液体菌种培训教材(四)液体菌种的制作过程及方法
液体菌种制作
素才能决定。
6.酸碱度
不同种类的食用菌都有一个最适酸碱度，例如，黑木耳的
ห้องสมุดไป่ตู้
最适pH为6.0-6.5、金针菇为6.3、香菇为4.5-6.5。
7.罐压 在发酵过程中罐压通常为0.2-0.7Kg/cm。 8.泡沫控制 在发酵过程中泡沫过多不利于发酵，目前大多数是加入
0.006%的泡敌做消泡剂消除泡沫。
9.发酵特点
发酵终点是否准确，应参考产物浓度、过滤浓度、氨基酸
六、液体菌种制作的主要参数
1.菌龄 菌龄与种子的活力密切相关。通常，摇瓶种子菌龄控制在 4-10d，一级种子和二级种子菌龄为48-96H。 2.接种量 一般地，食用菌深层发酵时的接种量为10-20%。 3.温度 通常在22-30℃生长最快，得率最高。
4.通气量 食用菌深层发酵的通气量以0.2-1.5通气体积/培养液体积 /min为宜。 5.搅拌速度 食用菌深层发酵的搅拌速度一般是180-500r/min。
体的，不受季节性限制。
三、液体菌种制作的用途
1.生产液体菌种 食用菌经深层发酵2-7d的幼嫩菌丝体，可以用来作为食用 菌栽培用的原种和栽培种。
2.制备药物或提取生化制品 许多食用菌种类，其深层发酵培养的菌丝体可作为提取药 物成分或生化制品的材料。
3.制作食品或畜禽饲料
四、液体菌种制作的主要设备 1.摇床
第三节
液体菌种制作技术
一、液体菌种制作的原理
食用菌液体菌种制作是在发酵罐中，采用液
体培养基通入无菌空气并加以搅拌，增加培 养基中溶氧含量，提供食用菌菌体呼吸代谢
所需要的氧气，并控制适宜的外界条件，获
得大量的菌丝体或代谢产物。
液体菌种的制作及使用方法
液体菌种的制作及使用方法随着食用菌生产的发展,食用菌制种方法在传统固体制作的基础上在不断的改进和提高,其中液体菌种的制作便是其中之一。
液体发酵技术是现代生物技术之一，起源于美国。
它是指在生化反应器中，模仿自然界将食药用菌在生育过程中所必需的糖类、有机和无机含有氮素的化合物、无机盐等一些微量元素以及其它营养物质溶解在水中作为培养基，灭菌后接入菌种，通入无菌空气并加以搅拌，提供食用菌菌体呼吸代谢所需要的氧气，并控制适宜的外界条件，进行菌丝大量培养繁殖的过程。
工业化大规模的发酵培养即为发酵生产，亦称深层培养或沉没培养。
液体菌种的制作及使用方法液体菌种由于具有生产规模化、控制自动化、生长无菌化、发菌高速化的生产应用优势,为食用菌产业化的发展提供了良好的种源条件,是食用菌产业化发展的必然方向,已被业内人士所看好。
液体菌种是用液体培养基培养而成的菌种。
近年来，国内外正积极研究液体菌种的培养与利用。
与固体菌种相比，它具有菌种生产周期短、菌龄整齐一致、接种方便、接于固体菌料发酵快、适宜于工厂化生产等优点，因而受到了广大栽培者的欢迎。
目前我国已能进行深层发酵的食用菌有：香菇、平菇、凤尾菇、美味侧耳、鲍鱼菇、金针菇、黑木耳、猴头、草菇、蜜环菌、茯苓、滑菇和冬虫夏草等。
一、液体菌种的培养方法常见的有采用摇床来生产的摇瓶培养法和采用发酵罐来生产的深层培养法。
若少量生产，可以用摇瓶培养法。
深层培养需要一整套工业发酵设备，如锅炉、空气压缩机、空气净化系统、发酵罐等，故投资大，只适用于工厂化的大规模生产。
而摇瓶培养投资少，设备技术简单，适合一般菌种厂生产使用。
本节主要介绍摇瓶培养的技术方法。
1、食用菌液体发酵的培养基根据培养基中组成的不同，可分为天然培养基和合成培养基。
天然培养基的组成均为天然有机物。
合成培养基则是采用—些已知化学成分的营养物质作培养基。
在生产上，还根据工艺将培养基分为孢子培养基、种子培养基及发酵培养基。
但无论如何划分，每一种培养基的组成中都离不开碳、氮、无机盐、微量元素、维生素和生长素等。
(完整)食用菌液体菌种的制作
食用菌液体菌种的制作
2009—5-5 8：23:26
在无菌的条件下把菌种投放到培养基里。
安装通气管后用输氧机给培养基输入氧气。
把培养基放置在摇床机上进行振荡培养.
食用菌液体菌种具有生产周期短、菌龄整齐一致、接种方便、发酵快、适宜于工厂化生产等优点。
食用菌液体菌种的生产方式一般可分为电磁搅拌法、摇瓶机法、简易深层发酵（吹氧)法、发酵罐法。
据省农科院食用菌站工作人员介绍，摇瓶机法不仅接种简单，管理方便，而且生产量根据机器的设定而不同，投资20 00～3000元即可。
配制液体培养基先把马铃薯煮到熟而不烂时提取上清液，然后配制3％葡萄糖、1%玉米粉、0。
05%硫酸镁、0。
1％磷酸二氢钾，最后将马铃薯上清液和上述溶液及水混合即可。
液体培养基适用于多种食用菌菌种的培养.
