透射电镜生物样品前处理步骤
常温生物透射电镜的实验流程和应用介绍
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透射点镜的生物样本的制样过程
透射电镜生物样品制作过程透射电镜生物样品制作过程大致经过取材、固定、脱水、浸透、包埋、切片及染色等步骤。
一. 取材取材时要注意的要点是：快、小、冷、净、准、避免机械损伤。
取材方法：将固定液滴在冰台上的卡片上，在麻醉后的动物身上快速用剪刀剪取一块组织，用预冷的过的缓冲液将剪下的组织洗净，迅速放到卡片上的固定液中，用刀片切去被镊子夹到和剪刀剪过的组织，后按实验的目的将组织切成0.5~1mm2的立方或横截面为1mm2的长方体。
用牙签将切好的组织块转移到装有固定液的小瓶中，贴好标签并置于4℃的冰箱中。
二．固定以下操作尽可能在4℃的环境下，使用的溶液也要保存在4℃的冰箱中。
1、戊二醛固定：用镊子轻轻的将组织块从固定液中取出，放在卡片上的固定液中，利用双面刀片把组织块切成小块状，放进盛有1~1.5ml的0.1%的戊二醛的固定液的细管中，将吸管放进真空箱中，将大气压抽到760托后取出，使组织块在戊二醛溶液中固定1小时。
2、漂洗：经戊二醛固定的组织块要用1~1.5ml的0.1%PBS缓冲溶液漂洗，漂洗的次数为5次，在漂洗到第四次时可以将组织留在PBS漂洗液中过夜，放入4℃的冰箱中。
第二天早晨再进行第五次漂洗。
3、四氧化锇固定：向漂洗过的组织中加入0.5ml的0.1%四氧化锇固定液，固定时间为2个小时。
由于四氧化锇具有毒性，因此操作在通风橱里进行。
4、漂洗四氧化锇：用0.1%PBS缓冲溶液漂洗剩余的四氧化锇，然后再漂洗两次，其时间间隔为10min。
三．脱水为了保证包埋介质完全渗入组织内部，必须事先将组织内的水分驱除干净，即用一种和水及包埋剂均能相混溶的液体来取代水，常用的脱水剂是乙醇和丙酮。
1、酒精脱水:用浓度梯度依次为30%、50%、70%、90%的酒精，依次浸泡组织，其浸泡的时间一般为10min。
当在70%梯度的酒精时，样品可以放置过夜。
2、丙酮脱水：用浓度梯度为90%、100%的丙酮浸泡组织，在纯丙酮中浸泡三次。
透射电镜制样步骤以及注意事项
透射电镜制样步骤以及注意事项透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope，简称TEM）是目前最常用的高分辨率电子显微镜，可以用于观察物质的微观结构。
制备TEM样品的过程非常重要，下面将详细介绍TEM制样的步骤以及需要注意的事项。
制备TEM样品的步骤一般包括样品的选择、固定与固化、切片、薄化、网格制备和贴膜等。
第一步是样品的选择，样品应具有研究价值且适合观察。
例如，生物样品可以是细胞、组织或器官的薄片，金属样品可以是扁平的块状、粉末或薄膜等。
第二步是固定与固化。
对于生物样品，常用的固定方法包括浸泡法、灌注法和切片冷冻法；对于无机样品，可以使用固定剂将样品固定在固定剂中。
第三步是切片。
将固定好的样品切割成薄片，一般要求薄片的厚度在100 nm以下，通常使用超薄切片机来进行切割。
第四步是薄化。
将切割好的样品进行薄化处理，使其达到TEM观察所需的薄度。
常见的薄化方法有机械薄化、电化学薄化和离子薄化等。
第五步是网格制备。
将薄化好的样品放置在铜网格上，网格的选取应该根据所研究样品的性质和需要进行选择。
最后一步是贴膜。
将组织切片或带有样品的网格进行贴膜，以保护样品并提高图像的对比度。
在以上步骤中，需要注意的事项有：1.样品在制备过程中要避免受到污染或氧化，尽量在纯净无尘的环境中进行操作。
2.固定剂的选择要合理，不同的样品可能需要使用不同的固定剂，应根据需要进行选择。
3.切片时要注意刀片的尖锐度和切割角度，以免对样品造成损伤或变形。
4.薄化过程中要控制好加工参数，以保证样品的均匀薄化。
5.制作网格时应选择合适的网格尺寸和类型，以适应观察需求。
6.贴膜时要使薄膜均匀平整，并避免出现气泡或杂质。
总之，TEM制样是一项复杂而关键的过程，要保证样品的质量和可观察性，需要仔细选择方法、控制操作参数、注意样品的保护与处理。
合理的样品制备能够获得高质量的TEM图像，并提供准确的实验数据和结论。
透射电镜样品制备流程
样品制备是射电镜观察的关键环节，如果样品不足够细腻或有杂质，就无法 得到清晰的观察结果。因此，在制备样品时需要注意以下几点：
样品必须保证足够薄：射电镜的观察效果与样品的薄度成会使用不同的设备和工具。例如，生物样品制备可能 需要使用切片机、真空干燥炉等设备；材料样品制备可能需要使用打磨机、拉丝 机等设备。
