透射电镜样品制作(2015-12-11)
透射电镜样品制备方法
透射电镜样品制备方法由于电子束穿透能力限制，必须把标本切成厚度小于0.1um以下的薄片才适用，这种薄片称为超薄切片。
常用的超薄切片厚度是50-70nm。
在透射电镜的样品制备方法中，超薄切片技术是最基本、最常用的制备技术。
超薄切片的制作过程基本上和石蜡切片相似，需要经过取材、固定、脱水、渗透、包埋聚合、切片及染色等步骤。
一．取材的基本要求组织从生物活体取下后，如果不立即进行适当处理，会由于细胞内部的各种酶作用，出现细胞自溶现象。
此外还可能由于污染，微生物在组织内繁殖使细胞的微细结构遭受破坏，因此，为了细胞结构尽可能保持天然状态，必须做到快、小、准、冷。
（1）动作迅速，组织从活体取下后应在最短的时间内（争取1分钟内）投入2.5%戊二醛固定液。
（2）所取组织的体积要小，一般不超过1mm*1mm*1mm。
也可将组织修成1mm*1mm*2mm大小长条形。
因为固定剂的渗透能力较弱，组织块如果太大，块的内部将不能得到良好的固定。
（3）机械损伤要小，解剖器械应锋利，操作宜轻，避免牵拉、挫伤与挤压。
（4）操作最好在低温（0℃~4℃）下进行，以降低酶的活性，防止细胞自溶。
（5）取材部位要准确。
二．取材方法将取出的组织放在洁净的蜡版上，滴一滴预冷的固定液，用新的、锋利的刀片将组织切下并修小，然后用牙签或者镊子将组织块移至盛有冷的固定液的1.5ml离心管中。
如果组织块带有较多的血液和组织液，应先用PBS洗几遍，然后切成小块固定。
1.动物及人体组织的取材（在冰浴上进行）动物组织的取材，应麻醉（1%戊巴比铵5ml/kg体重腹腔注射）或断头急性处死，解剖出所需器官，用解剖剪刀剪取一小块组织，放在干净的纸板上，滴一滴冷却的固定液，用新的、无油污的锋利双面刀片将材料切成大约1mm宽，2~3mm长的小块并从中选出受损伤较小的小条，再将其切成1mm3的小块，最后用牙签将这些小块逐一放入盛有预冷的、新鲜固定液的1.5ml管内，放入冰箱冷藏室低温固定（0~4℃）2-4小时或以上。
透射点镜的生物样本的制样过程
透射电镜生物样品制作过程透射电镜生物样品制作过程大致经过取材、固定、脱水、浸透、包埋、切片及染色等步骤。
一. 取材取材时要注意的要点是：快、小、冷、净、准、避免机械损伤。
取材方法：将固定液滴在冰台上的卡片上，在麻醉后的动物身上快速用剪刀剪取一块组织，用预冷的过的缓冲液将剪下的组织洗净，迅速放到卡片上的固定液中，用刀片切去被镊子夹到和剪刀剪过的组织，后按实验的目的将组织切成0.5~1mm2的立方或横截面为1mm2的长方体。
用牙签将切好的组织块转移到装有固定液的小瓶中，贴好标签并置于4℃的冰箱中。
二．固定以下操作尽可能在4℃的环境下，使用的溶液也要保存在4℃的冰箱中。
1、戊二醛固定：用镊子轻轻的将组织块从固定液中取出，放在卡片上的固定液中，利用双面刀片把组织块切成小块状，放进盛有1~1.5ml的0.1%的戊二醛的固定液的细管中，将吸管放进真空箱中，将大气压抽到760托后取出，使组织块在戊二醛溶液中固定1小时。
2、漂洗：经戊二醛固定的组织块要用1~1.5ml的0.1%PBS缓冲溶液漂洗，漂洗的次数为5次，在漂洗到第四次时可以将组织留在PBS漂洗液中过夜，放入4℃的冰箱中。
第二天早晨再进行第五次漂洗。
3、四氧化锇固定：向漂洗过的组织中加入0.5ml的0.1%四氧化锇固定液，固定时间为2个小时。
由于四氧化锇具有毒性，因此操作在通风橱里进行。
4、漂洗四氧化锇：用0.1%PBS缓冲溶液漂洗剩余的四氧化锇，然后再漂洗两次，其时间间隔为10min。
三．脱水为了保证包埋介质完全渗入组织内部，必须事先将组织内的水分驱除干净，即用一种和水及包埋剂均能相混溶的液体来取代水，常用的脱水剂是乙醇和丙酮。
1、酒精脱水:用浓度梯度依次为30%、50%、70%、90%的酒精，依次浸泡组织，其浸泡的时间一般为10min。
当在70%梯度的酒精时，样品可以放置过夜。
2、丙酮脱水：用浓度梯度为90%、100%的丙酮浸泡组织，在纯丙酮中浸泡三次。
透射电镜样品制备
（2）浸透、包埋具体步骤：
① 浸透： a、包埋液与环氧丙烷1：1，37℃或常温1小时。 b、包埋液与环氧丙烷3：1，37℃或常温5小时或过夜。 c、纯包埋液37℃5小时，摆床或振荡器上浸透。
② 包埋与固化： 组织块用牙签挑入包埋管中，注满包埋液，置温箱
中 固 化 。 37℃ 、 12 小 时 后 ， 移 入 45℃ ， 24 小 时 ， 60℃，24小时。
5．超薄切片
（1）制备超薄切片的准 备
1）金属载网：
耐高温，无磁性；平整； 网孔大小合适，孔间距小， 价格便宜。 (一般直径3mm， 内有网孔200～300个)
50%→70%→80%→90%→无水乙醇（或丙酮）（2～3次） 每步10～20分钟（培养细胞时间可短些，致密组织时间长些）， 除无水乙醇（或丙酮）在室温下进行外，其余均应在4℃下进行。
可在70%乙醇中加2%铀盐块染：电子染色。
4．浸透与包埋：
是将组织块制成能进行超薄切片的硬块。
（1）包埋液的组成：
捞片——染色
6．超薄切片染色（正染）
染色的目的： 利用重金属盐与组织细胞的不同成份呈不同程
度的结合或吸附，从而造成这些成份对电子散射 能力的差异，散射电子多的结构在荧光屏上的图 像深暗，称电子密度高;反之即为浅亮，电子密度 低，从而起到增强图像反差的作用。
6．超薄切片染色（正染）
重金属盐有铀盐（如醋酸双氧铀）和铅盐（枸 椽酸铅）等。
【2】常用固定剂的特点
（1）戊二醛（Glutraldehyde） 1）2.5%戊二醛固定液的配制（见书） 2）固定原理及优缺点