摇瓶振荡培养液体培养基配制好后,装入容量为500毫升的三角烧瓶中，每瓶装入100毫升，并加入1～15粒小玻璃珠，瓶口用棉塞、牛皮纸密封,在1.5千克/平方厘米压强下灭菌30分钟。
然后投入一块约2平方厘米的斜面菌种，于2 3℃～25℃下静置培养24小时。
待菌丝萌发时再放置在往复式摇床上振荡培养，振荡频率为每分钟80～100次，振幅为6～10厘米。
摇床室的温度控制在24℃～2 5℃,培养时间因菌类不同而异，一般是5天左右。
将振荡好的培养基倒入大容器里，经过扩容后，在无菌条件下安装通气管，用输氧机通入适量氧气后培养48小
时.培养结束的标准:培养液清澈透明,其中悬浮着大量小菌丝球，并伴有各种菇类特有的香味。
培养好的液体菌种应放入培养箱中保存。
北虫草液体菌种制作方法
北虫草液体菌种制作方法北虫草的菌种怎样制作培育？北虫草是一种富含虫草素、氧基酸等营养物质的虫、菌结合的食用菌类，因为营养物质种类多、含量高，是人们生活中的上等滋补佳品，在市场上销售情况一直较佳，人工种植前景看好。
而今天给大家介绍一下关于北虫草液体菌种制作方法，如下：一、培养基配方配方：玉米粉1%、葡萄糖2%、蛋白胨1%、酵母粉0.5%、磷酸二氢钾0.1%、水95.35%、硫酸镁0.05%、维生素B110mg、PH值调至6.5左右。
二、制作培养方法1.制作一级摇瓶种：将这些原料溶于水后装在500毫升三角瓶中，每个三角瓶装量200毫升，放入玻璃珠3粒左右，塞紧棉塞，然后用4层纱布罩住棉塞、瓶口扎紧，放在高压灭菌锅内进行消毒，待压力表上升至0.5kg/cm2压力时，即放净冷气待指针降至0后，再关掉放气阀门，待温度表指针逐渐上升至1.1kg/cm2后就开始保温30分钟后，慢慢下降指针至0，然后开盖冷却至常温，再移入接种箱或超净工作台等待接种。
2.接种方法：先把灭菌后的北虫草液体菌种培养基移放在超净工作台上，并把北虫草母种和接种勾、酒精灯、酒精棉球等接种物品也放在超净工作台上，工作服挂在接种室消毒。
然后在接种室点燃烟雾剂（用臭氧消毒器更好），立即关闭所有门窗密闭消毒同时打开紫外线灯。
待40min后，将烟雾放净，关闭紫外线灯，接种人员就可进行接种。
接种的方法是穿好工作服，打开超净工作台风机，点燃酒精灯，左手拿着母种试管对准火焰口，右手拿着铁勾在酒精灯火焰消毒3-5秒种后立即伸进母种试管内把菌种分成5-7段，再用左手迅速将纱布瓶盖打开，右手立即把一段菌块勾入瓶内（每瓶接入5-6片0.5平方厘米大小菌种）速将瓶盖按原样盖紧。
当北虫草菌种接好后，移入22-24℃恒温培养室，摇床震荡发菌培养。
摇床转速140r/min，经过4-6天的发菌培养，经检查北虫草菌液的颜色开始清亮、菌球密集，瓶口闻有很浓的北虫草气味，可判断为菌种优良。
液体菌种制作方法
液体菌种制作方法液体菌种的生产容器多种多样，制作方法法归纳起来主要有以下四种：1.电磁搅拌器法：此法比较简单，投资也比较少，200元左右就可进行生产。
从接种到菌丝长好要3-5天时间。
但也存在生产量小的缺点，一般只用于生产栽培种或生产发酵罐的专用母种。
生产过程：在无菌条件下将试管种接到三角瓶里，搅拌3-5天后得到大量的菌丝体。
2.摇瓶（床）震荡法：此法比较简单，接种简单，管理方便，生产量在几百毫升到几百升不等。
投资在几百至几千元钱之间。
但大型机噪音大，不能在有人居住的地方生产。
生产过程：在无菌条件下将试管种接到瓶内，摇动。
一般4-7天左右会出现大大量的菌球。
3.简易深层发酵（吹氧）法：此法分二种，一种是容器与过滤器一起灭菌的，容易些；另一种是容器与过滤器分开灭菌的，相对来说比较麻烦一些，主要是器材的联接要在无菌状态下进行，如果哪个环节出现问题，不能保证成功率。
投资也要3000多元。
生产过程：在无菌条件下将试管种接到容器内，通气培养4-7天，得到大量的菌球。
4.发酵罐法：是目前要求最高的一种，涉及到好多方面的知识，很难自学成才，而且投资也高，一般要10，000元以上。
如果生产规模大或是菌种场，建议用发酵罐比较好。
如果资金充足，生产小的也可以用发酵罐，因为省略了二级和三级种的制作过程，很快就会把投资收回来，而且可以减轻很多工作量。
生产过程：发酵罐注水、加料后，灭菌40-60分钟，冷却至28℃时，接入经过并瓶的专用母种，一般品种在3-5天内就可以完成培养。
时间的长短一是看罐的大小，二是看品种。
需要说明的是电磁搅拌器生产的液体菌种是菌丝团，而摇瓶机法、简易深层发酵（吹氧）法、发酵罐法生产出来的液体菌种一般是菌球。
152.4液体菌种制作
谢谢观看！
酸二氢钾0.5 g/L，硫酸镁0.25 g/L。
二、液体菌种制种工艺
4.液体培养基的制作方法 （1）投料和定容
二、液体菌种制种工艺
4.液体培养基的制作方法 （2）液体培养基灭菌