在进行射电镜样品制备时，应根据所要观察的样品的性质和结构选择合适的 流程和设备，以便获得清晰的观察结果。
在进行射电镜样品制备时，应注意避免样品污染。样品污染可能会导致观察 结果不准确或无法观察。
射电镜样品制备是在进行射电镜观察前必须进行的一项工作，样品制备的流 程包括以下几个步骤：
采集样品：样品可以是植物、动物或矿物等，需要使用特殊的工具或方法进 行采集。
切割样品：根据所要观察的部位，使用刀具将样品切成较薄的片状。 脱水：将切割好的样品浸泡在溶液中，使其脱去水分。 透明化：将脱水后的样品浸泡在透明化剂中，使其变得透明。 加粘合剂：在样品的表面涂上粘合剂，使其固定在玻片上。 贴装：将样品贴装在射电镜的样品台上，准备进行观察。
样品污染的主要原因有：
样品采集过程中的污染：如果样品采集过程中不注意清洁，可能会导致样品 污染。
样品制备过程中的污染：如果样品制备过程中使用的设备或工具不清洁，也 可能导致样品污染。
周围环境的污染：如果周围环境不清洁，也可能导致样品污染。
为了避免样品污染，应注意保持清洁，使用清洁的设备和工具，并在清洁的 环境中进行样品制备。
样品必须透明：样品必须透明，才能够清晰地观察其内部的结构。 样品必须稳定：在观察过程中，样品必须保持稳定，否则就无法得到清晰的 观察结果。 样品必须无杂质：样品必须保证无杂质，否则就会干扰观察效果。
tem透射电镜的样品制备方法
tem透射电镜的样品制备方法TEM（透射电子显微镜）是一种常用的高分辨率显微镜，可以观察到物质的结构和组成。
样品制备对于TEM观测至关重要，良好的样品制备可以提供高质量的显微图像。
以下是TEM透射电镜的样品制备方法的详细讨论。
1.样品选择：选择适合TEM观察的样品，典型的样品包括纳米材料、生物细胞、材料薄膜等。
根据需要选择合适的样品尺寸和形状。
2.样品固定：根据样品的特性和需要，采取合适的方法将样品固定在支撑物上。
常用的方法包括离心沉淀、滴定、蒸发浓缩等。
对于生物样品，可以使用化学固定剂（如戊二醛）进行化学固定。
3.样品切片：对于大尺寸或不透明的样品，需要将其切割成薄片，一般要求切片尺寸在100 nm以下。
常用的切片工具有超声切割仪、离子切割仪等。
切割样品时要注意样品的定位和定向，以确保观察到感兴趣的区域。
4.样品脱水：对于生物样品，需要将其进行脱水处理。
脱水可以使用乙醇和丙酮等有机溶剂，逐渐将样品中的水分替换为有机溶剂。
脱水过程中要避免剧烈振荡，以防止样品的破坏。
5.样品浸渍：将脱水后的样品浸渍在透明介质中，如环氧树脂或聚合物。
浸渍过程中需要避免气泡和异物的进入，以保持样品的质量。
6.样品调平：将浸渍后的样品放在平板上，用研磨纸将其调平。
调平过程中要注意避免样品的损坏。
7.样品切割：将调平后的样品切成适当尺寸的小块，便于后续的操作。
切割时要使用锋利的刀具，以保证切面的平整度。
8.样品研磨：使用研磨纸或研磨腰带对样品进行研磨，以使其表面更加平整。
研磨过程中要注意研磨力度的控制，以免样品的破损。
9.样品薄化：使用电子束或离子束对样品进行薄化处理，将其厚度控制在适当的范围内。
薄化过程中要注意能量和时间的控制，以避免样品的损坏。
10.样品清洁：最后，使用有机溶剂或气流将样品上的杂质去除，使样品表面干净。
以上就是TEM透射电镜的样品制备方法的详细讨论。
不同的样品可能需要不同的制备方法，需要根据实际情况进行调整。
透射电镜生物样品前处理步骤
透射电镜生物样品前处理步骤电镜样品制备步骤1、取材：放入2.5%戊二醛溶液中固定2-4h(4℃可保存1-2周，冷冻可保存2年)注：不可用自来水冲洗，被钳、镊夹取造成机械损伤的组织不可部分可取较大面积，但厚度必须小于1mm（戊二醛固定能力小于0.5mm）2、漂洗：牙签取出样品至新的1.5ml离心管，用0.1M pH7.0磷酸缓冲液（PBS）漂洗样品三次（摇床），每次15min3、锇酸固定与再漂洗：1%锇酸溶液固定样品1-2h（临用前计算用量≤50ul/样，用0.1M PBS将2%锇酸稀释至1%，通风橱操作），吸出固定液，用0.1M pH7.0 PBS漂洗样品三次，每次15min 注：漂洗以清除固定液，避免产生沉淀物干扰结构观察4、脱水剂梯度脱水：用梯度浓度（50%，70%，80%，90%和95%）乙醇溶液对样品进行脱水处理，每个浓度处理15min 再用100%乙醇处理20min （乙醇细胞内抽提少，但与包埋剂相容性差）最后用纯丙酮处理20min（若包埋剂为Epon改用环氧乙烷置换）注：脱水以清除游离水以便包埋剂均匀渗透；脱水剂易吸收空气中水分，密封，置换时应该迅速由低到高逐级脱水而不能急剧脱水，更换溶液时应迅速，以免组织内外产生气泡。
