认识色谱柱—反相色谱柱
反相 液相色谱柱 类型
反相液相色谱柱类型1.引言1.1 概述反相液相色谱（reversed-phase liquid chromatography, RP-LC）是指在液相色谱中使用极性流动相和非极性固定相的一种分离技术。
相比于传统的正相液相色谱，反相液相色谱更为常用，其应用领域涵盖了许多不同的样品类型和化学物质。
在反相液相色谱中，固定相通常由选择性的疏水性填料组成，而流动相则是一种较为极性的有机溶剂和水的混合物。
当样品在流动相中被注入柱子时，根据样品分子与固定相之间的相互作用力，不同成分将以不同的速率被分离。
这种分离的基本原理是根据分析物分子的极性差异来实现的。
反相液相色谱柱的选择也是非常重要的，不同类型的柱子具有不同的特点和分离效果。
例如，C18柱是最常用的反相液相色谱柱之一，其固定相表面上有十八个碳原子，对中等极性物质具有良好的分离效果。
另外，还有C8柱、C4柱等，它们根据碳原子数的不同而具有不同的分离能力。
总体而言，反相液相色谱柱是一种非常重要和广泛应用的色谱技术。
它在药物分析、环境监测、食品安全检测等领域发挥着重要的作用。
本文将详细介绍反相液相色谱柱的类型以及它们的特点和应用，希望能够为读者对该领域的了解提供一定的帮助。
1.2 文章结构本文将按照以下结构来展开讨论反相液相色谱柱类型。
在引言部分，我们将首先进行概述，介绍反相液相色谱柱的基本概念和重要性。
接着，我们会详细说明全文的结构和组织方式，以便读者能够清楚地了解文章的整体框架。
最后，我们会明确阐述本文的目的，即为读者提供关于反相液相色谱柱类型的全面指南。
在正文部分，我们将分为两个主要要点进行讨论。
首先，我们将介绍反相液相色谱柱类型的基本原理和特点。
这个要点的主要目的是使读者了解反相液相色谱柱的工作原理和它们在分析化学中的应用。
接着，我们将详细介绍不同类型的反相液相色谱柱，例如C18、C8、Phenyl等。
我们将对每种类型的反相液相色谱柱进行描述和比较，以便读者能够理解它们之间的差异和选择适合自己的柱子。
正相色谱和反相色谱
正相色谱和反相色谱正相色谱（Normal Phase Chromatography）正相色谱是一种将物质分离的方法，是一种基于极性差异的液相色谱法。
所谓正相色谱，是因为在正相色谱柱中，填充物通常是一些极性较高的固体相，例如硅胶（silica gel）和氧化铝（alumina）等。
正相色谱柱可以分离无电荷的极性化合物，例如一些羟基化合物和醇类分子。
在正相色谱中，毒理学家可以分离和鉴定一些有机物。
反相色谱（Reverse Phase Chromatography）反相色谱是一种将物质分离的方法，是一种基于亲疏水性质差异的液相色谱法。
所谓反相色谱，是因为在反相色谱柱中，填充物通常是由一个疏水的固体相组成，例如碳颗粒、聚合物等。
反相色谱柱可以分离各种极性分子，例如对有机药物、蛋白质、核酸等进行分离和纯化。
毒理学家可以使用反相色谱技术进行药物开发和毒性评估。
正相色谱和反相色谱之间的不同在正相色谱中，爱保者可以利用样品和固相之间的极性差异来分离和纯化物质。
正相色谱通常用于分离和纯化极性药物和天然产物，如氨基酸，多肽和糖。
在反相色谱中，爱保者利用样品和固相之间的非极性差异来分离和纯化化合物。
反相色谱通常用于分离和纯化疏水药物和天然产物，如脂肪酸，核酸和激素。
正相色谱和反相色谱在毒理学中的应用正相色谱和反相色谱都广泛应用于毒理学，尤其是药物开发和毒性评估。
毒理学家可以利用这些技术来分离和纯化化合物。
毒理学家应用表面增强拉曼光谱（surface-enhanced Raman spectroscopy，SERS）联用反相色谱分离和纯化天然产物，从而破解其分子结构。
结论正相色谱和反相色谱是两种最常用的色谱技术之一，它们是一种高效的分离和纯化化合物的方法。
在毒理学研究和药物开发中，正相色谱和反相色谱可广泛应用。
我们期待在今后研究中看到更多正相色谱和反相色谱的应用，以便更好地了解各种疾病和药物与人体的相互作用。
赛分科技-反相液相色谱柱
其它反相液相色谱柱采用高度可控的单分子层形成和封尾技术 高的柱间重现性 高的选择性和分离效率优异的稳定性3Bio-C8Bio-C8柱适合于肽段的指纹图谱识别，天然和人工合成多肽以及低分子量蛋白等的分离。
3Bio-C4的指纹图谱识别，天然和人工多肽以及低分子量蛋白等的分离等。
