色谱法薄层色谱和柱色谱
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一f定极性的有展开机剂溶前剂沿）至流原 经点吸中附心的有距样离品展的开吸剂 比 性同比附 产 吸 分移能的移剂生较从值有 。 值时竞易吸R但关 是，争，附f 对， 一在展吸随剂同不 个一开附展上一同 特定剂，开解溶的 定条与极剂吸质溶 的件在质 常样性较较下相在 数和品小快难同色 （溶中的地，条谱定质的组移随件分性（各分动展下离分组组从；开进过析分分吸极剂行程的）对附性移色的依的（谱比据吸剂大动分流分移）子附上的较动离值。结剂解组慢相时是构。），不、
应用：精制样组品，分鉴定化合物，跟踪反应进程和柱色谱的摸索最佳条件等。
吸附竞争
固定相
流动相
吸附剂 （固定相）
比 由 样移于品值吸中R附各f ：剂组（分硅吸胶附、能氧力化不铝同等（，极强性极强性的）组对分
被R 吸= 附能斑力 点的越 最 强高 ）浓 ，度 当中 展心 开至 剂原 （点 中常 心常 的是 距具离 有
流动的体系称为流动相（气体或液体）；固定不动的物质称为固 定相（可以是固体或液体＊）。
根据组分在固定相中的作用原理不同，可分为吸附色谱、分配色 谱、离子交换色谱、排阻色谱等；
根据操作条件不同，可分为薄层色谱、柱色谱、纸色谱、气相色 谱及高效液相色谱等类型。
二. 实验原理和实验技术
薄层色谱（TLC，薄层层析） 特点薄：层所吸需附样色品谱少的，分工离作时原间理短：，效率高。
己烷、石油醚 ＜ 环己烷 ＜ 四氯化碳 ＜ 三氯乙烯 ＜ 二硫化碳 ＜ 甲苯 ＜ 苯 ＜ 二氯甲烷 ＜ 氯仿 ＜ 乙醚 ＜ 四氢呋喃 ＜ 乙酸乙酯 ＜ 丙酮 ＜ 正 丁醇 ＜ 丙醇 ＜ 乙醇 ＜ 甲醇 ＜水 ＜ 冰乙酸 ＜ 吡啶 ＜ 乙酸
如果单一展开剂分离效果不显著，可选用混合溶剂。
环己烷–乙酸乙酯混合溶剂 （９︰１）
• 再用溶剂洗脱时，已经分开的溶质可以从柱上 分别洗出收集。
二. 实验原理和实验技术
柱色谱 吸附剂的选择：
常用的吸附剂：氧化铝、硅胶、氧化镁、碳酸钙和活性炭等。 吸附剂要求：
不能与被分离的物质和展开剂发生化学作用； 吸附剂的粒度大小要均匀。 粒度小，表面积大，吸附能力强，分离效果好，但流速慢； 氧化铝： 粒度大，表面积小，吸附能力弱，分离效果差，但流速快。 酸性（分离酸性物质，如有机酸类化合物） 中性（分离中性物质，如醛、酮、醌和酯类化合物） 碱性（分离碱性物质，如碳氢化合物、生物碱、胺等）
＞ 卤代烃、醚 ＞ 芳香烃 ＞ 烯 ＞ 环烷烃 ＞ 烷烃
二. 实验原理和实验技术
薄层色谱（TLC，薄层层析） 展开剂的选择：
选择展开剂时，要考虑样品各组分的极性、溶解度和吸附活性等因素。 一般情况下，溶剂的展开能力与溶剂的极性成正比。
Βιβλιοθήκη Baidu
溶剂的极性大
溶剂对化合物的解吸能力强
Rf 值大
常用展开剂的极性大小顺序（仅对硅胶和氧化铝适用）：
二. 实验原理和实验技术
柱色谱 吸附柱色谱的工作原理：
• 在色谱柱中填入表面积很大、经过活化的多孔 性粉状固体吸附剂（硅胶、氧化铝）。
• 分离的混合物溶液流过吸附柱时，各种成分同 时被吸附在柱的上端。