透射电镜样本的制备
➢超薄切片制样 ➢负染
超薄切片
由于电子的穿透能力弱，一般的组织细胞的切片，无法在 电镜下获得清晰的图像。阻碍了电子显微镜的发展。
1957年，英国Huxley发明超薄切片机。
超薄切片制片过程
取材
固定
染色
切片
脱水
浸透 包埋
取材
快小冷准净
取材
迅速
部位 少带
放入
0.5-
低温 准确 血液
5mL 10mL 20mL 30mL 40mL 50mL
2.495 0.62 1.885 0.085 2.57 0.31 2.12 0.085 2.425 0.925 1.65 0.085
4.99 9.98 14.97 19.96 24.95 1.24 2.48 3.72 4.96 6.2 3.77 7.54 11.31 15.08 18.85 0.17 0.34 0.51 0.68 0.85 5.14 10.28 15.42 20.56 25.7 0.62 1.24 1.86 2.48 3.1 4.24 8.48 12.72 16.96 21.2 0.17 0.34 0.51 0.68 0.85 4.85 9.7 14.55 19.4 24.25 1.85 3.7 5.55 7.4 9.25 3.3 6.6 9.9 13.2 16.5 0.17 0.34 0.51 0.68 0.85
Epon812 DDSA（十二烷基琥珀酸酐） MNA （甲基内次甲基邻苯二甲酸酐） DMP-30（2,4,6三，二甲氨基甲基苯酚）
固化剂：控制软度 固化剂：控制硬度 加速剂
包埋剂配方
季节配比 包埋液成份
春秋 夏 冬
Epon812 DDSA MNA DMP-30 Epon812 DDSA MNA DMP-30 Epon812 DDSA MNA DMP-30
透射电镜样品制备步骤
透射电镜样品制备步骤透射电镜是一种重要的材料表征技术，它利用电子的波动性和微粒性来观察材料的结构和性质。
为了能够使用透射电镜观察样品，首先需要对样品进行制备。
透射电镜样品制备步骤如下：1.选择合适的样品：透射电镜样品可以是固体、液体、薄膜或纳米颗粒等。
根据研究目的和样品性质选择合适的样品。
2.样品预处理：根据样品性质的不同，进行必要的预处理。
例如，对于固体样品，可以选择切割、抛光或电解抛光等方法来得到平滑的表面。
3.样品固定：将样品固定到透射电镜样品架上。
不同的样品有不同的固定方法。
例如，对于固体样品，可以使用导电胶将其固定在样品架上。
4.薄层制备：对于厚度过大的样品，需要将其制备成透明的薄层以便透射电镜观察。
常用的方法有机械研磨、电子束刻蚀或离子束刻蚀等。
5.样品清洁：将样品放入超声波清洗机中进行清洗，以去除可能附着在样品表面的杂质或污染物。
6.特殊处理：如果需要对样品进行特殊处理，例如加热、冷冻处理或受到特定环境气氛的影响等，根据需要进行相应的处理。
7.样品干燥：将样品放入真空或氮气环境中，以确保样品干燥。
避免样品受到水汽的污染。
8.获得薄片：使用切片机将固态样品切割成适当厚度的薄片。
为了获得高质量的薄片，可以选择特殊的切片工具和技术，例如离子束切片或低速钻磨切片。
9.薄片形状整理：使用不同的研磨和抛光方法，将薄片的形状和表面进行调整，以确保样品的平滑度和一致性。
10.网格制备：将薄片粘贴在透射电镜网格上。
网格可以增强样品的稳定性和保护，同时提供用于定位和标识的标记。
11.后续处理：根据研究目的和透射电镜分析的要求，可以对样品进行进一步处理。
例如，可以进行染色、脱膜、溅射或腐蚀等处理。
以上是透射电镜样品制备的一般步骤。
不同样品和研究目的可能会有所不同。
因此，根据具体的研究需求和样品特点，制备过程可以做相应的调整和优化。
透射电镜样品制备方法
透射电镜样品制备方法透射电镜（Transmission Electron Microscope，简称TEM）是一种高分辨率的显微镜，能够观察到纳米级别的细微结构。
在进行透射电镜观察之前，制备样品是非常关键的一步。
本文将介绍透射电镜样品制备的方法，希望能够对相关研究者提供一些参考和帮助。
首先，样品的制备需要从样品的选择开始。
在透射电镜观察中，样品通常是非晶态材料、纳米颗粒、生物样品等。
根据需要观察的对象，选择合适的样品非常重要。
在选择样品时，需要考虑到样品的尺寸、形状、结构等因素，确保样品能够满足观察要求。
其次，样品的制备需要进行样品的处理和制备。
对于非晶态材料和纳米颗粒样品，通常需要将样品制备成薄膜或薄片的形式，以便透射电镜能够观察到样品的内部结构。
而对于生物样品，则需要进行化学固定、脱水、包埋等处理，以保持样品的形态和结构。
在样品的处理和制备过程中，需要严格控制各个步骤的条件和参数，确保样品的质量和结构不受影响。
接着，样品的制备需要进行样品的切割和抛光。
对于非晶态材料和纳米颗粒样品，通常需要使用离心切片机或离心抛光机进行样品的切割和抛光，以获得薄膜或薄片样品。
而对于生物样品，则需要使用超薄切片机进行样品的切割，以获得透明的样品切片。
在样品的切割和抛光过程中，需要严格控制切割和抛光的条件和参数，确保样品的表面平整和光滑。
最后，样品的制备需要进行样品的染色和标记。
对于生物样品，通常需要使用染色剂对样品进行染色，以增强样品的对比度和清晰度。
同时，还可以使用金标记等方法对样品进行标记，以便观察特定结构或分子。
在样品的染色和标记过程中，需要严格控制染色和标记的条件和参数，确保样品的染色和标记效果良好。
综上所述，透射电镜样品制备是透射电镜观察的关键步骤之一。
通过选择合适的样品、进行样品的处理和制备、进行样品的切割和抛光、进行样品的染色和标记等步骤，可以获得高质量的透射电镜样品，为后续的观察和分析提供可靠的基础。
