多肽合成方法
多肽合成反应
多肽是少于100个氨基酸脱水缩合形成的化合物，分子结构介于氨基酸和蛋白质之间，具有很高的生物活性。
随着多肽在药物研发、食品研究以及在化妆品领域的广泛应用（特别是生物制药的发展），多肽合成已然成为化学生物学研究的一个重要且不断增长的领域。
多肽合成反应1）末端氨基酸N端脱保护2）激活待添加氨基酸（C端脱保护）3）偶联成具有酰胺功能的肽4）重复上述步骤添加更多的氨基酸，直到得到目的肽多肽化学合成方法1）固相合成（SPPS）：在聚合珠或树脂上从C端（羧基端）向N端（氨基端）固相合成多肽。
*Boc多肽合成法经典的多肽固相合成法，以Boc作为氨基酸α-氨基的保护基，苄醇类作为侧链保护基，Boc的脱除通常采用三氟乙酸(TFA)进行。
多肽合成时将已用Boc保护好的N-α-氨基酸共价交联到树脂上，TFA切除Boc保护基，N 端用弱碱中和。
肽链的延长通过二环己基碳二亚胺(DCC)活化、偶联进行，最终采用强酸氢氟酸(HF)法或三氟甲磺酸(TFMSA)将合成的目标多肽从树脂上解离。
在Boc多肽合成法中，为了便于下一步的多肽合成，反复用酸进行脱保护，一些副反应被带入实验中，例如多肽容易从树脂上切除下来，氨基酸侧链在酸性条件不稳定等。
FMOC-苯甘氨酸102410-65-1BOC-L-4-甲基苯丙氨酸80102-26-7BOC-L-羟脯氨酸13726-69-7*Cbz-氨基酸及衍生物CBZ-L-赖氨酸甲酯盐酸盐27894-50-42）偶联试剂：*活性酯/添加剂N-羟基硫代琥珀酰亚胺钠盐106627-54-71H-苯并三唑-1-基氧三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐128625-52-5Fmoc-His(Trt)-Wang resin 100-200 mesh, 1%DVB，Substitution 0.3-0.8mmol/g。
多肽有机合成和无机合成
多肽有机合成和无机合成1.引言1.1 概述概述多肽是由氨基酸残基通过肽键连接而成的生物大分子。
多肽具有广泛的生物活性和应用价值，因此对于多肽的合成研究一直是化学领域的重要研究方向之一。
多肽的合成方法多种多样，可以分为有机合成和无机合成两种主要类型。
有机合成方法是通过有机合成化学的手段将氨基酸残基逐个加入到多肽链中。
这种方法需要有机合成化学家们设计并合成一系列的保护基、缩合试剂以及催化剂等。
有机合成方法的优点在于可以合成具有复杂结构和特定功能的多肽，但由于合成步骤多、操作繁琐，合成周期较长，因此在合成过程中往往需要进行大量的优化和调试。
无机合成方法是通过无机化学的手段合成多肽链。
这种方法利用了无机合成反应的高效性和选择性。
无机合成方法的优点在于高效快速，适用于合成较短的多肽链。
然而，由于无机合成反应的特点，无机合成方法往往无法合成含有较长的多肽链或者特殊结构的多肽。
本文将重点介绍多肽的有机合成方法和无机合成方法。
对于有机合成方法，将讨论其定义、原理以及常用的合成方法，并介绍其中的优缺点。
而对于无机合成方法，将阐述其定义、原理以及适用的合成方法，并探讨其在多肽合成中的应用前景。
通过对有机合成和无机合成的对比分析，可以更加全面地了解两种方法在多肽合成中的优缺点。
同时，展望未来，对多肽合成技术的发展方向进行展望，探索更加高效、简便的合成方法，以满足对于多肽的广泛应用需求，并促进多肽领域的进一步发展。
