液相色谱常见问题及处理方法(LCMS)资料

常用弱酸的pKa
pK1
醋酸
4.87
柠檬酸
3.13
磷酸
2.16
pK2
4.76 7.2 1
pK3
6.40
12.32
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6. 不使用时，两头要盖上盖子，避免固定相干枯。
7. 使用预柱。
8. 避免流动相组成及极性的剧烈变化（梯度洗脱）
9、避免压力脉冲的剧烈变化
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肩峰或分叉峰产生的原因：
1. 柱子劣化 （柱头处产生不均匀的空隙）
2. 样品变化 （生成氧化物、分解物等）
判断标准：
所有的峰都产生有肩峰或分叉时则为柱子劣化。
1. 在使用新柱之前，最好用强洗脱溶剂在低流量下 (0.2-
0.3 ml/min)冲洗 30 min，长时间未用的分析柱也要同
样处理。
2. 定期使用强洗脱溶剂冲洗柱子。
3. 使用缓冲盐作为流动相后，要先用水（含有少量甲醇
5~10%）冲洗，再用有机溶剂（甲醇）冲洗。
4. 净化样品。
5. 分离条件优化（防止鬼峰出现）。
使宝石球与垫片分开 2）拆下单向阀，放入异丙醇或水中，
用超声波清洗
故障2：宝石球或塑料垫片受污导致密封不好。 表现：系统压力波动大 措施：拆下单向阀，放入异丙醇或水中，用超声波清
洗。
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2. 柱塞密封圈
密封圈
柱塞杆 泵头清洗管路 流动相
故障：密封圈磨损而导致 密封不良
现象：系统压力波动大或 漏夜
措施：更换密封圈 注意点：更换密封圈拆卸
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2. 脱气： 除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡。
气泡对测定的影响：
1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积； 2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形； 3）气泡过多可使泵压力不稳甚至停止工作； 4）检测器中的气泡产生基线波动，
① 示差折光检测器——使折射率变化 ② UV检测器（200nm以下）——溶解氧气有吸收 ③ 荧光检测器——溶解氧气有荧光猝灭作用
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样品过滤：
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四、色谱柱
故障：系统压力过高、峰型变差（拖尾峰、前沿峰、 分叉峰），保留时间改变等。
解决措施：清洗、填补、更换
正相柱清洗溶剂： 正庚烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇等
反相柱清洗溶剂：： 甲醇、乙腈、氯仿、异丙醇、0.05mol/L稀硫酸
注意：应排除操作不当引起的假象。
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色谱柱的维护
1. 高效液相色谱分析方法的建立 2. 高效液相色谱仪常见问题及处理方法 3. 制备型高效液相色谱技术 4. 高效液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS）
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高效液相色谱仪常见问题 及处理方法
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泵系统
线路过滤器
单向阀
检测器 柱塞密封圈 手动/自动进样器
吸滤头
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一、吸滤头
材料：不锈钢烧结，孔径10μm 故障：堵塞 表现：管路中不断有气泡生成 措施：用5％～20％的稀硝酸，超声波清洗，
2. 清洁样品池 表现：样品池和参比池能量相差较大； 检查方法：不同的仪器有具体的检查方法； 措施：用针筒注入异丙醇，清洗样品池；如污染严重， 拆开样品池，将透镜等放入异丙醇中超声波清洗。
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六、其他问题
1. 溶剂的过滤
滤膜类型： 聚四氟乙烯滤膜： 适用于所有溶剂，酸和盐。 醋酸纤维滤膜： 不适用于有机溶剂，特别适用于水基溶剂。 尼龙66滤膜： 适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可以 用于强酸，不适用于二甲基甲酰胺。 再生纤维素滤膜： 蛋白吸收低，适用于水溶性样品和有机溶 剂。
再用蒸馏水清洗 注意点：吸滤头拆下时不得将塑料管剪断
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二、高压泵
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1. 单向阀 单向阀结构
宝石球
单向阀原理
吸液冲程
排液冲程
出口单向阀
抛光面
透明塑料垫片 流动相
泵头
进口单向阀
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常见故障：
故障1：宝石球粘附于垫片 表现：泵无法吸液或排液，流路不通，柱压低或没有。 措施：1）用针筒抽单向阀的出口以产生负压，
脱气的方法
1. 超声波脱气法
2. 使用氟树脂膜的减压脱气法
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使用氟树脂膜的减压脱气法
氟树脂膜 真空室 往送液泵
流动相控制器真空泵 Nhomakorabea21
3. 缓冲液
选择缓冲液的步骤
1、确定最佳分离状态时的流动相pH； 2、选择具有与流动相的pH相近的pKa 的缓冲液
（即使浓度稀也具有较强的缓冲能力）；
3、确认检测波长下缓冲液是否有较大的吸收； （在波长210nm附近及以下进行检测时，不能 用醋酸和柠檬酸的缓冲液）
泵头前，柱塞杆复位 （P－SET）
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三、手动进样阀
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1. 构造及使用原理
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2. 常见故障 故障1：转子密封损坏 现象：漏液 原因： a 拧的太紧
b 样品太脏（过滤不充分） c 针头损坏或未使用液相色谱专用注射器 解决措施：更换转子密封，并在使用时注意保养。
故障2：载样困难 原因： 定量环堵塞 解决措施：清洗或更换定量环
延长柱寿命方法：（ 更新）
1、倒（反）冲柱 2、换过滤片 3、修补柱头
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柱的补修 填料的取出
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恢复实例
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五、检测器
1. 更换氘灯（紫外检测器） • 判断氘灯能量： 设定220nm波长，检查参比池能量，如能量低于 800，需更换氘灯。（详细参照说明书） • 操作注意点： 不要用手直接接触氘灯表面