主管接空气过滤器出气阀
二、液体菌种制种工艺
5.摇瓶菌种生产
二、液体菌种制种工艺
6.接种
火焰圈灼烧接种口
菌种接入罐体
二、液体菌种制种工艺
概述
液体菌种具有成本低、制作时间短、萌发快、生长快、纯度高、菌龄短、 出菇齐、产量高等优点，在生产应用中有其明显的优势。
一、生产环境和生产设施设备
1.液体菌种生产场所
液体菌种生产车间
液体菌种接种车间
液体菌种培养器剖面图
一、生产环境和生产设施设备
2.液体菌种生产设施：配料间、发菌间、冷却间、接种间、培养室、检测室。
7.培养 罐体压力表压力在0.02 MPa～0.03 MPa，温度控制在20±1 ℃、通
气量为1:0.8条件下进行液体菌种培养。
二、液体菌种制种工艺
8.放罐接种 将待接种的固体种袋（瓶）或栽培袋放置在输送带上，输入至无菌接
种区。在接种区用接种器将液体菌种注（喷）入。
固体种袋（瓶）放置在输送带上
无菌接种区
接种间Biblioteka 培养室二、液体菌种制种工艺
1.液体菌种制种工艺
二、液体菌种制种工艺
2.液体菌种培养器进行维护和检查 3.液体菌种培养基配方 ➢ 黄豆粉 10 g/L、蔗糖3.0 g/L、KH2P04 1 g/L、MgS04 0.5 g/L。 ➢ 玉米粉6 g/L、黄豆粉4.5 g/L。 ➢ 玉米粉1.0 g/L，黄豆粉1.5 g/L，葡萄糖7.5 g/L，酵母膏1.5 g/L，磷
食用菌生产技术 液体菌种
3.制作饮料、保健品 3.制作饮料、 制作饮料 食用菌液体培养物经过粉碎→研磨打浆→ 食用菌液体培养物经过粉碎→研磨打浆→热 水浴浸提→过滤→稀释或浓缩→调配， 水浴浸提→过滤→稀释或浓缩→调配，可研 制成功能饮料、保健品。 制成功能饮料、保健品。 4. 制作畜禽饲料 食用菌液体培养物，经过浸提或提取有用成 食用菌液体培养物， 分后的废弃物，还可制作畜禽饲料。 分后的废弃物，还可制作畜禽饲料。
五、液体菌种制作的主要工艺 1.液体种子制备 1.液体种子制备 液体种子制备的目的是大量繁殖足够数量的、 液体种子制备的目的是大量繁殖足够数量的、 健壮的、高纯度的菌丝体。 健壮的、高纯度的菌丝体。 ⑴ 斜面菌种制备 制备方法（培养基配方和操作步骤）同试 制备方法（培养基配方和操作步骤） 管斜面母种的制备，在此不再多讲了。 管斜面母种的制备，在此不再多讲了。 ⑵ 摇瓶种子制备 主要操作步骤：称量→煮制→分装→灭菌→ 主要操作步骤：称量→煮制→分装→灭菌→ 无菌检验→接种→ 无菌检验→接种→振荡培养管理
四、液体菌种制作的主要设备 1.摇床食用菌为需氧菌，液体菌种培养需 摇床食用菌为需氧菌， 摇床食用菌为需氧菌 要增加氧气的供应，因此， 要增加氧气的供应，因此，不断振荡有 利于菌丝体的快速生长。 利于菌丝体的快速生长。摇床是液体菌 种生产常用的设备 2.种子罐和发酵罐 种子罐和发酵罐 一级种子罐通常为50-100L，二级种子罐 一级种子罐通常为 ， 为500-1000L。 。
六、液体菌种制作的主要参数
1.菌龄 2.接种量 3.温度 1.菌龄 2.接种量 3.温度 4.通气量 5.搅拌速度 6.酸碱度 4.通气量 5.搅拌速度 6.酸碱度 7.罐压 8.泡沫控制 7.罐压 8.泡沫控制 9.发酵特点 9.发酵特点
2-6液体菌种制作简介
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液体发酵的主要作用
工业上液体发酵有着重要作用，是 食品工业、医药工业及国名经济的重 要组成部分；
1、生产液体菌种； 2、制备药物或提取生化制品； 3、制作食品或畜禽饲料等。
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摇床
种子罐和发酵罐
空气净化设备
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模块三
2-6
液体菌种简介
液体菌种特点 液体菌种制作工艺
一、液体菌种特点
概念 步骤 液体菌种 制备工艺 流程
无菌 空气 斜面 菌种
增加培养基 溶氧量
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状态 培养基呈液体状态 实质 培养基不添加琼脂等凝固剂
摇瓶 种子罐 培养 培养
1、培养条件易于控制，管理方便；
2、营养成分分布均匀，与菌丝 接触面大，菌丝生长整齐；
主要内容
1.液体菌种主要特点及作用
2.液体菌种制作工艺流程
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思考、讨论题
1、液体发酵有何意义？ 2、制作液体菌种有何作用？工艺 流程与固体菌种有何不同？