接下来将详细介绍多肽的有机合成方法和无机合成方法，深入探讨其原理和具体的合成方式。
同时，通过案例分析和实验结果的展示，更加直观地展示多肽合成方法的优势与不足，并对其未来的发展进行展望。
1.2文章结构1.2 文章结构本文将对多肽有机合成和多肽无机合成进行详细介绍和比较分析。
首先，引言部分将给出多肽有机合成和多肽无机合成的概述，包括定义和原理的解释，并说明本文的目的。
接着，正文部分将分成两个小节，分别介绍多肽有机合成和多肽无机合成的相关内容。
多肽固相合成
多肽固相合成引言多肽是由氨基酸单元组成的生物大分子，具有广泛的生物活性和潜在的药物研发价值。
多肽固相合成是一种常用的合成方法，可以用于制备中小型多肽以及肽类药物。
本文将介绍多肽固相合成的原理、步骤和常用技术，并探讨其在药物研究领域中的重要性。
1. 多肽固相合成的原理多肽固相合成基于肽链从C端向N端逐渐延伸的原理。
合成过程中，多肽链通过戊二烯二硅烷（Boc）或氯甲酰（Fmoc）等保护基与固体载体（通常为氯甲基丙烯酸酯交联的聚合物）共价结合。
经过一系列的反应和保护基的去除，最终得到目标多肽。
2. 多肽固相合成步骤多肽固相合成步骤一般包括以下几个阶段：2.1. 准备工作首先，需要准备好实验室必备的试剂和仪器设备，并确保实验室操作符合安全要求。
此外，还需要选取合适的固相载体和保护基。
2.2. 固相修饰将固相载体与氯甲基丙烯酸酯进行反应，引入活性基团，以便后续与氨基酸单元的连接。
2.3. 保护基的引入选择合适的保护基（例如Boc、Fmoc）引入到固相载体上，以保护其反应活性。
2.4. 氨基酸单元的耦合将保护基的氨基酸单元与固相载体上的活性基团耦合，形成肽链的C端。
2.5. 保护基的去除通过适当的反应条件去除保护基，暴露出氨基酸单元的反应位点。
2.6. 重复步骤2.4和2.5重复步骤2.4和2.5，直到合成完整的多肽链。
2.7. 多肽链的剪切与脱保护将多肽与固相载体分离，并通过适当的反应条件去除保护基。
2.8. 纯化与鉴定对合成得到的多肽进行纯化和鉴定，通常使用高效液相色谱（HPLC）和质谱（MS）等检测技术。
3. 常用的多肽固相合成技术多肽固相合成涉及到许多关键的技术，下面介绍几种常用的技术方法：3.1. Boc策略Boc策略是一种常用的多肽固相合成策略，其特点是生化反应条件温和，适用于氨基酸侧链中含有灵敏官能团的情况。
然而，Boc保护基的去除需要使用强酸，容易引起副反应。
3.2. Fmoc策略Fmoc策略是另一种常用的多肽固相合成策略，它与Boc 策略相比，具有更广泛的应用范围。
多肽合成的书
多肽合成的书1. 引言多肽是由氨基酸通过肽键连接而成的生物大分子，具有广泛的生物活性和应用潜力。
多肽合成是一项重要的研究领域，它涉及到多种化学技术和方法。
本书将介绍多肽合成的原理、方法和应用，旨在为读者提供全面、详细且深入的知识。
2. 多肽合成的原理多肽合成是通过将氨基酸分子中的羧基与氨基反应形成肽键，将多个氨基酸连接在一起而实现的。
常用的多肽合成方法包括固相合成法、液相合成法和化学合成法等。
2.1 固相合成法固相合成法是最常用且高效的多肽合成方法之一。
它利用聚苯乙烯或聚酰胺树脂等固相材料作为载体，在其表面上固定一个保护了氨基酸羧基的功能基团，然后通过反复进行去保护-偶联循环反应，逐步扩大多肽链长度。