透射电镜的样品制备方法详解
透射电镜的样品制备透射电镜的样品制备是一项较复杂的技术，它对能否得到好的ＴＥＭ像或衍射谱是至关重要的．投射电镜是利用样品对如射电子的散射能力的差异而形成衬度的，这要求制备出对电子束＂透明＂的样品，并要求保持高的分辨率和不失真．电子束穿透固体样品的能力主要取决加速电压，样品的厚度以及物质的原子序数．一般来说，加速电压愈高，原子序数愈低，电子束可穿透的样品厚度就愈大．对于１００～２００ＫＶ的透射电镜，要求样品的厚度为５０～１００ｎｍ，做透射电镜高分辨率，样品厚度要求约１５ｎｍ（越薄越好）．透射电镜样品可分为：粉末样品，薄膜样品，金属试样的表面复型．不同的样品有不同的制备手段，下面分别介绍各种样品的制备．（１）粉末样品因为透射电镜样品的厚度一般要求在１００ｎｍ以下，如果样品厚于１００ｎｍ，则先要用研钵把样品的尺寸磨到１００ｎｍ以下，然后将粉末样品溶解在无水乙醇中，用超声分散的方法将样品尽量分散，然后用支持网捞起即可．（２）薄膜样品绝大多数的ＴＥＭ样品是薄膜样品，薄膜样品可做静态观察，如金相组织；析出相形态；分布，结构及与基体取向关系，错位类型，分布，密度等；也可以做动态原位观察，如相变，形变，位错运动及其相互作用．制备薄膜样品分四个步骤：ａ将样品切成薄片（厚度１００～２００微米），对韧性材料（如金属），用线锯将样品割成小于２００微米的薄片；对脆性材料（如Ｓｉ，ＧａＡｓ，ＮａＣｌ，ＭｇＯ）可以刀将其解理或用金刚石圆盘锯将其切割，或用超薄切片法直接切割．ｂ切割成φ３ｍｍ的圆片用超声钻或ｐｕｎｃｈｅｒ将φ３ｍｍ薄圆片从材料薄片上切下来．ｃ预减薄使用凹坑减薄仪可将薄圆片磨至１０μｍ厚．用研磨机磨（或使用砂纸），可磨至几十μｍ．ｄ终减薄对于导电的样品如金属，采用电解抛光减薄，这方法速度快，没有机械损伤，但可能改变样品表面的电子状态，使用的化学试剂可能对身体有害．对非导电的样品如陶瓷，采用离子减薄，用离子轰击样品表面，使样品材料溅射出来，以达到减薄的目的．离子减薄要调整电压，角度，选用适合的参数，选得好，减薄速度快．离子减薄会产生热，使样品温度升至１００～３００度，故最好用液氮冷却样品．样品冷却对不耐高温的材料是非常重要的，否则材料会发生相变，样品冷却还可以减少污染和表面损伤．离子减薄是一种普适的减薄方法，可用于陶瓷，复合物，半导体，合金，界面样品，甚至纤维和粉末样品也可以离子减薄（把他们用树脂拌合后，装入φ３ｍｍ金属管，切片后，再离子减薄）．也可以聚集离子术（ＦＩＢ）对指定区域做离子减薄，但ＦＩＢ很贵．对于软的生物和高分子样品，可用超薄切片方法将样品切成小于１００ｎｍ的薄膜．这种技术的特点是样品不会改变，缺点是会引进形变．（３）金属试样的表面复型即把准备观察的试样的表面形貌（表面显微组织浮凸）用适宜的非晶薄膜复制下来，然后对这个复制膜（叫做复型）进行透射电镜观察与分析．复型适用于金相组织，断口形貌，形变条纹，磨损表面，第二相形态及分布，萃取和结构分析等．制备复型的材料本身必须是＂无结构＂的，即要求复型材料在高倍成像时也不显示其本身的任何结构细节，这样就不致干扰被复制表面的形貌观察和分析．常用的复型材料有塑料，真空蒸发沉积炭膜（均为非晶态物质）．常用的复型有：ａ塑料一级复型，分辨率为１０～２０ｎｍ；ｂ炭一级复型，分辨率２ｎｍ，ｃ塑料－炭二级复型，分辨率１０～２０ｎｍ；ｄ萃取复型，可以把要分析的粒子从基体中提取出来，这种分析时不会受到基体的干扰．除萃取复型外，其余复型只不过是试样表面的一个复制品，只能提供有关表面形貌的信息，而不能提供内部组成相，晶体结构，微区化学成分等本质信息，因而用复型做电子显微分析有很大的局限性，目前，除萃取复型外，其他复型用的很少．。
透射电镜样品制备
透射电镜试样制备一、实验内容及目的了解透射电镜对试样的要求，熟悉透射电镜试样的制备过程，制备一个合格的透射电镜试样。
二、薄膜样品的制备用于透射电镜下观察的试样厚度要求在50-200nm之间，试样的制备过程大致可以分为以下三个步骤：第一步从实物或大块样品上切割厚度为0.3-0.5mm厚的薄片。
电火花线切割法是目前用得最广泛的方法，它是用一根往返运动的金属丝作切割工具，以被切割的样品作阳极、金属丝作阴极，两极间保持一个微小的距离，利用其间的火花放电进行切割。
电火花切割可切下厚度小于0.5mm的薄片，切割时损伤层比较浅，可以通过后续的磨制或减薄过程去除。
电火花切割只能切割导电样品，对于陶瓷等不导电样品可用金刚石刃内圆切割机切片。
第二步样品薄片的预减薄。
预减薄的方法有两种，即机械法和化学法。
机械法是通过手工研磨来完成的，把切割好的薄片一面用粘接剂粘在样品座表面，然后在水砂纸磨盘上进行研磨减薄。
应注意把样品平放，不要用力太大，并使它充分冷却。
减薄到一定程度时，用溶剂把粘接剂溶化，使样品从样品座上脱落下来，然后用同样方法研磨另一个面直至样品被减薄至规定的厚度。
（如果材料较硬，可减薄至70μm左右；若材料较软，则厚度不能小于100μm。
另一种预先减薄的方法是化学薄化法。
这种方法是把切割好的金属薄片放入配制好的化学试剂中，使它表面受腐蚀而急需减薄。
因为合金中各组成相的腐蚀倾向是不同的，所以在进行化学减薄时，应注意减薄液的选择。
化学减薄的速度很快，因此操作时必须动作迅速。
化学减薄的最大优点是表面没有机械硬化层，减薄后样品的厚度可以控制在20-50μm 。
经化学减薄的样品最终抛光穿孔后，可供观察的薄区面积较大。
但是化学减薄时必须事先把薄片表面充分清洗，否则将得不到满意的结果。
第三步最终减薄目前效率最高和操作最简便的方法是双喷电解抛光法，图为一台双喷式电解抛光装置的示意图。