课外学习资源
1.黄毅.食用菌栽培. 北京：高等教育出社1998 2.中国食用菌菌种网
液体菌种制作过程
液体菌种的的制作过程一、母种纯化1、配方：1000ml为例（1）小麦（麦夫或豆芽）50克，土豆200克，葡萄糖20克，蛋白胨2克，琼脂18-20克，KH2 PO4 1.5克，MgSO4 0.75克，PH自然（6左右）（2）蔗糖24g，蛋白胨2g，酵母膏1g，2、制作小麦煮开花，土豆煮酥而不烂；琼脂剪碎，放入溶解，加入其他配料，总体积称到标准量，装入试管，进行常规灭菌（121℃，40分钟）。
3、接种将所用母种及新制的试管放入接种箱，灭菌20分钟后将手用75%的医用酒精擦洗（消毒），伸入接种箱等待5-10分钟再开始接种（接种前所有接种工具都要在酒精灯火焰上匀烧灭菌），在酒精灯火上方切取0.3cm²一小块菌丝，放入新培养基上，塞好试管口；放在该菌最适合的温度下培养。
4、培养在培养过程中，每天都要仔细逆光观察，发现有任何疑常现象都要淘汰不要。
二、摇瓶种子制作1、配方：1000ml为例a.可以用母种纯化配方（不加琼脂）b.土豆200克，黄豆8克（需打凝浆）或脱脂豆奶8克，葡萄糖30克，蛋白胨2克，KH2PO41.5克，MgSO4 0.75克。
c.玉米小麦各50克，蔗糖20克，葡萄糖10克，蛋白胨2克，酵母膏2克，KH2PO41克，MgSO4 0. 5克。
d．蔗糖24g，蛋白胨2g，酵母膏1g，KH2PO42g,MgSO4 1g, 豆浆50ml.2、制作将以上配方任选一种用类似母种的方法制成液体培养基，装入摇瓶，塞好瓶口，包上放潮纸，放入灭菌锅，封好锅口，打开放气阀，当有大量蒸气排出时关闭放气阀，温度升至121℃后，计时40分钟，让其自然冷却，压力归零时，打开灭菌锅盖，将一边掀起3-5cm，利用余热将棉塞烘干。
3、接种将摇瓶及纯化好的母种一起放入接种箱，灭菌后，去掉防潮纸，扭松棉塞，在酒精灯火焰上方，挑取0.3cm²的菌丝皮左手拿起棉塞,右手迅速将菌丝接入,然后立刻盖上棉塞,用同样的方法一个摇瓶接入15-20块,让其均匀地分布在液体表面。
液体菌种实施方案
阿魏菇液体菌种培育的设计报告技术路线及实施方案阿魏菇(pleurotus ferulae lanzi)又名阿魏蘑、阿魏侧耳、白灵菇等，是一种食药两用大型真菌，它因寄生或腐生在一种药用植物阿魏上而得名。
以前报道阿魏菇的栽培是固体菌种栽培，未见有液体菌种栽培的报道。
与固体菌种相比，液体菌种具有生产周期短、菌丝发育点多、接种后菌丝集中快速、菌龄整齐等优点。
在肯定条件下，用于菌种袋、栽培袋的接种及多糖的提取可以明显缩短生产周期，因此液体菌种的培育具有宽阔的进展前景。
本争辩拟对阿魏菇液体菌种培育进展试验，具体试验方案如下：一、设计报告：承受不同的液体培育基配方来观看菌丝体的生长状况、菌球消灭的时间以及多糖的得率。
其中培育基的配方主要通过供给不同的原料来做碳源，氮源以及不同的 ph 值。
筛选出最正确培育基并对发酵工艺条件优化，并且将液体菌种应用于栽培试验，观看出菇状况。
二、技术路线：获得菌种〔单孢分别，组织分别〕→扩大培育成斜面菌种→摇瓶培育〔筛选培育基〕→发酵罐深层培育〔发酵工艺条件优化〕→一局部接种于菌袋进展出菇试验，另一局部菌丝体和发酵液分别多糖的提取分别。
三、实施方案：试验时间安排在 2023.11——2023.12。
1．斜面菌种：pda 培育基，用于保藏菌种。
2.一级种子培育：用摇瓶培育。
确定不同的碳源、氮源和ph 等，通过正交试验筛选出最正确培育基3.二级种子培育：在一级种子根底上进一步扩大培育，用发酵罐培育。
确定培育基的配方，以及发酵参数如温度、转速、ph 值等及接种量、培育时间等对种子质量的影响，完成发酵工艺条件优化，确定放罐标准。
4.栽培出菇试验：用所得二级液体菌种接种到栽培袋上，与固体菌种相比较进展出菇试验，观看出菇时间、产量等因素。
5.一局部液体菌种用来分别提取多糖。
篇二：液体菌种制备流程及进呈现状液体菌种进呈现状食用菌菌种液体发酵技术从60 年月开头便有人开头探究，至80 年月开头用于生产实践，到目前为止，国内主要还是使用的在位灭菌气升式发酵罐，我们称之为第一代食用菌液体菌种发酵设备。
液体菌种生产流程
EM等菌种培养技术流程
一、液体菌种培养
1、一、二级种培养基配方：白糖 1.5L
糖蜜0.5L
磷酸二氢钾50g
轻质碳酸钙50g
味精下脚料1kg
甲壳素100g
水55L
2、菌种分别是：EM菌、枯草杆菌、硝化菌等。
3、制作方法：将55L水煮沸，加入培养基各组分，再次煮沸后，分装至25L 的塑料桶（每桶约19L），待冷却后分别接种1L，分别扩繁培养，一般3-7天即可用。
注：1）接种比例1：20。
2）枯草杆菌（是耐热菌）需趁热接入菌种培养。
