疟原虫的制片技术-2017
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疟原虫检验技术
疟原虫检验技术概述血涂片检查疟原虫是诊断和鉴定疟原虫种别的主要方法，也是疟疾流行病学调查的重要部分，血涂片制作和染色的好坏足心影响检查的结果，必须把握好“三关”。
玻片清洁。
清洁的玻片无油脂，无划痕，无灰尘，玻片上有油迹，使厚血膜容易脱落，薄血膜涂布不均匀。
在用手指持玻片时，只能夹持玻片的两侧边缘，不要接触玻片的表面，以避免手指上的油污染玻片。
新的载玻片先用热肥皂水洗涤，再用清水冲洗，然后用软而洁净的毛巾擦干待用。
①5%的肥皂水煮沸法：将洗衣肥皂削成小片，加水配成约5%的肥皂水，煮沸后将玻片一张一张地平放进肥皂水内，微火煮约一刻钟，然后灭火待肥皂水稍冷后，将洁干毛巾擦净后待用。
②清洁液浸泡法：清洁液配制如下：重铬酸钾 80g 浓硫酸100ml 水清净水 1000ml 二、制片 1.薄血膜涂制 2.厚血膜涂制薄血膜厚血膜标记处 1.薄血膜涂制： 1.薄血膜涂制 1 先用75%酒精棉球将耳垂消毒，待酒精干后用采血针迅速刺入耳垂近下端边缘处。
2 用左手的拇指与食指以及右手的中指向相对的方向将耳垂轻轻挤压出血。
3 取一张洁净的载玻片，将它的左1/3的表面接触耳垂上的血滴（不要将玻片接触耳垂上的皮肤），使一小滴血在玻片上。
血量1-1.5mm3 .1/4火柴头大小。
薄血膜涂好后，再轻挤耳垂挤出约火柴头大一血滴，将这一滴血滴在玻片的中心1/3处然后用推片的一角由血滴中央向周围旋转涂成直径约一厘米的圆形血膜，旋转涂制时间不宜过短，以免形成纤维蛋白束，遮盖了疟原虫。
厚血薄涂好后，应平放待干，防苍蝇舔食血膜或灰尘落在上面。
受检者的编号可用铅笔或钢笔写在薄血膜的边缘上，也可用蜡笔写在厚血膜一端。
血片制作和染色质量规范质量控制血片制作和染色质量判定标准 1.血片制作质量判定标准：好：厚薄血膜均好，或薄血膜好，厚血膜中。
中：薄血膜中，厚血膜好或中。
差：薄血膜差，或厚薄血膜均差。
质量控制 2.血片制作和染色合格率要求：分别以血片制作、染色和清洁度的好、中、差合并计算合格率。
【2017年整理】厚、薄血膜法查疟原虫
厚、薄血膜法查疟原虫基本原理：疟原虫寄生于红细胞，经制片、染色后，显微镜下可以鉴别疟原虫的虫种和虫期。
试剂器材：75%酒精棉球、采血针、载玻片、甲醇、pH7.0~7.2 PBS缓冲液、姬氏染液（或瑞氏染液）、显微镜等。
操作方法：(1)采血：①采血时间在普查时，一般无法考虑采血时间。
在临床上，对现症病人一般可随时采血，但为了提高检出率，就应当考虑采血的适当时间。
对典型发作的间日疟及三日疟患者，应选择发作后数小时至10余小时采血为好。
此时疟原虫发育至环状体乃至大滋养体，虫体大，疟色素已形成，受染红细胞也出现变化，有利于疟原虫的检出。
恶性疟原虫大滋养体和裂殖体是在皮下、脂肪和内脏微血管中发育的，通常在外周血液中不易查到，配子体在环状体出现1周后方能见于外周血液，故在发作时采血。
②采血部位从患者耳垂或指尖（以左手无名指为宜）取血，婴儿通常从大姆趾第二趾骨腹面针刺采血。
③采血方法用75%乙醇棉球消毒取血部位皮肤，待干后用左手拇指和食指捏住采血部位，右手持针迅速刺入皮肤，待血液流出或轻轻挤出血滴，供制作涂片用，采血完毕用干棉球轻压伤口止血。
(2)制片：①薄血膜的制作取1滴血于1张洁净的载玻片上，选1张边缘平整、光滑的载玻片作推片，用左手拇指和中指夹持其两端，将推片的边缘中点与血滴接触，并与载玻片呈30o~45o夹角，待血滴沿推片边缘向两侧展开后，立即由右向左迅速推成薄血膜。
理想的薄血膜要求红细胞均匀地铺成一层，无裂痕，其末端凸出呈舌尖形。
注意：推片时用力和速度要均匀，不能中途停顿或重复推片，以免造成血膜断裂或厚薄不匀。
如取血量多，夹角宜小；取血量小，则夹角可大些。
②厚血膜的制作用推片的一角接触刺血点上的血滴，取血2滴，置载玻片上，并从里向外作旋转涂布，使成直径为0.8cm大小的圆形血膜，厚薄要均匀，然后平置桌上，待自然干燥。
③厚薄血膜同片制作用目测法将载玻片从右到左等分成6格，厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部，第1、2格可用于贴标签，制作厚、薄血膜方法同上。
疟原虫镜检血片的制作与染色课件
厚血膜的位置，位于玻片右1/3处。
厚血膜外观：圆形厚薄均匀，无划痕。过厚易于脱 落，过薄达不到检出率的要求。
4.推制薄血膜
用干棉球抹净玻片角上的血渍，然后将推片下缘 平抵载玻片的中线，当血液在载玻片与推片之间 向两侧扩展至约2cm宽时，使两玻片保持25~35° 角，从右向左迅速向前推成舌状薄血膜，厚度 应以红细胞之间互相接触而不相互重叠为佳。
吉姆萨（Giemsa）染液由天青、伊红组成。染料中天青是 碱性的,伊红是酸性的。染色的原理是基于在酸性染料中具 有染色作用的阴离子和细胞内的碱性物质相结合，而碱性染 料中的阳离子和细胞内的酸性物质相结合，所以酸性的细胞 成分被碱性染料所染色，而碱性的细胞组分则被酸性染料染 色。
嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色， 称为嗜酸性物质；细胞核蛋白和淋巴细胞 胞浆为酸性，与 碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质；中 性颗粒呈等电状态与伊红和天青均可结合，染淡紫色，称为 中性物质。