5、包埋剂梯度渗透：①用包埋剂丙酮混合液（V/V=1/1）处理样品1h：计算用量80ul/样再配制(参考样品大小)②用包埋剂丙酮混合液（V/V=3/1）处理样品3h：计算用量80ul/样再配制(参考样品大小)③纯包埋剂渗透样品过夜：将样品移至干燥的新离心管中，常温过夜(所用器具均应干燥)注：样品周围不能有气泡6、加热聚合：牙签取出经渗透处理的样品至0.5ml干燥离心管（预先装入约300ul包埋剂），加热聚合仪70℃加热过夜。
7、莱卡EM UC 7超薄切片仪修快、切片（50-70nm）8、正染色：塑料包埋模具（刀划几道缝隙），染色时温度低影响染色效果，冬天空调醋酸双氧铀50%乙醇饱和溶液100ul染色（15min-1h），双蒸水冲洗柠檬酸铅100ul染色15min（极易吸收空气中CO2产生PbCO3,染色时毋对着说话、呼吸，同时放置数块NaOH）9、日立H-7650透射电镜观察spurr包埋剂配制：ERL 2.5gNSA 5.2 g 混合均匀后再加入催化剂DMAE，搅拌30min；低温干燥保存DER 2.5 gDMAE 0.1g宜新鲜配制但由于使用期限长(3-4天)，混合物可在使用前一天制备。
电镜样品处理流程
电镜样品处理流程电镜样品处理流程可以分为以下几个步骤：1. 采集样品：根据需要，选择合适的样品进行采集。
样品可以是细胞、组织、材料等。
2. 传统固定：将样品进行固定处理，以保持其形态和结构的稳定性。
常用的固定剂有冰乙酸、乙醛、戊二醛等。
3. 脱水：将固定后的样品通过浓度递增的酒精溶液进行脱水处理，以去除组织中的水分。
常用的脱水溶液有30%，50%，70%，95%，100%的酒精。
4. 渗透：将脱水后的样品通过有机溶剂（如丙烯酸甲酯，或Epon等）进行渗透，使其逐渐转变为切片时易于切割和观察的坚硬物质。
5. 嵌包：将渗透后的样品置于嵌包物（如丙烯酮），并放入模具中固定，以形成坚硬的嵌包样品块。
6. 切片：将嵌包样品块进行切片处理，常用的切片工具有超薄切片机。
7. 上网：将切片后的样品片置于网状金属网底上，并使用适当的胶水或聚合物将其固定在网上。
8. 吐壳：将样品上的嵌包剂和其他杂质去除，使样品表面清晰可见。
可以使用酶解等方法。
9. 染色：根据需要，对样品进行染色处理，以增加对比度和观察效果。
常用的染色剂有重金属盐、酸性着色剂等。
10. 干燥：将染色后的样品片在通风处晾干，以去除残留的溶剂和水分。
11. 金属蒸镀：将样品片放置于金属蒸镀设备中，进行金属蒸镀处理，以增加样品的导电性，以便观察。
12. 观察和拍摄：将样品片放置在电子显微镜中，利用电子束对样品进行观察，可以通过摄像机等设备进行图像记录。
13. 分析和解释：根据观察到的图像和结构，进行分析和解释，得出相关结论。
14. 保存和归档：将样品片进行妥善保管，以备将来的研究和参考之用。
透射电镜组织处理
透射电镜组织处理
透射电镜（Transmission Electron Microscope，TEM）是一种高分辨率的显微镜，可以用于观察和分析材料的微观结构和成分。
在使用透射电镜进行样品观察之前，需要对样品进行适当的处理。
以下是透射电镜组织处理的一般步骤：
1. 固定样品：将要观察的组织样品进行固定处理。
常用的固定剂有醛固定剂，如戊二醛或葡萄糖醛固定剂。
固定的目的是停止细胞功能，保存细胞和组织的原貌。
2. 切片：将固定的样品块切割成非常薄的切片。
通常使用超薄切片机或者离心机来获得薄片。
厚度通常为50到100纳米左右，以保证透射电镜的有效穿透。
3. 染色：对切片进行染色以增强对细胞结构的观察。
常用的染色剂有重铀酸、铅酸等。
染色的目的是使细胞结构在电子束中的对比度增强。
4. 上膜：在切片的背面电镜网格上涂上薄膜，以便将切片固定在透射电镜的样品架上。
5. 透射电镜观察：将处理好的样品放置于透射电镜中观察。
通过调整电子束的聚焦和缩放，可以观察到组织和细胞的微观结构。
透射电镜组织处理的目的是保持样品的原始结构和形态，并使其适应电子束的穿透性观察。
注意，在进行透射电镜观察之前，样品必须成为极度干燥状态，因为电子束对水分很敏感。
通过透射电镜观察和分析组织样品，可以获得高分辨率和高对比度的图像，从而进一步了解组织和细胞的微观结构和功能组织。
这对于生物学研究、药物开发和疾病研究具有重要意义。
透射电镜样品制备-生物技术