将预先减薄的样品剪成直径为3mm的圆片,装入样品夹持器中。
透射电镜样品制备方法
透射电镜样品制备方法透射电镜（Transmission Electron Microscopy，简称TEM）是一种高分辨率的显微镜，能够观察到原子尺度的物质结构。
在进行透射电镜观察前，样品的制备是至关重要的一步。
本文将介绍透射电镜样品制备的方法，希望能够帮助大家更好地进行样品制备工作。
首先，样品的制备要求样品具有一定的薄度。
因此，在进行透射电镜观察前，通常需要将样品切割成极薄的切片。
对于生物样品，可以采用超薄切片机进行切割；对于金属、陶瓷等样品，可以采用离子蚀刻或机械打磨的方法制备薄片。
在进行切割或打磨时，需要保持样品表面的平整和光洁，以确保透射电镜观察时获得清晰的图像。
其次，样品的制备还需要考虑到样品的固定和染色。
对于生物样品，固定和染色是非常重要的步骤。
固定可以保持样品的形态和结构不变，而染色则可以使样品在透射电镜下更易于观察。
常用的固定剂包括乙醛、戊二醛等，而染色剂则根据需要选择不同的染色方法。
另外，样品的制备还需要考虑到样品的支撑。
在进行透射电镜观察时，样品通常需要支撑在一种载体上，以便于放置在透射电镜的样品台上。
常用的载体包括碳膜、网格和硅片等。
在选择载体时，需要考虑到载体的透明性、机械强度和热稳定性等因素。
最后，样品的制备还需要考虑到真空条件。
透射电镜通常在高真空环境下进行观察，因此样品制备时需要保证样品的干燥和密封。
特别是对于生物样品，需要进行脱水和干燥处理，以避免在真空环境下产生气泡或水蒸汽，影响透射电镜观察效果。
总之，透射电镜样品制备是透射电镜观察工作中至关重要的一步。
在进行样品制备时，需要考虑到样品的薄度、固定和染色、支撑和真空条件等因素，以确保最终获得清晰、准确的透射电镜图像。
希望本文介绍的方法能够对大家进行透射电镜样品制备工作有所帮助。
透射电子显微镜样品制备
截面样品专用胶
G1 . G2 (Gatan公司)
M-Bond600/610
G1胶的优点：
1）固化快130°5-10分钟
2）保存时间长（室温一年）
3）高温稳定性好：300°工作十几个小时,400 °几小时
（可在TEM 加热台上升温）
三、薄膜样品——截面样品的制备
截面样品的制备
切好的截面样品重复平面样品的制备工艺,当
3. 凹坑
凹坑后的样品
4. 离子减薄
目的：TEM样品的最终减薄，以获得电子束透明的观察区
域。
特点：不受材料电性能的影响，即不管材料是否导电，金
属或非金属或者二者混合物，不管材料结构多复杂均可用
此方法制备薄膜。制样时惰性气体介质（氩气）对样品组
织结构无影响。
原理：在电场作用下氩气被电离成带Ar+的氩离子，带着一
大钉薄深度：1.1mm×tan4°=77（μm）。因此样品的钉
薄深度不能大于77微米，否则离子束打不到样品中心。
钉轮直径和钉薄深度的关系
不同的钉轮直径可获得的钉薄深度不同
10mm直径的钉轮，钉薄
的深度大于77μm一般不用。
15mm直径的轮子在实践
中效果不错。
钉薄前样品的最佳厚度
起始样品厚度应是钉薄深度
以及氧化膜复型。
一级塑料复型是对样品表面形貌的简单的复制，它表面的形貌
与样品的形貌刚好互补，所以称之为负复型。其厚度可以小到
100纳米。
碳膜一级复型是一种正复型，它与塑料一级复型的区
别是：
1.碳膜复型的厚度基本上相同，而塑料复型的厚度随试样位置
透射电镜样品制备实验报告
透射电镜样品制备实验报告1. 引言透射电镜（Transmission Electron Microscope, TEM）是一种常用的高分辨率显微镜，常用于观察材料的微观结构和成分。
在进行透射电镜观察前，我们需要制备透射电镜样品，确保样品的质量和制备过程的可重复性。
本实验报告将详细介绍透射电镜样品制备的步骤和注意事项。
2. 实验步骤2.1 样品选择与切割在制备透射电镜样品时，我们首先需要选择适合的材料。
根据需要观察的性质和结构，选择合适的材料样品。
常用的样品包括金属薄膜、纳米材料等。
选定样品后，使用适当的工具将样品切割成适当大小的块状。
2.2 样品固定将切割好的样品固定在透射电镜网格上。
网格有不同规格和材质可供选择，根据实际需要选择合适的网格。
将样品小心地放置在网格上，确保样品的平整和固定。
2.3 样品薄化透射电镜观察需要样品足够薄。
样品薄化的方法有多种，常用的方法包括机械研磨和电解腐蚀。
在机械研磨过程中，我们可以使用研磨装置对样品进行逐渐薄化，直到达到所需的厚度。
电解腐蚀方法则通过在特定电解液中进行电解，使样品表面逐渐溶解，从而达到薄化的目的。
2.4 样品清洗和干燥薄化后的样品需要进行清洗，以去除可能存在的污染物或杂质。
使用合适的溶剂对样品进行清洗，注意避免破坏样品。
清洗后，将样品放置在洁净的环境中进行干燥。
干燥的方法可以采用自然风干或使用特定的干燥设备进行加速干燥。
2.5 网格装配将制备好的样品网格装配到透射电镜样品架上。
注意避免样品与其他物质接触，保持样品的干净和完整。
3. 注意事项在进行透射电镜样品制备实验时，需要注意以下事项：•实验室要求：在有经验的指导下进行实验，遵守实验室的安全规定和操作规程。
•样品选择：根据需要观察的性质选择合适的材料样品。
•切割技术：使用适当的切割工具和技术，确保样品切割的平整和准确。
•样品固定：确保样品固定在透射电镜网格上，避免样品松动或移位。
•薄化技术：选择合适的薄化方法，并控制好薄化的厚度，以确保样品达到所需的薄度。
纳米材料透射电镜样品制备方法
纳米材料透射电镜样品制备方法
制备纳米材料透射电镜样品是一项复杂的过程，需要精密的操
作和合适的设备。
以下是一种常见的制备方法：
