正相色谱柱与反相色谱柱有哪些区别
高效液相色谱的正相与反相怎么区分
正相反相取决于固定相的极性高于流动相是正相反之则反。
流动相极性大于固定相,称之为反相。
流动相极性小于固定相,称之为正相。
看色谱柱的固定相填料是什么:
正相色谱法:采用极性固定相(如聚乙二醇、氨基与腈基键合相);流动相为相对非极性的疏水性溶剂(烷烃类如正已烷、环已烷),常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。常用于分离中等极性和极性较强的化合物(如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等)。
反相色谱法:一般用非极性固定相(如C18、C8);流动相为水或缓冲液,常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。适用于分离非极性和极性较弱的化合物。RPC在现代液相色谱中应用最为广泛,据统计,它占整个HPLC应用的80%左右。
根据流动相,固定相之间的极性大小来区分的。
流动相极性大于固定相,称之为反相。
流动相极性小于固定相,称之为正相。
液相色谱法中反相柱、正相柱的概念
液相色谱法中反相柱、正相柱的概念
“反相”和“正相”是液相色谱法早期提出的概念,当初键合相色谱柱尚未浮现,固定相被涂覆在载体表面,极易流失。为此,科学家对流淌相的用法,给出了合理的建议:流淌相极性与固定液极性应具有较大差别,以削减固灌航失。固定相极性弱于流淌相时的液相色谱法,被称为反相色谱法,固定相极性强于流淌相时的液相色谱法,被称为正相色谱法。尽管目前键合相色谱柱已成为主流,但这一概念在色谱办法开发、预测出峰挨次等方面仍具有重要的意义。由上面的介绍可知,详细的色谱办法、色谱柱属于正相还是反相,不仅取决于固定相极性,同时,还取决于流淌相极性。C18(硅胶键合十八烷基硅烷)、C8(硅胶键合辛基硅烷)、phenyl(硅胶键合苯基硅烷)等色谱柱,因为固定相极性极低,因而是标准的反相柱;Silica(硅胶)、NH2(硅胶键合氨丙基硅烷)具有较高的极性,主要用于分别带有极性基团的化合物,所用流淌相的极性通常低于这些固定相,因而是标准的正相柱。CN(硅胶键合腈丙基)色谱柱的极性介于正相和反相之间。当流淌相极性超过CN时,它属于反相柱;反之,则是正相柱。色谱柱内径打算载样量,载样量与内径的平方成正比。色谱柱长度与塔板数成正比,与柱压成正比,柱长越长,
分别度越好,但时光会越长。粒径影响涡流蔓延相,粒径越小,涡流
蔓延相越小,柱效越高,粒径与柱效近似成反比。粒径越小,压力也
越大,压力与粒径的平方成反比,但粒径越小,分别度会越高。填料
孔径对分析对象的相对分子质量有限制,当孔径为分析物尺寸的5倍
以上时,分析物才干顺当通过孔隙,孔径处于6~12nm的色谱柱,适
反相色谱柱的选择和使用 色谱柱操作规程
反相色谱柱的选择和使用色谱柱操作规程
液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。正相柱大多以硅胶为柱,或是在硅胶表面键合—CN,—NH3等官能团的键合相硅胶柱;反相柱填料紧要以硅胶为基质,在其表
液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。正相柱大多以硅胶为柱,或是在硅胶表面键合—CN,—NH3等官能团的键合相硅胶柱;反相柱填料紧要以硅胶为基质,在其表面键合非极性的十八烷基官能团(ODS)称为C18柱,其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。另外还有离子交换柱,GPC柱,聚合物填料柱等。下面介绍一下反相色谱柱的选择和使用:
一、反相色谱柱的选择
1.柱子的PH值使用范围
反相柱优点是固定相稳定,应用广泛,可使用多种溶剂。但硅胶为基质的填料,使用时确定要注意流动相的PH范围。一般的C18柱PH值范围都在2—8,流动相的PH值小于2时,会导致键合相的
水解;当PH值大于7时硅胶易溶解;常常使用缓冲液固定相要降解。一旦发生上述情况,色谱柱人口处会塌陷。同样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同。假如流动相PH较高或常常使用缓冲液时,建议选择PH范围大的柱子,例如戴安公司的Acclaim柱PH2—9或Zorbax的PH2—11.5的柱子。