半薄切片定位：
目的：定位、筛选、比较研究 （0.5～2.0μm）
半薄切片染色程序： 1．捞片 2．展片干燥 3．染色（甲苯胺蓝） 4．水洗、(透明、封固)
（2）超薄切片：
超薄切片机
厚度的辨认：
体视学显微镜下观察干涉色
暗灰色：＜400Å
灰 色：400～500Å
银 色：500～700Å
金 色：700～900Å
（2）锇酸（又称四氧化锇。OSO4, ）
1） 1%锇酸固定液的配制：（见书） 2）固定原理及优缺点
a、经典的固定剂。对蛋白质和脂质亲和力强。 b、有强烈的电子染色作用。 c、渗透较慢，0.25～0.5mm/h左右。常用作后固定。 d、对糖类和核酸保存很差，不保存酶活性。 e、固定时间不宜超过2小时。 f、提前配置，应低温、密封、避光保存。
② 包埋与固化： 组织块用牙签挑入包埋管中，注满包埋液，置温箱
中 固 化 。 37℃ 、 12 小 时 后 ， 移 入 45℃ ， 24 小 时 ， 60℃，24小时。
（4）包埋操作中的注意事项：
调整a液、b液的比例。
a. 器材和试剂均应注意防潮。（干燥器、烤箱） b. 配制包埋液时，防止气泡产生。
【2】常用固定剂的特点
（1）戊二醛（Glutraldehyde） 1）2.5%戊二醛固定液的配制（见书） 2）固定原理及优缺点
a、戊二醛对于蛋白质、多糖、核酸以及细胞内微管、滑面内质 网、纺缍丝、胞饮小泡和细胞基质固定良好。 b、穿透力强，可达4mm/h，常用作前固定。 c、固定后可在4℃冰箱长时间保存（数周～数月）。 d、对酶的活性保存较好，适用于电镜细胞化学研究。 e、对脂肪不起固定作用。 f、无“电子染色”作用。 g、不稳定、易氧化。
简述透射电镜中样品制备的常用方法
简述透射电镜中样品制备的常用方法一、引言透射电镜是一种非常重要的材料表征工具，可以用来观察材料的微观结构和成分。
在进行透射电镜实验时，样品制备是非常关键的一步。
本文将介绍透射电镜中样品制备的常用方法。
二、样品制备前的准备工作在进行透射电镜实验之前，需要进行一些准备工作。
首先，需要选择合适的样品，通常需要具有高度纯度、均匀性和结晶度。
其次，需要选择合适的切片方法和切片仪器。
最后，在进行样品制备之前，需要对仪器进行检查和校准。
三、传统切片法传统切片法是最常见的一种样品制备方法。
该方法主要包括以下步骤：1.将样品固定在金属网格上。
2.使用超声波清洗器将金属网格浸泡在去离子水中清洗干净。
3.使用细针将金属网格放置在相应位置。
4.使用玻璃棒将金属网格压入薄膜中，并使其平整。
5.使用细针或玻璃棒将薄膜剪成小块。
6.使用切片机将薄膜切成适当大小的样品。
7.将样品放置在透射电镜上进行观察。
四、离子切割法离子切割法是一种比传统切片法更先进的样品制备方法。
该方法主要包括以下步骤：1.将样品固定在金属网格上。
2.使用超声波清洗器将金属网格浸泡在去离子水中清洗干净。
3.使用离子束磨削仪对样品进行加工处理，得到一块平整的样品表面。
4.使用离子束切割仪对样品进行切割，得到纳米级别的薄片。
5.将薄片放置在透射电镜上进行观察。
五、焦电流加工法焦电流加工法是一种新型的样品制备方法。
该方法主要包括以下步骤：1.将样品固定在金属网格上。
2.使用超声波清洗器将金属网格浸泡在去离子水中清洗干净。
3.使用焦电流加工仪对样品进行加工处理，得到高质量的薄片。
4.将薄片放置在透射电镜上进行观察。
六、结论样品制备是透射电镜实验中非常关键的一步。
传统切片法、离子切割法和焦电流加工法是常用的样品制备方法。
在进行样品制备之前，需要进行充分的准备工作，选择合适的样品和切片仪器，并对仪器进行检查和校准。
通过合理选择样品制备方法，可以得到高质量的样品，并为后续实验提供可靠的数据支持。
透射电镜使用流程
透射电镜使用流程样品准备：首先，需要准备符合透射电镜观察要求的样品。
对于动物组织标本，应在取样后的短时间内（如1-3分钟内）立即投入电镜固定液中以固定组织，然后切成适当大小的块状。
固定液的渗透能力有限，超出特定尺寸后组织可能无法完全固定，因此务必注意控制取样组织的体积。
取样后，组织应在室温下避光固定一段时间，然后转移至低温保存，以待后续处理。
抽真空与加高压：打开透射电镜前，需要先接通总电源，打开冷却水，并接通抽真空开关进行抽真空。
待真空度达到指定值后，可以开始上机工作。
接着，接通镜筒内的电源，给电子枪和透镜供电，并给电子枪加高压至所需值。
观察与调整：在荧光屏状态下，通过操作工具选择观察区域，并调整画面亮度。