固相合成法具有高纯度、高效率和高自动化程度的优点，适用于合成中等长度（10-50个氨基酸）的多肽。
然而，固相合成法在合成长链多肽时面临一些挑战，如副反应的产生和耐受性差等问题。
2.2 液相合成法液相合成法是通过在溶液中进行多肽合成的方法。
它与固相合成法相比，更适用于合成短链多肽。
液相合成法通常采用保护-偶联策略，即先保护氨基酸羧基和氨基，然后将它们连接起来形成肽键。
液相合成法具有操作简便、灵活性高和耐受性好的优点，但由于产物分离和纯化困难，其应用范围受到一定限制。
2.3 化学合成法化学合成法是通过化学反应直接构建多肽链的方法。
它不依赖于生物体内酶类催化反应，可以在无需特殊条件下实现多肽的快速合成。
化学合成法具有反应条件温和、选择性好和适用范围广的优点，但需要对每个氨基酸进行独立的保护和偶联，反应步骤较多，合成过程复杂。
3. 多肽合成的方法多肽合成的方法包括固相法、液相法和化学法等，下面将对每种方法进行详细介绍。
3.1 固相法固相法是通过将氨基酸固定在载体上，然后在其表面上进行反应来合成多肽。
具体步骤如下：1.载体选择：选择适宜的聚合物材料作为载体，如聚苯乙烯或聚酰胺树脂。
2.活化载体：将载体活化，使其表面具有反应活性基团。
多肽合成基础知识
多肽合成基础知识多肽合成又叫肽链合成，是一个固相合成顺序一般从C 端(羧基端)向N端(氨基端)合成。
过去的多肽合成是在溶液中进行的称为液相合成法。
多肽的合成主要分为两条途径:化学合成多肽和生物合成多肽。
多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程，固相合成顺序一般从c端（羧基端）向n端（氨基端）合成。
过去的多肽合成是在溶液中进行的称为液相合成法。
多肽准确名称是生物活性肽，是20世纪被发现的。
多肽有生物活性多肽和人工合成多肽两种。
化学合成主要是以氨基酸与氨基酸之间缩合的形式来进行。
在合成含有特定顺序的多肽时，由于多肽合成原料中含有官能度大于2的氨基酸单体，多肽合成时应将不需要反应的基团暂时保护起来，方可进行成肽反应，这样保证了多肽合成目标产物的定向性。
多肽的化学合成又分为液相合成和固相合成。
将所要合成肽链的羟末端氨基酸的羟基以共价键的结构同一个不溶性的高分子树脂相连，然后以此结合在固相载体上的氨基酸作为氨基组份经过脱去氨基保护基并同过量的活化羧基组分反应，接长肽链。
重复（缩合→洗涤→去保护→中和及洗涤→下一轮缩合）操作，达到所要合成的肽链长度，最后将肽链从树脂上裂解下来，经过纯化等处理，即得所要的多肽。
其中α-氨基用boc（叔丁氧羰基）保护的称为boc固相合成法，α-氨基用fmoc（9-芴甲氧羰基）保护的称为fmoc固相合成法。
多肽的合成是氨基酸重复添加的过程，通常从C端向N 端(氨基端)进行合成。
多肽固相合成的原理是将目的肽的第一个氨基酸C端通过共价键与固相载体连接，再以该氨基酸N端为合成起点，经过脱去氨基保护基和过量的已活化的第二个氨基酸进行反应，接长肽链，重复操作，达到理想的合成肽链长度，最后将肽链从树脂上裂解下来，分离纯化，获得目标多肽。
多肽合成
多肽合成及应用进展简介什么是多肽多肽是α-氨基酸以肽键连接形成的化合物，是蛋白质的中间代谢产物。
通常来说，多肽指的是少于100个氨基酸脱水缩合形成的化合物，相对分子量低于10,000。