2.填料的端基封尾(或称封口)
把填料的残余硅羟基接受封口技术进行端基封尾,可改善对极性化合物的吸附或拖尾;含碳量增高了,有利于不易保留化合物的分别;填料稳定性好了,组分的保留时间重现性就好。假如待分析的样品属酸性或碱性的化合物,可以选用填料经端基封尾的色谱柱。
二、液相色谱柱的使用
最新液相色谱正相与反相区别
液相色谱仪正相与反相区别在液相色谱仪分析中,根据流动相和固定相相对极性的不同,可分为正相色谱和反相色谱。所谓正相色谱是指固定相极性大于流动相极性的情况,反之,固定相的极性小于流动相的极性,则称为反相色谱。
正相色谱与反相色谱的区别是什么呢?由于极性化合物更容易被极性固定相所保留,所以正相色谱系统一般适用于分离极性化合物,极性小的组分先流出。相反,反相色谱系统一般适用于分离非极性或弱极性化合物,极性大的组分先流出。因此在应用上,正相色谱用于分离极性较大的物质,如蛋白质、生物碱等。反相色谱多用于分离极性较小的物质,在流动相的选择上,反相色谱的优势更大,在实际工作中反相色谱的应用更为广泛。
正相色谱用的固定相通常为硅胶,以及其他具有极性官能团,如胺基团和氰基团的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基或其他团的极性较强,因此,分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小,即极性弱的组份最先被冲洗出色谱柱。
反相色谱填料常是以硅胶为基础,表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。反相色色谱所使用的流动相极性较强,通常为水,缓冲液与甲醇,已腈等混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合最先被冲出,而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。常用的反相填料有C18、C8、C4、C6H5等。
反相液相色谱柱效高、分离能力强、保留机理清楚,是液相色谱分离模式中使用最为广泛的一种,对于生物大分子、蛋白质及酶的分离分析,反相液相色谱正受到越来越多的关注.反相色谱法是以表面非极性载体为固定相,以比固定相极性强的溶剂为流动相的一种液相色谱分离模式.反相色谱固定相大多是硅胶表面键合疏水基团,基于样品中的不同组分和疏水基团之间疏水作用的不同而分离.在生物大分子分离中,多采用离子强度较低的酸性水溶液,添加一定量乙腈、异丙醇或甲醇等与水互溶的有机溶剂作流动相.普通的反相色谱固定相和孔径大于300Å的硅胶键合烷基固定相应用较为普遍,聚合物基质的反相色谱固定相也有较多应用.
正相色谱和反相色谱的定义
正相色谱和反相色谱的定义
正相色谱和反相色谱是色谱分析中常用的两种分离模式。
正相色谱是指在色谱柱中使用带有亲水性固定相的柱子,以分离非极性或弱极性化合物。在正相色谱中,样品中的化合物会被固定相中的极性官能团吸附,然后通过改变流动相中的极性或极性溶剂浓度,使吸附在固定相中的化合物逐渐被洗脱出来。正相色谱常用于分离脂肪族化合物、芳香族化合物和天然产物等非极性或弱极性化合物。
反相色谱则是在色谱柱中使用带有疏水性固定相的柱子,以分离极性化合物。在反相色谱中,样品中的化合物会被固定相中的疏水性官能团吸附,难以通过流动相中的极性溶剂洗脱出来。因此,通常需要改变流动相中的疏水性或疏水溶剂浓度来实现分离。反相色谱常用于分离极性化合物,如氨基酸、核苷酸、药物和天然产物等。
正反相色谱
反相色谱中,固定相非极性,流动相极性。
典型的流动相一般是水或水系缓冲液与甲醇、乙腈或四氢呋喃的混合物。典型的固定相是用脂肪烃硅完化的硅胶键合相,其它用于反相色谱的基质有石墨化碳和苯乙烯-二乙烯苯基质。反相色谱的性能还受残留的硅醇基的活性的影响。硅醇基与洗脱物的极性基团作用。因此,根据硅醇基的活性不同,填料显示出不同的选择性。而且,常能观察到碱性物质在硅醇基活性高的填料上产生拖尾峰。修饰硅醇基活性的一个办法是封端,即用硅烷化试剂把硅醇基转变成三甲基甲硅烷基基团。不过,即使是作了封端,基质表面的硅醇基密度还是比键合配基的密度大。硅醇基的活性也和硅胶的预处理(基质灭活)、硅胶纯度有关。碱性分析物的色谱分析推荐使用高纯度硅胶基质、充分封端的键合相。未封端的填料在许多应用中有可以获得不同选择性的优点。