(2) 采血针：使用一次性釆血针。
(3) 玻片盒：
(4) 75％乙醇棉球：用于采血前后的消毒。
(5) 标签记号笔：用于玻片上书写号码。
2. 采血部位及取血方法 采血部位以耳垂较为 合适，也可在手指末端采血，婴儿可从拇趾或 足跟取血。先用75％乙醇棉球消毒取血部位后， 以一次性采血针迅速刺入取血部位1~2mm深， 然后用左手大拇指、食指和右手中指协同挤出 血滴。
2. 染色用水
常用的染液的稀释用水和染色的冲洗用水，是中 性的蒸馏水或经煮沸过滤的冷开水，也可用井水、 河水、泉水或雨水。为了使血膜着色较好，应用 pH7.0～7.2水效果最佳。
可配制缓冲液用于染液的稀释和染色后的冲洗。 配制pH6.6~7.4缓冲液时，先制备好两种贮备液。 贮备液Ⅰ为每1 000ml蒸馏水含9.5g 磷酸氢二钠， 贮备液Ⅱ为每1 000ml蒸馏水含9.07g 磷酸二氢钾。 配制pH6.6~7.4的缓冲液时，将两种贮备液按一定 比例混合后，用蒸馏水稀释成各种浓度的溶液。
厚血膜外观：圆形厚薄均匀，无划痕。过厚易于脱 落，过薄达不到检出率的要求。
4.推制薄血膜
用干棉球抹净玻片角上的血渍，然后将推片下缘 平抵载玻片的中线，当血液在载玻片与推片之间 向两侧扩展至约2cm宽时，使两玻片保持25~35° 角，从右向左迅速向前推成舌状薄血膜，厚度 应以红细胞之间互相接触而不相互重叠为佳。
吉姆萨（Giemsa）染液由天青、伊红组成。染料中天青是 碱性的,伊红是酸性的。染色的原理是基于在酸性染料中具 有染色作用的阴离子和细胞内的碱性物质相结合，而碱性染 料中的阳离子和细胞内的酸性物质相结合，所以酸性的细胞 成分被碱性染料所染色，而碱性的细胞组分则被酸性染料染 色。
嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色， 称为嗜酸性物质；细胞核蛋白和淋巴细胞 胞浆为酸性，与 碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质；中 性颗粒呈等电状态与伊红和天青均可结合，染淡紫色，称为 中性物质。
(2) 采血针：使用一次性釆血针。
(3) 玻片盒：
(4) 75％乙醇棉球：用于采血前后的消毒。
(5) 标签记号笔：用于玻片上书写号码。
2. 采血部位及取血方法 采血部位以耳垂较为 合适，也可在手指末端采血，婴儿可从拇趾或 足跟取血。先用75％乙醇棉球消毒取血部位后， 以一次性采血针迅速刺入取血部位1~2mm深， 然后用左手大拇指、食指和右手中指协同挤出 血滴。
2. 染色用水
常用的染液的稀释用水和染色的冲洗用水，是中 性的蒸馏水或经煮沸过滤的冷开水，也可用井水、 河水、泉水或雨水。为了使血膜着色较好，应用 pH7.0～7.2水效果最佳。
可配制缓冲液用于染液的稀释和染色后的冲洗。 配制pH6.6~7.4缓冲液时，先制备好两种贮备液。 贮备液Ⅰ为每1 000ml蒸馏水含9.5g 磷酸氢二钠， 贮备液Ⅱ为每1 000ml蒸馏水含9.07g 磷酸二氢钾。 配制pH6.6~7.4的缓冲液时，将两种贮备液按一定 比例混合后，用蒸馏水稀释成各种浓度的溶液。
疟原虫血片制作染色精讲
2019/1/30 13
血片的染色 （一）染液的种类及染色原理
染液种类：目前所用的血片染色液，虽然名称 很多，但都是从罗门诺夫斯基氏创造的染液 变化过来的。总的可分为水溶液和酒精溶液 两大类，前者包括罗氏、西氏（Simon)、 J.S.B氏染液等，后者包括利氏 (Leishman)、瑞氏和吉氏染液（被国家推 荐使用）等。这些染液中的主要染剂都包含 美兰、伊红和由美兰氧化所成的天青，所以 称为多色性染剂。
2019/1/30
23
影响染色效果的因素
（4）染液的稀释浓度 染液的浓度高其着 色就快而深，从而疟原虫寄生红细胞的薛 氏点粗大显著，但颜色常偏碱；染液浓度 过低则染色时间久，颜色偏酸，薛氏点不 明显或消失。
2019/1/30
24
影响染色效果的因素
（5）染色时间 染色时间长染色效果好， 反之较差。室温高则着色快，染色时间可 略缩短，气温低可适当延长。因此染色时 间应根据染液的质量、新旧、稀释浓度和 气温而适当增减。
2019/1/30
7
薄血膜血量及涂片法
薄血膜 取洁净的载玻片2张， 1 张平置在桌上，以左手拇 指，食指夹持载玻片两端 （手指切勿接触玻片表面）， 用另一张边缘平滑（最好为 磨口边缘）的载玻片做推片， 用推片一端边缘的中点从取 血部分刮取约1~1.5微升的 血量（相当于 1/4火柴头大 小），使血滴与平置的载玻 片接触，并形成 25~35 度 夹角，待血液向两侧扩展约 2 厘米宽度时，均匀而迅速 地轻轻向左推出（约 2.5 厘 米长）且边缘带有“舌状” 的薄血膜。
2019/1/30 8
涂制厚、薄血膜的位置
通常是将厚、薄血膜涂在一张载玻片上。方法 是将载玻片分为 3 等分（留出标签或磨砂面位 置后的 3 等分）。厚血膜涂在载玻片靠近标签 或磨砂面方向的右1/3中央处，圆形、厚薄均 匀、边缘整齐。薄血膜涂在载玻片 1/2 至左 1/3的中部位置，舌状、厚薄均匀。
血片的染色 （一）染液的种类及染色原理
染液种类：目前所用的血片染色液，虽然名称 很多，但都是从罗门诺夫斯基氏创造的染液 变化过来的。总的可分为水溶液和酒精溶液 两大类，前者包括罗氏、西氏（Simon)、 J.S.B氏染液等，后者包括利氏 (Leishman)、瑞氏和吉氏染液（被国家推 荐使用）等。这些染液中的主要染剂都包含 美兰、伊红和由美兰氧化所成的天青，所以 称为多色性染剂。