多肽具有很高的生物活性。
目前，已经发现了上万种内源性多肽，包括激素、生长因子和神经肽等多种调节因子，他们在免疫、神经系统、内分泌等发挥重要作用。
图1. 肽键形成示意图。
多肽合成多肽合成的方法众多，主要分为化学合成和生物合成两条途径。
1. 化学合成化学合成主要是通过氨基酸脱水缩合反应来实现。
在反应过程中，将原料中不需要反映的氨基酸暂时保护起来，从而保证合成的定向进行。
化学合成又分为固相和液相合成，主要区别在于是否使用固相载体。
液相合成：液相合成有两种策略，逐步合成和片段组合。
逐步合成简单迅速，适合绝大部分多肽的合成，而片段组合有利于合成更大的多肽（含有超多100个氨基酸），最大特点是易于纯制。
固相合成：固相合成法是Merrifield于1963年创立，原理是将氨基酸的C末端固定在不溶树脂上，然后依次进行缩合反应、延长肽链。
固相合成法可以细分为Fmoc（9-芴甲基氧羧基）和Boc（叔丁氧羧基）法。
Boc法是以Boc作为氨基酸α-氨基的保护基，以苄醇类作为侧链保护基，是一种经典的方法；而Fmoc是以Fmoc作为氨基酸α-氨基的保护基。
相比Boc法，Fmoc 法具有反应条件温和、产率高、副反应少等优势。
在两种传统方法的基础上，科学家又逐渐发明了氨基酸的羧内酸苷法（NCA）、组合化学法、液相分段合成法等。
NCA法：氨基酸的羧内酸酐是一种氨基酸衍生物。
NCA 法基于阴离子开环聚合机理,可通过碱类等引发反应。
NCA法反应：在碱性条件下,氨基酸阴离子进攻NCA 形成氨基甲酸根离子,酸化时该离子失去二氧化碳形成二肽，该二肽又在碱性条件下形成阴离子进攻其它的NCA ,如此反复进行下去。
图2. NCA法。
组合化学法：该方法是在固相多肽合成基础上提出来的，即氨基酸的构建单元通过组合的方式连接，合成出含有大量化合物的库，从中筛选出理化性质或者药理活性一致的化合物。
多肽合成工艺与应用
多肽合成工艺与应用多肽合成是一种重要的生物技术，在医药和生物科学领域有着广泛的应用。
多肽是由氨基酸分子组成的多聚体，其中每个氨基酸分子通过肽键结合组成一个多肽分子。
多肽分子的结构和功能是由其氨基酸序列所决定的。
因此，合成具有特定氨基酸序列的多肽分子是研究多肽生物学和医学应用的重要途径。
多肽合成的过程主要分为两种方法：化学合成和生物合成。
化学合成是指通过有机合成化学反应，将多个氨基酸分子逐步连接到一起形成多肽分子。
生物合成则是利用生物体内的生物合成机制，通过蛋白质合成机制合成多肽分子，如利用大肠杆菌表达和纯化多肽分子。
目前，多肽合成技术已成为生物医学研究和药物开发领域不可或缺的一部分。
多肽药物具有较强的靶向性和选择性，因此相对传统药物来说，更加安全有效。
多肽合成技术应用广泛，研究领域包括癌症治疗、神经疾病、肝炎病毒、艾滋病毒以及自身免疫性疾病等等。
多肽合成的技术难度较大，需要高智商的科学家进行研究。
多肽分子的合成需要考虑到每个氨基酸分子的空间位阻和硬度，同时需要考虑肽键的形成和去保护基的过程，因此在多肽合成生产线上，不能出现小小的偏差，否则就会导致多肽分子合成失败。
主要的多肽合成工艺分为液相合成和固相合成两种。
其中，固相合成是目前多肽合成的主流工艺，它可以在较短时间内合成大量的多肽分子，并且可以通过自动化实现快速高效的生产。
固相合成凭借着其快速高效的特点，已被广泛应用于生物医学研究与开发领域。