使用带有离子电荷的固定相,使根据洗脱物电荷进行分离成为可能。对于硅胶基质的离子交换填料,离子基团通过标准的硅烷化技术键合到硅胶表面。对于聚合物基质的离子交换填料,离子交换基团分布于交联聚合物的整体(through the matrix)。有四种离子交换填料:强/弱阳离子交换填料和强/弱离子交换填料。弱离子交换填料的特征是电量与pH值有函数关系。以羧酸基为功能基的离子交换剂是弱阳离子交换剂的代表。弱阴离子交换剂由一级、二级、三级铵为功能基。大部分强离子交换剂的电荷与pH值无关。四级铵形成强阴离子交换剂,而磺酸基构成了强阳离子交换剂。所有这些离子交换基团都可以在聚合物基质上见到,主要用于分离生物大分子。除了弱阳离子基团外,其它功能基都可以键合到硅胶上。
正相色谱柱和反相色谱柱的区别
正相色谱柱和反相色谱柱的区别
本质上是填料(固定相)的不同,正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强;反相色谱柱填料极性弱,洗脱顺序由强到弱。以下是详细说明:
1、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica)以及其他具有极性官能团胺基团,如(NH2,APS)和氰基团(CN,CPS)的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他极性基团极性较强,因此,分离的次序是依据样品中各组分的极性大小,即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如正已烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等。
2、反向色谱反向色谱用的填料常是以硅胶为基质,表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强,通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出,而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反向填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。
正相色谱与反相
正相色谱
液-液色谱有正相和反相之分。如果采用极性固定相和相对非极性流动相,就称为正相;如果采用相对非极性固定相和极性流动相,则称为反相。由于极性化合物更容易被极性固定相所保留,所以正相液-液色谱系统一般可用于分离极性化合物。相反,反相液-液色谱系统一般可用于分离非极性或弱极性化合物。正相色谱的流出顺序是极性小的先流出,极性大的后流出;反相色谱的流出顺序正好相反。另外,其他有些色谱如柱色谱也有正反相之分。
正反相色谱区别:
色谱柱的安装:
1、首先应确认柱和仪器的接头以及管路是否匹配。为减少死体积,进样阀、柱子、检测器之间的连接管路内径尽可能使用内径较小的管线,同时控制进样器、色谱柱和检测器之间连接管线的长度。安装色谱柱之前,确认流路系统中的溶剂是否正常。对分析较复杂的样品建议安装保护柱。
2、为了使色谱柱与仪器系统达最佳的连接效果,应尽量使用与色谱柱接口相匹配的螺帽和锥形接头,如原来的接头长期匹配其他类型的色谱柱,建议在连接新色谱柱前应检查匹配情况,避免造成色谱柱的损坏或因色谱柱不匹配造成的漏液。
3、使用PEEK 材料的通用接头,只需用手拧紧不需要特定扳手,使用压力为5000psi;使用温度不得超过100℃。
流动相平衡:
1、在进行样品检测前,至少使用20倍柱体积流动相使色谱柱充分平衡。流动相一定要使用色谱级别的溶剂。如使用水相的缓冲液应当天配制以保持新鲜避免细菌产生。
2、流动相使用前需用微孔滤膜过滤,消除流动相中颗粒对色谱系统和色谱柱的损坏。缓冲液与其他流动相混合后应重新过滤避免溶解度变化造成产生新的沉淀。不应使用纯水作为流动相冲洗C18色谱柱,以免柱性能损坏(添加5%的有机溶剂冲洗色谱柱,同时可以达到对缓冲盐清洗的作用。还可以使色谱柱更容易平衡)。
正相色谱vs反相色谱
正相色谱vs反相色谱
点击次数:986 发布时间:2009-11-9
现代高效液相色谱中,分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择.但是色谱填料的选择范围很宽,要做合适的选择,必须对此有一定的认识和了解.