3）用发酵罐培养菌种效果更佳。
二、菌种扩繁成1吨
1、培养基配方：白糖20kg
碳酸钙2kg
过磷酸钙2kg
味精下脚料10kg
糖蜜4-5L
甲壳素1L
在98L大不锈钢桶加入55L水煮沸，加入培养基物料组分，煮沸后趁热倒入2吨大桶中；连续煮2锅；放置30min，以达杀菌目的。
另外准备若干个大桶，装满水，用臭氧处理器消毒，静止放置1h后待用；向2吨大桶中倒入臭氧处理的无菌水，至半桶时，接种（8种菌之一,其中枯草杆菌最好用热水），接种比例1：80（约1.5%）。
乳酸菌和光合菌可以不用打气，其它6种菌接种2天后要补充新鲜空气，培养5天后可用。
食用菌液体菌种的制作步骤
食用菌液体菌种的制作步骤
一、液体培养基配方：葡萄糖20克蛋白胨10克硫酸镁
0.5克硫酸二氢钾1克水1000ml
二、液体培养基的制作步骤：
1、称量、溶解
按配方称量药品，将药品置于烧杯中加水，玻璃棒搅匀。
2、分装
分装三角瓶时避免培养液黏住瓶壁口，用漏斗进行分装，三角瓶装料系数60％。
3、加棉塞
棉塞大小，松紧度要适中，一般塞入3-4厘米。
4、装锅灭菌
塞好棉塞的三角瓶用双层报纸包扎好，装入灭菌锅，盖上报纸，排气后，待温度升至121℃开始计时，温度控制在121—123℃，维持50min。
5、烘棉塞
当压力降至0.05MPa时带压进入无菌室，当压力即将降至零时开始放气，打开锅盖拿出报纸，将锅盖嵌一小缝，以此来烘干棉塞，维持40—50min。
6、冷却
取出三角瓶放在超净工作台或接种箱中，冷却后进行接种。
液体菌种生产与固体培养不同，是以液体做培养基，通过多级发酵培养得到菌液，发酵菌液中含有大量的菌丝体，
可直接做液体菌种。
目前，液体菌种发酵生产的工艺流程有：一是摇瓶培养工艺，即斜面母种→一级摇瓶种子→二级摇瓶种子→三级摇瓶种子；二是深层发酵罐培养工艺，即斜面母种→种子罐→发酵罐→液体菌种。
少量可用摇瓶震荡培养，大量的用发酵罐通气培养。
实验3 液体菌种制作
七、液体菌种接种方法：
1、用75%的酒精棉球对手指和广口三角瓶外壁 消毒。 2、点燃酒精灯。 3、打开三角瓶封口膜，用移液管取5~10mL的 液体菌种迅速移接到三角瓶中，迅速封口。 4、贴标签 写明菌种编号，接种日期，姓名，随后置于振 荡培养箱中于25℃避光振荡培养，7~10d可以 长满瓶。 5、结果记录
四、液体菌种制作的特点
1、成本低； 2、菌丝体生长快速； 3、生产周期短； 4、工厂化生产、无季节性。
五、液体菌种制作的用途
1、生产液体菌种； 2、制备药物或提取生化制品； 3、制作食品或畜禽饲料。
பைடு நூலகம்
六、液体菌种制作的主要设备
1、摇床 往复式摇床：振荡方式为来回震荡 旋转式摇床：振荡方式为旋转 2、发酵罐
实验三 液体菌种的制作
一、实验目的
1、液体培养基的制备方法 2、液体菌种接种方法
二、实验材料与设备
1、菌种 侧耳 2、马铃薯 200克 ；葡萄糖 20克 ； 自来水 1000毫升 ；自然PH 。 3、广口三角瓶 、振荡培养箱
三、液体菌种制作的原理
食用菌液体菌种制作是采用液体培养基通入 无菌空气并加以搅拌，增加培养基中溶氧 含量，提供食用菌菌体呼吸代谢所需要的 氧气，并控制适宜的外界条件，获得大量 的菌丝体或代谢产物。
液体菌种实施方案
阿魏菇液体菌种培养的设计报告技术路线及实施方案阿魏菇(pleurotus ferulae lanzi)又名阿魏蘑、阿魏侧耳、白灵菇等，是一种食药两用大型真菌，它因寄生或腐生在一种药用植物阿魏上而得名。
以前报道阿魏菇的栽培是固体菌种栽培，未见有液体菌种栽培的报道。
与固体菌种相比，液体菌种具有生产周期短、菌丝发育点多、接种后菌丝蔓延迅速、菌龄整齐等优点。
在一定条件下，用于菌种袋、栽培袋的接种及多糖的提取可以明显缩短生产周期，因此液体菌种的培养具有广阔的发展前景。
本研究拟对阿魏菇液体菌种培养进行试验，具体试验方案如下：一、设计报告：采用不同的液体培养基配方来观察菌丝体的生长情况、菌球出现的时间以及多糖的得率。
其中培养基的配方主要通过提供不同的原料来做碳源，氮源以及不同的ph值。
筛选出最佳培养基并对发酵工艺条件优化，并且将液体菌种应用于栽培实验，观察出菇情况。
二、技术路线：获得菌种（单孢分离，组织分离）→扩大培养成斜面菌种→摇瓶培养（筛选培养基）→发酵罐深层培养（发酵工艺条件优化）→一部分接种于菌袋进行出菇试验，另一部分菌丝体和发酵液分离多糖的提取分离。
三、实施方案：试验时间安排在2009.11——2010.12。
1．斜面菌种：pda培养基，用于保藏菌种。
2．一级种子培养：用摇瓶培养。
确定不同的碳源、氮源和ph等，通过正交实验筛选出最佳培养基3．二级种子培养：在一级种子基础上进一步扩大培养，用发酵罐培养。