通过固相合成不仅可以快速合成特定氨基酸序列的多肽，而且还可以开发出不同结构和性质的多肽分子及其衍生物，以实现一些特殊的临床治疗和生物科学目的。
在固相合成工艺中，通常使用的是聚苯乙烯的微粒子作为载体，将第一个氨基酸分子连结到载体上，之后通过肽键的反应逐步添加其他氨基酸分子，最终合成成多肽分子。
在多肽合成过程中，需要处理大量的化学试剂，因此需要进行高质量的卫生清理，并在操作过程中注意安全操作方法。
总之，多肽合成是一种重要的生物技术，在药物开发和生物科学领域具有广泛的应用。
多肽合成方法科普
多肽合成方法一、基本介绍多肽是涉及到生物体内各种细胞功能的生物活性物质。
它是分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的一类化合物，由多种氨基酸按照一定的排列顺序通过肽键结合而成。
到现在，人们已经发现和分离出一百多种存在于人体的肽，对于多肽的研究和利用，出现了一个空前的繁荣景象。
多肽的全合成不仅具有很重要的理论意义，而且具有重要的应用价值。
通过多肽全合成可以验证一个新的多肽的结构；设计新的多肽，用于研究结构域功能的关系；为多肽生物合成反应机制提供重要的信息；建立模型酶以及合成新的多肽药物等。
二、合成方法多肽的合成主要有两种途径：化学合成和生物合成。
化学合成主要通过氨基酸缩合反应来实现。
为得到具有特定顺序的合成多肽，当合成原料中含有官能度大于2的氨基酸单体时，应将不需要反应的基团暂时保护起来，然后再进行连接反应，以保证合成的定向进行。
多肽的化学合成有固相合成和液相合成，其主要的区别在于是否使用固相载体。
多肽液相合成主要有逐步合成和片段组合两种策略，逐步合成简洁迅速，被用于各种生物活性多肽片段的合成；片段组合法为合成含有100个以上氨基酸的多肽提供了最有前途的路线，并已成功地合成了多种有生物活性的多肽，其最大的特点是易于纯制。
液相合成方法现在主要采用BOC和Z两种保护方法，现在主要应用在短肽合成，如阿斯巴甜，力肽，催产素等，其相对与固相合成，具有保护基选择多，成本低廉，合成规模容易放大的许多优点。
与固相合成比较，液相合成主要缺点是，合成范围小，一般都集中在10个氨基酸以内的多肽合成，还有合成中需要对中间体进行提纯，时间长，工作量大。
1963年，Merrifield创立了固相合成法，为此，Merrifield获得了1984年的诺贝尔化学奖。
该方法是将氨基酸的C末端固定在不溶树脂上，然后在此树脂上依次缩合氨基酸、延长肽链。
固相合成法又可分为Boc（叔丁氧羰基）法和Fmoc（9-芴甲氧羰基）法。
它具有合成方便，迅速，容易实现自动化，而且可以比较容易的合成到30个氨基酸左右多肽。
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1．多肽化学合成概述：1963年，R.B.Merrifield［1］创立了将氨基酸的C末端固定在不溶性树脂上，然后在此树脂上依次缩合氨基酸，延长肽链、合成蛋白质的固相合成法，在固相法中，每步反应后只需简单地洗涤树脂，便可达到纯化目的.克服了经典液相合成法中的每一步产物都需纯化的困难，为自动化合成肽奠定了基础.为此，Merrifield获得1984年诺贝尔化学奖.今天，固相法得到了很大发展.除了Merrifield所建立的Boc法(Boc:叔丁氧羰基)之外，又发展了Fmoc 固相法(Fmoc:9-芴甲氧羰基).