1,正相色谱
正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica),以及其他具有极性官能团,如胺基团 (NH2,APS)和氰基团(CN,CPS)的键合相填料.
由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他团的极性较强,因此,分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小,即极性强弱的组份最先被冲洗出色谱柱. 正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如:正乙烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等.
2,反相色谱
反相色谱填料常是以硅胶为基础,表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相. 反相色谱所使用的流动相极性较强,通常为水,缓冲液与甲醇,已腈等混合物. 样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合最先被冲出,而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留. 常用的反相填料有
C18(ODS),C8(MOS),C4(B),C6H5(Phenyl)等.
二,聚合物填料
聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等,其主要优点是在PH值为1~ 14均可使用. 相对与硅胶基质的C18填料,这类填料具有更强的疏水性;大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效. 现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料,色谱柱柱效较低. 三,其他无机填料
其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化.由于其特殊的性质,一般仅限于特殊的用途.如石墨化碳也用于正逐渐成为反相色谱填料.这种填料的分离不同与硅胶基质烷基键合相,石墨化碳的表面即是保留的基础,不再需其它的表面改性,该柱填料一般比烷基键合硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强,石墨化碳可用于分离某些几何导构体,又由于HPLC流动相中不会被溶解,这类柱可在任何PH与温度下使用.氧化铝也可用于HPLC, 氧化铝微粒刚性强,可制成稳定的色谱柱柱床,其优点是可在PH高达12的流动相中使用. 但由于氧化铝与碱性化合物作用也
反相色谱柱的选择和使用 色谱柱如何操作
反相色谱柱的选择和使用色谱柱如何操作
液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。正相柱大多以硅胶为柱,或是在硅胶表面键合—CN,—NH3等官能团的键合相硅胶柱;反相柱填料紧要以硅胶为基质,在其表
液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。正相柱大多以硅胶为柱,或是在硅胶表面键合—CN,—NH3等官能团的键合相硅胶柱;反相柱填料紧要以硅胶为基质,在其表面键合非极性的十八烷基官能团(ODS)称为C18柱,其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。另外还有离子交换柱,GPC柱,聚合物填料柱等。下面介绍一下反相色谱柱的选择和使用:
一、反相色谱柱的选择
1.柱子的PH值使用范围
反相柱优点是固定相稳定,应用广泛,可使用多种溶剂。但硅胶为基质的填料,使用时确定要注意流动相的PH范围。一般的C18柱PH值范围都在2—8,流动相的PH值小于2时,会导致键合相的
水解;当PH值大于7时硅胶易溶解;常常使用缓冲液固定相要降解。一旦发生上述情况,色谱柱人口处会塌陷。同样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同。假如流动相PH较高或常常使用缓冲液时,建议选择PH范围大的柱子,例如戴安公司的Acclaim柱PH2—9或Zorbax的PH2—11.5的柱子。
2.填料的端基封尾(或称封口)
把填料的残余硅羟基接受封口技术进行端基封尾,可改善对极性化合物的吸附或拖尾;含碳量增高了,有利于不易保留化合物的分别;填料稳定性好了,组分的保留时间重现性就好。假如待分析的样品属酸性或碱性的化合物,可以选用填料经端基封尾的色谱柱。
二、液相色谱柱的使用
HPLC色谱柱的种类
高效液相色谱柱大致可分为五类:
一、高效反相液相色谱柱
以C18为代表的高效反相液相色谱柱一直被描述为药物发现、开发、方法验证(validation)的心脏! 高效反相液相色谱柱也极其广泛应用在药物代谢及动力学、生命科学、医疗健康、生物分析检测、毒品和兴奋剂检测、食品安全分析、环境分析、军事、国土安全等领域! 高效反相液相色谱制备柱也是最重要的分离纯化技术之一!
