疟原虫的制片技术-2017

注 意： 厚血膜制作完成后一定要平放，倾斜会导
致厚薄不均匀，容易脱落。
薄血膜的制作
方 法： 取约1～1.5ul的血（相当于1/4火柴头大
小），使推片与平置的载玻片在血滴前方密切接触， 并形成25°～35°夹角，后拉推片与血滴接触，待血 液向两侧扩展约 2～2.5cm宽时，均匀而迅速地从右 向左推成舌状薄血膜（约2.5cm长）。
（4）染色用水
（ 5 ）冲洗方法
应沿玻片或染色缸边缘加水使染液表面 一层溢出，并轻轻冲洗，以免染液色素颗粒附着于血膜。
不合格的血片
（1）没有标签 （2）没有厚血膜 （3）厚血膜脱落（未晾干、冲掉） （4）厚血膜固定（操作失误） （5）薄血膜过厚（血量过多） （6）薄血膜过薄（血量过少） （7）颜色过深（染液浓度高、染色时间长） （8）颜色过浅（染液浓度低、染色时间短） （9）杂质过多（未冲洗干净）
制片注意事项
血膜应自然干燥 切忌在毒太阳下晒或用火烤，加
快其干燥可采用放手背或衣服上摩擦、冷风吹。血膜 干透后才能用甲醇固定薄血膜。
血膜应及时处理
夏天标本尽可能24-48h内固定染 色；冬天也不能超过72h。放置时间越久，厚血膜越 不易溶血，染色效果也差。若不能及时染色，薄血膜 宜先用甲醇固定（1～3分钟），然后用过滤清水对厚 血膜溶血，晾干后装入盒内盖严，待以后染色。
染液的配制和染色方法： 根据说明书操作。
染色注意事项
（1）滴加染液时吸管不要碰到血膜，否则容易出现划 痕； （2）滴加染液时不要出现气泡，否则影响着色； （3）勿直接倾倒掉玻片上的染液，以防渣滓附着在玻 片上冲不掉影响镜检； （4）冲洗染液的水流一定要轻缓，不要对着厚血膜冲， 否则厚血膜直接被冲掉；如果用漂洗的方法，将血片 倾斜着从水盆中取出。 （5）一定不要染反了！
吉氏染液的染色方法
染色前的处理： 血膜干燥后,先用甲醇或无水乙醇固
定薄血膜,再用清水对厚血膜溶脱血红蛋白（新制作的血 片可省略这一步骤，因染液中含较高浓度的水，在染色过 程中进行溶血），然后再进行染色。
染液的配制： 每1ml缓冲液或蒸馏水，加吉氏母液2-3
滴；或将母液和缓冲液按照1:9的比例混合。
影响染色效果的因素
血片染色好坏除与玻片清洁度、血片制作质量和染色 技术等有关外，还受到以下因素的影响： （1）染液稀释后使用时间
必须现用现稀释，当时使用， 一般在0.5h内染色力最强。吉氏和瑞氏染液的主要成份是 美蓝、伊红和由美蓝氧化产生的天青，三者能在甲醇中溶 解，但在水溶液中伊红遇到美蓝和天青即产生沉淀，从而 失去染色能力。
玻片清洁无磨损
载玻片必须完全清洁无油渍或污 垢。制片时，手指勿接触玻片表面，以免油污使薄血 膜产生空白区以及厚血膜脱落。推片边缘一定要平滑、 清洁，才能使推出的血膜均匀一致，边缘无毛刺。
刚涂制的血膜要平放 厚血膜未干前切勿倾斜，以
免血膜倾向一侧，造成血膜厚薄不均，厚处不易溶血 和着色而影响检查结果。晾干血膜时应注意防尘，防 止苍蝇、蟑螂等昆虫吮吸血膜。干后应及时装入标本 盒并盖严。
取约4～5ul血（相当于火柴头大小），右手持推片下 端，使推片一角与血滴中心接触，由里向外一个方向 旋转2～4圈，最后再回到中心，涂成直径0.8～1cm大 小圆形厚血膜。