色谱柱固定相理化参数应用实例紫杉醇利福平MinutesGP-Phenyl邻苯二甲酸单酯 孟鲁司特钠咀嚼片❀ 订购信息GP-C8 Bio-C8 GP-C4Bio-C4GP-Phenyl长度x 内径 粒径（μm ）订货号 10 mm x 2.0 mm （保护柱） 3 107083-2001108083-2001109043-2001110043-2001111363-2001 30 mm x 2.1 mm 50 mm x 2.1 mm 3 3 107083-2103 107083-2105 108083-2103 108083-2105 109043-2103 109043-2105110043-2103 110043-2105 111363-2103 111363-2105 10 mm x 4.0 mm （保护柱） 3 107083-4001 108083-4001 109043-4001110043-4001 111363-4001 100 mm x 4.6 mm 150 mm x 4.6 mm 250 mm x 4.6 mm 3 3 3 107083-4610 107083-4615 107083-4625 108083-4610 108083-4615 108083-4625 109043-4610 109043-4615 109043-4625 110043-4610 110043-4615 110043-4625 111363-4610 111363-4615 111363-4625 10 mm x 2.0 mm （保护柱） 5 107085-2001 108085-2001 109045-2001110045-2001 111365-2001 30 mm x 2.1 mm 50 mm x 2.1 mm 5 5 107085-2103 107085-2105 108085-2103 108085-2105 109045-2103 109045-2105110045-2103 110045-2105 111365-2103 111365-2105 10 mm x 4.0 mm （保护柱） 5 107085-4001 108085-4001 109045-4001110045-4001 111365-4001 100 mm x 4.6 mm 150 mm x 4.6 mm 250 mm x 4.6 mm 5 5 5 107085-4610 107085-4615 107085-4625 108085-4610 108085-4615 108085-4625 109045-4610 109045-4615 109045-4625 110045-4610 110045-4615 110045-4625 111365-4610 111365-4615 111365-4625 150 mm x 10.0 mm 250 mm x 10.0 mm 5 5 107085-10015 107085-10025 108085-10015 108085-10025 109045-10015 109045-10025110045-10015 110045-10025 111365-10015 111365-10025 10 mm x 21.2 mm （保护柱） 5 107085-21201 108085-21201109045-21201110045-21201111365-21201150 mm x 21.2 mm 250 mm x 21.2 mm 5 5 107085-21215 107085-21225 108085-21215 108085-21225 109045-21215 109045-21225 110045-21215 110045-21225 111365-21215 111365-21225 150 mm x 30.0 mm 250 mm x 30.0 mm 5 5 107085-30015 107085-30025 108085-30015 108085-30025 109045-30015 109045-30025 110045-30015 110045-30025 111365-30010 111365-30025 150 mm x 10.0 mm 250 mm x 10.0 mm 10 10 107089-10015 107089-10025 108089-10015 108089-10025 109049-10015 109049-10025 110049-10015 110049-10025 111369-10015 111369-10025 150 mm x 21.2 mm 250 mm x 21.2 mm 10 10 107089-21215 107089-21225 108089-21215 108089-21225 109049-21215 109049-21225 110049-21215 110049-21225 111369-21215 111369-21225 150 mm x 30.0 mm 250 mm x 30.0 mm10 10107089-30015 107089-30025108089-30015 108089-30025109049-30015 109049-30025110049-30015 110049-30025111369-30015 111369-30025注：以上为常备规格订货信息，其它规格或特殊定制产品电询。
反反相色谱柱
反反相色谱柱反相相色谱柱（Reverse-phase chromatography column，RPC）是由具有疏水性的聚合物材料制成的色谱柱，通过这种柱子进行反相色谱技术，适用于分离水溶性化合物。