• 当洗脱剂流下时，由于不同化合物吸附能力不 同，往下洗脱的速度也不同，即溶质在柱中自 上而下按对吸附剂亲和力大小分别形成若干色 带。
《有机化学实验》
色谱法
（薄层色谱、柱色谱）
一. 实验目的
学习薄层色谱和柱色谱技术的原理和应用； 掌握用薄层色谱和柱色谱分离和鉴定化合物的
操作技术。
二. 实验原理和实验技术
• 色谱法：分离、提纯和鉴定有机化合物的重要方法之一。
• 色谱法基本原理：利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解 性能（即分配）的不同，或其它亲和作用性能的差异，使混合物的 溶液流经该物质时进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组分分 开。
除单一溶剂外，也可采用混合溶剂， 或采用梯度（开始是低极性溶剂，后面是高极性溶剂）
二. 实验原理和实验技术
薄层色谱和柱色谱
• 相同点：薄层色谱和柱色谱都属于液–固吸附色谱，都是经过在吸 附剂和展开剂（洗脱剂）之间的多次吸附–溶解作用，将混合物中 各组分分离成孤立的样点，实现混合物的分离。
• 不同点： 薄层色谱：是将吸附剂涂布在玻璃板上，形成薄薄的平面涂层。 干燥后在涂层的一端点样，竖直放入一个盛有少量展开剂的有盖 容器中。展开剂接触到吸附剂涂层，借毛细作用向上移动。 柱色谱：是将吸附剂装于柱中，当待分离的混合物溶液流过吸附 柱时，各种成分同时被吸附在柱的上端。当洗脱剂流下时，由于 不同化合物吸附能力不同，往下洗脱的速度也不同，从而达到分 离的目的。
样品点 （多组分）
二. 实验原理和实验技术
薄层色谱（TLC，薄层层析） 固定相的选择：
硅胶和氧化铝是薄层色谱常用的固定相，两者都属于极性吸附剂。 硅胶：（吸附性）表面的Si-OH基 （应用）分离酸性、中性有机物
氧化铝：（吸附性）铝原子上未成键的电子对 （应用）分离碱性、中性有机物
硅薄胶层的吸型附号色：谱（60固G、定6相00为GF极254性、吸60附H、剂6）0H中F25，4和化6合0H物F25的4+3吸66等附能力与它们的极性成 正比，具有较强极性的化合物吸附较强，即Rf 值较小。 常见有机化合物的极性大小： 无机盐、离子型有机物 ＞ 磺酸、羧酸 ＞ 醇、酚、胺 ＞ 醛、酮、酯
三. 实验装置
薄层板
层析柱
层析缸 薄层色谱
柱色谱
四. 实验步骤
使毛细管液面刚好接触到薄层板即可，
薄层色谱
点样用的毛细管必须专
切勿点样过重而使薄层破坏。
（1）薄层板的制备：用，（不略得）弄混。
（2）点样：
取出制好的薄层板，分别在距一端lcm处用铅笔轻轻划一横线作为起始线。取 管口平整的毛细管△插入样品溶液中，在一块板的起点线上点△5%间硝基苯胺的 苯溶液、1%的偶氮苯的苯溶液和1%苏丹Ⅲ的苯溶液三个样点。在第二块板的起 点线上点混合液及未知物A/B两个样点，样点间相距约1.5cm左右。如果样点的 颜 应色超间较过硝浅2m基，m。苯可胺重复点样原，点重（复点偶点样氮样线苯前）必勿须浸待动入前作展次要开苏样快剂丹点！中Ⅲ干否！燥则后溶进剂行前。沿样很点快直消径失不。
本实验吸附剂：中性氧化铝（150目）
二. 实验原理和实验技术
柱色谱
溶剂、洗脱剂的选择：
