需氧革兰阳性杆菌及检验
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需氧革兰阳性杆菌及检验
棒状杆菌属
(Corynebacterium)
革兰氏染色阳性杆菌。因其成员的一 端或两端膨大呈棒状而得名 。多形态， 排列不规则，常呈栅栏状或V字状等； 染色不均匀，两端有着色较深的异染颗 粒。无芽孢，大多数菌株无动力。需氧 或兼性厌氧，营养要求特殊，DNA中的G ＋C克分子含量为52～68％。胞壁多糖 主要是阿拉伯糖和半乳糖。与分枝杆菌 属、奴卡氏菌属和放线菌属相似，有交 叉反应。分类学上认为本属与放线菌属 关系尤为密切。
• 结构与作用（抑制细胞合成蛋白质）
– A片段和B片段 – B片段有受体结合、跨膜和转位功能，使A片段得以
进入细胞 – A片段有使EF-2酶失活的活性，影响蛋白质的合成，
细胞死亡，产生病变。 – 白喉毒素有剧毒，1-2个毒素分子进入细胞可将细
胞杀死。
• 作用靶：心肌和神经细胞
作用机制
所致疾病
• 传染源：患者及带菌者 • 传播途径：飞沫或污染 • 引起白喉：分咽白喉、喉白喉、鼻白喉和其他部位白
基础知识
• 白喉杆菌是革兰阳性杆菌，菌体末端膨大呈棒 状，胞浆中有异染颗粒，无荚膜、无鞭毛，不 产生芽胞
• 致病物质：白喉外毒素 • 传染源：患者和带菌者。 • 所致疾病：白喉 • 病后免疫力：牢固 • 特异性预防：白喉类毒素 • 治疗：除使用抗生素外应尽早足量注射白喉抗
毒素
白喉棒状杆菌（俗称白喉杆菌）
– 其他：侵害眼结膜、外耳道、阴道、皮肤和皮肤创口处， 也能形成假膜。
白喉棒状杆菌
白喉杆菌
鼻咽部
吸收入血
软腭麻痹 肾上腺功能障碍 心肌受损
声带麻痹 膈肌麻痹
死亡 （晚期死亡原因）
毒素
局部
白喉
粘 血 组 炎纤
膜 管 织 症维
细 扩 水 细蛋
胞 张 肿 胞白
坏
原
死
渗
出
假膜 （早期死亡原因）
白喉假膜
➢免疫性
锡克试验(Schick test)
• 意义：用白喉毒素作皮内试验，用于调查 人群对白喉的免疫力
• 方法：试验侧注射0.1ml白喉毒素，对照侧 注射0.1ml经80℃5min灭活的白喉毒素
• 结果：阳性：表示机体对白喉无免疫力， 应进行白喉疫苗接种，然后再用本试验测 定免疫效果。2．阴性：表示机体已产生免 疫力（是清除抗原过程方才无反应现象）
Schick test结果分析
试验侧
阴性反应
–
阳性反应 24~48h
4~7d达峰
假阳性反应 6~18h红肿
1~2d消退
混合反应 6~18h红肿
4~7d达峰
对照侧 – –
本质 有免疫力 无免疫力
同前
有免疫力，超敏反应
6~18h红肿 无免疫力，超敏反应 3~4d反应消退
防治原则
• 预防
– 人工主动免疫：注射白喉类毒素（白百破三 联疫苗）
＜6月: 免疫力强 自然被动免疫 6月-5岁: 免疫力弱 需人工主动免疫加强
＞5岁: 免疫力强 隐性感染，人工主动免疫
• 3.分离培养
标本 接 种 吕氏血清斜面 37℃ 涂片镜检 6－12h
接
种
亚碲酸钾琼脂平板 培养
灰白色小菌落
黑色菌落
4.毒力试验
• 体内法：豚鼠体内中和试验 • 体外法：琼脂Elek平板毒力试验
一. 白喉杆菌(C. diphtheriae)
1. 生物学性状
–G+、染色不均、X形、 L形或V形排列 – 异染颗粒(Albert染色)
成分: 核糖核酸和多磷酸盐 作用: 储存养料
鉴定价值
鉴别选择培养基 亚碲酸钾血平板——黑色菌落
➢形态与染色
生物学性状
生物学性状
形态与染色
• 典型白喉杆菌菌体细长微弯， 一端或两端膨大呈棒状，无 荚膜、无鞭毛，不产生芽胞。
致病性与免疫性
白喉的免疫主要依靠抗毒素。人体血清中抗毒素含量超过 0.01u/mL以上者，即有免疫力。故病后、隐性感染及预接种均可获 得牢固免疫力。
新生儿通过胎盘可由母体得到抗毒素。出生后这种被动免疫逐 渐消失，至1周岁时几乎全部易感。以往50%白喉患者是5岁内儿童。
调查人群对白喉的免疫力可用锡克试验（Schick test）进行 测定。
– 人工被动免疫：注射白喉抗毒素紧急预防 治疗 – 白喉抗毒素---皮肤试验、早期使用 – 抗生素：如注射青霉素或口服红霉素进行抗