而反相相色谱柱（Normal-phase chromatography column，NPC）也是由聚合物材料制成的柱子，通常用于气相色谱（Gas chromatography，GC）分析。
与NPC相比，RPC具有更高的选择性和灵敏度，是许多分析实验室中使用的标准柱子之一。
RPC的原理是利用固定相和流动相之间的亲疏水性差异来分离化合物。
InRPC中，固定相是一种聚合物材料，它的表面上覆盖有可逆的疏水基团，这些基团可以与水相互作用，但不能与非极性或疏水溶剂（例如乙腈、甲醇或乙醇）相互作用。
流动相是一种含水量低的有机溶剂，它可以与固定相上的可逆基团相互作用。
反相柱的基础是用比固体相为主的高分子材料并通过化学修饰来改变它们的亲疏水性质来实现分离化合物的任务。
RPC柱可以分为两种类型，即水介质反相柱和有机介质反相柱。
前者适用于水溶性化合物的分离和提取，流动相为水和有机物的混合物，而后者适用于非极性或疏水性化合物的分离和提取，流动相以有机物为主的混合物，例如乙醇和水的混合物、甲醇和水混合物、醋酸和水混合物等。
在 RPC中，分离过程可以通过调整流动相的配比和流量来控制，根据化合物的亲疏水性质来改变分离条件。
在水介质反相分离中，一般流动相为甲醇和acetonitrile（ACN）等有机物和水的混合物，流量通常在0.2-3.0 mL/min之间。
而在有机介质反相分离中，流动相为有机物和水的混合物，流量通常在0.5-1.0 mL/min之间。
总之，RPC是一种广泛应用于分离水溶性化合物的技术，通过调整流动相的组成和流量，可对不同化合物进行有效分离。
同时，RPC具有分离速度快、准确性高、可逆性好等优点，是许多实验室中常用的技术之一。
液相色谱柱的经典问题总结
液相色谱柱的经典问题总结1、什么是反相柱、正相柱？“反相”和“正相”的概念是液相色谱法早期提出的概念，当时键合相色谱柱尚未出现，固定相被涂覆在载体表面，极易流失，为此科学家对流动相使用给出了合理的建议：流动相极性与固定液极性应具有较大差别，以减少固定液流失。
固定相极性弱于流动相时的液相色谱法被称为反相色谱法，固定相极性强于流动相时的液相色谱法被称为正相色谱法。
尽管目前键合相色谱柱已成为主流，但这一概念在色谱方法开发、预测出峰顺序等方面具有重要意义。
由上面的介绍可知具体的色谱方法、色谱柱属于正相还是反相不仅取决于固定相极性，同时还取决于流动相极性。
C18（硅胶键合十八烷基硅烷）、C8（硅胶键合辛基硅烷）、PH（硅胶键合苯基硅烷）等色谱柱，由于固定相极性极低，比目前已知的任何流动相的极性都要低，因而是标准的反相柱；Silica（硅胶）、NH2（硅胶键合氨丙基硅烷）具有较高的极性，主要用于分离带有极性基团的化合物，所用流动相的极性通常低于这些固定相，因而是标准的正相柱。
CN（硅胶键合腈丙基）的极性适中，当流动相极性超过CN时，它属于反相柱，反之则是正相柱。
2、色谱柱规格对分析结果会产生何种影响？色谱柱内径决定载样量，载样量与内径的平方成正比；色谱柱长度与塔板数成正比，与柱压成正比；粒径影响涡流扩散相，粒径越小涡流扩散相越小，柱效越高，粒径与柱效近似成反比；粒径越小，压力也越大，压力与粒径的平方成反比。
填料孔径对分析对象的分子量有限制，当孔径为分析物尺寸的5倍以上时，分析物才能顺利通过孔隙，孔径处于60~120 Å的色谱柱适用于相对分子量小于10000的分析物，孔径为300 Å的色谱柱可以满足分子量处于10000以上的大分子化合物分析。
3、液相色谱分析中如何才能提高分离度？下式为分离度计算公式：N：柱效反映色谱柱性能，柱效越高，分离度越好。
在其他条件恒定的情况下，塔板数增加一倍，分离度仅提高40%。
反相色谱柱
反相色谱柱
反相色谱柱（Reverse Phase Chromatography Column）就是指交换相相反的色谱柱，它与正相色谱柱最大的不同就是其固定相成分是疏水性的，相比之下，正相色谱柱的固定相成分是亲水性的。
反相色谱柱能够在样品分离中提供更高的选择性和特异性，因此在生化、医学或化学领域的样品分离中都得到了广泛的应用。
反相柱的工作原理
反相柱的固定相为一种亲油类材料，如碳氢化合物、疏水性聚合物等，通过与移动相中的亲水类化合物发生静电交换而实现手段分离。
由于反相色谱柱的固定相是疏水材料，因此它可以随着溶剂极性的变化而改变样品吸附和洗脱的性质。
反相柱的应用
反相柱在生物学、医学、化学和食品领域中应用广泛，是鉴别和分离化合物的最基本技术之一。
在生物学领域，反相柱用于分离复杂的蛋白质混合物，如血清等，在制药工业中，反相色谱柱被广泛应用于分离和纯化药物，如抗癌药物、抗生素等。
在食品分析中，反相柱用于分离和分析带有不同疏水性的化合物，如蛋白质、糖类和脂质。
反相柱的优点和缺点
反相色谱柱操作简单，效率高，分离效果好，可以分离各种极性的化合物。
与正相色谱柱相比，反相柱选择性更高。