1. 样品准备，首先，需要选择合适的纳米材料，例如金属纳米
颗粒或纳米结构的半导体材料。
然后，将样品分散在适当的溶剂中，如乙醇或丙酮，以获得均匀的分散液。
2. 标本制备，将分散的纳米材料溶液滴在碳膜覆盖的透射电镜
网格上。
通过自然干燥或者较低温度的热处理，使样品均匀地分布
在网格上，并且避免聚集和团聚。
3. 真空干燥，将样品置于真空中进行干燥，以去除溶剂和任何
可能的残留物，确保样品的纯净度和稳定性。
4. 透射电镜观察，将制备好的样品放入透射电镜中进行观察。
在观察之前，通常需要使用离子束或者溅射技术制备悬臂梁样品，
以确保样品的薄度和透明度。
此外，还有一些其他的制备方法，如冷冻切片法、离子磨薄法
等，可以根据具体的样品特性和研究需求选择合适的方法。
在制备过程中，需要注意样品的稳定性和纯净度，避免杂质的引入和样品的变形。
同时，也需要根据透射电镜的要求，调整样品的厚度和形貌，以获得清晰的观察结果。
总的来说，纳米材料透射电镜样品的制备是一个细致而关键的步骤，对于后续的观察和分析具有重要意义。
透射电镜的制样方法
形貌的细节特征。 • 常用的复型材料是对电子束透明的薄膜——非晶碳膜、各种塑料薄膜和氧化物薄
膜）。
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三、间接样品(复型)的制备
• 在电镜中易起变化的样品和难以制成薄膜的试样采用此方法. • 表面显微组织浮雕的复型膜，只能进行形貌观察和研究，不能研究试样的成分
分布和内部结构。
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复型的种类
• 按复型的制备方法，复型主要分为：
•
一级复型
•
二级复型
•
萃取复型（半直接样品）
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电解双喷 1 。 电 解 双 喷 时 ， 一 般 要 进 行 冷 却 ， 常 用 液 氮 加 酒 精 的 方 法 来 冷 却 ， 尤 其 是 钢 铁 材 料 ， 必 须 冷 却 ， 而 且
最好用液氮。 2。电解双喷时，要调好电流和电压的值，只有电流和电压的值处于电解抛光的平台时，才能制造出好
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粉末（纤维）样品的断面
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2. 晶体薄膜样品
• 块状材料多采用此方法。 • 通过减薄制成对电子束透明的薄膜样品。 • 薄膜样品制备方法要求： ①薄膜样品的组织结构必须和大块样品相同，且制备过程中不引起材料组织的变
化。 ② 薄，相对电子束而言必须有足够的“透明度”，且避免薄膜内不同层次图像的
重叠，干扰分析。 ③ 具有一定的强度。
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晶体薄膜法
• 薄膜样品制备步骤： ① 切取：切取薄块（厚度<0.5mm） ② 预减薄：用机械研磨、 Dimpling、化学抛光等减薄成“薄片”（0.1mm） ③ 终减薄：用电解抛光、离子轰击减薄成“薄膜”（<500nm）（视材料而
透射电镜样品制备
透射电镜样品制备引言透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope, 简称TEM)是一种非常强大的高分辨率成像技术，可以用于观察材料的结构和组织，以及研究纳米级别的材料特性。
在使用TEM进行实验之前，必须制备一种称为透射电镜样品的特殊样品。
透射电镜样品制备的关键是制备出足够薄的样品，以便电子可以通过样品而不会被散射或吸收。
本文将介绍透射电镜样品制备的常用方法和步骤。
方法1. 切割样品透射电镜样品通常需要从大块的材料或器件中切割出来。
首先，选择合适的切割工具，如金刚石刀片或钨丝刀，以确保能够切割出薄片。
然后，将待切割的材料固定在切割台上，并将其固定好。
使用切割工具沿着所需的方向切割材料，控制切割角度和速度，制备出较薄的样品。
2. 技术腐蚀技术腐蚀是一种常用的透射电镜样品制备方法，可以在保持样品形状和结构的情况下，去除样品表面的杂质。
首先，将样品放置在腐蚀液中，如酸性或碱性溶液中。
然后，根据所需的腐蚀速率和选择的溶液，控制腐蚀时间，使材料的表面逐渐溶解。
腐蚀完成后，取出样品并用纯水冲洗，最后用热空气干燥。
3. 离心旋涂法离心旋涂法是一种常用的制备透射电镜样品的方法，适用于制备薄膜和纤维样品。
首先，将待制备的样品溶液或悬浮液滴在旋涂机的旋盘中心。
然后，启动旋涂机，使旋盘高速旋转。
在旋涂过程中，液体会在旋盘边缘形成薄膜或纤维，而溶剂则会挥发掉。
当样品完全干燥后，取出样品即可。
4. 离子磨蚀离子磨蚀是一种制备透射电镜样品的高级方法。
它可以控制样品的厚度和形状，并在其表面形成平坦的区域。
首先，将样品放置在磨蚀仪中，并选择合适的离子束参数。
然后，启动磨蚀仪，使离子束磨蚀样品表面。
通过控制磨蚀时间和离子束能量，可以获得所需的样品厚度和表面平整度。
结论透射电镜样品制备是进行TEM实验的关键步骤之一。
通过选择合适的方法和技术，可以制备出足够薄的样品，以便电子能够透射而不被散射或吸收。
透射电镜常规样品制备流程
透射电镜常规样品制备流程
透射电镜是电子显微镜技术中最重要的一种技术，普通晶体样品的常
规样品制备流程如下：
1、样品的准备：将样品、水、石蜡、助融剂(如NaCl)、磷酸盐、石墨、甲醛和电子源材料(碳粉)准备好备用，并配合温度控制装置使用。