无论是过去,现在和可预见的未来, 以球形B型硅胶(5um 或3um)为材料骨架的高效反相液相色谱柱在实际应用中永远占有统治地位!常规HPLC方法的开发几乎总是从C18作为出发点,反相色谱占了80%以上的应用。
过去数十年来, 无数努力集注于:
1) 改善硅胶的品质, 优化键合化学; 2)开发新颖的材料骨架替代硅胶。
十多年前, 使用有机硅材料取代无机硅材料作为起始原料生产球形硅胶代表一个划时代的革命! 生产的球形硅胶命名为B型球形硅胶。无机A型硅胶重金属含量很高, 硅胶表面若干位置严重酸化及螯合效应等导致许多碱性化合物回收率低。球形B型硅胶重金属含量很低, 在非常大的程度上消除了A型无机硅胶表面若干位置严重酸化及螯合效应等问题。用B型球形硅胶合成高效液相色谱填料, 导致高效液相色谱柱产品质量有质的飞跃!
然而,另一方面,基于客户的大量反馈和我们对几乎所有色谱厂商产品的评估, 我们相信键合化学问题没有获得很好的解决。具体体现在:
(1) “纯粹”反相机理的键合相例如C18和C8市场上仍然是单功能,三功能和聚合物键合相"鱼目混杂"。
(2) 键合相封端问题没有获得很好的解决, 一直是困扰色谱领域最大的问题! 迄今为止全部的尝试只获得有限的成功。
反相与正相色谱法有什么区别
反相还是正相,是根据流动相相对于固定相的极性而言的。流动相极性强于固定相的,称作反相色谱;流动相极性弱于固定相的,称作正相色谱。
反相色谱流动相的极性强,容易带着极性分子走,而留下非极性分子。这主要用于非极性样品的分离。
正相色谱固定相极性强,容易把极性分子留下,故主要用于极性样品的分离。如离子色谱。实际应用好像没有太注意正相还是反相,倒是都很注意柱子能承受什么样极性的物质。反相液相色谱柱不可以用强极性的纯水,都是要加入至少5%的有机溶剂来弱化水的极性。正相的离子色谱柱则坚决不可以进入有机物质。但是气相色谱实际也是一种正相色谱,却往往要求不可以有水进入。
高效液相色谱的正相与反相区分方式如下:
正相色谱:固定相极性大于流动相极性;反相色谱:固定相极性小于流动相极性。
高效液相色谱法又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支,以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析。
正相色谱和反向色谱及C18柱子
正相色谱和反向色谱及C18柱子
反相与正相的区别在于,固定相与流动相的极性大小。反相:固定相的极性小于流动相的极性正相:固定相的极性大于流动相的极性反向色谱流动相极性大于固定相极性测定样品时极性大的先出峰,正向反之
在正相色谱中,一般采用极性键合固定相,硅胶表面键合的是极性的有机基团,键合相的名称由键合上去的基团而定。最常用的有氰基(-CN)、氨基(-NH2)、二醇基(DIOL)键合相。流动相一般用比键合相极性小的非极性或弱极性有机溶剂,如烃类溶剂,或其中加入一定量的极性溶剂(如氯仿、醇、乙腈等),以调节流动相的洗脱强度。通常用于分离极性化合物。一般认为正相色谱的分离机制属于分配色谱。组分的分配比K值,随其极性的增加而增大,但随流动相中极性调节剂的极性增大(或浓度增大)而降低。同时,极性键合相的极性越大,组分的保留值越大。
该法主要用于分离异构体,极性不同的化合物,特别是用来分离不同类型的化合物。
反相键合相色谱法
在反相色谱中,一般采用非极性键合固定相,如硅胶-C18H37(简称ODS或C18)硅胶-苯基等,用强极性的溶剂为流动相,如甲醇/水,乙腈/水,水和无机盐的缓冲液等。
目前,对于反相色谱的保留机制还没有一致的看法,大致有两种观点:
一种认为属于分配色谱,另一种认为属于吸附色谱。
分配色谱的作用机制是假设混合溶剂(水+有机溶剂)中极性弱的有机溶剂吸附于非极性烷基配合基表面,组分分子在流动相中与被非极性烷基配合基所吸附的液相中进行分配。吸附色谱的作用机制是把非极性的烷基键合相,看作是在硅胶表面上覆盖了一层键合的十八烷基的“分子毛”,这种“分子毛”有强的疏水特性。当用水与有机溶剂所组成的极性溶剂为流动相来分离有机化合物时,一方面,非极性组分分子或组分分子的非极性部分,由于疏溶剂的作用,将会从水中被“挤”出来,与固定相上的疏水烷基之间产生缔合作用。另一方面,被分离物的极性部分受到极性流动相的作用,使它离开固定相,减少保留值,此即解缔过程。显然,这两种作用力之差,决定了分子在色谱中的保留行为。.