但是它并不适用于极性很高的物质，如乙醇等，同时还需要注意的是它对于多肽和糖类等高8极性物质分离效果较差，因此在使用反相柱进行样品分离时，需要根据具体的样品特性选择合适的柱型。
总之，反相色谱柱作为一种重要的色谱柱类型，已经成为分离、分析和纯化化合物的著名分析技术，为科学界和工业界提供了不少便利，然而也需要我们在使用过程中切记仔细细致地进行操作，以获得更好的分离效果。
反相色谱柱型号
反相色谱柱型号全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：反相色谱柱是液相色谱中常用的一种类型，它采用了与样品相互排斥的固定相，使得被分析的溶质在流动相中逆相运动，从而实现有效的分离。
在反相色谱柱的选择中，柱型号是一个非常重要的考虑因素，不同的柱型号适用于不同的分析要求。
本文将介绍反相色谱柱的柱型号及其选择原则。
反相色谱柱的柱型号通常由其内径、长度和填充物类型组成。
内径是指柱子内部管壁到中心轴的距离，通常以毫米（mm）为单位表示。
常见的内径包括2.1mm、4.6mm、和10mm等。
长度是指柱子的有效填充长度，通常以毫米为单位表示。
填充物类型是指柱子内部的固定相种类，包括C18、C8、C4等，不同的填充物类型适用于不同种类的样品分析。
选择反相色谱柱的柱型号时，需要考虑以下几个因素：首先是分析样品的性质。
一般来说，对于小分子有机化合物的分析，内径较小的柱子更适合，因为它有更好的分辨率和灵敏度。
对于大分子蛋白质或多肽的分析，则需要较大内径的柱子以提高样品的负载能力。
其次是分析的目的。
如果是快速分析，可以选择长度较短的柱子，但分离效果可能会较差。
如果是需要高分离效果的定量分析，可选择长度较长的柱子，虽然分析时间较长，但分离效果更好。
再次是设备的匹配性。
柱子的直径和长度需要与色谱仪器的性能匹配，使得色谱系统工作更加稳定可靠。
最后是经济考虑。
不同的柱型号价格也不同，需要根据实验室的经济预算选择适合的柱型号。
在实际应用中，一般会根据分析的具体要求来选择反相色谱柱的柱型号。
如果是初步筛选实验，可以选择内径较小、长度较短的柱子；如果是定量分析或者需要高分辨率的分析，则需要选择内径较大、长度较长的柱子。
在选择反相色谱柱的柱型号时，需要综合考虑样品性质、分析目的、设备匹配性和经济预算等因素，以选择出最适合的柱子进行分析。
只有选择合适的柱型号，才能够确保实验的准确性和稳定性，为科研工作提供可靠的支持。
希望本文能够帮助读者更好地了解反相色谱柱的柱型号选择原则。
反相色谱柱的选择和使用 色谱柱如何操作
反相色谱柱的选择和使用色谱柱如何操作液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。
正相柱大多以硅胶为柱，或是在硅胶表面键合—CN,—NH3等官能团的键合相硅胶柱；反相柱填料紧要以硅胶为基质，在其表液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。
正相柱大多以硅胶为柱，或是在硅胶表面键合—CN,—NH3等官能团的键合相硅胶柱；反相柱填料紧要以硅胶为基质，在其表面键合非极性的十八烷基官能团（ODS）称为C18柱，其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。
另外还有离子交换柱，GPC柱，聚合物填料柱等。
下面介绍一下反相色谱柱的选择和使用：一、反相色谱柱的选择1.柱子的PH值使用范围反相柱优点是固定相稳定，应用广泛，可使用多种溶剂。
但硅胶为基质的填料，使用时确定要注意流动相的PH范围。
一般的C18柱PH值范围都在2—8，流动相的PH值小于2时，会导致键合相的水解；当PH值大于7时硅胶易溶解；常常使用缓冲液固定相要降解。
一旦发生上述情况，色谱柱人口处会塌陷。
同样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同。
假如流动相PH较高或常常使用缓冲液时，建议选择PH范围大的柱子，例如戴安公司的Acclaim柱PH2—9或Zorbax的PH2—11.5的柱子。
2.填料的端基封尾（或称封口）把填料的残余硅羟基接受封口技术进行端基封尾，可改善对极性化合物的吸附或拖尾；含碳量增高了，有利于不易保留化合物的分别；填料稳定性好了，组分的保留时间重现性就好。
假如待分析的样品属酸性或碱性的化合物，可以选用填料经端基封尾的色谱柱。
二、液相色谱柱的使用色谱柱在使用前，可以进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
在做柱性能测试时要依照色谱柱出厂报告中的条件进行（出厂测试所使用的条件是较佳条件），只有这样，测得的结果才有可比性。
但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同。
1、样品的前处理a、可以使用流动相溶解样品。
c18色谱柱的适用范围
c18色谱柱的适用范围
C18色谱柱是一种常见的反相色谱柱，它由硅胶为基质，表面覆盖十八烷基官能团（ODS）构成。