2、样品处理：将样品用接近样品发热点的温度处理，一般为200?C，把样品放入室温保温的石蜡，再将该石蜡分别放入不同的温度槽，如助融
剂的温度可以高于样品放置温度。
3、镀膜：将样品放置在硝酸银或碳材料的固体膜下，镀膜时，将碳
气体经过电子枪加热，形成形状与原子相同的表面。
4、结晶：首先需要将样品放置在一定温度和压力下，进行结晶，再
将研磨剂如磷酸盐、石墨和水添加到样品中，使样品迅速结晶，并在腔内
升温至合适温度，加快结晶过程。
5、夹具的清洗：在滴定液中加入抗蚀剂，夹具进行清洗，确保样品
无几何不良影响。
6、取晶体：用软金属夹具取出晶体，放在清洗过的滴定液中浸泡，
以使样品重新渗透，然后将样品放入滴定液腔中，进行滴定，使样品表面
无污染物。
7、安装样品：用金刚石夹具将样品安装在金刚石台子上，并将其固定，以保证样品的准确安装。
透射电镜样品的制备
第二节透射电镜样品的制备一、表面复型和萃取复型技术（一）复型样品成像原理复型样品是一种间接试样，是用中间媒介物（碳、塑料薄膜）把样品表面浮雕复制下来，通过对浮雕的观察间接地得到样品表面组织形貌。
一定能量的入射电子照射到样品上要受到样品内原子核与核外电子的作用，产生弹性散射与非弹性散射。
非晶体复型样品成像主要取决于入射电子与试样中原子相互作用所产生的电子散射。
电子束穿过样品时在样品厚的区域或原子序数大的区域受散射程度大，反之则小。
这就是所谓的质厚衬度效应。
如果在样品下方加一光阑，那么散射角大于光阑孔径角的电子被光阑挡住或吸收，而不能穿过光阑孔参与成像。
散射角小于或等于光阑孔径角的电子就能穿过光阑孔参与成像，因此在荧光屏上就形成了明暗不同的衬度，产生了样品的图像。
图5—10为复型样品成像示意图。
（二）复型样品制备技术1．对金相试样的要求电镜的高分辨本领使它能够显示出金属组织的微细特征。
为使组织微细特征不在制备试样时失真，对图5—10 复型样品成像示意图金相试样的制备要求严格。
否则会造成假像影响对观察结果的分析。
试样要细心磨制，仔细抛光，力求避免产生微小的磨痕及变形层。
浸蚀剂与做金相试样时所用的浸蚀剂相同，浸蚀应浅些，这样可保留组织细节。
如果浸蚀过重就可能引起相界、晶界的过浸蚀，导致失真、脱落，甚至会出现腐蚀坑等假象。
2．AC纸的制作AC纸就是醋酸纤维素薄膜，是用6%醋酸纤维素丙酮溶液制作的塑料薄膜。
为了使AC 纸质地柔软、渗透性强并具有蓝色，在所配制的溶液中再加入2%磷酸三苯脂和几粒甲基酯。
待醋酸纤维素在丙酮中溶解后将其倒在干净、平滑的玻璃板上，倾斜转动玻璃板，使溶液均匀展开。
然后用玻璃钟罩扣上，让钟罩下边与下板间留有一定间隙以便于丙酮挥发。
大约经过24小时后AC纸干透，用小刀片轻划AC纸边缘，小心揭下即可。
3．塑料—碳二级复型塑料—碳二级复型由于其制备过程不损坏金相试样表面，重复性好，供观察的第二级复型—碳膜导电、导热性好，在电子束照射下较为稳定，因而得到广泛的应用。
透射电镜样品制备方法
透射电镜样品制备方法透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope，简称TEM）是一种利用电子束穿透样品而观察样品结构的高分辨率显微镜。
为了获得高质量的透射电子显微镜图像，样品制备是非常重要的一步。
下面将介绍几种常见的透射电镜样品制备方法。
1.薄片制备法：薄片制备法是最常用的透射电镜样品制备方法之一、首先，将待观察的材料切割成薄片，通常使用切片机或者离心切片机进行切割。
然后，将薄片放置在网格上，并用显微镊夹持住。
接下来，使用离心机将网格和薄片一起离心，以去除多余的液体。
最后，将网格放入透射电镜中进行观察。
2.离解法：离解法适用于那些不易制备成薄片的样品。
首先，将待观察的样品制备成溶液或者悬浮液。
然后，将溶液滴在碳膜覆盖的网格上。
接下来，使用离心机将网格和溶液一起离心，使溶液在网格上均匀分布。
最后，将网格放入透射电镜中进行观察。
3.冻结法：冻结法适用于那些需要观察生物样品或者水溶液的样品。
首先，将待观察的样品制备成溶液或者悬浮液。
然后，在液氮中冷冻样品，使其迅速冻结成冰。
接下来，使用离心机将冰冻样品离心，以去除多余的液体。
最后，将网格放入透射电镜中进行观察。
4.脂溶法：脂溶法适用于那些不溶于水的样品。
首先，将待观察的样品制备成脂溶液。
然后，将脂溶液滴在碳膜覆盖的网格上。
接下来，使用离心机将网格和脂溶液一起离心，使脂溶液在网格上均匀分布。
最后，将网格放入透射电镜中进行观察。
除了以上几种常见的透射电镜样品制备方法，还有一些特殊的方法，如原位制备法、离子切割法等。
这些方法可以根据实际需求选择使用。
总结起来，透射电镜样品制备是透射电子显微镜观察样品结构的关键步骤。
合适的样品制备方法可以保证获得高质量的透射电镜图像。
不同的样品制备方法适用于不同类型的样品，研究人员可以根据实际情况选择合适的方法进行样品制备。
透射电镜样品制备方法
透射电镜样品制备方法透射电镜（Transmission Electron Microscope，TEM）是一种能够观察物质内部微观结构的高分辨率显微镜，广泛应用于材料科学、生物学、纳米技术等领域。
而透射电镜样品的制备质量直接影响到后续的观察结果。
因此，制备高质量的透射电镜样品至关重要。
下面将介绍一些常用的透射电镜样品制备方法。
首先，对于生物样品的制备，常用的方法是冷冻切片技术。
这种方法能够保持生物样品的原始结构，避免了传统化学固定和脱水过程中可能引起的伪形态。
在冷冻切片过程中，样品被快速冷冻，并在低温下切割成极薄的切片，然后通过透射电镜观察。
这种方法适用于观察生物细胞、组织等样品。