• 选择原则：
极性大的洗脱剂对极性大和小 的组分洗脱能力都很强。
取决于样品各组分的极性；
极性小的组分用极性小的洗脱剂进行洗脱；
极性大的组分用极性大的洗脱剂△进行洗脱。
• 最终选择： 根据各组分的极性，采用TLC技术确定。 （在TLC中能使各组分分开的展开剂即可做为柱色谱的洗脱剂。）
应用：精制样组品，分鉴定化合物，跟踪反应进程和柱色谱的摸索最佳条件等。
吸附竞争
固定相
流动相
吸附剂 （固定相）
比 由 样移于品值吸中R附各f ：剂组（分硅吸胶附、能氧力化不铝同等（，极强性极强性的）组对分
被R 吸= 附能斑力 点的越 最 强高 ）浓 ，度 当中 展心 开至 剂原 （点 中常 心常 的是 距具离 有
流动的体系称为流动相（气体或液体）；固定不动的物质称为固 定相（可以是固体或液体＊）。
根据组分在固定相中的作用原理不同，可分为吸附色谱、分配色 谱、离子交换色谱、排阻色谱等；
根据操作条件不同，可分为薄层色谱、柱色谱、纸色谱、气相色 谱及高效液相色谱等类型。
二. 实验原理和实验技术
薄层色谱（TLC，薄层层析） 特点薄：层所吸需附样色品谱少的，分工离作时原间理短：，效率高。
己烷、石油醚 ＜ 环己烷 ＜ 四氯化碳 ＜ 三氯乙烯 ＜ 二硫化碳 ＜ 甲苯 ＜ 苯 ＜ 二氯甲烷 ＜ 氯仿 ＜ 乙醚 ＜ 四氢呋喃 ＜ 乙酸乙酯 ＜ 丙酮 ＜ 正 丁醇 ＜ 丙醇 ＜ 乙醇 ＜ 甲醇 ＜水 ＜ 冰乙酸 ＜ 吡啶 ＜ 乙酸
如果单一展开剂分离效果不显著，可选用混合溶剂。
环己烷–乙酸乙酯混合溶剂 （９︰１）
• 再用溶剂洗脱时，已经分开的溶质可以从柱上 分别洗出收集。
二. 实验原理和实验技术
柱色谱 吸附剂的选择：
常用的吸附剂：氧化铝、硅胶、氧化镁、碳酸钙和活性炭等。 吸附剂要求：
不能与被分离的物质和展开剂发生化学作用； 吸附剂的粒度大小要均匀。 粒度小，表面积大，吸附能力强，分离效果好，但流速慢； 氧化铝： 粒度大，表面积小，吸附能力弱，分离效果差，但流速快。 酸性（分离酸性物质，如有机酸类化合物） 中性（分离中性物质，如醛、酮、醌和酯类化合物） 碱性（分离碱性物质，如碳氢化合物、生物碱、胺等）
＞ 卤代烃、醚 ＞ 芳香烃 ＞ 烯 ＞ 环烷烃 ＞ 烷烃
二. 实验原理和实验技术
薄层色谱（TLC，薄层层析） 展开剂的选择：
选择展开剂时，要考虑样品各组分的极性、溶解度和吸附活性等因素。 一般情况下，溶剂的展开能力与溶剂的极性成正比。
Βιβλιοθήκη Baidu
溶剂的极性大
溶剂对化合物的解吸能力强
Rf 值大
常用展开剂的极性大小顺序（仅对硅胶和氧化铝适用）：
二. 实验原理和实验技术
柱色谱 吸附柱色谱的工作原理：
• 在色谱柱中填入表面积很大、经过活化的多孔 性粉状固体吸附剂（硅胶、氧化铝）。
• 分离的混合物溶液流过吸附柱时，各种成分同 时被吸附在柱的上端。
• 当洗脱剂流下时，由于不同化合物吸附能力不 同，往下洗脱的速度也不同，即溶质在柱中自 上而下按对吸附剂亲和力大小分别形成若干色 带。
《有机化学实验》
色谱法
（薄层色谱、柱色谱）
一. 实验目的
学习薄层色谱和柱色谱技术的原理和应用； 掌握用薄层色谱和柱色谱分离和鉴定化合物的
操作技术。
二. 实验原理和实验技术