C18的碳链长度为18个碳原子，因此被称为“C18”。
C18色谱柱还具有很好的耐酸碱性和耐溶剂性，可以在pH2-9的范围内使用。
这种色谱柱具有高分离度、高灵敏度和高稳定性等优点，因此在许多领域中都有广泛的应用。
包括药物、食品添加剂、环境污染物、天然产物等。
它可以用于正相、反相、离子对和离子交换等多种色谱模式。
在反相色谱中，C18色谱柱可以用于分离非极性或弱极性的化合物，如脂肪酸、醇类、酮类、酯类等。
此外，C18色谱柱还可以用于分离含有不同官能团的化合物，如酚类、胺类、羧酸类等。
它还具有良好的热稳定性，可以在高温下使用。
这些优点使得C18色谱柱在实验室和工业领域中都得到了广泛应用。
C18色谱柱是一种非常实用且功能强大的色谱柱，适用于分析各种类型的有机化合物。
它在药物分析、食品安全检测、环境监测等领域都有着重要的应用价值。
随着科学技术的不断发展，C18色谱柱在未来仍将发挥重要作用。
色谱柱说明书-反相系列色谱柱 (RPC)
反相系列色谱柱(RPC)使用说明书1. 适用范围以硅胶为基质，表面键合C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C1(SAS)、C6H5(Phenyl)官能团的反相色谱（RPC, Reversed Phase Chromatography ）填料的系列色谱柱。
2.性能验收收到色谱柱，开箱检验确认后，请尽快按照色谱柱评价报告中的色谱条件进行测试，以确认色谱柱品质。
样品：① 尿嘧啶(5.0×10-6g/mL) ② 苯乙酮(2.0×10-5g/mL) ③ 甲苯(7.5×10-4g/mL) ④ 乙苯(6.0×10-4g/mL) ⑤ 芴(1.0×10-5g/mL)样品均使用流动相溶解及稀释。
注：如上述条件与色谱柱检测报告不一致，以检测报告为准。
3.色谱柱连接色谱柱入口和出口按色谱柱标签箭头所示方向连接。
色谱柱连接管端口部分必须平整，不能出现毛刺和切口斜面等现象。
在可能的条件下，色谱柱两端的连接管路要尽可能短，连接管内径应尽可能小，以防止因样品扩散造成不能反映色谱柱真实柱效等情况发生。
4. 使用pH 值范围和耐水性常规色谱柱使用pH 值范围是2.0~8.0，特殊填料色谱柱pH 值使用范围更宽，如Supersil 系列为1.5~10，SinoPak 系列为1~12。
常规色谱柱是使用水相不高于90%，特殊处理的填料色谱柱耐水性更高，如SinoChrom ODS-BP 色谱柱最高使用水相比例可达95%，AQ 系列色谱柱可以使用100%水相。
5.使用温度范围推荐使用温度不高于60℃。
当使用磷酸盐缓冲液，在中等或高pH 值操作时，建议柱温不要超过40℃。
使用中避免温度突然升高。
6.色谱柱储存过夜或短时间储存：使用缓冲溶液或含盐流动相时，需要用10%~20%甲醇/水或乙腈/水将色谱柱和系统内流动相置换，色谱柱储存溶剂中有机溶剂浓度不低于20%。
长时间储存：可以用纯甲醇或纯乙腈储存，并将色谱柱堵头拧紧。
制备色谱柱型号
制备色谱柱的型号多种多样，具体取决于不同的应用和需求。
以下是一些常见的制备色谱柱型号及其特点：
1. 正相色谱柱：通常采用硅胶或氧化铝作为填料，适用于分离极性物质和官能团较为活泼的化合物。
常
用的正相色谱柱有：① Baseline正相色谱柱，适用于一般的有机化合物分离；② C18十八烷基键合球形硅胶色谱柱，适用于一般的有机化合物和生物大分子的分离。
2. 反相色谱柱：通常采用C18、C8、C4等烷基键合硅胶作为填料，适用于分离极性较弱的物质和蛋白
质、多肽等生物大分子。
常用的反相色谱柱有：① C18反相色谱柱，适用于一般的有机化合物和生物大分子的分离；② C8反相色谱柱，适用于分离极性较弱的有机化合物；③ C4反相色谱柱，适用于分离极性更弱的有机化合物。
3. 离子交换色谱柱：通常采用阴离子或阳离子交换剂作为填料，适用于分离带有电荷的离子化合物。
常
用的离子交换色谱柱有：①阴离子交换色谱柱，适用于分离带有负电荷的离子化合物；②阳离子交换色谱柱，适用于分离带有正电荷的离子化合物。
4. 凝胶色谱柱：通常采用多孔性的凝胶作为填料，适用于分离分子量较大的化合物。
常用的凝胶色谱柱
有：① Sephadex G系列凝胶色谱柱，适用于一般的凝胶过滤分离；② Superdex系列凝胶色谱柱，适用于分离生物大分子和多聚物。
正相柱还是反相柱
正相柱反相柱的使用特别注意HPLC使用过后的系统清洗：含有缓冲盐溶液的流动相的清洗方法：1、先用100%的纯水冲洗，打开排放阀，用3~5ml/min的流量，洗二十分钟左右后停泵。
此举主要是针对吸液系统、泵头、进出口单向阀等体积较大的空间的清洗2、再用95：5的甲醇/水清洗整个系统，关闭排放阀，用1ml/min的流量，洗30~60分钟后停泵。
此举主要是用水清洗整个系统中的盐，用5%的甲醇主要是为了保护色谱柱。
3、最后用100%的甲醇清洗整个系统，用1ml/min的流量，洗2分钟左右，然后关机。
如果流动相中不含盐，则使用上述第三步清洗即可。