HPLC色谱柱的种类
高效液相色谱柱大致可分为五类:
一、高效反相液相色谱柱
以C18为代表的高效反相液相色谱柱一直被描述为药物发现、开发、方法验证(validation)的心脏! 高效反相液相色谱柱也极其广泛应用在药物代谢及动力学、生命科学、医疗健康、生物分析检测、毒品和兴奋剂检测、食品安全分析、环境分析、军事、国土安全等领域! 高效反相液相色谱制备柱也是最重要的分离纯化技术之一!
无论是过去,现在和可预见的未来, 以球形B型硅胶(5um 或3um)为材料骨架的高效反相液相色谱柱在实际应用中永远占有统治地位!常规HPLC方法的开发几乎总是从C18作为出发点,反相色谱占了80%以上的应用。
过去数十年来, 无数努力集注于:
1) 改善硅胶的品质, 优化键合化学; 2)开发新颖的材料骨架替代硅胶。
十多年前, 使用有机硅材料取代无机硅材料作为起始原料生产球形硅胶代表一个划时代的革命! 生产的球形硅胶命名为B型球形硅胶。无机A型硅胶重金属含量很高, 硅胶表面若干位置严重酸化及螯合效应等导致许多碱性化合物回收率低。球形B型硅胶重金属含量很低, 在非常大的程度上消除了A型无机硅胶表面若干位置严重酸化及螯合效应等问题。用B型球形硅胶合成高效液相色谱填料, 导致高效液相色谱柱产品质量有质的飞跃!
然而,另一方面,基于客户的大量反馈和我们对几乎所有色谱厂商产品的评估, 我们相信键合化学问题没有获得很好的解决。具体体现在:
(1) “纯粹”反相机理的键合相例如C18和C8市场上仍然是单功能,三功能和聚合物键合相"鱼目混杂"。
(2) 键合相封端问题没有获得很好的解决, 一直是困扰色谱领域最大的问题! 迄今为止全部的尝试只获得有限的成功。
液相色谱柱的分类、选择及维护
液相色谱柱的分类、选择及维护
一、液相色谱柱的分类(按色谱固定相基质分)
1、硅胶基质
1.1、反相色谱柱:反相色谱填料常是以硅胶为基础,表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。反相色谱所使用的流动相极性较强,通常为水,缓冲液与甲醇,已腈等混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合最先被冲出,而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。常用的反相填料有C18(ODS)、C8(MOS)、C4(B)、C6H5(Phenyl)等。
1.2、正相色谱:正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica),以及其他具有极性官能团,如胺基团(NH2,APS)和氰基团(CN,CPS)的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他团的极性较强,因此,分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小,即极性强弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如:正乙烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等。
1.3、离子交换色谱柱:以磺化交联强阴/阳离子键合硅胶色谱柱,常用规格:强阴离子色谱柱(SAX),强阳离子交换色谱柱(SCX) 2、聚合物基质
聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等,其主要优点是在PH值为1-14均可使用。相对与硅胶基质的C18填料,这类填料具有更强的疏水性;大孔的聚合物填料对蛋白质等
样品的分离非常有效。现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料,色谱柱柱效较低。所有聚合物基质在流动相发生变化时都会出现膨胀或收缩。用于HPLC的高交联度聚合物填料,其膨胀和收缩要有限制。溶剂或小分子容易渗入聚合物基质中,因为小分子在聚合物基质中的传质比在陶瓷性基质中慢,所以造成小分子在这种基质中柱效低。对于大分子像蛋白质或合成的高聚物,聚合物基质的效能比得上陶瓷性基质。因此,聚合物基质广泛用于分离大分子物质。
季铵盐液相色谱
季铵盐液相色谱
季铵盐液相色谱是一种分离和分析季铵盐类化合物的方法。季铵盐是一种强碱性的化合物,具有水溶性和极性,可以通过液相色谱法进行分离和分析。液相色谱法是一种常用的分离和分析方法,通过在流动相中加入离子对试剂,可以增加季铵盐在色谱柱内的保留,从而提高分离效果。
在季铵盐液相色谱中,常用的色谱柱有反相色谱柱和正相色谱柱。反相色谱柱可以用于分离非极性或弱极性的化合物,而正相色谱柱则更适合分离强极性的化合物。在反相色谱柱中,流动相通常为有机溶剂和水混合物,而固定相则为硅胶或聚合物。在正相色谱柱中,流动相通常为水和无机盐溶液,而固定相则为硅胶或氨基硅烷化合物的吸附剂。
季铵盐液相色谱的优点包括高分离效能、高灵敏度、高选择性等。它可以用于分析季铵盐类农药、表面活性剂、杀菌剂等化合物的含量和纯度,也可以用于研究季铵盐类化合物的合成和反应机理。
总之,季铵盐液相色谱是一种有效的分离和分析方法,可以广泛应用于季铵盐类化合物的分析和研究。
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正相色谱柱与反相色谱柱有哪些区别?