菌治疗
炭疽杆菌
B.anthrax
——致命生物武器
炭疽热感染事件
• 革兰染色阳性
• 胞浆中有异染颗粒，排列 成念珠状，Albert染色，异 染颗粒（多聚磷酸盐）染成 蓝黑色，菌体呈绿色，异染 颗粒是白喉杆菌的主要形态 特征，在鉴定时有重要意 义
Albert染色
培养特性
• 需氧或兼性厌氧
• 营养要求较高
• 吕氏血清培养基或鸡蛋斜面培养基 （含有凝固血清）上生长迅速，形 态典型，异染颗粒明显
抑制易感细胞蛋白质的合成； 协助A链进入易感细胞内。
毒素
NAD+EF-2
ADPR-EF-2+烟酰胺+H+
（无活性复合物）
2．索状因子（cord factor）能破坏哺乳动物细胞中的线粒体， 影响细胞呼吸与磷酸化。
3．K抗原 有利于细菌在粘膜表面的定植。
致病物质 致病性
• 白喉外毒素（抗原性强，毒性强）：只有携带 β棒状杆菌噬菌体的溶原性白喉杆菌才能产生 外毒素
喉
• 临床表现
– 引起局部炎症：假膜（血管渗出液中含有纤维蛋白，可将 炎性细胞、粘膜坏死细胞和白喉杆菌凝集在一起，形成灰 白色膜状物），假膜脱落，致呼吸困难甚至窒息是白喉早 期致死的主要原因
– 全身中毒症状：如心肌炎、软腭麻痹、声嘶、肾上腺功能 障碍等症状，心肌细胞内蛋白质转换率降低，成为白喉晚 期致死的主要原因
抵抗力
对湿热抵抗力不强
煮沸1min或加热 58℃10min可致死
对日光、寒冷、干燥抵抗力较强
一般消毒剂敏感 3%来苏10min死亡
本菌对青霉素和常用抗生素比较敏感。
致病性来自百度文库
➢致病物质
致病性与免疫性
1．白喉毒素（diphtheria toxin）是一种外毒素，毒性强、 具有高度抗原性的蛋白质：
A--s-s--B
• 分离培养：筛选鉴别培养基（含 0.03%～0.04%亚碲酸钾血琼脂）的 血平板，在些培养基上菌落呈黑色
• 根据白喉杆菌对亚碲酸钾的还原能 力，菌落的特点（形态与生化反应） 区分为：重型、轻型、中间型
亚碲酸盐平板
生化反应：
• 发酵葡萄糖、麦芽糖，产酸不产气 • 吲哚试验阴性 • 尿素酶试验阴性 • 氧化酶试验阴性
棒状杆菌属
(Corynebacterium)
革兰氏染色阳性杆菌。因其成员的一 端或两端膨大呈棒状而得名 。多形态， 排列不规则，常呈栅栏状或V字状等； 染色不均匀，两端有着色较深的异染颗 粒。无芽孢，大多数菌株无动力。需氧 或兼性厌氧，营养要求特殊，DNA中的G ＋C克分子含量为52～68％。胞壁多糖 主要是阿拉伯糖和半乳糖。与分枝杆菌 属、奴卡氏菌属和放线菌属相似，有交 叉反应。分类学上认为本属与放线菌属 关系尤为密切。
• 结构与作用（抑制细胞合成蛋白质）
– A片段和B片段 – B片段有受体结合、跨膜和转位功能，使A片段得以
进入细胞 – A片段有使EF-2酶失活的活性，影响蛋白质的合成，
细胞死亡，产生病变。 – 白喉毒素有剧毒，1-2个毒素分子进入细胞可将细
胞杀死。
• 作用靶：心肌和神经细胞
作用机制
所致疾病
• 传染源：患者及带菌者 • 传播途径：飞沫或污染 • 引起白喉：分咽白喉、喉白喉、鼻白喉和其他部位白
基础知识
• 白喉杆菌是革兰阳性杆菌，菌体末端膨大呈棒 状，胞浆中有异染颗粒，无荚膜、无鞭毛，不 产生芽胞
• 致病物质：白喉外毒素 • 传染源：患者和带菌者。 • 所致疾病：白喉 • 病后免疫力：牢固 • 特异性预防：白喉类毒素 • 治疗：除使用抗生素外应尽早足量注射白喉抗
毒素
白喉棒状杆菌（俗称白喉杆菌）
– 其他：侵害眼结膜、外耳道、阴道、皮肤和皮肤创口处， 也能形成假膜。
白喉棒状杆菌
白喉杆菌
鼻咽部
吸收入血
软腭麻痹 肾上腺功能障碍 心肌受损
声带麻痹 膈肌麻痹
死亡 （晚期死亡原因）
毒素
局部
白喉
粘 血 组 炎纤
膜 管 织 症维
细 扩 水 细蛋
胞 张 肿 胞白
坏
原
死
渗
出
假膜 （早期死亡原因）
白喉假膜
➢免疫性
锡克试验(Schick test)
• 意义：用白喉毒素作皮内试验，用于调查 人群对白喉的免疫力
• 方法：试验侧注射0.1ml白喉毒素，对照侧 注射0.1ml经80℃5min灭活的白喉毒素