选定观察区域后，需要调弱光强，确保光强度在适当的范围内，然后切换到CCD模式进行进一步调整。
通过调节旋钮可以增大或减小放大倍数，选定拍照区域后，再次调整光强使图像清晰。
完成这些步骤后，点击面板上的聚焦键进行自动聚焦，并使用聚焦旋钮将图像调整至最清晰。
拍照与记录：在图像清晰并调整到最佳状态后，可以进行拍照操作。
务必注意，在拍照前点击保存按钮，否则图像不会自动保存。
卸载样品与清理：观察完成后，需要按照特定的步骤卸载样品，包括拔出样品杆、取出样品等。
然后，进行真空低温处理，以确保设备处于良好的工作状态。
请注意，透射电镜是一种高精密度的科研仪器，使用时必须严格遵循操作规程，以确保设备的安全和实验的准确性。
同时，由于透射电镜的使用涉及复杂的物理和化学原理，操作人员应具备一定的专业知识和技能。
在进行透射电镜操作时，建议由经验丰富的专业人员或在专业人员的指导下进行。
透射电镜标本制备方法
透射电镜样品制备方法透射电镜的样品制备方法，需要经过取材、固定、脱水、渗透、包埋聚合、切片及染色等步骤。
一．取材的基本要求组织从生物活体取下后，如果不立即进行适当处理，会由于细胞内部的各种酶作用，出现细胞器自溶现象。
因此，为了细胞结构尽可能保持天然状态，必须做到快、小、准、冷。
（1）动作迅速，组织从活体取下后应在最短的时间内（1分钟内）投入2.5%戊二醛固定液。
（2）所取组织的体积要小，一般不超过1mm*1mm，取样形状为牙签状。
也可将组织修成1mm*1mm*2-5mm大小长条形。
因为固定剂的渗透能力较弱，组织块如果太大，块的内部将不能得到良好的固定。
（3）机械损伤要小，解剖器械应锋利，操作宜轻，避免牵拉、挫伤与挤压。
推荐使用手术刀或双面刀片。
（4）操作最好在低温（0℃—4℃）下进行，以降低酶的活性，防止细胞自溶。
（5）取材部位要准确。
切片窗小于1mm*1mm，如取样带有太多的多余组织，可能造成你需要的部分刚好被修掉。
二．取材方法（按照自己的样品类型检索）1.动物及人体组织的取材（在冰浴上进行）动物组织的取材，应麻醉（1%戊巴比铵5 ml/kg体重腹腔注射）或断头急性处死，解剖出所需器官。
用手术刀切割取一小块组织，放在干净的硬质板上（例如培养皿底部），滴一滴冷却的固定液。
用新的、无油污的锋利双面刀片将材料切成大约1 mm宽，3~5 mm长的小块并从中选出受损伤较小的小条（牵拉损伤将直接破坏组织，切取时刀片下压，不要来回拉锯），用牙签将这些小块逐一放入盛有预冷的、新鲜固定液的1.5 ml管内，放入冰箱冷藏室低温固定（0~4℃）4小时或以上。
*固定结束后，将固定液用磷酸盐缓冲液稀释三倍，样品于该溶液中在4℃冰箱保存。
送样前请用磷酸盐缓冲液于4度冰箱浸泡清洗15 min，共3次，做好标记送至电镜室。
送样请使用2 ml离心管，用记号笔在离心管管壁上写好编号，用透明胶带缠绕。
后续管子会接触丙酮和乙醇，一定要用透明胶带缠绕，以防记号被洗掉。
简述透射电镜中样品制备的常用方法
透射电镜中样品制备的常用方法透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope，TEM）是一种重要的高分辨率显微镜，常用于研究物质的微观结构和性质。
在使用透射电镜观察样品之前，需要对样品进行制备，以确保样品的质量和形貌。
本文将介绍透射电镜中常用的样品制备方法，包括样品的选择、切片制备、薄膜制备等。
1. 样品的选择在进行透射电镜观察之前，样品的选择非常重要。
通常，样品需要满足以下要求：•样品具有一定的透明度，能够让电子束穿透。
•样品存在较为稳定的晶体结构，以便进行晶体学分析。
•样品的尺寸合适，不过大以免超出透射电镜的观察范围。
•样品的形状和厚度需适合观察操作。
常见的样品包括金属、有机物、无机晶体、陶瓷和生物样品等。
2. 切片制备透射电镜观察样品的常用方法之一是制备薄片，即切片制备。
切片制备的目的是将样品制备成适合透射电镜观察的薄片，通常要求薄片的厚度在几百纳米到几微米之间。
切片制备的步骤如下：步骤1：固定样品对于生物样品，首先需要将样品固定。
常用的固定方法包括冷冻固定、化学固定和凝胶固定等。
这些方法可以保持样品原有的结构和形态。
步骤2：取样从固定的样品中取出小块样品，通常使用显微针或者显微刀进行操作。
步骤3：去脂处理（可选）对于脂肪含量较高的样品，需要进行去脂处理。
常见的方法包括冷冻去脂、溶液去脂等。
步骤4：嵌培将取样得到的样品嵌入切片中，嵌培有多种方法。
常用的方法包括：冷冻嵌培、树脂嵌培等。
步骤5：切割将嵌培好的样品进行切割。