确定培养基的配方，以及发酵参数如温度、转速、ph值等及接种量、培养时间等对种子质量的影响，完成发酵工艺条件优化，确定放罐标准。
4．栽培出菇试验：用所得二级液体菌种接种到栽培袋上，与固体菌种相比较进行出菇试验，观察出菇时间、产量等因素。
5．一部分液体菌种用来分离提取多糖。
篇二：液体菌种制备流程及发展现状液体菌种发展现状食用菌菌种液体发酵技术从60年代开始便有人开始探索，至80年代开始用于生产实践，到目前为止，国内主要还是使用的在位灭菌气升式发酵罐，我们称之为第一代食用菌液体菌种发酵设备。
食用菌液体菌种的制作PPT课件
c 将培养液分装到250mL的三角烧瓶中（80-100ml/瓶），再放入5-10颗玻璃珠，加塞，包扎，灭菌（121℃，30min） 3、接种：待培养液充分冷却至室温后，无菌操作从母种斜面铲取约1cm² 的菌丝体块（勿带过多的培养基），使菌丝面朝上悬浮于液面上； 4、培养：先25℃静止培养2d, 待接种菌块萌发长出新菌丝后，再 于摇床上振荡（150-180rpm）培养 3-4d，观察检测液体菌种的质量。
恒温培养箱；恒温摇床；超净工作台；灭菌锅；电炉（1台/组）； 250mL三角烧瓶（1个/人）；500mL或250mL烧杯、量筒（各1个/组）；中长玻璃棒（1根/组），六层纱布（1块/组），接种钩、接种铲（各1支/组）；小刀、棉塞、牛皮纸、橡皮筋； 食用菌母种（1支/组），马铃薯，葡萄糖，磷酸二氢钾，硫酸ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ，蛋白胨，氯化钠
食用菌液体菌种的制作
1、学习液体菌种制作的原理与方法； 2、掌握液体菌种的质量检测； 3、了解液体菌种在食用菌生产中的优点。
一 实验目的
液体菌种是指将食用菌的菌丝在一定的的培养条件下采用液体培养基使其生长增殖形成大量菌丝体或菌丝球，以作为食用菌栽培的原种或栽培种使用。液体菌种必须经显微镜检查后方可用于科研和生产。 液体菌种使用的培养基根据不同菌类营养要求的特点而设计，其主要成分为碳源、氮源、矿质元素与维生素。碳源常用蔗糖和葡萄糖；氮源主要是蛋白胨、酵母粉等；无机盐常添加硫酸镁、磷酸二氢钾等；维生素多用维生素B1。
三 实验器材
1、配方：马铃薯200g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾0.5g、硫酸镁0.5g、蛋白胨2g、氯化钠0.1g，水1000mL，PH自然。 2、培养基制备： a 根据配方和用量称取适量去皮的马铃薯，切块（1cm³大小）后于烧杯中加入一定量的水，在电炉上加热煮沸30min（熟而不烂），用六层纱布过滤后将滤液补充至初始体积 b 按比例向滤液中加入配方中的其它各成份，搅拌（必要时可加热）使各成份充分溶解，（若溶液较浑浊可再过滤一次）再补充至初始体积，冷却（不烫手）
水桶自制液体菌种的方法
水桶自制液体菌种的方法
制作液体菌种有几种方法，以下是其中一种常用的方法：
材料：
1. 容器：可以使用玻璃瓶、腐蚀性物质不会反应的塑料瓶等。
2. 培养基：可以购买已配好的培养基，也可以自制。
3. 菌种：可以使用已购买的菌种，也可以使用自己提取的菌种。
步骤：
1. 准备好容器，清洗消毒后晾干。
2. 配制培养基，如果自己配制，可选择适当的基质（如蔗糖、琼脂等）和必需的营养物质（如氮源、磷源等），按照比例加入适量的水中，搅拌均匀。
3. 把配制好的培养基倒入容器中，留下一定的空间给菌种生长。
4. 添加菌种：如果有已购买的菌种，按照说明书上的指导添加适量的菌种到培养基中；如果使用自己提取的菌种，可以从分离出的单一菌落中取一小块放入培养基中。
5. 盖紧容器盖，避免外界的污染。
6. 将培养基置于适宜的温度和光照条件下，有利于菌种生长（不同的菌种有不同的适宜生长条件）。
7. 定期观察培养基中的菌落生长情况，如果生长良好，可以继续培养；如果发现污染或者其他异常，需要进行相应的处理（如重新进行培养）。
8. 根据需要，可以用培养基菌种进行插播或者扩大规模培养。
需要注意的是，制作液体菌种需要一定的实验室技术和sterile(无菌)操作。
不熟悉实验室操作的人士最好在专业人士的指导下进行。
液体菌种的制作
液体菌种的制作一、液体菌种生产的关键技术1.溶氧量液体菌种生产中最关键的是培养液中氧的溶解量，因为在菌丝生长过程中，必须不断的吸收溶解其中的氧气来维持自身的新陈代谢，氧气在液体（水）中的溶解量与压力、温度有关，同时与培养液的接触面积、渗透压有很大的关系。
2.空气过滤技术的关键就是保证进入的空气无菌度高，因此必须选择孔径小、材料先进的过滤膜。
一般细菌直径在0.55um,酵母菌在110um，病毒一般在20400mu，所以选择过滤膜时应综合考虑以上因素。