当固定相的极性大于流动相的极性时，可称为正相分配色谱或简称正相色谱.若固定相的极性小于流动相的极性时，可称为反相分配色谱或简称反相色谱.在用于正相色谱时，可使用如正己烷的低极性流动相，在用于反相色谱时，可使用甲醇或水的强极性流动相.正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。
这种填料做成的柱子就称为正相柱.反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相,常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等.这种填料做成的柱子就称为反相柱.正相柱和反相柱缘于，柱上固定相与流动相之间极性的对比。
若固定相极性大于流动相，为正相柱，反之，为反相柱。
通常为反相柱应用较多。
所有色谱均适用，包括纸色谱和薄层。
现在一般都用反相，正相在样品对水敏感等特殊情况下才使用。
正相的固定性是极性的，流动相是非极性的，适于分离强极性物质。
反相的固定性是非极性的，流动相是极性的，适于分离弱极性物质。
正相色谱柱与反相色谱柱的区别本质上是填料(固定相)的不同,正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强；反相色谱柱填料极性弱，洗脱顺序由强到弱。
以下是详细说明：1、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。
各种不同色谱柱在填料上的化学差别
各种不同色谱柱在填料上的化学差别
2014-02-17 蒋竞波谱分析
色谱柱是什么
1）反相色谱柱C8，C18，phenyl，氰基柱，这些反相色谱柱都是硅胶基质，然后利用硅胶上面的硅羟基，连接不同的键合相，从而得到不同类型的的色谱柱。
下面这张图是色谱柱里面硅胶的围观结构
2）键合相是通过什么样的办法连接上硅胶的呢？它们是通过氯硅烷与硅羟基反应脱去一份子HCl完成键合和连接的，下图中R的种类决定了柱子的型号，如果R是C8则这个柱子是C8柱，如果R是C18则这个柱子就是C18柱子。
3）为什么不同的色谱柱会产生不同的分离效果呢？这主要是由不同的R基团与样品的相互作用的差异造成的，比如C8 和C18的柱子的差别在疏水性，phenyl柱如果遇到含有苯环的化合物除了有疏水作用还会产生苯环与苯环
两个平面的相互作用，下面是一组化合物在不同的填料上的出峰情况，
4）什么是色谱柱的封端，色谱柱为何要封端？
色谱柱封端指的是用四甲基硅氯封住硅胶表面裸露的羟基，有与TMSCl比键合相分子要小很多，所以它有机会与更多的羟基反应，实现封端，封端的目的主要是为了减少硅胶上的OH与急性样品形成比较强的氢键左右而形成拖尾。
下面就是柱子封端示意图。
5）那么应该如何根据结构来选择色谱柱呢？请看下回分解。
反相液相色谱柱的使用 液相色谱如何操作
反相液相色谱柱的使用液相色谱如何操作反相液相色谱柱具有无与伦比的性能。
即使对于特别难分别的碱性化合物，也可获得杰出的峰形，从而改善了这些类型的样品的柱效和分别度。
反相液相色谱柱使用中的反相液相色谱柱具有无与伦比的性能。
即使对于特别难分别的碱性化合物，也可获得杰出的峰形，从而改善了这些类型的样品的柱效和分别度。
反相液相色谱柱使用中的注意事项1、新C18柱在使用前，须先用甲醇或乙腈试剂以20倍柱体积低流速冲洗，作用是使固定相能充分润湿、碳链伸展彻底，使反相液相色谱柱的性能达到更好状态。
实在操作是，将配制好65%的乙腈/水冲洗后，把色谱柱进口端连接在色谱仪上，出口端放空（不可连上检测器，以免污染了检测器），以0.1ml/min～0.5ml/min的低流速将色谱柱中的清稀溶液吹干，过20分钟后再接上检测器，以 1.0ml/min的流速，连续冲洗2～8小时；2、液相色谱仪检测分析样品完毕后，须冲洗色谱柱。
尤其是流动相中含有酸或盐时，需将色谱柱中的酸或盐冲洗干净，通常建议用10%甲醇水冲洗20倍柱体积；3、若反相液相色谱柱处于长期闲置状态时，要将色谱柱彻底冲洗，建议冲洗3—4小时以上，保存在纯有机试剂或高比例的有机试剂溶液中；4、由于C18柱的固定相疏水性较强，在使用过程中尽量不要使用高水相条件，若水相比例过高易引起固定相疏水塌陷，引起柱效快速下降，甚至造成不可逆的负面影响；由于碳载量高，表现尤为明显，建议使用过程中水相比例不超过90%；5、压力上升、柱性能下降：通常为色谱柱被污染，对色谱柱进行再生处理可恢复部分柱效；6、压力骤升：通常由盐析出或筛板堵塞引起，若是盐析出，用10%甲醇水低流速冲洗至压力恢复即可；若判定并非盐析出，以纯甲醇或10%甲醇水为流动相反冲色谱柱（将色谱柱反接，不接检测器），若反冲半小时仍无效果则说明反冲无效，需找寻其他原因。
在硅胶制造和键合技术方面进行了改进，因此能够获得这样优异的性能，并且这些技术完全由掌控。
赛分科技-C18反相液相色谱柱
更多产品信息欢迎登陆; 2C18反相液相色谱柱GP-C18OSi CH 3CH 3(CH 2)17 CH 3GP-C18以全覆盖的键合硅胶为填料，具有优异的稳定性。