以这两种方法为基础的各种肽自动合成仪也相继出现和发展，并仍在不断得到改造和完善.Merrifield所建立的Boc合成法［2］是采用TFA(三氟乙酸)可脱除的Boc为α-氨基保护基，侧链保护采用苄醇类.合成时将一个Boc－氨基酸衍生物共价交联到树脂上，用TFA脱除Boc，用三乙胺中和游离的氨基末端，然后通过Dcc活化、耦联下一个氨基酸，最终脱保护多采用HF法或TFMSA(三氟甲磺酸)法.用Boc法已成功地合成了许多生物大分子，如活性酶、生长因子、人工蛋白等.多肽是涉及生物体内各种细胞功能的生物活性物质。
它是分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的一类化合物,由多种氨基酸按照一定的排列顺序通过肽键结合而成。
到现在，人们已发现和分离出一百多种存在于人体的肽，对于多肽的研究和利用，出现了一个空前的繁荣景象。
多肽的全合成不仅具有很重要的理论意义，而且具有重要的应用价值。
通过多肽全合成可以验证一个新的多肽的结构；设计新的多肽，用于研究结构与功能的关系；为多肽生物合成反应机制提供重要信息；建立模型酶以及合成新的多肽药物等。
多肽的化学合成技术无论是液相法还是固相法都已成熟。
近几十年来，固相法合成多肽更以其省时、省力、省料、便于计算机控制、便于普及推广的突出优势而成为肽合成的常规方法并扩展到核苷酸合成等其它有机物领域。
本文概述了固相合成的基本原理、实验过程，对其现状进行分析并展望了今后的发展趋势。
从1963年Merrifield发展成功了固相多肽合成方法以来，经过不断的改进和完善，到今天固相法已成为多肽和蛋白质合成中的一个常用技术，表现出了经典液相合成法无法比拟的优点。
其基本原理是：先将所要合成肽链的羟末端氨基酸的羟基以共价键的结构同一个不溶性的高分子树脂相连，然后以此结合在固相载体上的氨基酸作为氨基组份经过脱去氨基保护基并同过量的活化羧基组分反应，接长肽链。
重复（缩合→洗涤→去保护→中和及洗涤→下一轮缩合）操作，达到所要合成的肽链长度，最后将肽链从树脂上裂解下来，经过纯化等处理，即得所要的多肽。
其中α-氨基用BOC（叔丁氧羰基）保护的称为BOC固相合成法，α-氨基用FMOC（9-芴甲氧羰基）保护的称为FMOC固相合成法，2．固相合成的基本原理多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程，固相合成顺序一般从C端（羧基端）向 N端（氨基端）合成。
过去的多肽合成是在溶液中进行的称为液相合成法。
现在多采用固相合成法，从而大大的减轻了每步产品提纯的难度。
为了防止副反应的发生，参加反应的氨基酸的侧链都是保护的。
羧基端是游离的，并且在反应之前必须活化。
化学合成方法有两种，即Fmoc和tBoc。
由于Fmoc比tBoc存在很多优势，现在大多采用Fmoc法合成，如图：具体合成由下列几个循环组成：一、去保护：Fmoc保护的柱子和单体必须用一种碱性溶剂（piperidine）去除氨基的保护基团。
二、激活和交联：下一个氨基酸的羧基被一种活化剂所活化。
活化的单体与游离的氨基反应交联，形成肽键。
在此步骤使用大量的超浓度试剂驱使反应完成。
循环：这两步反应反复循环直到合成完成。
三、洗脱和脱保护：多肽从柱上洗脱下来，其保护基团被一种脱保护剂（TFA）洗脱和脱保护。
