血液检测原理知识分享

(SSC)
中～强
弱
弱
弱～中
强
弱
成熟 白细胞
中
弱～强 弱～强
FSC：前向散射光
SFL：侧向荧光
WPC散点图 Abn Lymph
HBPlaCst
WBC
BHlPasCt
WBC Abn Lymph
SSC：侧向散射光
HPC散点图
HPC
HPC通道测定时，HPC区域中出现的粒子显示为 紫红色。 (全血模式时显示为红色)。
病例：IG增高病例
镜检图片：
Sysmex仪器对于异常细胞检出的灵敏度为0.7%
WDF通道的要点
①散点图基本上和XE系列的DIFF通道无区别。
②试剂得以改良（溶血剂的作用较XE系列稳定。）
③新的SFLAS算法应用， 使得LY和MO间距拉宽，除散点位置 外还综合散点重心、形态等，使得得以更加明确地划分。
XN2000/3000机型搭配要求
XN9000机型搭配原则
•要符合左高右低搭配的原则，同类型配置原则
可搭配机型
A1 A1 A1 B1 A1 A2 B1 A1 A2 B1 B2 B3 A2 B1 B2 B2 B3 B3 B3 B4 B4 B4 B4 B4
不可搭配机型
A2 A2 B2 B1 B2 B3
病例（一）： (B-CLL)淋系白血病
外周血中，可见白细胞数增加、贫血， 成熟淋巴细胞增加（93％）。淋巴细 胞的体积大约是红细胞体积的2倍左右， 细胞质面积小，嗜碱性弱。核为类圆 形，核染色质浓缩。核仁不显眼。另 外，在标本上可见大量的破碎细胞核 的轮廓。
病例（二）：( AML-M2 )髓系白血病
SFL
WPC 61.1 58.2
RET 203.8
3.3
PLT-F 203.8 18.21
SFL
RBC/PLT
HGB
498.2 746.8
9.3
WBC
9,530 9,530 9,530
RBC
80,500
93,500
PLT
3,220 17,860
3,730
PLT-O 、PLT-F染色试剂的区别
一例烧伤患者的XN PLT-F散点图
Erythrocyt
Fragmentated erythrocytes
Platelets
一例烧伤患者的XE PLT-O散点图
Erythrocyt
Fragmentated erythrocytes
Platelets
使用试剂的区别：
XN PLT-F通道染液 TM
FluorocellPLT 重点突出PLT部分
手动测定
微量测定※2
微量测定※3
（微量采血管测定）
88μL 88μL 88μL 88μL
70μL 70μL
88μL 88μL 88μL
1 mL 1 mL 0.3 mL 160μL
0.3 mL 140μL
（稀释后 ）
1 mL 0.3 mL 160μL
※1 进样器测定：试管架自动传送的进样器测定。 ※2 微量测定：为了减少最低体积（dead volume）、打开采血管盖进行的手动测定。 ※3 微量测定（微量采血管测定）：使用微量采血管进行的检测。开盖测定。 ※4 稀释模式：将血液7倍稀释后进行测定的模式。
SFL：侧向荧光
RET参考范围-卫生 部正在操作。 建议实验室也可建 立自己的参考范围。
网织红细胞检测参数
RET-He:网织红细胞 血红蛋白含量
LFR:低荧光强度网织 红细胞比率
MFR：中荧光强度网 织红细胞比率
网织红 检测参数
HFR:高荧光强度网织 红细胞比率
IRF：未成熟网织红细 胞百分比
RET#% 网织红细胞计数的绝
标志 RET Abnormal scattergram,
Fragments?