其次，对于材料样品的制备，常用的方法是机械切割和离子蚀刻。
机械切割是指利用超薄切片机或离心切片机将材料切割成极薄的切片，然后通过透射电镜观察。
而离子蚀刻则是利用离子束对材料进行加工，形成极薄的样品。
这两种方法适用于观察金属、陶瓷、半导体等材料样品。
另外，对于纳米材料的制备，常用的方法是原位制备技术。
这种方法通过在透射电镜下直接在样品表面进行原位制备，如原位成膜、原位合成等，可以观察到纳米材料的生长过程和结构特征。
这种方法适用于观察纳米颗粒、纳米线、纳米片等样品。
总的来说，透射电镜样品的制备方法多种多样，选择合适的制备方法需要根据具体样品的性质和要求来确定。
在制备过程中，需要注意样品的预处理、切割、薄化等步骤，确保样品的质量和结构完整。
通过精心制备的透射电镜样品，可以获得清晰、准确的观察结果，为后续的科研工作提供可靠的数据支持。
在透射电镜样品制备过程中，还需要注意操作规范、安全防护等问题，确保实验过程安全可靠。
同时，不同样品的制备方法可能存在差异，需要根据具体情况进行调整和改进。
希望本文介绍的透射电镜样品制备方法能够为相关科研工作者提供一些参考和帮助，促进透射电镜技术的应用和发展。
透射电镜样品制作(2015-12-11)
透射电镜样品包埋块制作原理步骤一、取材：1、动作迅速：组织离体后，应将其快速放入4℃戊二醇固定液中，使组织细胞尽可能保持原来的生活状态。
2、减少损伤：选择锋利切割器械，减少牵拉或挤压组织。
3、组织块大小：取材医生可先切成长条形，然后再修成约1mm3大小。
二、固定：固定目的是把细胞在活体状态时的超微结构细节尽可能完整地保存下来，避免自身酶的分解而出现自溶，或因外界微生物的入侵繁殖而产生腐败，致使细胞的超微结构遭受破坏。
同时也使细胞内的各种成分固定下来，避免以后的冲洗和脱水时溶解和流失。
理想的固定剂应具备以下特点：能够迅速又均匀地渗透到组织结构内；能够稳定细胞各种结构成分，使之在以后处理过程中不致溶解和丢失；对细胞超微结构没有损伤；能供细胞化学测定并能增强图像反差。
当然，满足所有要求的固定剂是不存在的，目前常用固定剂有锇酸和戊二醇。
1.使用锇酸的注意事项：锇酸即四氧化锇，它能和细胞内绝大多部分成分反应，且能够保护脂肪，但对碳水化合物、糖类和核酸保护作用差，锇酸渗透差，分子密度大，经锇酸固定的组织在电镜下能获得较好反差。
锇酸为剧毒、极易挥发的试剂，对呼吸道有强烈刺激作用，必须在通风橱中操作，废液必须收集在密闭容器中。
常用的锇酸溶液为2%的储备液，使用之前需用0.2MPBS稀释成1%的锇酸溶液。
2.戊二醇戊二醇能够稳定糖原，同时保存某些锇酸保护作用差的蛋白质结构，对酶活性破坏小。
对微管、滑面内质网等固定较好，对脂肪保护差，且反差小，因此必须和锇酸配合使用，即“双重固定法”。
3.固定方法：样本先用2.5%戊二醇在4℃下固定2h，经PBS缓冲液多次清洗后再用1%锇酸固定2h。
根据不同组织，可适当延长固定时间。
由于戊二醇能够和锇酸反应产生电子致密的还原锇沉淀，组织经戊二醇固定后，必须将戊二醇清洗干净才能转入锇酸。
此外，锇酸又能和乙醇作用生成沉淀，因此锇酸固定后也应用PBS清洗液进行清洗干净方能进行脱水处理。
一般清洗3次，每次15min左右(或过夜)。
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透射电镜样品包埋块制作原理步骤
一、取材：
1、动作迅速：组织离体后，应将其快速放入4℃戊二醇固定液中，使组织细胞尽可能保持原来的生活状态。
2、减少损伤：选择锋利切割器械，减少牵拉或挤压组织。
3、组织块大小：取材医生可先切成长条形，然后再修成约1mm3大小。
二、固定：
固定目的是把细胞在活体状态时的超微结构细节尽可能完整地保存下来，避免自身酶的分解而出现自溶，或因外界微生物的入侵繁殖而产生腐败，致使细胞的超微结构遭受破坏。
同时也使细胞内的各种成分固定下来，避免以后的冲洗和脱水时溶解和流失。
理想的固定剂应具备以下特点：能够迅速又均匀地渗透到组织结构内；能够稳定细胞各种结构成分，使之在以后处理过程中不致溶解和丢失；对细胞超微结构没有损伤；能供细胞化学测定并能增强图像反差。
当然，满足所有要求的固定剂是不存在的，目前常用固定剂有锇酸和戊二醇。
1.使用锇酸的注意事项：
锇酸即四氧化锇，它能和细胞内绝大多部分成分反应，且能够保护脂肪，但对碳水化合物、糖类和核酸保护作用差，锇酸渗透差，分子密度大，经锇酸固定的组织在电镜下能获得较好反差。
锇酸为剧毒、极易挥发的试剂，对呼吸道有强烈刺激作用，必须在通风橱中操作，废液必须收集在密闭容器中。
常用的锇酸溶液为2%的储备液，使用之前需用0.2MPBS稀释成1%的锇酸溶液。
2.戊二醇
戊二醇能够稳定糖原，同时保存某些锇酸保护作用差的蛋白质结构，对酶活性破坏小。
对微管、滑面内质网等固定较好，对脂肪保护差，且反差小，因此必须和锇酸配合使用，即“双重固定法”。
3.固定方法：
样本先用2.5%戊二醇在4℃下固定2h，经PBS缓冲液多次清洗后再用1%锇酸固定2h。
根据不同组织，可适当延长固定时间。
由于戊二醇能够和锇酸反应产生电子致密的还原锇沉淀，组织经戊二醇固定后，必须将戊二醇清洗干净才能转入锇酸。
此外，锇酸又能和乙醇作用生成沉淀，因此锇酸固定后也应用PBS清洗液进行清洗干净方能进行脱水处理。
一般清洗3次，每次15min左右(或过夜)。
三、脱水：脱水是将组织中的游离水彻底清除的过程。
由于常用的包埋剂，如环氧树脂，大多都是非水溶
性树脂，只有将生物组织中的游离水清除干净，包埋剂才能浸入组织，常用脱水剂是乙醇和丙酮。