独特的单官能团化学键合技术可避免形成复合的C18分子层。
均匀的涂层确保了固定相具有高选择性和高效率的分离特点。
• 推荐使用有机溶剂或有机溶剂/水体系的流动相HP-C18(CH 2)17–CH 3HP-C18以全覆盖的键合硅胶为填料，具有优异的稳定性。
它能用纯水作为流动相，可分离酸性、中性和碱性有机化合物，以及许多药物和多肽等。
Bio-C18CH 3CH 3O Si (CH 2)17 CH 3Bio-C18具有大的孔径，可用纯水作为流动相，因此，Bio-C18柱是测定和分析天然和合成多肽以及小分子蛋白质的理想色谱柱。
特殊化学键合技术形成单层ODS ，在纯水溶液中不会崩解。
BR-C18O Si OO2)17 CH 3BR-C18特别为各种碱性化合物的分离而设计，pH 耐受范围为1.5-10.5。
色谱柱固定相理化参数特性采用高度可控的单分子层形成和封尾技术 高的柱间重现性高的选择性和分离效率柱稳定性赛分科技的C18 HPLC 柱固定相以全覆盖的硅胶为填料，因此具有优异的稳定性。
Figure 1和Figure 2分别显示了苯胺、苯甲醚和甲苯在GP-C18和HP-C18上运行13,000倍柱体积流动相（甲醇: 水= 85: 15, v/v ）后保留时间依然高度重现。
这种稳定性使我们的C18产品非常适合于各种分析物的确认。
赛分科技的BR-C18柱使用的是被完全覆盖的键合硅胶填料，因此即使在高pH 环境下仍具有优异的化学稳定性。
Figure 3是对测试化合物甲苯以55%乙腈-45%水（pH 10）为流动相运行18,000倍柱体积后得到的结果，可见保留时间高度重现。
如此高的稳定性使BR-C18柱特别适用于许多分析物的确认。
BR-C18独有的化学键合技术使其具有高选择性和高分离效率的特点。
正相色谱柱与反相色谱柱的区别
色谱根据极性分类流动相极性＞固定相极性- 反相色谱流动相极性＜固定相极性- 正相色谱一、吸附色谱（adsorption chromatography）又叫液固色谱法：流动相是液体，固定相是固体。
分离原理：固定相是固体吸附剂，吸附剂是多孔性微粒物质表面有吸附中心。
样品组分与流动相竞争吸附中心。
各组分的吸附能力不同，使组分在固定相中产生保留时间不同和实现分离。
固定相：固定相通常是强极性的硅胶、氧化铝、活性炭、聚乙烯、聚酰胺等固体吸附剂。
活性硅胶最常用。
流动相：弱极性有机溶剂或非极性溶剂与极性溶剂的混合物，如正构烷烃（己烷、戊烷、庚烷等）、二氯甲烷/甲醇、乙酸乙酯/乙腈等。
应用：对于极性，结构异构体分离和族分离仍是最有效的方法，如农药异构体分离、石油中烷、烯、芳烃的分离。
缺点是容易产生不对称峰和拖尾现象。
二、分配色谱原理：固定液机械的吸附在惰性载体上，样品分子依据他们在流动相和固定相间的溶解度不同，分别进入两相分配而实现分离。
固定相：将一种极性或非极性固定液吸附在惰性固相载体上。
如全多孔微粒硅胶吸附剂。
根据极性不同分类：正相分配色谱—固定相载体上涂布的是极性固定液；流动相是非极性溶剂；可分离极性较强的水溶性样品；弱极性组分先洗脱出来。
反相分配色谱—固定相载体上涂布的是非极性或弱极性固定液；流动相是极性溶剂；强极性组分先洗脱出来。
液-液分配色谱固定相中的固定液体往往容易溶解到流动相中去，所以重现性很差，且不能进行梯度洗脱，已经不大为人们所采用。
三、键合相色谱考虑分配色谱法中固定液的缺点，因此将各种不同的有机关能团通过化学反应共价结合到固定相惰性载体上，固定相就不会溶解到流动相中去了。
键合固定相优点：1、对极性有机溶剂有良好的化学稳定性2、使色谱柱的柱效高、寿命长3、实验重现性好4、几乎适于各种类相的有机化合物的分离，尤其是k’宽范围的样品5、可以梯度洗脱根据极性不同分类：正相键合相色谱—固定相极性＞流动相极性固定相：二醇基、醚基、氰基、氨基等极性基团的有机分子。
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2.00
4.00
6.00
M inutes
nortriptyline
pH 7.0
1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 M inutes
8.00 10.00
amitriptyline
6.00 7.00 8.00
封端
常用封尾end-capped ： 三甲基硅氧烷
极性封尾，增加极性保留
HILIC柱
Zic-HILIC Hypersil GOLD HILIC Atlantis HILIC 柱
目的：改善峰形
目的：提高极性化合物 保留
宽pH色谱柱
ECOSIL ODS-Extend Xbridge/Xterra C18/C8 Gemini C18 Zorbax Extend
目的：提高色谱柱pH使 用范 物的保留及 严重拖尾
两实验使用相同的传统C8硅胶柱
既然pH< 3时硅醇基离解受抑制，为何不在所有情 况下采用酸性条件进行分离?