• 结果：阳性：表示机体对白喉无免疫力， 应进行白喉疫苗接种，然后再用本试验测 定免疫效果。2．阴性：表示机体已产生免 疫力（是清除抗原过程方才无反应现象）
Schick test结果分析
试验侧
阴性反应
–
阳性反应 24~48h
4~7d达峰
假阳性反应 6~18h红肿
1~2d消退
混合反应 6~18h红肿
4~7d达峰
对照侧 – –
本质 有免疫力 无免疫力
同前
有免疫力，超敏反应
6~18h红肿 无免疫力，超敏反应 3~4d反应消退
防治原则
• 预防
– 人工主动免疫：注射白喉类毒素（白百破三 联疫苗）
＜6月: 免疫力强 自然被动免疫 6月-5岁: 免疫力弱 需人工主动免疫加强
＞5岁: 免疫力强 隐性感染，人工主动免疫
• 3.分离培养
标本 接 种 吕氏血清斜面 37℃ 涂片镜检 6－12h
接
种
亚碲酸钾琼脂平板 培养
灰白色小菌落
黑色菌落
4.毒力试验
• 体内法：豚鼠体内中和试验 • 体外法：琼脂Elek平板毒力试验
一. 白喉杆菌(C. diphtheriae)
1. 生物学性状
–G+、染色不均、X形、 L形或V形排列 – 异染颗粒(Albert染色)
成分: 核糖核酸和多磷酸盐 作用: 储存养料
鉴定价值
鉴别选择培养基 亚碲酸钾血平板——黑色菌落
➢形态与染色
生物学性状
生物学性状
形态与染色
• 典型白喉杆菌菌体细长微弯， 一端或两端膨大呈棒状，无 荚膜、无鞭毛，不产生芽胞。
致病性与免疫性
白喉的免疫主要依靠抗毒素。人体血清中抗毒素含量超过 0.01u/mL以上者，即有免疫力。故病后、隐性感染及预接种均可获 得牢固免疫力。
新生儿通过胎盘可由母体得到抗毒素。出生后这种被动免疫逐 渐消失，至1周岁时几乎全部易感。以往50%白喉患者是5岁内儿童。
调查人群对白喉的免疫力可用锡克试验（Schick test）进行 测定。
– 人工被动免疫：注射白喉抗毒素紧急预防 治疗 – 白喉抗毒素---皮肤试验、早期使用 – 抗生素：如注射青霉素或口服红霉素进行抗
菌治疗
炭疽杆菌
B.anthrax
——致命生物武器
炭疽热感染事件
• 革兰染色阳性
• 胞浆中有异染颗粒，排列 成念珠状，Albert染色，异 染颗粒（多聚磷酸盐）染成 蓝黑色，菌体呈绿色，异染 颗粒是白喉杆菌的主要形态 特征，在鉴定时有重要意 义
Albert染色
培养特性
• 需氧或兼性厌氧
• 营养要求较高
• 吕氏血清培养基或鸡蛋斜面培养基 （含有凝固血清）上生长迅速，形 态典型，异染颗粒明显
抑制易感细胞蛋白质的合成； 协助A链进入易感细胞内。
毒素
NAD+EF-2
ADPR-EF-2+烟酰胺+H+
（无活性复合物）
2．索状因子（cord factor）能破坏哺乳动物细胞中的线粒体， 影响细胞呼吸与磷酸化。
3．K抗原 有利于细菌在粘膜表面的定植。
致病物质 致病性
• 白喉外毒素（抗原性强，毒性强）：只有携带 β棒状杆菌噬菌体的溶原性白喉杆菌才能产生 外毒素
喉
• 临床表现
– 引起局部炎症：假膜（血管渗出液中含有纤维蛋白，可将 炎性细胞、粘膜坏死细胞和白喉杆菌凝集在一起，形成灰 白色膜状物），假膜脱落，致呼吸困难甚至窒息是白喉早 期致死的主要原因
– 全身中毒症状：如心肌炎、软腭麻痹、声嘶、肾上腺功能 障碍等症状，心肌细胞内蛋白质转换率降低，成为白喉晚 期致死的主要原因
抵抗力
对湿热抵抗力不强
煮沸1min或加热 58℃10min可致死
对日光、寒冷、干燥抵抗力较强
一般消毒剂敏感 3%来苏10min死亡
本菌对青霉素和常用抗生素比较敏感。
致病性来自百度文库
➢致病物质
致病性与免疫性
1．白喉毒素（diphtheria toxin）是一种外毒素，毒性强、 具有高度抗原性的蛋白质：
A--s-s--B
• 分离培养：筛选鉴别培养基（含 0.03%～0.04%亚碲酸钾血琼脂）的 血平板，在些培养基上菌落呈黑色
• 根据白喉杆菌对亚碲酸钾的还原能 力，菌落的特点（形态与生化反应） 区分为：重型、轻型、中间型
亚碲酸盐平板
生化反应：
• 发酵葡萄糖、麦芽糖，产酸不产气 • 吲哚试验阴性 • 尿素酶试验阴性 • 氧化酶试验阴性