切割时需要使用马来酸酐刀或者超薄刀，在适当的位置进行切割，得到适合的样品。
步骤6：收集和保护薄片将切割好的薄片收集并放置在适当的载玻片或网格中，然后进行保护。
保护可以使用丙酮或乙醇进行漂洗、涂层等方法。
3. 薄膜制备除了切片制备外，透射电镜观察样品的另一种常用方法是薄膜制备。
相对于切片制备，薄膜制备更加灵活，可以制备更薄的样品。
薄膜制备的步骤如下：步骤1：样品制备制备需要制备的样品，并确保样品的表面较为光滑。
透射电镜细胞样品制备流程
透射电镜细胞样品制备流程透射电镜（Transmission Electron Microscope，简称TEM）是一种利用电子束穿透样品以获取高分辨率图像的仪器。
它是生物学、材料科学等领域研究中不可或缺的工具。
在细胞学研究中，使用透射电镜观察细胞样品的超高分辨率结构，可以帮助科学家深入了解细胞的组织结构和功能。
想要制备透射电镜的细胞样品，需要经过一系列的步骤和操作。
下面将详细介绍透射电镜细胞样品制备的流程。
1. 样品固定：首先，需要将待观察的细胞样品进行固定。
固定的目的是保持细胞的形态结构和细胞内部组织的稳定性。
常用的固定剂有戊二醛、醋酸乙酯和冰乙酸等。
固定剂的选择应根据细胞类型和实验目的来确定。
2. 组织切片：固定后的细胞样品需要进行切片。
切片可以通过机械切割或冷冻切割等方法进行。
切片时应注意样品的厚度，一般要求细胞切片的厚度在50-100纳米左右。
3. 样品染色：对于未染色的细胞样品，其对电子束的吸收能力较弱，因此需要对样品进行染色增强对比度。
常用的染色剂有重铀酸、铅酸和乙酸铀等。
染色剂的选择应根据样品的性质和实验要求来确定。
4. 薄膜制备：切片好的样品需要转移到透射电镜网格上进行观察。
通常，会使用薄膜来支撑样品，并使其保持平坦。
常用的薄膜材料有碳膜和聚合物膜等。
5. 网格制备：透射电镜网格是一种特殊的载体，用于固定细胞样品并放置在透射电镜中观察。
网格制备通常需要使用特殊的网格支架和胶水，将薄膜和网格固定在一起。
6. 清洗和干燥：制备好的细胞样品需要进行清洗和干燥处理。
清洗的目的是去除样品表面的杂质和残留物，以确保样品的纯净度。
干燥的目的是使样品完全干燥，以便在透射电镜中观察时不产生影响。
7. 观察和记录：制备好的细胞样品可以放入透射电镜中进行观察。
透射电镜通过透射电子束与样品相互作用，获取样品的高分辨率图像。
科学家可以根据观察到的图像来分析细胞的结构和功能，并进行记录和分析。
总结起来，透射电镜细胞样品的制备流程包括样品固定、组织切片、样品染色、薄膜制备、网格制备、清洗和干燥、观察和记录等步骤。
透射电镜常规样品制备流程(精)
透射电镜样品制备流程因为透射电镜能察看的样品一定很薄（ 60～ 70nm），所以透射电镜的样品准备要求很严格，方法也很单调，仅有一下两种方法：一．负染色技术负染色技术简单迅速，能够显示生物大分子、细菌、分别的细胞器以及蛋白晶体等样品的形态、构造、大小以及表面构造的特点。
特别在病毒学中，负染色技术有着宽泛的应用。
样品要求：①样品悬液的纯度不要求很纯，可是假如杂质太多，如大批的细胞碎片，培育基残渣，糖类以及各样盐类结晶的存在都会扰乱染色反响和电镜的察看。
特别是不可以有过多的糖类，因为在电子束的轰击下，糖类简单碳化而有碍察看，所以样品要适合提纯。
②样品悬液的浓度要适中，太稀在电镜下很难找到样品，太浓样品聚积影响察看。
操作流程：汲取样品悬液滴到有膜的铜网上，静置数分钟，而后用滤纸吸去剩余的液体，滴上负染色液，染色1～2min 后滤纸吸去负染色液，待干后用于电镜察看。
二、超薄切片技术超薄切片技术是为透射电镜察看供给薄样品的特意技术，是生物学中研究细胞超微构造最常用的技术。
宽泛应用于生物体的各样细胞的超微构造察看。
一般厚度在10～100nm 的切片称为超薄切片，制作这类切片的技术叫做超薄切片技术。
超薄切片制作的过程包含取材、固定、脱水、浸透、包埋、聚合、切片和染色等几个环节，和一般光学显微镜的白腊切片过程相像。
可是，超薄切片切片过程更加仔细与复杂，要求更严格，并且所用的试剂比较昂贵、配制复杂、强致癌。
详细操作步骤、注意事项以下：1．取材和前固定：迅速的切取大小为0.5～1.0mm3 的样品块，一分钟内把组织（样品）块浸入 2.5％戊二醛（入口质量）溶液（取样前来平台领取），每个离心管内装20个以上的样品块，作为一个样送到平台。
要求：①取材前必定要和工作人员获得电话联系！②取材选择部位要正确靠谱，保证每块资料都是要察看的部位。