染色
白细 胞
网织 红细 胞 红细胞
侧向荧光 (SFL)
前向散射光 (FSC)
强
强
中
强
弱
强
FSC：前向散射光
稀释剂：CELLPACK DFL 染色液：Fluorocell RET
RET散点图
RBC
LFR MFR HFR
PLT-O
5分类 NRBC 0.9%
XN2000
报警信息：
原始细胞？
白细胞散点图异常
核左移？单核细胞增加？
幼稚细胞存在？
1.WDF通道：IG和HFLC的定量参数
检测参数： NEUT, LYMPH, MONO, EO, IG
•WDF通道中，对白细胞进行计 数并分类为中性粒细胞、淋巴细 胞、单核细胞以及嗜酸性粒细胞 •同时定量检出幼稚粒细胞(IG% ，#）以及异型淋巴细胞（ HFLC%，#）等的异常细胞。 •对相关异常参数 的复检规则制 定更具定量化。
RBC/PLT
1.半导体激光+流式细胞
主要原理
WNR WDF RET/PLT-O PLT-F
激光633nm
荧光染色
聚次甲基 噁嗪
流式
半导体激光提供的细胞信 息
FSC
前向散射光：细胞大小
SSC
侧向散射光：细胞内容物复 杂程度
SFL
侧向荧光：细胞内核酸含量
2.阻抗+射频
主要原理 RBC/PLT-I 鞘流阻抗法
噁嗪荧光染色
XE PLT-O通道染液
® RET-SEARCH(II)染色溶液
重点突出网织红细胞部分
聚次甲基+ 噁嗪荧光染色
低值血小板——重复性
显显微微镜镜见见极极少少量量RRBBCC碎碎片片
显微镜见1%RBC碎片 显微镜见少量RBC碎片
PLT-F通道检测低值血小板的重复性最佳。
病例 ：红细胞碎片对血小板计数的干扰
外周血中，可见白细胞数增加、贫血、血小板数减少。原始细胞 的形态为中型，核质比较低。核为类圆形，或可见切迹。核染色 质为较大，且纤细，可观察到明显的核仁。零散地可见有Auer小 体（ ➡）的原始细胞。另外，在核和细胞质中可观察到空泡。
使用WPC通道进行复检，可降低推片率
3.WPC通道要点：
① 选择性使用：通过reflex对怀疑类报警追加WPC检测在WPC通道，采 用荧光染色可以检出类似Abnormal Lymph和Blast的异常细胞。
正常情况，两个通道WBC 总数相差不大
2.WNR通道要点：
① 由于在CBC模式下该通道用于WBC测定，因此可以在全体 样本中测得NRBC计数，以及由NRBC数修正过的WBC数据 。
② 由于采用荧光染色进行检测，红细胞没有被染色，所以不 存在红细胞溶血不良所造成的影响。
（仪器评估检测时也未出现溶血不良的例子） ⇒删除“RBC Lyse Resistance?”的报警。
RBC
WBC
IPF PLT-F
SFL：侧向荧光
XN-3种检测通道检测PLT
PLT-I：颗粒大小
低值血小板检测更加准确
PLT-O： α颗粒
PLT-F ：线粒体DNA
XN 稀释倍率 (倍) 分析量 (μL) 实际计数*
IPF IPF
PLT-O
PLT-F
DC
WNR
61.1
58.2
WDF 61.1 58.2
XN-20[A1] XN-20[A1]
XN-10[B1] XN-10[B3]
XN-10[B4] XN-10[B4]
规格：吸样量・所需血液量
吸样量
所需血液量
全血模式 低值白细胞模式
稀释模式※4 体液模式
进样器检测定※1
手动测定
微量测定※2
微量测定※3
（微量采血管测定）
微量测定※2
微量测定※4
（微量采血管测定）
血液检测原理
Sysmex学术应用部 曹文静
HST
XE-alpha
Sysmex’ 血液分析仪 家族
XT-2000i
XS-800i
XT-1800i
pocH-100i
KX-21N
K-4500
XN
XE-2100D/L
XE-5000 XE-2100
3
规格：尺寸（机组）
搭配原则：遵循左高右低
灵活地适应顾客的要求 ・准备分析功能不同的2种型号
New 3.WPC：通过REFLEX设置选择性检测
报警信息
Abnormal lymph?, Blasts?, Atypical lymph?
试剂
溶血剂：Lysercell WPC 染色液：Fluorocell WPC
主界面
异常淋巴 细胞
原始细胞
溶血
染色
侧向荧光 前向散射光 侧向散射光
(SFL)
(FSC)
血细胞通过→电阻 值发生变化→脉冲 被检测 当血细胞通过检测 部小孔时，电阻信 号 ①信号的大小与通 过的细胞体积呈正 比 ②电阻变化的次数 ＝细胞数
前鞘流：避免多颗粒同时通过宝石孔——少计数 避免颗粒侧流——多计数
后鞘流：避免颗粒回流——多计数
11
3.SLS-血红蛋白法
HGB通道
血红蛋白（四聚体）
② 试剂无臭味：通过试剂的改良，区别与原先IMI通道。 ③ 特异性高：在保持高灵敏度前提下，不仅区分髓系还能区分淋系。 ④ 降低推片率，缩短TAT。
异常淋巴细胞(Abnormal Lymph)：易着色，体积较小。 原始细胞(Blast)：不易被染色，体积较大。
4.原理：RET通道
项目 RET, RET-He
以PLT-F结果为准
5.PLT-F通道要点：
以XE2100为例，检测原理、通道、参数信息
全血标本
检测模块 检测原理 检测通道
检测信息 检测参数
RBC/PLT
HGB
WBC
RET
鞘流原理 -DC检测 -
比色法
流式细胞原理
流式细胞原理 RF/DC
RBC/PLT 通道
HGB 通道
PLT 直方图
RBC 直方图
DIFF 通道 DIFF 散点图
NRBC 通道
RET 通道
WBC/Ba 通道
IMI 通道
WBC 散点图
NRBC 散点图
RET 散点图
PLT
RBC HGB Lymph
WBC NRBC HPC RET
Mono
Baso
PLT-O
Neut+Ba Eo
IRF
XN仪器检测通道的改善
DIFF 低NPR值LB血TC小-F板
检测通道
BWANSRO
RET
IWMPI C
项目 PLT, IPF
标志 PLT Abnormal scattergram, PLT Clumps?
