血清碱性磷酸酶活力测定

底物液
1.00
1.00
1.00
1.00
混匀，37℃水浴保护15min
铁氰化钾溶液
3.00
3.00
3.00
3.00
血清
——
———
——
0.100
2.立即混匀。在510nm波长处比色，以蒸馏水调零点，读取各 管吸光度。
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计算
ALP活性=（A测定—A对照）/（A标准—A空白） *0.05*100(金氏单位）
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2．血清ALP活性降低比较少见： 主要见于呆小病、重症慢 性肾炎、乳糜泻、贫血、恶病质等。
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注意事项
1. 目前市售的酚标准液多数为安瓿瓶，开后不能 久置
2. 底物液中不应含有酚，如空白管显红色，说明 磷酸苯二钠已分解，不宜使用。
3. 加入铁氰化钾后必须迅速混匀，否则对实验结 果会有影响。
血清碱性磷酸酶活力测定
(磷酸苯二钠法)
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酶活力：也称酶活性，是表示催化某一特定反应的 能力。可以用在一定条件下所催化的某一特定化学 速度表示。
酶催化反应速度越快，酶活力升高，反之活力愈 低。
酶促反应速度=
底物减少量或生成物增加量 单位时间
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2
酶的活力单位
国际单位：Katal，1s转化1mol底物的酶量 临床表示：Kings，如血清谷丙转氨酶活力单位，每100ml血
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标准曲线法
制备如下： 取试管6支，分别加酚标准液 (1ml=0．1mg)，0、0.05、0.1、0.2、0.3、 0.4ml，各管依次加复合基质液3.1、3.05、3.0、 2.9、2.8、2.7ml。混匀后37℃水浴保温5分钟， 各管加入1.0ml碱性溶液，再加0.5％铁氰化钾 2.0ml，立即混匀。静置10分钟，510nm波长下比 色。将以上各管所得读数与其相应的碱性磷酸酶 单位(依次为0.5、10、20、30、40单位)在坐标纸 上作图，绘制成标准曲线。
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实验原理
碱性磷酸酶在碱性环境中作用于磷酸苯二钠，使 之水解生成酚和磷酸。酚在碱性溶液中与4-氨基 安替比林作用，经铁氰化钾氧化形成红色醌类化 合物，其颜色深浅与ALP活性成正比。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
磷酸苯二钠+H2O
ALP 苯酚+磷酸氢二钠
pH=10
苯酚+4-氨基安替比林 铁氰化钾 红色醌亚胺衍生物
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临床意义：
血清中ALP活力测定在临床常作为肝胆疾病和骨骼疾病的临床 辅助诊断指标。
1．血清ALP活性升高可能原因如下 ：①肝胆疾病：阻塞性黄 疸、急性或慢性黄疸性肝炎、肝癌等；②骨骼疾病：由于 骨的损伤或疾病使成骨细胞内所含高浓度的ALP释放进入血 液中，引起血清ALP活性增高，如纤维性骨炎、成骨不全症、 佝偻病、骨软化病、骨转移癌和骨折修复愈合期等。
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实验操作
1.取试管4支，按下表操作
血清（ml） 酚标准液 蒸馏水
测定管 0.100 —— ——
pH10碳酸盐缓冲液 1.00
标准管 —— 0.100 —— 1.00
空白管 —— —— 0.100 1.00
对照管 —— —— —— 1.00
混匀，37℃水浴保温5min，同时将底物预热
清在37℃。pH=7.4的条件下与底物作用60min，生成 1μmol丙酮酸所需的酶量为1个活力单位
酶的比活力：单位质量酶蛋白或单位体积酶制剂所含有酶 活力单位数，即酶活力浓度。
酶活力的测定方法 1.终止测定法（定时法或终点法） 2.动力学分析法（连续监测法或速率法）
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实验目的
熟悉酶活性测定方法的一般原理 掌握血清ALP测定原理与临床意义
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实验器材和试剂：
（一）器材： 5ml移液管，1ml移液管，100或200ul微量可调式移液器 ，721E分光光度计，1cm比色皿，37℃ 恒温水浴
（二）试剂： 1．0.1mol/L碳酸盐缓冲液(pH10.0) 称取无水碳酸钠
6.36g，碳酸氢钠3.36g，4-氨基安替比林1.5g，溶于 800mL蒸馏水中，定容至1L。置棕色瓶中保存。 2．20mmol/L磷酸苯二钠溶液 先将500ml蒸馏水煮 沸，迅速加入磷酸苯二钠2.18g(磷酸苯二钠如含2分子结 晶水，则应称取2.54g) ，冷却后加氯仿2ml防腐，在4℃ 冰箱保存。（用剩的溶液不应再倒回瓶中） 3．铁氰化钾的硼酸溶液 称取铁氰化钾2.5g，硼酸17g ，各自溶于蒸馏水400ml中，两液混合后，加蒸馏水至1L ，置棕色瓶中避光保存(如出现蓝绿色即弃去)。 4．酚标准工作液（0. 05mg/ml）：购买合格的二级 标准品。