• 色谱法：分离、提纯和鉴定有机化合物的重要方法之一。
• 色谱法基本原理：利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解 性能（即分配）的不同，或其它亲和作用性能的差异，使混合物的 溶液流经该物质时进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组分分 开。
除单一溶剂外，也可采用混合溶剂， 或采用梯度（开始是低极性溶剂，后面是高极性溶剂）
二. 实验原理和实验技术
薄层色谱和柱色谱
• 相同点：薄层色谱和柱色谱都属于液–固吸附色谱，都是经过在吸 附剂和展开剂（洗脱剂）之间的多次吸附–溶解作用，将混合物中 各组分分离成孤立的样点，实现混合物的分离。
• 不同点： 薄层色谱：是将吸附剂涂布在玻璃板上，形成薄薄的平面涂层。 干燥后在涂层的一端点样，竖直放入一个盛有少量展开剂的有盖 容器中。展开剂接触到吸附剂涂层，借毛细作用向上移动。 柱色谱：是将吸附剂装于柱中，当待分离的混合物溶液流过吸附 柱时，各种成分同时被吸附在柱的上端。当洗脱剂流下时，由于 不同化合物吸附能力不同，往下洗脱的速度也不同，从而达到分 离的目的。
样品点 （多组分）
二. 实验原理和实验技术
薄层色谱（TLC，薄层层析） 固定相的选择：
硅胶和氧化铝是薄层色谱常用的固定相，两者都属于极性吸附剂。 硅胶：（吸附性）表面的Si-OH基 （应用）分离酸性、中性有机物
氧化铝：（吸附性）铝原子上未成键的电子对 （应用）分离碱性、中性有机物
硅薄胶层的吸型附号色：谱（60固G、定6相00为GF极254性、吸60附H、剂6）0H中F25，4和化6合0H物F25的4+3吸66等附能力与它们的极性成 正比，具有较强极性的化合物吸附较强，即Rf 值较小。 常见有机化合物的极性大小： 无机盐、离子型有机物 ＞ 磺酸、羧酸 ＞ 醇、酚、胺 ＞ 醛、酮、酯
三. 实验装置
薄层板
层析柱
层析缸 薄层色谱
柱色谱
四. 实验步骤
使毛细管液面刚好接触到薄层板即可，
薄层色谱
点样用的毛细管必须专
切勿点样过重而使薄层破坏。
（1）薄层板的制备：用，（不略得）弄混。
（2）点样：
取出制好的薄层板，分别在距一端lcm处用铅笔轻轻划一横线作为起始线。取 管口平整的毛细管△插入样品溶液中，在一块板的起点线上点△5%间硝基苯胺的 苯溶液、1%的偶氮苯的苯溶液和1%苏丹Ⅲ的苯溶液三个样点。在第二块板的起 点线上点混合液及未知物A/B两个样点，样点间相距约1.5cm左右。如果样点的 颜 应色超间较过硝浅2m基，m。苯可胺重复点样原，点重（复点偶点样氮样线苯前）必勿须浸待动入前作展次要开苏样快剂丹点！中Ⅲ干否！燥则后溶进剂行前。沿样很点快直消径失不。
本实验吸附剂：中性氧化铝（150目）
二. 实验原理和实验技术
柱色谱
溶剂、洗脱剂的选择：
• 选择原则：
极性大的洗脱剂对极性大和小 的组分洗脱能力都很强。
取决于样品各组分的极性；
极性小的组分用极性小的洗脱剂进行洗脱；
极性大的组分用极性大的洗脱剂△进行洗脱。
• 最终选择： 根据各组分的极性，采用TLC技术确定。 （在TLC中能使各组分分开的展开剂即可做为柱色谱的洗脱剂。）