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影响染色效果的因素
（4）染液的稀释浓度 染液的浓度高其着 色就快而深，从而疟原虫寄生红细胞的薛 氏点粗大显著，但颜色常偏碱；染液浓度 过低则染色时间久，颜色偏酸，薛氏点不 明显或消失。
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影响染色效果的因素
（5）染色时间 染色时间长染色效果好， 反之较差。室温高则着色快，染色时间可 略缩短，气温低可适当延长。因此染色时 间应根据染液的质量、新旧、稀释浓度和 气温而适当增减。
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薄血膜血量及涂片法
薄血膜 取洁净的载玻片2张， 1 张平置在桌上，以左手拇 指，食指夹持载玻片两端 （手指切勿接触玻片表面）， 用另一张边缘平滑（最好为 磨口边缘）的载玻片做推片， 用推片一端边缘的中点从取 血部分刮取约1~1.5微升的 血量（相当于 1/4火柴头大 小），使血滴与平置的载玻 片接触，并形成 25~35 度 夹角，待血液向两侧扩展约 2 厘米宽度时，均匀而迅速 地轻轻向左推出（约 2.5 厘 米长）且边缘带有“舌状” 的薄血膜。
2019/1/30 8
涂制厚、薄血膜的位置
通常是将厚、薄血膜涂在一张载玻片上。方法 是将载玻片分为 3 等分（留出标签或磨砂面位 置后的 3 等分）。厚血膜涂在载玻片靠近标签 或磨砂面方向的右1/3中央处，圆形、厚薄均 匀、边缘整齐。薄血膜涂在载玻片 1/2 至左 1/3的中部位置，舌状、厚薄均匀。
疟原虫镜下形态-2017想
感染的红细胞： 胀大不 明显，基本正常 虫体大小： 较大，约为 红细胞直径1/3 胞浆： 环状，浅蓝色 核： 红色，一个，偶有 二个 疟色素：无
薄血膜Pv大滋养体
感染的红细胞： 胀大，褪色，出 现形状大小相等、分布均匀、 数目较多、鲜红色的薛氏小点 虫体大小： 较大 胞浆： 不规则，浅蓝色，出现阿 米巴伪足，有空泡 核： 红色，一个 疟色素：有，细小杆状，黄褐色， 分布不均匀
疟原虫与其它物体的鉴别
水中原虫
水中原虫有时也可看到核、胞浆和空泡，与间日疟大滋养 相似。 鉴别：无疟色素，空泡多如网眼。
植物种子
鉴别：有很清晰的厚薄一致的边界，染色较深、无疟色素， 也看不到核，且有柄脱落时的痕迹。
鉴定疟原虫的五条原则
1、疟原虫要有核有浆（红核蓝浆）
2、疟原虫各期（除环状体外）均含有疟色素 3、疟原虫自然形态要像；疟原虫呈半透明状态，模糊一团不透 明者不是 4、体积最大的疟原虫也不能超过中性粒细胞大 5、数量极少，似是而非者判为可疑，应重新选择时机多次制片、 多次检查
薄血膜Pf成熟裂殖体
感染的红细胞：大小正常，颜 色较深，可见茂氏小点 虫体大小：较小 胞浆和核：裂殖子8-32个，通 常为8-18个， 排列不规则， 核红色，胞浆蓝色 疟色素：黑褐色，集中于中央 或一侧 注意：外周血一般不易见到！
薄血膜Pf雌（大）配子体
形状：新月形，两端稍尖 胞浆：深蓝色 核：一个，较小，致密，深红 色，位于中央，核周可见透 明不染色带 疟色素：黑褐色，密布于核的 周围 注意：一般在环状体出现后710天才出现，如果就诊的及 时，血片中一般见不到！
胞浆活泼
Pv早期大滋养体，薛氏点明显
厚血膜Pv 大滋养体
Pv R和T：红细胞胀大明显，2个环状体寄生 同一红细胞少见；中部2个大滋养体
薄血膜Pv大滋养体
感染的红细胞： 胀大，褪色，出 现形状大小相等、分布均匀、 数目较多、鲜红色的薛氏小点 虫体大小： 较大 胞浆： 不规则，浅蓝色，出现阿 米巴伪足，有空泡 核： 红色，一个 疟色素：有，细小杆状，黄褐色， 分布不均匀
疟原虫与其它物体的鉴别
水中原虫
水中原虫有时也可看到核、胞浆和空泡，与间日疟大滋养 相似。 鉴别：无疟色素，空泡多如网眼。
植物种子
鉴别：有很清晰的厚薄一致的边界，染色较深、无疟色素， 也看不到核，且有柄脱落时的痕迹。
鉴定疟原虫的五条原则
1、疟原虫要有核有浆（红核蓝浆）
2、疟原虫各期（除环状体外）均含有疟色素 3、疟原虫自然形态要像；疟原虫呈半透明状态，模糊一团不透 明者不是 4、体积最大的疟原虫也不能超过中性粒细胞大 5、数量极少，似是而非者判为可疑，应重新选择时机多次制片、 多次检查
薄血膜Pf成熟裂殖体
感染的红细胞：大小正常，颜 色较深，可见茂氏小点 虫体大小：较小 胞浆和核：裂殖子8-32个，通 常为8-18个， 排列不规则， 核红色，胞浆蓝色 疟色素：黑褐色，集中于中央 或一侧 注意：外周血一般不易见到！
薄血膜Pf雌（大）配子体
形状：新月形，两端稍尖 胞浆：深蓝色 核：一个，较小，致密，深红 色，位于中央，核周可见透 明不染色带 疟色素：黑褐色，密布于核的 周围 注意：一般在环状体出现后710天才出现，如果就诊的及 时，血片中一般见不到！
胞浆活泼
Pv早期大滋养体，薛氏点明显
厚血膜Pv 大滋养体
Pv R和T：红细胞胀大明显，2个环状体寄生 同一红细胞少见；中部2个大滋养体
疟原虫的镜检技术-制片染色
免疫染色技术
利用特异性抗体对疟原虫进行染色， 提高疟原虫的染色效果和特异性。