2.1 树脂的选择及氨基酸的固定将固相合成与其他技术分开来的最主要的特征是固相载体，能用于多肽合成的固相载体必须满足如下要求：必须包含反应位点（或反应基团），以使肽链连在这些位点上，并在以后除去；必须对合成过程中的物理和化学条件稳定；载体必须允许在不断增长的肽链和试剂之间快速的、不受阻碍的接触；另外，载体必须允许提供足够的连接点，以使每单位体积的载体给出有用产量的肽，并且必须尽量减少被载体束缚的肽链之间的相互作用。
用于固相法合成多肽的高分子载体主要有三类：聚苯乙烯-苯二乙烯交联树脂、聚丙烯酰胺、聚乙烯-乙二醇类树脂及衍生物，这些树脂只有导入反应基团，才能直接连上（第一个）氨基酸。
根据所导入反应基团的不同，又把这些树脂及树脂衍生物分为氯甲基树脂、羧基树脂、氨基树脂或酰肼型树脂。
BOC合成法通常选择氯甲基树脂，如Merrifield树脂；FMOC合成法通常选择羧基树脂如王氏树脂。
氨基酸的固定主要是通过保护氨基酸的羧基同树脂的反应基团之间形成的共价键来实现的，形成共价键的方法有多种：氯甲基树脂，通常先制得保护氨基酸的四甲铵盐或钠盐、钾盐、铯盐，然后在适当温度下，直接同树脂反应或在合适的有机溶剂如二氧六环、DMF或DMSO中反应；羧基树脂，则通常加入适当的缩合剂如DCC或羧基二咪唑，使被保护氨基酸与树脂形成共酯以完成氨基酸的固定；氨基树脂或酰肼型树脂，却是加入适当的缩合剂如DCC后，通过保护氨基酸与树脂之间形成的酰胺键来完成氨基酸的固定。
氨基、羧基、侧链的保护及脱除要成功合成具有特定的氨基酸顺序的多肽，需要对暂不参与形成酰胺键的氨基和羧基加以保护，同时对氨基酸侧链上的活性基因也要保护，反应完成后再将保护基因除去。
同液相合成一样，固相合成中多采用烷氧羰基类型作为α氨基的保护基，因为这样不易发生消旋。
最早是用苄氧羰基，由于它需要较强的酸解条件才能脱除，所以后来改为叔丁氧羰基（BOC）保护，用TFA（三氟乙酸）脱保护，但不适用含有色氨酸等对酸不稳定的肽类的合成。
1978年，chang Meienlofer和Atherton等人采用Carpino报道的Fmoc(9-芴甲氧羰基)作为α氨基保护基，Fmoc基对酸很稳定，但能用哌啶-CH2CL2或哌啶-DMF脱去，近年来，Fmoc 合成法得到了广泛的应用。
羧基通常用形成酯基的方法进行保护。
甲酯和乙酯是逐步合成中保护羧基的常用方法，可通过皂化除去或转变为肼以便用于片断组合；叔丁酯在酸性条件下除去；苄酯常用催化氢化除去。
对于合成含有半胱氨酸、组氨酸、精氨酸等带侧链功能基的氨基酸的肽来说，为了避免由于侧链功能团所带来的副反应，一般也需要用适当的保护基将侧链基团暂时保护起来。
保护基的选择既要保证侧链基团不参与形成酰胺的反应，又要保证在肽合成过程中不受破坏，同时又要保证在最后肽链裂解时能被除去。
如用三苯甲基保护半胱氨酸的S-，用酸或银盐、汞盐除去；组氨酸的咪唑环用2,2,2-三氟-1-苄氧羰基和2,2,2-三氟-1-叔丁氧羰基乙基保护，可通过催化氢化或冷的三氟乙酸脱去。
精氨酸用金刚烷氧羰基（Adoc）保护，用冷的三氟乙酸脱去。
固相中的接肽反应原理与液相中的基本一致，将两个相应的氨基被保护的及羧基被保护的氨基酸放在溶液内并不形成肽键，要形成酰胺键，经常用的手段是将羧基活化，变成混合酸酐、活泼酯、酰氯或用强的失去剂（如碳二亚氨）形成对称酸酐等方法来形成酰胺键。