侧向荧光
前向散射光
染色
(SFL)
(FSC)
红细 胞
血小 板
IPF
(未成熟血 小板）
弱～中
强
弱～中
弱
中～强
中
FSC：前向散射光
稀释剂：CELLPACK DFL 染色液：Fluorocell PLT
PLT-F散点图
New
2.WNR：有核红细胞计数为常规报告参数
项目：
WBC, NRBC, BASO 报警信息
PLT Clumps?, NRBC Present, WBC Abnormal Scattergram
细胞膜通过
溶血
荧光
嗜碱性 粒细胞
侧向荧光 前向散射光
(SFL)
(FSC)
强
强
淋巴细胞
溶血剂：Lysercell WNR 染色液：Fluorocell WNR
➢ NRBC ➢ RET ➢ RET-HE ➢ IRF
➢ IPF
添加实验
幼稚细胞灵敏度高达
0.7%
各通道检测原理
原理：WDF通道
XE系列
XN系列
和XE相比较，LYMPH和MONO的散点群更加明确地得以划分。
病例 未分类样本改善
XE5000
未分类 NRBC?
报警信息： 原始细胞？异淋? 有核红？ 白细胞散点图异常 核左移？单核细胞增加？ 嗜碱细胞增加？幼稚细胞？
WNR散点图 BASO
FSC：前向散射光
单核细胞
粒细胞
（中性粒细胞 嗜酸性粒细胞等）
有核红细胞
红细胞
中
中
弱
中
极弱 极弱
NRBC WBC
Debris
SFL：侧向荧光
病例：外周血有核红病例
NRBC升高见于：
有效降低推片复检率
WNR通道WBC总数：9.67*109/L
WDF通道WBC总数：9.51*109/L
△
○
△
OFF
○
OFF
PLT-F
ON
OFF
ON
ON
OFF
OFF
检测模式
WB，PD
○
○
○
○
○
○
BF
ON
ON
ON
ON
ON
ON
○：搭载 ON：软件控制下的选择方式：“选择” 择” △：作为参考参数汇报
OFF：软件控制下的选择方式：“无选
WB: whole blood, PD: prediluted, BF: body fluid
十二烷基磺酸钠：无氰无毒
亲水基
疏水基
珠蛋白
亚铁血红素
（月桂基硫酸钠）
SLS的疏水基作用于 珠蛋白 （第2阶段）
珠蛋白的 结构改变 （变性）
亚铁血红素的铁（Fe2+） 被氧化（Fe2+→Fe3+） （第3阶段）
SLS的亲水基与Fe3+结合 （第4阶段）
幼稚细胞和异常标本的检出
粒系
红系
巨核系
➢ IG ➢ HPC
XN-20
XN-10
（XN-10、XN-20）
A1
A2
B1
B2
B3
B4
・采用设备时，通过软件的变更，
检测通道
WNR
○
○
○
○
○
○
可将XN-20设定为2组机型 ﹑XN-10设定为4组机型
RBC/PLT
○
○
○
○
○
○
HGB
○
○
○Leabharlann ○○○WDF
○
○
○
○
○
○
WPC
○
○
×
×
×
×
RET
○
○
ON
OFF
ON
OFF
PLT-O
对值和百分比
RET通道小结：
1.XN校准品种还有RET参数，具有溯源性。 2.IRF：IRF是反映红系增生减低比较敏感的指标，IRF对肾性贫血的疗效 判断具有重要价值。 3.RET-HE: ①缺铁性贫血的鉴别诊断，IDA时，明显减低 ②肾性贫血：建议EPO+铁剂治疗，同时检测RET-HE的变化
5.原理：PLT-F通道