人工智能在疟原虫镜检中的应用
图像识别与分类
利用人工智能技术对显微镜下的疟原虫图像进行自动识别、分类和计数，提高镜 检的准确性和效率。
数据挖掘与分析
通过人工智能技术对疟原虫镜检数据进行分析和挖掘，发现数据间的关联和规律 ，为疟疾防控提供科学依据。
固定涂片时要选用适当的 固定剂，避免涂片脱落。
染色时要选用适当的染色 剂，按照染色剂的要求进 行操作，确保染色效果良 好。
镜检时要仔细观察疟原虫 的结构特征，避免误诊和 漏诊。
冲洗时要彻底去除多余的 染料和杂质，避免干扰观 察。
03
疟原虫镜检制片染色技 术
疟原虫镜检制片染色技术的原理
原理概述
疟原虫镜检制片染色技术是一种 用于检测疟原虫的病理学方法。 通过制备血液涂片，并对其进行 染色，可以观察到疟原虫的存在
疟原虫镜检技术的应用场景
在疟疾流行地区，疟原虫镜检技 术常用于对疑似疟疾患者进行快
速诊断，以指导治疗和防控。
在实验室研究中，疟原虫镜检技 术可用于研究疟原虫的生物学特 性、药物敏感性以及疫苗开发等
方面。
在公共卫生领域，该技术也可用 于监测和评估疟疾的流行趋势和
传播风险。
02
制片染色技术
制片染色技术的原理
疟原虫的镜检技术-制 片染色
目 录
• 疟原虫镜检技术简介 • 制片染色技术 • 疟原虫镜检制片染色技术 • 疟原虫镜检制片染色技术的发展趋势
01
疟原虫镜检技术简介
疟原虫镜检技术的定义
01
疟原虫镜检技术是指通过显微镜 观察疟原虫在人体内的形态、结 构和生长过程，从而对疟疾进行 诊断和研究的实验技术。
利用特异性抗体对疟原虫进行染色， 提高疟原虫的染色效果和特异性。
人工智能在疟原虫镜检中的应用
图像识别与分类
利用人工智能技术对显微镜下的疟原虫图像进行自动识别、分类和计数，提高镜 检的准确性和效率。
数据挖掘与分析
通过人工智能技术对疟原虫镜检数据进行分析和挖掘，发现数据间的关联和规律 ，为疟疾防控提供科学依据。
固定涂片时要选用适当的 固定剂，避免涂片脱落。
染色时要选用适当的染色 剂，按照染色剂的要求进 行操作，确保染色效果良 好。
镜检时要仔细观察疟原虫 的结构特征，避免误诊和 漏诊。
冲洗时要彻底去除多余的 染料和杂质，避免干扰观 察。
03
疟原虫镜检制片染色技 术
疟原虫镜检制片染色技术的原理
原理概述
疟原虫镜检制片染色技术是一种 用于检测疟原虫的病理学方法。 通过制备血液涂片，并对其进行 染色，可以观察到疟原虫的存在
疟原虫镜检技术的应用场景
在疟疾流行地区，疟原虫镜检技 术常用于对疑似疟疾患者进行快
速诊断，以指导治疗和防控。
在实验室研究中，疟原虫镜检技 术可用于研究疟原虫的生物学特 性、药物敏感性以及疫苗开发等
方面。
在公共卫生领域，该技术也可用 于监测和评估疟疾的流行趋势和
传播风险。
02
制片染色技术
制片染色技术的原理
疟原虫的镜检技术-制 片染色
目 录
• 疟原虫镜检技术简介 • 制片染色技术 • 疟原虫镜检制片染色技术 • 疟原虫镜检制片染色技术的发展趋势
01
疟原虫镜检技术简介
疟原虫镜检技术的定义
01
疟原虫镜检技术是指通过显微镜 观察疟原虫在人体内的形态、结 构和生长过程，从而对疟疾进行 诊断和研究的实验技术。
疟疾的病原学诊断技术
制作血膜的注意事项
2. 刚涂制的血膜要平放在标本盒内，
厚血膜未干前勿使标本盒倾斜，以免 血膜倾向一侧，造成血膜厚薄不均， 厚处不一溶血和着色而影响检查结果； 晾干血膜时应注意防尘、防止苍蝇、 蟑螂等昆虫吮吸血膜，干后应及时装 入标本盒并盖严，新的木制标本盒需 敞开放置一段时间，让木醇挥发后才 能使用，以免厚血膜红蛋白被其固定， 不能溶血或染色效果不佳。
血涂片制作 及疟原虫镜检技术
烟台市疾控中心 检验科
授课内容
1.厚、薄血膜血片制作方法。 2.疟原虫的生活史及其各发育阶 段的基本特点。 3.间日疟、恶性疟各期疟原虫的 形态与镜检技术
血膜的制作
用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将 血液涂呈薄膜状，称薄血膜；一种是血液涂 成圆盘，称厚血膜。无特殊要求的可厚薄血 膜分载玻片涂制。
制片时机掌握（取血时间）
采血时间： 现症病人和流调普查时 可不考虑取血时机。但在诊断或需要 某期疟原虫作标本时，则应掌握适宜 的取血时机。
疟疾典型的临床表现：分前驱期、 发冷（寒战）期、发热期、出汗期和 间歇期五期。
采血时间： P.v —— 发作后10小时内采血， 各期（R、T、S、G）疟原虫均可 查见。 P.f —— 发作时采血可查到 R；发 作后10天左右采血可查见 G。
厚薄血膜的优缺点及适用范围
薄血膜： 用血量少1-1.5ul，疟原虫的
形态完整，便于疟原虫虫种的鉴定。 为保证检测的敏感性，常耗时较多， 不适用于大规模调查，常出现漏诊。
厚血膜：用血量较多4-5ul，疟原虫胞
浆和核有一定程度的固缩，较难识别； 但须查范围小，节省时间，阳性检出 率较高。
血片的镜检原则
T
G
P.V 与 P.f 鉴别报告
(完整版)疟原虫检验技术
厚血膜 用推片的一角，从取 血部位刮取约4微升血量 （相当于火柴头大小）， 使血滴与平置的载玻片接 触，再由里向外一个方向 旋转，转2~4圈，涂成直 径0.8~1厘米大小圆形厚 血膜
薄血膜再取一小滴血.将血置 于第一张玻片离厚血膜适 当远的地方.将 推片的边 缘紧贴载玻片，轻轻上下 移动，使血液沿边缘散开， 然后匀速地向前推进，形 成薄而平铺的薄血膜