低pH可导致分离选择性的丧失!---碱性基团离子化，极性增加
AU
AU
0.04
pH 2.0
0.02
0.00 0.00
0.04 0.03 0.02 0.01 0.00
宽pH 柱
硅胶柱应用禁区的有力手段
无机基质 (C18 –硅胶)
有机基质 (高聚物)
优点
• 机械强度高
• 柱效高 • 保留稳定
疏水塌陷
什么是“疏水塌陷”？
低比例有机溶剂或纯 水溶液流动相
湿润的孔
C18 硅胶
未湿润的孔
注意：保留时间与填料表面积与配体有关。然而，如果硅胶表面未湿润，那么有效的色 谱表面积会减少95%，因此，减少被分析物的保留时间即等于“疏水塌陷”，记 住：几乎所有的表面积都在孔内！
疏水塌陷
流动相：0.1% 醋酸水溶液
由于空间位阻的存在，键合反应最多 只能覆盖50%的硅羟基，超过一半硅 羟基是活性硅羟基，与碱性基团会发 生离子交换作用，增加了保留，导致 峰形拖尾，用短链氯硅烷（如三甲基 氯硅烷）键合活性的硅羟基，可以减 小这种影响，这种操作被称为封尾， 封端，封口。
封端
封端
–封口残余硅羟基 –减少不可逆吸附或拖尾 –增加碳含量（0.1% -1%）
阿莫西林 初始时
停流速后 (孔去湿: ~3%)
0
2
4
6
8
10
Minutes
AQ 柱
1、极性封尾 2、极性嵌入
3、低碳载量极性保留机理：离子交换+疏水作用
4、保留硅羟基 5、增加极性嵌入键合相
对极性与非极性化合物的优异保留特性 在100％水溶液流动相中运行保持色谱性能稳定 峰形优异 超低键合相流失，质谱兼容 酸性条件下稳定性良好 在高水相、低pH条件下具有较长的色谱柱寿命 极佳的色谱柱间重现性 碳载量低，不适合分离复杂组份和强碱性化合物
N
+
CH3
屏蔽了带负 电的硅羟基
改善与水的浸润性－100%水溶液兼容 降低了碱性化合物的保留 降低了拖尾现象
碱性分析物在硅胶柱上的拖尾机理
与键合相的疏水性作用
当流动相pH值小 于3时, 硅醇基呈
中性(未解离)
O-Si
O-Si OH O-Si O- Si OH
O-Si OH O-Si O- Si O-Si
现代色谱柱三大技术平台
纯硅胶柱
ECOSIL ODS-SH Purospher STAR RP18e Symmetry C18
亲水AQ柱
ECOSIL ODS-AQ Atlantis Dc18, T3 Synergi Hydro-RP
极性嵌入柱
ECOSIL ODS-EPS Zorbax-Bonus RP18 Symmetry shield RP18
OH O-Si O-Si
Base
双重保留机理:1). 与键合相的的疏水性作
用; 2). 与残余硅醇基间的离子交换作用
H+N(CH3)2
O-Si
O-Si O-
离子交换作用
O-Si
O-Si
OO--Si
(CH ) H+N 32
O-
O-Si
O-Si
O-Si OO--Si
O-Si
当流动相为 pH68时, 硅醇基带负
反相色谱C18填料
硅胶
注意： • 硅胶 颗粒大小分布 • 金属残留 • 内部孔径 • 实心核颗粒
改性硅胶
硅甲基嵌入型聚乙氧基 硅烷 (MPEOS)
四乙氧基硅烷 (TEOS)
甲基三乙氧基硅烷 (MTEOS)
碱性条件下硅胶溶解
普通硅胶柱
waters改性硅胶 柱
• 硅胶快速溶解 • 严重的柱失效 • 柱寿命短暂
范围，最大耐压，筛板孔径等
内径 长度
粒径 碳载量 孔径 比表面积
材质 封端
柱效 拖尾 载样量（体积） 载样量（浓度） 分离度 回收率
你能正确连接它们吗？
填料
• 硅胶 等载体 （正相色谱） • 硅胶+键合相 （反相色谱） • 聚合物+键合相 （离子交换，手性色谱柱等） • 整体柱 （空间排阻色谱等）
阿莫西林
“湿润时”
“去湿后”
0
2
4
6
8
Vo：被分析物没有保留
此时色谱柱并没有“坏”，如何复原： –低比例有机相低流速冲洗过渡，然后高比例低流速。
10 分
疏水塌陷
极性嵌入色谱柱：无疏水塌陷现象发生
内嵌极性基团键合相：
–使用高比例水溶液流动相时色谱性能稳定
保留时间无变化
流动相：0.1% 醋酸水溶液
• 因嵌入硅甲基的阻挡, 颗粒表面溶解速 度明显减缓
• 柱寿命大大延长 •pH范围可达1~11
键合
、双、三官能团键合 三官能团键合 二官能团键合
单官能团键合
键合密度
• 碳载量 •影响残留硅羟基比率 • 键合相流失率
常见键合相
主要作用机 疏水 理
疏水 π-π 疏 疏水 水
氢键 π-π
氢键
氢键
阳离子 阴离子 交换 交换
空间位阻
空间位阻：异丙基硅氧烷，异丁基硅氧烷 增加pH范围，但有限，一般1~9
• Agilent • Phenomenex
空间位阻
• 抗水解
Agilent XDB
极性嵌入
Waters “Shield”
内嵌极性基团固定相：水表面层可能机理 极性基团增加了表面层水的浓度
水 “屏蔽” 层
H3C H
色谱分离基本原理
“两相分配，相似相溶”
色谱柱结构
色谱柱有方向性，主要与装填技术有关。 筛板的内部孔形态会影响柱效
规格
Waters XBridge Shield RP 18 4.6*250mm 5um
• 表观规格：柱管材质，填料分类，尺寸，粒径 • 隐藏信息：碳载量，平均孔径，比表面积，封端，键合类型，pH