③全部植物样品必定要抽真空，能够沉底的样品也抽真空 15mins，不可以沉底的样品必定要抽真空致沉底！④细菌、散在细胞等不可以成块的样品，加戊二醛固定液，离心积淀后送到平台，由平台工作人员办理。
透射电镜常规样品制备流程
透射电镜常规样品制备流程
透射电镜是电子显微镜技术中最重要的一种技术，普通晶体样品的常
规样品制备流程如下：
1、样品的准备：将样品、水、石蜡、助融剂(如NaCl)、磷酸盐、石墨、甲醛和电子源材料(碳粉)准备好备用，并配合温度控制装置使用。
2、样品处理：将样品用接近样品发热点的温度处理，一般为200?C，把样品放入室温保温的石蜡，再将该石蜡分别放入不同的温度槽，如助融
剂的温度可以高于样品放置温度。
3、镀膜：将样品放置在硝酸银或碳材料的固体膜下，镀膜时，将碳
气体经过电子枪加热，形成形状与原子相同的表面。
4、结晶：首先需要将样品放置在一定温度和压力下，进行结晶，再
将研磨剂如磷酸盐、石墨和水添加到样品中，使样品迅速结晶，并在腔内
升温至合适温度，加快结晶过程。
5、夹具的清洗：在滴定液中加入抗蚀剂，夹具进行清洗，确保样品
无几何不良影响。
6、取晶体：用软金属夹具取出晶体，放在清洗过的滴定液中浸泡，
以使样品重新渗透，然后将样品放入滴定液腔中，进行滴定，使样品表面
无污染物。
7、安装样品：用金刚石夹具将样品安装在金刚石台子上，并将其固定，以保证样品的准确安装。
透射电镜生物样品前处理步骤
透射电镜样品制备步骤取材醛类前固定缓冲液漂洗饿酸固定（后固定）缓冲液漂洗脱水剂梯度脱水丙酮/环氧丙烷臵换浸透（先于不同比例包埋剂-脱水剂再纯包埋剂长时间浸透）加热聚合修快超薄切片铀铅染色1、取材：4℃冰块上迅速取材，1mm3大小，立即放入2.5%戊二醛溶液中固定2-4h(4℃可保存1-2周，冷冻可保存2年)注：不可用自来水冲洗，被钳、镊夹取造成机械损伤的组织不可部分可取较大面积，但厚度必须小于1mm（戊二醛固定能力小于0.5mm）脑、胰等柔软组织先切成较大厚片于戊二醛固定数分钟增加硬度，再切成小块臵于新的戊二醛固定液小肠、周围神经、肌肉等方向性、易扭曲样本可绑在小波棒上固定，待硬化后纵行方向切成长方形固定2、漂洗：牙签取出样品至新的1.5ml离心管，用0.1M pH7.0磷酸缓冲液（PBS）漂洗样品三次（摇床），每次15min3、锇酸固定：1%锇酸溶液固定样品1-2h（临用前计算用量≤50ul/样，用0.1M PBS将2%锇酸稀释至1%，通风橱操作）注：饿酸固定时间过长会导致脂蛋白复合体溶解，使组织变脆，不利于切片3、再漂洗：吸出固定液，用0.1M pH7.0 PBS漂洗样品三次，每次15min注：漂洗以清除固定液，避免产生沉淀物干扰结构观察骨组织漂洗后需脱钙，EDTA-2Na脱钙液4、脱水剂梯度脱水：用梯度浓度（50%，70%，80%，90%和95%）乙醇溶液对样品进行脱水处理，每个浓度处理15min再用100%乙醇处理20min （乙醇细胞内抽提少，但与包埋剂相容性差）最后用纯丙酮处理20min（若包埋剂为Epon改用环氧乙烷臵换；Cell的固定脱水无需臵换）注：脱水以清除游离水以便包埋剂均匀渗透；脱水剂易吸收空气中水分，密封，臵换时应该迅速由低到高逐级脱水而不能急剧脱水，更换溶液时应迅速，以免组织内外产生气泡。
植物组织脱水时间延长，100%脱水剂中加入烤干的无水CuSO4、无水Na2SO45、包埋剂梯度渗透：①用包埋剂丙酮混合液（V/V=1/1）处理样品1h：计算用量80ul/样再配制(参考样品大小)②用包埋剂丙酮混合液（V/V=3/1）处理样品3h：计算用量80ul/样再配制(参考样品大小)③纯包埋剂渗透样品过夜：将样品移至干燥的新离心管中，常温过夜(所用器具均应干燥)注：样品周围不能有气泡6、加热聚合：牙签取出经渗透处理的样品至0.5ml干燥离心管（预先装入约300 ul包埋剂），加热聚合仪70℃加热过夜。
透射电镜组织处理
透射电镜组织处理
透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope，TEM）是一种强大的显微镜技术，可以对材料的内部结构和组织进行高分辨率的观察。
为了进行透射电镜观察，材料通常需要经过一系列处理步骤以准备样品。
下面是一般的透射电镜组织处理步骤：
1.采样和切片：从原始材料中采集要观察的样品，并使用显
微切割机或离心切片机将样品切片成适当的厚度（通常是
几十到几百纳米）。
2.修剪和固定：根据需要，选择感兴趣的样品区域，修剪并
将其固定在载玻片或网状膜上，以便在电镜中进行观察。
3.固定剂处理：为了保持样品的原始结构和形态，通常使用
特定的固定剂处理样品。