外观吉氏染色血片
偏酸 标准
偏碱
染色质量影响因素
➢配置完吉氏原液时必须过滤除去杂质颗粒，有助 于提高镜检质量； ➢染液稀释后使用时间：原液必须临用时稀释，随 配随用； ➢染液的稀释浓度； ➢染色时间。
染色质量影响因素
➢染色稀释用水: PH7.0-7.2清洁水。
用水过酸，可致感 染的RBC上的点彩 染不出来；
恶性疟 P.falciparum
● 分布热带、亚热带，是非洲的重要疾病
● 我国流行区域为云南省和海南省
● 四种疟原虫中致病力最强，无免疫力者 感染后出现急性症状,不及时治疗可危及 生命（脑型疟）
间日疟 P.vivax
● 遍布全球温带地区及大片热带地区。在热 带非洲，特别是西非则很少见
● 间日疟原虫分布于我国大部分地区,主要是中部地区 ● 病程良性, 有复发
间日疟（P. vivax ）
鉴定要点
1. 红细胞明显涨大 2. 薛氏点明显 3. 成熟环状体粗大 4. 滋养体胞浆有阿
米巴样伪足 5. 血片中可见各期
的原虫形态 6. 成熟裂殖体约含
12-24个裂殖子
2. Intermittent fever; arrived from India 2 months ago.
原虫镜检---金标准
●当前分子生物学、血清学技术快速发展, 但是厚薄血片的检查仍被认为是不可替 代的确诊疟疾的 “金标准”
薄血膜再取一小滴血.将血置 于第一张玻片离厚血膜适 当远的地方.将 推片的边 缘紧贴载玻片，轻轻上下 移动，使血液沿边缘散开， 然后匀速地向前推进，形 成薄而平铺的薄血膜
外观吉氏染色血片
偏酸 标准
偏碱
染色质量影响因素
➢配置完吉氏原液时必须过滤除去杂质颗粒，有助 于提高镜检质量； ➢染液稀释后使用时间：原液必须临用时稀释，随 配随用； ➢染液的稀释浓度； ➢染色时间。
染色质量影响因素
➢染色稀释用水: PH7.0-7.2清洁水。
用水过酸，可致感 染的RBC上的点彩 染不出来；
恶性疟 P.falciparum
● 分布热带、亚热带，是非洲的重要疾病
● 我国流行区域为云南省和海南省
● 四种疟原虫中致病力最强，无免疫力者 感染后出现急性症状,不及时治疗可危及 生命（脑型疟）
间日疟 P.vivax
● 遍布全球温带地区及大片热带地区。在热 带非洲，特别是西非则很少见
● 间日疟原虫分布于我国大部分地区,主要是中部地区 ● 病程良性, 有复发
间日疟（P. vivax ）
鉴定要点
1. 红细胞明显涨大 2. 薛氏点明显 3. 成熟环状体粗大 4. 滋养体胞浆有阿
米巴样伪足 5. 血片中可见各期
的原虫形态 6. 成熟裂殖体约含
12-24个裂殖子
2. Intermittent fever; arrived from India 2 months ago.
原虫镜检---金标准
●当前分子生物学、血清学技术快速发展, 但是厚薄血片的检查仍被认为是不可替 代的确诊疟疾的 “金标准”
疟原虫血片制片染色技术考核标准
圆形厚膜均匀，边缘
整齐
10
圆形稍不均不整齐
8
厚薄不匀影响着色
5
薄血膜
（40
分）
血量（10分）
1～1.5цl
10
略多或略少
7
过多或过少
5
位置（10分）
玻片1/2～1/3处
10
稍偏右或偏左
7
偏右或偏左过多
5
直径（10分）
2.5～2.0cm
10
稍大或稍小
8
过多或过少
5
外观（10分）
舌状厚薄均匀，无划
痕
10
疟原虫血片制片染色技术考核标准
项目
检查内容
质量标准
好
分值
中
分值
差
分值
血片制作
（80分）
厚血膜
（40
分）
血量（10分）
4～5цl
10
略多或略少
7
过多或过少
5
位置（10分）
玻片右1/3
10
稍偏右
7
偏右过多
5
直径（10分）
0.8～1.0cm
10
0.7～0.8或1.0～1.2cm
8
<0.7或>1.2cm
5
外观（10分）
舌状稍不均
8
厚薄不匀呈波浪型，有划痕
5
血片染色质量（10
分）
外观（10分）
厚血膜完整
10
厚血膜半脱落
5
厚血膜全脱落
2
血片清洁度（10分）
外观（10分）
光洁无油灰
10
稍有油污、稍有沉渣
5
油灰粘连沉渣多或有杂菌
2
整齐
10
圆形稍不均不整齐
8
厚薄不匀影响着色
5
薄血膜
（40
分）
血量（10分）
1～1.5цl
10
略多或略少
7
过多或过少
5
位置（10分）
玻片1/2～1/3处
10
稍偏右或偏左
7
偏右或偏左过多
5
直径（10分）
2.5～2.0cm
10
稍大或稍小
8
过多或过少
5
外观（10分）
舌状厚薄均匀，无划
痕
10
疟原虫血片制片染色技术考核标准
项目
检查内容
质量标准
好
分值
中
分值
差
分值
血片制作
（80分）
厚血膜
（40
分）
血量（10分）
4～5цl
10
略多或略少
7
过多或过少
5
位置（10分）
玻片右1/3
10
稍偏右
7
偏右过多
5
直径（10分）
0.8～1.0cm
10
0.7～0.8或1.0～1.2cm
8
<0.7或>1.2cm
5
外观（10分）
舌状稍不均
8
厚薄不匀呈波浪型，有划痕
5
血片染色质量（10
分）
外观（10分）
厚血膜完整
10
厚血膜半脱落
5
厚血膜全脱落
2
血片清洁度（10分）
外观（10分）
光洁无油灰
10
稍有油污、稍有沉渣
5
油灰粘连沉渣多或有杂菌
2
疟原虫的镜检技术-制片染色
注意：蛋白质和氨基酸都是两性电解质，要求染 液的pH值7.0-7.2较好。 染液偏酸时，所带的正电荷增加，易于伊红结合， 使红细胞和疟原虫的核染成鲜红色，而淋巴细胞 和原虫的胞浆着色较差；反之，当染液偏碱时， 红细胞和嗜伊红白细胞的颗粒等被染成紫蓝色， 不易观察。