当然如果选的太小，成本将大幅度提高。
另外环境对于空气影响很大,在空气压缩机房、制种车间必须保持环境清洁。
3.培养液培养液是菌丝生长发育的营养源，要求营养全面均衡。
不同的菌种对营养要求偏重不同。
配制原料有糖、麸皮、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素、蛋白胨、土豆汁、酵母浸膏等。
配置培养液时，先将土豆片、麸皮一起煮熟，将汁液滤出，后加入其它辅料混匀即可。
4.接种培养器上端有接种口，也是装料口，将母种并瓶后加入抑菌剂，而后必须在火焰圈的保护下倒入罐体内，要求动作快、操作准确。
5.环境环境对菌种生产影响很大，过滤器本身不可能把杂菌百分之百地滤掉，减少环境中的杂菌基数是非常重要的，液体菌种母种接入到经灭菌的培养液中只要能形成对杂菌的生长优势就可以抑制杂菌感染，也就是说，液体菌种培养不是建立在绝对无菌的前提下相反是建立在相对无菌的前提下。
就此意义上说，保持环境清洁，减少空气中杂菌基数，对于提高菌种培养成功率意义较大。
二、液体菌种生产流程工艺流程图：空气压缩→过滤↓配料→装罐→灭菌→冷却→接种→培养→液体种↑试管斜面种→三角瓶液体专用母种1.试管种的生产：液体菌种对试管的纯度要求很高。
生产前,先要将试管种进行纯化,不然很难生产出液体种。
纯化的方法有二种：固体种生产法和菌种提纯法。
二者可任选其一。
2.三角瓶液体菌种专用母种生产：专用母种分固体和液体两种。
从生产技术上看，液体专用母种要难一些，是用电磁搅拌器进行生产。
液体菌种培训教材(四)液体菌种的制作过程及方法
液体菌种培训教材(节选四)2010年4月10日三、液体菌种的制作过程及方法（一）试管种的生产：液体菌种对试管的纯度要求很高。
所以要自己会做试管种。
试管种的制作其实很简单，在我们要用种的前三个月，到市场上去看哪个菇符合要求，就买回来（也可以用自己保存的试管种均可）。
在接种箱内进行常规气雾（最好是高锰酸钾和甲醛）消毒，30分钟后，开始分离。
分离时先将用具消毒，然后用手把菇体分开，用镊子夹一小块菇肉（不同的菇取种位置不同），放到试管里。
塞上棉塞就行了。
这样的成功率一般在80%以上。
在菌丝生长阶段，要经常观察菌丝的生长情况。
对菌丝生长不整齐的，有污染的，全部淘汰。
只留下没什么问题的，长满试管后，再取特定部位进行转管（见实操）。
菌丝长到**cm时，从菌丝生长的尖端提取一小块，一般地认为，取****大小就可以了，不过从试验上看，提得**效果越好。
平菇一般提二次就可以了，提到五次，基本上与脱毒菌种效果差不多。
别的品种要多些，最多不超过五次，都可以达到提纯的目的。
（二）三角瓶专用母种生产：专用母种分固体和液体两种。
从生产技术上看，液体专用母种要难一些，是用电磁搅拌器或摇瓶机进行生产。
整个过程要4-7天时间，生产的液体种稍经加工就可以直接使用。
液体菌种专用母种的配方就是用PDA加富配方去掉琼脂。
用三角瓶盛装，在高压锅里121℃保持30分钟就行了。
待三角瓶的温度降到30℃以下时，在超净工作台或接种箱内进行接种。
马上就可以进行搅拌或摇瓶了。
固体种生产时间要长些，保存的时间也长，而且方便运输。
固体专用母种一般污染要严重一些，有的人污染率要达到20-30左右。
固体专用母种我们现在一般不用，污染率太高，而且不好发现，最糟糕的是容易堵枪。
配方是把木屑过20-40目的筛，用去掉琼脂的PDA配方拌料，在121℃高压下灭菌2小时，待温度下降到30度以下时，在超净工作台或接种箱内进行常规接种。
一般20多天可以长好。
具有运输和贮存方便等特点。
玉木耳液体菌种生产技术规程
玉木耳液体菌种生产技术规程1．液体菌种生产工艺流程摇瓶空灭→摇瓶培养基的制作→灭菌→冷却→接种→培养→摇床培养→发酵罐清洗→发酵罐空灭→发酵罐培养基的生产→灭菌→冷却→接种→菌丝培养→接栽培袋→栽培袋培养2．摇瓶液体菌种的制备（1）摇瓶空灭使用1000毫升、耐126℃高温的无色或近无色的玻璃抽滤瓶，在压力0.15兆帕，温度121℃条件下灭菌30分钟。
（2）摇瓶培养基配方配方1：去皮马铃薯300克，葡萄糖20克，蛋白胨2克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁1克，消泡剂5毫升，水1000毫升，pH自然。
配方2：去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁1.5克，蛋白胨2.5克，VB11毫克，水1000毫升，pH自然。
（3）摇瓶培养基的制备按培养基配方称取原料，先将去皮马铃薯切成小块，加热至沸腾维持20～30分钟，用纱布过滤定容后，将滤液放入锅中，加入其他原材料小火加热至溶解蒸煮至溶解，待培养基冷却后分装放入摇瓶，摇瓶液体种培养基装量应为容器体积的1/4，在摇瓶中放入一粒转子。