例如，常用的固定剂有冷冻醇、
蛋白质交联剂（如缩醛或戊二醛）等。
4.重金属染色：为增加样品的对比度，某些样品可能需要进
行染色处理。
重金属染色剂（如铀酸或铋酸）通常用于染
色，以增强电子束与样品的相互作用。
5.脱水和浸透：为了进一步固化样品并保持其结构，通常使
用乙醇或丙酮等有机溶剂进行脱水处理，并使用一些合适
的浸透剂（如酮树脂或环氧树脂）浸透样品。
6.切片和显影：将浸透好的样品切成适当的薄片（通常是50
至100纳米），并使用硝酸铋等显影剂处理样品，以增强
对比度。
7.观察：将处理好的样品放入透射电镜中，利用电子束穿过
样品观察样品的内部结构和组织。
需要注意的是，透射电镜组织处理的具体步骤和条件可能会根据不同的样品类型和目的而有所不同。
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电镜样品制备步骤
1、取材：放入2.5%戊二醛溶液中固定2-4h(4℃可保存1-2周，冷冻可保存2年)
注：不可用自来水冲洗，被钳、镊夹取造成机械损伤的组织不可
部分可取较大面积，但厚度必须小于1mm（戊二醛固定能力小于0.5mm）
2、漂洗：牙签取出样品至新的1.5ml离心管，用0.1M pH7.0磷酸缓冲液（PBS）漂洗样品三次（摇床），每次15min
3、锇酸固定与再漂洗：1%锇酸溶液固定样品1-2h（临用前计算用量≤50ul/样，用0.1M PBS将2%锇酸稀释至1%，通风橱操作），吸出固定液，用0.1M pH7.0 PBS漂洗样品三次，每次15min
注：漂洗以清除固定液，避免产生沉淀物干扰结构观察
4、脱水剂梯度脱水：用梯度浓度（50%，70%，80%，90%和95%）乙醇溶液对样品进行脱水处理，每个浓度处理15min
再用100%乙醇处理20min （乙醇细胞内抽提少，但与包埋剂相容性差）
最后用纯丙酮处理20min（若包埋剂为Epon改用环氧乙烷置换）
注：脱水以清除游离水以便包埋剂均匀渗透；脱水剂易吸收空气中水分，密封，置换时应该迅速由低到高逐级脱水而不能急剧脱水，更换溶液时应迅速，以免组织内外产生气泡。
5、包埋剂梯度渗透：①用包埋剂丙酮混合液（V/V=1/1）处理样品1h：计算用量80ul/样再配制(参考样品大小)
②用包埋剂丙酮混合液（V/V=3/1）处理样品3h：计算用量80ul/样再配制(参考样品大小)
③纯包埋剂渗透样品过夜：将样品移至干燥的新离心管中，常温过夜(所用器具均应干燥)
注：样品周围不能有气泡
6、加热聚合：牙签取出经渗透处理的样品至0.5ml干燥离心管（预先装入约300ul包埋剂），加热聚合仪70℃加热过夜。
7、莱卡EM UC 7超薄切片仪修快、切片（50-70nm）
8、正染色：塑料包埋模具（刀划几道缝隙），染色时温度低影响染色效果，冬天空调
醋酸双氧铀50%乙醇饱和溶液100ul染色（15min-1h），双蒸水冲洗
柠檬酸铅100ul染色15min（极易吸收空气中CO2产生PbCO3,染色时毋对着说话、呼吸，同时放置数块NaOH）9、日立H-7650透射电镜观察
spurr包埋剂配制：ERL 2.5g
NSA 5.2 g 混合均匀后再加入催化剂DMAE，搅拌30min；低温干燥保存
DER 2.5 g
DMAE 0.1g
宜新鲜配制但由于使用期限长(3-4天)，混合物可在使用前一天制备。
Spurr树脂是嗜氧，聚合时不加盖
不同处理方法
7d后将培养基上的纤维素膜取出用水冲洗（除去膜表面杂质和残余培养基），浸泡于0.1mol/L浓度的NaoH溶液80℃保温一小时（去除非纤维结构和残余菌体），取出用去离子水冲洗至pH中性后干燥
碱煮：浸泡于0.1mol/L浓度的NaoH中，100℃煮沸30min，除去残留菌体与培养基杂质，再用0.5%的乙酸浸泡5min，后用水多次冲洗，至薄膜呈乳白色半透明，用吸水纸吸取表面水分，测试pH值，80℃干燥至恒重水煮：浸泡于蒸馏水中，100℃煮沸30min，后用水多次冲洗，用吸水纸吸取表面水分，测试pH值，80℃干燥至恒重
实验步骤
1，7d后将培养基上的纤维素膜取出用水冲洗，浸泡于0.1mol/L浓度的NaoH，取出冲洗后干燥
2，挖取一小块作为对照组A，电镜下观察微观结构
3，挖取两小块作为实验组B与C，分别碱煮与水煮，之后干燥，电镜下观察微观结构
实际应用
1，细菌纤维素有大表面积网状结构，因此具有很强抗压抗拉能力。
（造纸，纸张耐折度与强度能够大幅度提高）
2，细菌纤维素内部有很多“孔道"，因而有良好的透水和透气性。
（人造皮肤，创可贴，纱布，绷带）。