姬氏染液的染色方法
血片干燥后,先用甲醇或无水酒精固定薄血膜（瑞氏不需固定）, 再用清水对厚血膜溶脱血红蛋白(新制作的也可直接染色)，然后 再进行染色。 成批血片染色：将已用甲醇固定薄血膜的血片插入染色缸，倒入 3%姬氏染液稀释液（3毫升姬氏原液加缓冲液或蒸馏水97毫升， 混匀）浸没血片，同时对厚薄血膜染色30-40min（根据当地实际 情况，酌情增减染色时间），然后用清水轻轻将染液漂洗干净， 将血片标本（血膜面朝下）插于晾干板上晾干，包装，镜检。 单张血片染色：将处理好的血膜，加姬氏母液2-3滴，加缓冲液 或蒸馏水1ml，混合均匀，染色15-20分钟左右，然后用清水轻轻 将片上的染液冲洗干净，晾干镜检。（勿直接倾倒掉玻片上的染 液，防止渣滓附着在玻片上冲不掉影响镜检） 较理想的染色结果是红细胞为淡红或淡紫红色，疟原虫的胞质呈 蓝色，核为紫红色，疟色素为棕褐色。
染液的种类
疟原虫的染色，目前临床上应用最广泛的是瑞氏 （Wright stain）和姬氏染液（Giemsa stain）。 这些染液中的主要染剂都包含美蓝、伊红和由美 蓝氧化所成的天青，所以称多色性染剂。 我们主要用姬氏染液，它具有方便，染色效果稳 定，便于长期保存的优点。瑞氏染色，染色时间 短，但染色效果不如姬氏稳定，主要在门诊量大 的门诊实验室使用。
染液的染色原理
是染料与被染物的阴阳离子互相吸附而结合的一 种化学反应。 红、白细胞和疟原虫所含蛋白质的氨基酸电离出 的阴阳离子与酸碱染料伊红、美蓝有色集团所带 的阴阳离子相互结合便被染上不同的颜色。 疟原虫和白细胞的胞浆被染成蓝色，红细胞、疟 原虫和白细胞核被染成紫红色。
疟原虫血片制作染色
制作厚血膜
制作薄血膜
厚血膜血量及涂片法
厚血膜 用推片的一角，从取血部位刮取约4~5微升血 量（相当于火柴头大小），使.8~1厘米大小圆形厚血膜，血膜厚薄均匀，过厚易 于脱落，过薄达不到检出率的要求。
2021/3/12
5
薄血膜血量及涂片法
2021/3/12
6
涂制厚、薄血膜的位置
通常是将厚、薄血膜涂在一张载玻片上。方法 是将载玻片分为3等分（留出标签或磨砂面位 置后的3等分）。厚血膜涂在载玻片靠近标签 或磨砂面方向的右1/3中央处，圆形、厚薄均 匀 、 边 缘 整 齐 。 薄 血 膜 涂 在 载 玻 片 1/2 至 左 1/3的中部位置，舌状、厚薄均匀。
2021/3/12
14
血片的染色 （一）染液的种类及染色原理
2021/3/12
2
采血时间
取血时机 现症病人一般可随时取血，疟疾普 查时可不考虑取血时机。但在诊断或需要某期 疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。
间日疟在寒热发作时，外周血液中主要可见环 状体期；发作后数小时，环状体发育到滋养体 期，疟色素形成，形态较易辩认，为诊断疟疾 的有利时机；36~48小时，可检出裂殖体； 发作一、二次后，配子体出现较多。
2021/3/12
13
血片的染色 （一）染液的种类及染色原理
染色原理：美兰与伊红都不能使原虫和白细胞 的核着色，必须由天青作为媒介（染媒）才 能使其着色。天青虽然也是碱性染剂，但又 具有染媒作用，使原虫核和白细胞核等原来 只能染上极淡兰色的结构染上显著的酸性染 剂伊红，这样，就使白细胞粗大的核染成显 著的既兰又红的紫兰色，而较小或菲薄的原 虫核和淋巴细胞原浆中的颗粒染成紫红色。
载玻片的清洗
载玻片 用以涂制血膜的载玻片，必须清洁无油迹。 有油迹的载玻片涂制的厚血膜容易脱落，薄血膜涂 不均匀。
疟原虫的制片技术
❖ 我们推荐用吉氏染液，它具有方便，染色效果稳 定，便于长期保存的优点。
❖ 瑞氏染色，染色时间短，但染色效果不如吉氏稳 定，主要在门诊量大的门诊实验室使用。
-
染色前的处理
无论用吉氏染液还是瑞（吉）氏染液，染色前均 需要对薄血膜进行固定，对厚血膜进行溶血处理 。 ➢ 薄血膜固定：将血片薄血膜朝下，呈45°倾斜， 用吸管吸取一定量的甲醇或无水乙醇进行固定。 ➢ 厚血膜溶血：将清水滴加于厚血膜上或将厚血膜 向下插入水槽中，待厚血膜表面呈白色即可。
-
吉氏染液的染色方法
➢ 染色前的处理： 血膜干燥后,先用甲醇或无水乙醇固定
薄血膜,再用清水对厚血膜溶脱血红蛋白（新制作的血片 可省略这一步骤，因染液中含较高浓度的水，在染色过程 中进行溶血），然后再进行染色。
➢ 染液的配制： 每1ml缓冲液或蒸馏水，加吉氏母液2-3
滴；或将母液和缓冲液按照1:9的比例混合。
-
谢 谢！
➢ 染色方法： 每张血片约需要染液2ml，将染液混合均匀
，滴加于血膜上并覆盖整个血膜，染色15-20min。然后用 清水轻轻将染液冲洗干净，晾干后镜检。
-
瑞（吉）氏染液的染色方法
➢ 染色前的处理： 血膜干燥后,先用清水对厚血膜溶
脱血红蛋白，待厚血膜晾干后，直接进行染色。（这 种染色方法省略了固定薄血膜这一步骤，因染液中含 较高浓度的甲醇，在染色过程中对薄血膜进行固定） 。
注 意：（1）固定薄血膜时甲醇一定不要碰到厚血 膜；（2）厚血膜溶血后需要晾干再进行染色， 否则厚血膜很容易脱落。
-
注 意：母液的稀释用水尽量选用pH为7.0-7.2的缓
冲液。 原 因：当染液的pH值为7.0-7.2时染色效果较好，疟 原虫的胞浆被染成蓝色，疟原虫的核被染成红色。
❖ 瑞氏染色，染色时间短，但染色效果不如吉氏稳 定，主要在门诊量大的门诊实验室使用。
