，液体专用母种要难一些，是用电磁搅拌器或摇瓶机进行生产。整个过程要4-7天时间，生产的液体种稍经加工就可以直接使用。

液体菌种专用母种的配方就是用PDA加富配方去掉琼脂。用三角瓶盛装，在高压锅里121℃保持30分钟就行了。待三角瓶的温度降到30℃以下时，在超净工作台或接种箱内进行接种。马上就可以进行搅拌或摇瓶了。

固体种生产时间要长些，保存的时间也长，而且方便运输。固体专用母种一般污染要严重一些，有的人污染率要达到20-30左右。

固体专用母种我们现在一般不用，污染率太高，而且不好发现，最糟糕的是容易堵枪。配方是把木屑过20-40目的筛，用去掉琼脂的PDA配方拌料，在121℃高压下灭菌2小时，待温度下降到30度以下时，在超净工作台或接种箱内进行常规接种。一般20多天可以长好。具有运输和贮存方便等特点。

搅拌器是应用磁性材料N、S极的异性吸引，同性相斥的原理制成的。工作时，机械的磁转子转动时，瓶内的磁转子在瓶内跟着转，带动液体旋转，为液体供氧。液体菌种培养基本条件是有一定的氧气、菌丝、水份和营养，几个因素溶合才能使菌丝快速繁殖。由于转子的高速旋转，产生的菌丝被剪切成菌丝片段。

摇瓶机就是通过摇动液体，使空气与水溶合，增加液体中的氧气含量。通过摇动，液体在瓶内翻滚，使菌丝滚动成菌球。

我们用液体专用母种。

（三）发酵罐生产

生产时要先进行培养料的配制。配料时先将土豆去皮切片，与麸皮混合后用不锈钢锅煮熟并取汁，再将辅料KH2PO4、MgSO4等溶入，混匀后装入罐中，也可将免煮培养基或公司提供的专用培养基直接加入到罐内加热灭菌，125℃维持40分钟到一小时进行灭菌，灭菌结束后用冷水冷却至30℃以下。将并瓶后的三角瓶专用种在火焰的保护下接到罐内进行培养，培养时根据不同的菌种，设定适宜的温度。

培养期间应注意观察菌球出现的时间、颜色和排出气体的气味等，压力控制在**Mpa。如

遇到停电，关闭排气阀来保持罐中处于正压状态。来电后重新启动，并打开排气阀继续培养。培养过程中，可随时采样分析，几天后待菌球密度符合要求时（从视镜或排料观察），即可接种。

（四）接种

液体菌种生产结束后，在检测合格的情况下，就要进行接种。接种前要先将接种枪、连接管道用棉花塞上，放到高压锅里进行灭菌。121℃20分钟就行了。与此同时，将接种机打开工作。在接种时，前几枪不要接到栽培袋里，应该先喷到量筒里，以检查接种量的大小。全部接种过程都要在接种机下进行。

液体菌种培训教材（节选三）

2010年4月10日

（三）液体菌种的制作方法

液体菌种的生产方式可分为电磁搅拌法、摇瓶机法、简易深层发酵（吹氧）法、发酵罐法。

1.电磁搅拌法比较简单，投资也比较少，200元钱的投资就可进行生产。从接种到菌丝长好要7天时间。但也存在生产量小的缺点，所以生产中常用几个搅拌器同时生产来加以解决。也可以用扩张法来加以解决。主要生产过程：在无菌条件下将试管种接到三角瓶里，搅拌4-7天后得到大量的菌种。

2.摇瓶机法也是一种比较简单的方法，接种简单，管理方便，生产量根据机器的设定而不同。投资要1000-3000元钱。但也存在噪音大等缺点。生产过程：在无菌条件下将试管种接到瓶内，摇动。一般7天左右会出现大大量的菌球。

3.简易深层发酵（吹氧）法相对来说比较麻烦一些，主要是器材的联接要在无菌状态下进行，如果哪个环节出现问题，不能保证成功率。投资也要3000多元。生产过程：在无菌条件下将试管种接到容器内，通气培养7天，得到大量的菌球。

4.发酵罐法是目前要求最高的一种，涉及到好多方面的知识，很难自学成才，而且投资也高，一般要10000元以上。如果你的生产量大或是菌种场，建议你还是用发酵罐比较好。因为生产量大，很快就会把你的投资收回来，而且可以减轻你很多工作量。

发酵罐液体菌种的生产主要过程：专用母种的生产，时间在一周之内。发酵罐接种后，一般品种在三到五天内生产好。时间的长短一是看罐的大小，二是看品种。各有不同。

需要说明的是电磁搅拌器生产的液体菌种是菌丝团，而摇瓶机法、简易深层发酵（吹氧）法、发酵罐法生产出来的液体菌种一般是菌球。