将瓶口和胶皮管口用棉塞塞紧，棉塞外要加盖4层纱布，灭菌时纱布外加盖牛皮纸防潮。
（4）灭菌、冷却与接种将摇瓶放入高压灭菌锅中，在压力0.15兆帕，温度121℃条件下灭菌30分钟，灭菌完毕后，应自然降压，灭菌时应防止棉塞被冷凝水打湿。
待培养基冷却后接种，在接种箱或者超净工作台中接种，接种前先用75%酒精或新洁尔灭溶液进行表面擦拭消毒，然后开紫外灯灭菌30分钟，在液体培液表面接4块黄豆大的母种菌种块，使菌丝面朝上，菌种块必须漂浮在液体上，接种结束后塞紧棉塞。
（5）培养将接种后的摇瓶先放入恒温箱中在25℃下静止培养2～3天，待接种块在培养液上长到1厘米时放入摇床培养，温度26℃，转速以调至有一分钱硬币大小的旋涡为基准，摇30分钟，停10分钟，自动控制，维持3～4天。
判断标准：摇瓶摇动后菌丝挂壁，培养液浑浊度达90%以上，如有臭味，则表明有杂菌污染，不可使用。
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液体菌种培训教材(节选四)
2010年4月10日
三、液体菌种的制作过程及方法
（一）试管种的生产：液体菌种对试管的纯度要求很高。
所以要自己会做试管种。
试管种的制作其实很简单，在我们要用种的前三个月，到市场上去看哪个菇符合要求，就买回来（也可以用自己保存的试管种均可）。
在接种箱内进行常规气雾（最好是高锰酸钾和甲醛）消毒，30分钟后，开始分离。
分离时先将用具消毒，然后用手把菇体分开，用镊子夹一小块菇肉（不同的菇取种位置不同），放到试管里。
塞上棉塞就行了。
这样的成功率一般在80%以上。
在菌丝生长阶段，要经常观察菌丝的生长情况。
对菌丝生长不整齐的，有污染的，全部淘汰。
只留下没什么问题的，长满试管后，再取特定部位进行转管（见实操）。
菌丝长到**cm时，从菌丝生长的尖端提取一小块，一般地认为，取****大小就可以了，不过从试验上看，提得**效果越好。
平菇一般提二次就可以了，提到五次，基本上与脱毒菌种效果差不多。
别的品种要多些，最多不超过五次，都可以达到提纯的目的。
（二）三角瓶专用母种生产：专用母种分固体和液体两种。
从生产技术上看，液体专用母种要难一些，是用电磁搅拌器或摇瓶机进行生产。
整个过程要4-7天时间，生产的液体种稍经加工就可以直接使用。
液体菌种专用母种的配方就是用PDA加富配方去掉琼脂。
用三角瓶盛装，在高压锅里121℃保持30分钟就行了。
待三角瓶的温度降到30℃以下时，在超净工作台或接种箱内进行接种。
马上就可以进行搅拌或摇瓶了。
固体种生产时间要长些，保存的时间也长，而且方便运输。
固体专用母种一般污染要严重一些，有的人污染率要达到20-30左右。
固体专用母种我们现在一般不用，污染率太高，而且不好发现，最糟糕的是容易堵枪。
配方是把木屑过20-40目的筛，用去掉琼脂的PDA配方拌料，在121℃高压下灭菌2小时，待温度下降到30度以下时，在超净工作台或接种箱内进行常规接种。
一般20多天可以长好。
具有运输和贮存方便等特点。
搅拌器是应用磁性材料N、S极的异性吸引，同性相斥的原理制成的。
工作时，机械的磁转子转动时，瓶内
的磁转子在瓶内跟着转，带动液体旋转，为液体供氧。
液体菌种培养基本条件是有一定的氧气、菌丝、水份和营养，几个因素溶合才能使菌丝快速繁殖。
由于转子的高速旋转，产生的菌丝被剪切成菌丝片段。
摇瓶机就是通过摇动液体，使空气与水溶合，增加液体中的氧气含量。
通过摇动，液体在瓶内翻滚，使菌丝滚动成菌球。
我们用液体专用母种。
（三）发酵罐生产
生产时要先进行培养料的配制。
配料时先将土豆去皮切片，与麸
皮混合后用不锈钢锅煮熟并取汁，再将辅料KH2PO4、MgSO4等溶入，混匀后装入罐中，也可将免煮培养基或公司提供的专用培养基直接加入到罐内加热灭菌，125℃维持40分钟到一小时进行灭菌，灭菌结束后用冷水冷却至30℃以下。
将并瓶后的三角瓶专用种在火焰的保护下接到罐内进行培养，培养时根据不同的菌种，设定适宜的温度。
培养期间应注意观察菌球出现的时间、颜色和排出气体的气味等，压力控制在**Mpa。
如遇到停电，关闭排气阀来保持罐中处于正压状态。
来电后重新启动，并打开排气阀继续培养。
培养过程中，可随时采样分析，几天后待菌球密度符合要求时（从视镜或排料观察），即可接种。
（四）接种
液体菌种生产结束后，在检测合格的情况下，就要进行接种。
接种前要先将接种枪、连接管道用棉花塞上，放到高压锅里进行灭菌。
121℃20分钟就行了。
与此同时，将接种机打开工作。
在接种时，前几枪不要接到栽培袋里，应该先喷到量筒里，以检查接种量的大小。
全部接种过程都要在接种机下进行。