-
染色前的处理
无论用吉氏染液还是瑞（吉）氏染液，染色前均 需要对薄血膜进行固定，对厚血膜进行溶血处理 。 ➢ 薄血膜固定：将血片薄血膜朝下，呈45°倾斜， 用吸管吸取一定量的甲醇或无水乙醇进行固定。 ➢ 厚血膜溶血：将清水滴加于厚血膜上或将厚血膜 向下插入水槽中，待厚血膜表面呈白色即可。
-
吉氏染液的染色方法
➢ 染色前的处理： 血膜干燥后,先用甲醇或无水乙醇固定
薄血膜,再用清水对厚血膜溶脱血红蛋白（新制作的血片 可省略这一步骤，因染液中含较高浓度的水，在染色过程 中进行溶血），然后再进行染色。
➢ 染液的配制： 每1ml缓冲液或蒸馏水，加吉氏母液2-3
滴；或将母液和缓冲液按照1:9的比例混合。
-
谢 谢！
➢ 染色方法： 每张血片约需要染液2ml，将染液混合均匀
，滴加于血膜上并覆盖整个血膜，染色15-20min。然后用 清水轻轻将染液冲洗干净，晾干后镜检。
-
瑞（吉）氏染液的染色方法
➢ 染色前的处理： 血膜干燥后,先用清水对厚血膜溶
脱血红蛋白，待厚血膜晾干后，直接进行染色。（这 种染色方法省略了固定薄血膜这一步骤，因染液中含 较高浓度的甲醇，在染色过程中对薄血膜进行固定） 。
注 意：（1）固定薄血膜时甲醇一定不要碰到厚血 膜；（2）厚血膜溶血后需要晾干再进行染色， 否则厚血膜很容易脱落。
-
注 意：母液的稀释用水尽量选用pH为7.0-7.2的缓
冲液。 原 因：当染液的pH值为7.0-7.2时染色效果较好，疟 原虫的胞浆被染成蓝色，疟原虫的核被染成红色。
疟原虫血片制作及染色(ppt)
将推玻片向1的方向稍抽回，当血液充满推 玻片适当宽度（约2cm）后，以一定均匀的 速度向2的方向滑动（约2.5cm）。
血涂片质量评价： 血膜均匀、厚薄度合适、无空泡、无划痕 薄血膜头体尾位置和形状好、无停顿起伏、
两侧留出空间
注意：血滴大，速度快、角度大 血膜厚
血滴小，速度慢、角度小 血膜薄
血膜制作的注意事项
1. 玻片清洗时，避免玻片碰撞、磨损。制作血膜的 载玻片必须完全清洁而毫无油渍或污垢。制片时， 手指只能持载片的边缘，不能接触玻片表面，以免 油污使薄血膜产生空白区以及厚血膜脱落。作为推 片的玻片边缘一定要平滑，才能使推出的血膜均匀 一致。
血膜制作的注意事项
2. 刚涂制的血膜要平放在标本盒内，厚血膜未 干前勿使标本盒倾斜，以免血膜倾向一侧，造 成血膜厚薄不均，厚处不易溶血和着色而影响 检查结果；晾干血膜时应注意防尘、防止苍蝇 、蟑螂等昆虫吮吸血膜，凉干后应及时装入标 本盒并盖严，新的木制标本盒需敞开放置一段 时间，让醇、醛等物质挥发后才能使用，以免 厚血膜红蛋白被其固定，不能溶血导致染色效 果不佳。
血膜制作（取血时间）
恶性疟较理想的取血时间是在发作后至 20h内取血， 发作后2小时左右，此时环状体发育至最高峰，初发 患者退热后常查不到原虫。末梢血血检到恶性疟原虫 配子体，是在末梢血出现环状 体之后的7-10天。
血膜制作（工具准备）
一次性采血针、75%酒精、棉棒（球）,载玻片， 推片，记号笔或铅笔。
血膜染色 一、染液的种类及染色原理
血膜制作（取血操作）
取血方法 采血部位一般人为耳垂，指头， 通常在耳垂取血。先用75%酒精棉球消毒 取血部位（冬季用手捻动耳垂使其充血后 再行消毒），待酒精干后，用左手拇指和 食指紧捏耳垂上方，右手持消毒采血针（ 一人一针，避免血传疾病）迅速刺入耳垂 下端1~2毫米，不宜过深或过浅。然后用 右手中指轻轻向上挤压出血。
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内
（一）血片制作 （二）染 色
容
染液的种类
目前临床上应用最广泛的是瑞氏染液和吉氏染液。
我们推荐用吉氏染液，它具有方便，染色效果稳 定，便于长期保存的优点。 瑞氏染色，染色时间短，但染色效果不如吉氏稳 定，主要在门诊量大的门诊实验室使用。
染色前的处理
无论用吉氏染液还是瑞（吉）氏染液，染色前均 需要对薄血膜进行固定，对厚血膜进行溶血处理。 薄血膜固定：将血片薄血膜朝下，呈45°倾斜， 用吸管吸取一定量的甲醇或无水乙醇进行固定。 厚血膜溶血：将清水滴加于厚血膜上或将厚血膜 向下插入水槽中，待厚血膜表面呈白色即可。
谢
谢！
染液的配制和染色方法： 根据说明书操作。
染色注意事项
（1）滴加染液时吸管不要碰到血膜，否则容易出现划 痕； （2）滴加染液时不要出现气泡，否则影响着色； （3）勿直接倾倒掉玻片上的染液，以防渣滓附着在玻 片上冲不掉影响镜检； （4）冲洗染液的水流一定要轻缓，不要对着厚血膜冲， 否则厚血膜直接被冲掉；如果用漂洗的方法，将血片 倾斜着从水盆中取出。 （5）一定不要染反了！
管等
记号笔：写标签 水、纸巾：用于清洗、拭干推片
样本要求
末梢全血：指尖、耳垂末梢全血，婴幼儿可取拇趾
或足跟部全血。现场取血现场制片。
静脉全血：采用抗凝管采血。最好取血后立即制片，
如果血液放置时间过长会影响镜下形态。冷冻后的血 液不能用于制片。
骨 髓：临床上可用于确诊恶性疟感染，可查到恶性
吉氏染液的染色方法
染色前的处理： 血膜干燥后,先用甲醇或无水乙醇固
定薄血膜,再用清水对厚血膜溶脱血红蛋白（新制作的血 片可省略这一步骤，因染液中含较高浓度的水，在染色过 程中进行溶血），然后再进行染色。
染液的配制： 每1ml缓冲液或蒸馏水，加吉氏母液2-3
滴；或将母液和缓冲液按照1:9的比例混合。
（4）染色用水
（ 5 ）冲洗方法