其中选用DCC、HOBT或HOBT/DCC的对称酸酐法、活化酯法接肽应用最广。
裂解及合成肽链的纯化 BOC法用TFA+HF裂解和脱侧链保护基，FMOC法直接用TFA，有时根据条件不同，其它碱、光解、氟离子和氢解等脱保护方法也被采用。
合成肽链进一步的精制、分离与纯化通常采用高效液相色谱、亲和层析、毛细管电泳等。
4．固相合成的特点及存在的主要问题固相合成法对于肽合成的显著的优点：简化并加速了多步骤的合成；因反应在一简单反应器皿中便可进行，可避免因手工操作和物料重复转移而产生的损失；固相载体共价相联的肽链处于适宜的物理状态，可通过快速的抽滤、洗涤未完成中间的纯化，避免了液相肽合成中冗长的重结晶或分柱步骤，可避免中间体分离纯化时大量的损失；使用过量反应物，迫使个别反应完全，以便最终产物得到高产率；增加溶剂化，减少中间的产物聚焦；固相载体上肽链和轻度交联的聚合链紧密相混，彼此产生一种相互的溶剂效应，这对肽自聚集热力学不利而对反应适宜。
固相合成的主要存在问题是固相载体上中间体杂肽无法分离，这样造成最终产物的纯度不如液相合成物，必需通过可靠的分离手段纯化。
5．固相合成的研究发展前景固相多肽合成已经有40年的历史了，然而到现在，人们还只能合成一些较短的肽链，更谈不上随心所欲地合成蛋白质了，同时合成中的试剂毒性，昂贵费用，副产物等一直都是令人头痛的问题，而在生物体内，核糖体上合成肽链的速度和产率都是惊人的，那么，是否能从生物体合成蛋白质的原理上得到一些启发，应用在固相多肽合成（树脂）上，这是一个令人感兴趣的问题，也许是今后多肽合成的发展。
在Boc合成法中，反复地用酸来脱保护，这种处理带来了一些问题：如在肽与树脂的接头处，当每次用50%TFA脱Boc基时，有约1.4%的肽从树脂上脱落，合成的肽越大，这样的丢失越严重；此外，酸催化会引起侧链的一些副反应.Boc合成法尤其不适于合成含有色氨酸等对酸不稳定的肽类.1978年，Chang、Meienlofer和Atherton等人采用Carpino［3］报道的Fmoc(9-芴甲氧羰基)基团作为α-氨基保护基，成功地进行了多肽的Fmoc固相合成.Fmoc法与Boc法的根本区别在于采用了碱可脱除的Fmoc为α-氨基的保护基.侧链的保护采用TFA可脱除的叔丁氧基等，树脂采用90%TFA可切除的对烷氧苄醇型树脂和1%TFA可切除的二烷氧苄醇型树脂，最终的脱保护避免了强酸处理.6. HPLC分析和纯化分析HPLC使用柱子和泵系统，可以经受传递高压，这样可以用极细的微粒（3-10μm）做填料。
由此多肽要在几分钟内高度被分析。
HPLC分两类：离子交换和反相。
离子交换HPLC依靠多肽和固相间的直接电荷相互作用。
柱子在一定PH范围带有特定电荷衍变成一种离子体，而多肽或多肽混合物，由其氨基酸组成表现出相反电荷。
分离是一种电荷相互作用，通过可变PH，离子强度，或两者洗脱出多肽，通常，先用低离子强度的溶液，以后逐渐加强或一步一步加强，直到多肽火柱中洗脱出。
离子交换分离的一个例子使用强阳离子交换柱。
如sulfoethylaspartimide通过酸性PH中带正电来分离。
反相HPLC条件与正常层析正相反。
多肽通过疏水作用连到柱上，用降低离子强度洗脱，如增加洗脱剂的疏水性。
通常柱子由共价吸附到硅上的碳氢烷链构成，这种链长度为G4-G8碳原子。
由于洗脱是一种疏水作用。
大的疏水肽用短链柱洗脱好。