乙醇对细胞物质抽提少，组织收缩也少，但它和环氧树脂互溶性差，因此使用乙醇脱水时须用环氧丙烷作为中间溶剂。
丙酮和酒精、环氧丙烷互溶，所以通常先用乙醇后再用丙酮的脱水方法。
急剧脱水会引起细胞收缩，因此应采用逐级脱水(50%-70%-90%-100%乙醇)而不能急剧脱水。
更换溶液时动作要快，特别是不要让组织离开溶液，否则会在组织内外产生气泡；脱水过程中若要长时间停留或过夜，应放在70%乙醇或丙酮中，并在4℃保存。
四、包埋
1.渗透：渗透就是用包埋剂逐渐取代组织中的脱水剂，使细胞内外空隙被包埋剂所填充。
一般可先用环氧丙烷对半稀释的包埋剂浸透1-2h，再用纯包埋剂37℃烤箱渗透2h左右。
包埋剂通常由树脂、硬化剂、增塑剂及催化剂4种试剂按一定比例配制而成。
2.包埋：目的是以包埋剂完全浸透到组织内部，经加温逐渐聚合成坚硬固体。
理想包埋剂应具备的条件：黏稠适中，有良好切割性；能经受电子轰击；透明度较好；对人体无害。
目前常用国产环氧树脂618、Epon812环氧树脂、及低黏度包埋剂Spurr。
3.环氧树脂：环氧树脂为热塑性树脂，主要有两种化学反应基团，即环氧基和羟基。
末端环氧基易与其他含活性氢原子化合物如胺类反应，形成首尾相接的长链状聚合物。
单体中羟基能与酸酐结合，形成分子间横桥连接。
因此，把环氧树脂单体、胺类、酸酐等三者按一定比例混合，加上适当温度，可形成稳定的交
１
链状聚合物。
包埋剂配制及使用过程中的注意事项：
1. 所有容器及玻璃棒等应是清洁和干燥的；
2.配制过程中应搅拌均匀，使用过程中应避免异物，特别是水、乙醇、丙酮等混入包埋剂；
3.配制好的包埋剂应密封保存，避免受潮。
剩余包埋剂可密封并储存在-10—-20℃冰箱中，延长其使用期。
4.常用树脂制方
Epon812环氧树脂：
5.包埋方法
Spurr70℃烤箱内8h即可固化，60℃时间要相应延长，减少DER-736量可增加硬度。
国产树脂618、Epon812环氧树脂需37℃过夜，经45℃12h、60℃24h可固化，干燥存放。
五、切片
1.修快
首先粗修把多余树脂磨掉，然后在双筒镜下把端面修平，使组织面暴露，然后再修成45℃四面锥体。
顶端面可修成长方形或梯形，注意上下面平行。
半薄切片顶端面积以1-2mm2左右为宜，修成直角梯形便于定位。
2.切片操作
固定好组织块，调整刀的高低、角度和刀刃位置，调整刀槽内的液面，调整组织块与刀的距离，选择切片速度及厚度。
可根据干涉色判断切片厚度：灰色40-50nm ；银白色50-70 nm；金黄色70-90 nm；紫色90 nm以上。
灰色、银色较薄，但反差小，金色分辨率低，反差好，紫色太厚，一般不能观察。
六、染色
1.醋酸铀：是目前应用最广泛染色剂，能和大多数成分相结合，对核酸、核蛋白、结缔组织纤维、糖原、
分泌颗粒、溶酶体均可染色，但对膜结构染色效果较差。
醋酸铀在水和乙醇中溶解度较差，一般用50%或70%乙醇或丙酮配制成2%-3%的溶液。
组织块染色1-2h，切片染色30min即可。
长时间染色可引起糖原抽提和组织变形。
2.枸橼酸铅：铅染色其应用也很普遍，它具有很高的电子密度，对细胞超微结构均有广泛亲和力，能提高
细胞膜系统及脂类反差。
铅染液易与空气中二氧化碳接触形成碳酸铅沉淀，污染切片。
一般染10-20min 即可，长时间染色可使反差全部增强，不利于观察。
２
３
枸橼酸铅染液配制：
附表
表1 戊二醛溶液的配制
表2 0.2M 磷酸缓冲液（PBS ）的配制
按下表比例混合A 、B 液后，配成0.2mol/L 的母液，其中pH7.0为常用配方 pH 值 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 A 液 8.0 12.3 18.5 26.5 37.5 49.0 61.0 72.0 81.0 87.0 91.5 94.7 B 液
92.0 87.7 81.6 73.5 62.5 51.0 39.0 28.0 19.0 13.0 8.50 5.30
在缓冲液中加入葡萄糖，蔗糖或氯化钠等均能改变渗透压。
A 液：0.2mol/L 磷酸氢二钠溶液
B 液：0.2mol/L 磷酸二氢钠溶液 Na 2HPO 4 28.4g 或Na 2HPO 4.H 2O 31.61g 或Na 2HPO 4.2H 2O 35.6g 或Na 2HPO 4.7H 2O 53.63g 或Na 2HPO 4.12H 2O 71.64g
加双蒸水至1000mL
NaH 2PO 4 24.0g 或NaH 2PO 4.H 2O 27.6g 或NaH 2PO 4.2H 2O 31.21g
加双蒸水至1000mL
透射电镜样本制备
1.登记好需要制备样本数量及相应位置顺序。
2.摆放好脱水盒，加入适量PBS,依次按顺序转移组织块至脱水盒内。
3.先穿一个空盒作为上盖，再依次把脱水盒穿起来，放入脱水瓶内，加入10mlPBS,4℃存放，过夜，每天换液一次，换液两次。
4.配制脱水剂：PBS、1%锇酸（PBS对半稀释）、双蒸水、50%酒精、70%酒精、90%酒精、100%酒精、50%丙酮、70%丙酮、90%丙酮、100%丙酮（4℃）、100%丙酮（常温）、50%环氧丙烷，共13个，其中第一个PBS 直接用原瓶即可。
5.脱水程序：锇酸1.5h，水1min，其它每步6min。
6.把组织块放入预先环氧丙烷稀释好的包埋树脂中浸透1h。
7.取出脱水盒，先旋转几下，防止组织块贴壁（注意动作要快，如果组织块较多，中间应多次湿润组织快）。
8.把组织依次块放入包埋模具中，过夜浸透。
9.牙签轻轻调整组织块位置，尽量贴边。
10.聚合器中加热聚合：37℃12h、48℃24h、60℃48h。
４。