应沿玻片或染色缸边缘加水使染液表面 一层溢出，并轻轻冲洗，以免染液色素颗粒附着于血膜。
不合格的血片
（1）没有标签 （2）没有厚血膜 （3）厚血膜脱落（未晾干、冲掉） （4）厚血膜固定（操作失误） （5）薄血膜过厚（血量过多） （6）薄血膜过薄（血量过少） （7）颜色过深（染液浓度高、染色时间长） （8）颜色过浅（染液浓度低、染色时间短） （9）杂质过多（未冲洗干净）
染色方法： 每张血片约需要染液2ml，将染液混合均匀，
滴加于血膜上并覆盖整个血膜，染色15-20min。然后用清 水轻轻将染液冲洗干净，晾干后镜检。
瑞（吉）氏染液的染色方法
染色前的处理： 血膜干燥后,先用清水对厚血膜溶
脱血红蛋白，待厚血膜晾干后，直接进行染色。（这 种染色方法省略了固定薄血膜这一步骤，因染液中含 较高浓度的甲醇，在染色过程中对薄血膜进行固定）。
（2）染液的稀释浓度 染液的浓度要适当。染液的浓度
高，着色就快而深，疟原虫寄生红细胞的薛氏点粗大显著， 但颜色常偏碱；染液浓度低则染色时间久，颜色偏酸，薛 氏点不明显或消失。
影响染色效果的因素
（3）染色时间
染色时间长染色效果好，反之较差。染 色时间应根据染液的稀释浓度和气温而适当增减。室温高 则着色快，染色时间可略缩短，气温低可适当延长。 染液的稀释用水和染色后冲洗用水应选 择pH7.0-7.2缓冲液，也可以使用新鲜的蒸馏水或过滤的 冷开水。
注 意： 厚血膜制作完成后一定要平放，倾斜会导
致厚薄不均匀，容易脱落。
薄血膜的制作
方 法： 取约1～1.5ul的血（相当于1/4火柴头大
小），使推片与平置的载玻片在血滴前方密切接触， 并形成25°～35°夹角，后拉推片与血滴接触，待血 液向两侧扩展约 2～2.5cm宽时，均匀而迅速地从右 向左推成舌状薄血膜（约2.5cm长）。
疟原虫的制片技术
许 艳 山东省寄生虫病防治研究所
内
（一）血片制作 （二）染 色
容
所需设备
载玻片：清洁无油污，以免血膜受污染或脱落 推 片：边缘光滑，用完后及时清洗，以免影响下次使
用
微量采血吸管：20ul，取血时可供参考 胶 头：与微量采血吸管配套，注意不要吸进血液 取血所用的设备：75%酒精棉球、一次性采血针、抗凝
位 置： 玻片左半部分或第4格前缘到第6格中部。 外 观： 舌状，厚薄均匀，无划痕。在玻片上形成
平铺的红细胞，红细胞之间互相接触而不相互重叠。
注 意： 推制时速度要均匀。血滴大小、推片与载
玻片之间夹角大小及展开血膜的速度快慢等会影响血 膜的厚薄。
正确的推片姿势
标准的疟原虫血片
制片注意事项
注 意：（1）固定薄血膜时甲醇一定不要碰到
厚血膜；（2）厚血膜溶血后需要晾干再进行染 色，否则厚血膜很容易脱落。
注 意：母液的稀释用水尽量选用pH为7.0-7.2的缓
冲液。 原 因：当染液的pH值为7.0-7.2时染色效果较好，疟 原虫的胞浆被染成蓝色，疟原虫的核被染成红色。
染液偏酸时，红细胞和疟原虫的核染成鲜红色，而疟原虫 的胞浆着色较差。 染液偏碱时，红细胞被染成紫蓝色，不易观察。
标准血片： 每张玻片涂厚、薄血膜各1个 方 法： 将载玻片平均分为6等份：第1、2格用于贴
标签；厚血膜涂在第3格中央；薄血膜涂在第4格前缘 至第6格中部
外 观： 血片自左向右依次为薄-厚-标签
薄 血 膜
厚 血 膜
标 签
6
5
4
3
2
1
厚血膜的制作
方 法： 取洁净的载玻片1张，左手持载玻片平置，
疟大滋养体和裂殖体。
注 意：（1）用抗疟药之前取血（用药后镜检结果
往往是阴性）；（2）取血后应尽快制片（血细胞和 疟原虫的形态保存完好）。
血膜的种类
用于检查疟原虫的血膜用两种： 一种是将血液涂成薄膜状，称为薄血膜； 一种是将血液涂成圆盘状，称为厚血膜。要求Biblioteka 一张玻片上同时制作厚、薄两种血膜！！
血膜的位置
取约4～5ul血（相当于火柴头大小），右手持推片下 端，使推片一角与血滴中心接触，由里向外一个方向 旋转2～4圈，最后再回到中心，涂成直径0.8～1cm大 小圆形厚血膜。
位 置： 玻片中央偏右或6等份中的第3格中部。 外 观： 圆形，厚薄均匀，边缘整齐。过厚易于脱
落，过薄达不到检出率的要求。以1个油镜视野5-10 个白细胞为宜。
玻片清洁无磨损
载玻片必须完全清洁无油渍或污 垢。制片时，手指勿接触玻片表面，以免油污使薄血 膜产生空白区以及厚血膜脱落。推片边缘一定要平滑、 清洁，才能使推出的血膜均匀一致，边缘无毛刺。
刚涂制的血膜要平放 厚血膜未干前切勿倾斜，以
免血膜倾向一侧，造成血膜厚薄不均，厚处不易溶血 和着色而影响检查结果。晾干血膜时应注意防尘，防 止苍蝇、蟑螂等昆虫吮吸血膜。干后应及时装入标本 盒并盖严。
制片注意事项
血膜应自然干燥 切忌在毒太阳下晒或用火烤，加
快其干燥可采用放手背或衣服上摩擦、冷风吹。血膜 干透后才能用甲醇固定薄血膜。
血膜应及时处理
夏天标本尽可能24-48h内固定染 色；冬天也不能超过72h。放置时间越久，厚血膜越 不易溶血，染色效果也差。若不能及时染色，薄血膜 宜先用甲醇固定（1～3分钟），然后用过滤清水对厚 血膜溶血，晾干后装入盒内盖严，待以后染色。
影响染色效果的因素
血片染色好坏除与玻片清洁度、血片制作质量和染色 技术等有关外，还受到以下因素的影响： （1）染液稀释后使用时间
必须现用现稀释，当时使用， 一般在0.5h内染色力最强。吉氏和瑞氏染液的主要成份是 美蓝、伊红和由美蓝氧化产生的天青，三者能在甲醇中溶 解，但在水溶液中伊红遇到美蓝和天青即产生沉淀，从而 失去染色能力。