色谱柱的安装:
1、首先应确认柱和仪器的接头以及管路是否匹配。为减少死体积,进样阀、柱子、检测器之间的连接管路内径尽可能使用内径较小的管线,同时控制进样器、色谱柱和检测器之间连接管线的长度。安装色谱柱之前,确认流路系统中的溶剂是否正常。对分析较复杂的样品建议安装保护柱。
2、为了使色谱柱与仪器系统达最佳的连接效果,应尽量使用与色谱柱接口相匹配的螺帽和锥形接头,如原来的接头长期匹配其他类型的色谱柱,建议在连接新色谱柱前应检查匹配情况,避免造成色谱柱的损坏或因色谱柱不匹配造成的漏液。
3、使用PEEK 材料的通用接头,只需用手拧紧不需要特定扳手,使用压力为5000psi;使用温度不得超过100℃。
流动相平衡:
1、在进行样品检测前,至少使用20倍柱体积流动相使色谱柱充分平衡。流动相一定要使用色谱级别的溶剂。如使用水相的缓冲液应当天配制以保持新鲜避免细菌产生。
2、流动相使用前需用微孔滤膜过滤,消除流动相中颗粒对色谱系统和色谱柱的损坏。缓冲液与其他流动相混合后应重新过滤避免溶解度变化造成产生新的沉淀。不应使用纯水作为流动相冲洗C18色谱柱,以免柱性能损坏(添加5%的有机溶剂冲洗色谱柱,同时可以达到对缓冲盐清洗的作用。还可以使色谱柱更容易平衡)。
3、流动相需脱气后使用,可避免因气泡导致的泵和检测器的工作不正常。如果测试时使用的流动相与色谱柱保存使用的流动相有较大区别,应该使用过度分布的形式进行平衡。避免由于流动相的突然变化造成柱压增加过大或流动相缓冲盐结晶造成对色谱柱和仪器系统的损坏。正相色谱柱比反相色谱柱需要更长的平衡时间。
样品制备与操作:
1、样品应当尽可能溶解在能与流动相相互溶的溶剂中。除特殊指明外,如使用强溶剂溶解样品柱子的分辨率将可能降低。
2、样品溶液在进样前应使用针头式过滤器对样品预先过滤。频繁改变流动相组成,会加速降低柱效。
3、色谱柱由高压匀浆法装填,能承受较高压力。为获得最佳分离效果,使用时请不要超过200kgf,而且避免压力突然上升或变化,否则会造成硅胶填料的破坏,减少色谱柱的使用寿命。除特殊要求外最高操作温度不要超过60℃。
保存色谱柱:
1、如果流动相含有酸或无机盐,应当先用去离子水(20倍柱体积)冲洗干净。然后用用100%乙腈或甲醇保存色谱柱。最后用柱子的接头密封,并放在稳定的环境中存放。
2、应避免色谱柱受到直接的机械冲击或摔落,避免造成色谱柱性能的降低。
色谱柱的再生:
1、用相当于20倍柱体积的溶剂按下列顺序冲洗柱子,建议按柱子的箭头方向冲洗,尽可能不反冲:冲洗时使用的的参考溶剂顺序是水、甲醇、氯仿、异丙醇、甲醇。