位 置： 玻片中央偏右或6等份中的第3格中部。 外 观： 圆形，厚薄均匀，边缘整齐。过厚易于脱
落，过薄达不到检出率的要求。以1个油镜视野5-10 个白细胞为宜。
疟原虫的制片技术
许 艳 山东省寄生虫病防治研究所
内
（一）血片制作 （二）染 色
容
所需设备
载玻片：清洁无油污，以免血膜受污染或脱落 推 片：边缘光滑，用完后及时清洗，以免影响下次使
用
微量采血吸管：20ul，取血时可供参考 胶 头：与微量采血吸管配套，注意不要吸进血液 取血所用的设备：75%酒精棉球、一次性采血针、抗凝
标准血片： 每张玻片涂厚、薄血膜各1个 方 法： 将载玻片平均分为6等份：第1、2格用于贴
标签；厚血膜涂在第3格中央；薄血膜涂在第4格前缘 至第6格中部
外 观： 血片自左向右依次为薄-厚-标签
薄 血 膜
厚 血 膜
标 签
6
5
4
3
2
1
厚血膜的制作
方 法： 取洁净的载玻片1张，左手持载玻片平置，
疟大滋养体和裂殖体。
注 意：（1）用抗疟药之前取血（用药后镜检结果
往往是阴性）；（2）取血后应尽快制片（血细胞和 疟原虫的形态保存完好）。
血膜的种类
用于检查疟原虫的血膜用两种： 一种是将血液涂成薄膜状，称为薄血膜； 一种是将血液涂成圆盘状，称为厚血膜。
要求：一张玻片上同时制作厚、薄两种血膜！！
血膜Байду номын сангаас位置
管等
记号笔：写标签 水、纸巾：用于清洗、拭干推片
样本要求
末梢全血：指尖、耳垂末梢全血，婴幼儿可取拇趾
或足跟部全血。现场取血现场制片。
静脉全血：采用抗凝管采血。最好取血后立即制片，
如果血液放置时间过长会影响镜下形态。冷冻后的血 液不能用于制片。
骨 髓：临床上可用于确诊恶性疟感染，可查到恶性
谢
谢！
注 意：（1）固定薄血膜时甲醇一定不要碰到
厚血膜；（2）厚血膜溶血后需要晾干再进行染 色，否则厚血膜很容易脱落。
注 意：母液的稀释用水尽量选用pH为7.0-7.2的缓
冲液。 原 因：当染液的pH值为7.0-7.2时染色效果较好，疟 原虫的胞浆被染成蓝色，疟原虫的核被染成红色。
染液偏酸时，红细胞和疟原虫的核染成鲜红色，而疟原虫 的胞浆着色较差。 染液偏碱时，红细胞被染成紫蓝色，不易观察。
（2）染液的稀释浓度 染液的浓度要适当。染液的浓度
高，着色就快而深，疟原虫寄生红细胞的薛氏点粗大显著， 但颜色常偏碱；染液浓度低则染色时间久，颜色偏酸，薛 氏点不明显或消失。
影响染色效果的因素
（3）染色时间
染色时间长染色效果好，反之较差。染 色时间应根据染液的稀释浓度和气温而适当增减。室温高 则着色快，染色时间可略缩短，气温低可适当延长。 染液的稀释用水和染色后冲洗用水应选 择pH7.0-7.2缓冲液，也可以使用新鲜的蒸馏水或过滤的 冷开水。
内
（一）血片制作 （二）染 色
容
染液的种类
目前临床上应用最广泛的是瑞氏染液和吉氏染液。
我们推荐用吉氏染液，它具有方便，染色效果稳 定，便于长期保存的优点。 瑞氏染色，染色时间短，但染色效果不如吉氏稳 定，主要在门诊量大的门诊实验室使用。
染色前的处理
无论用吉氏染液还是瑞（吉）氏染液，染色前均 需要对薄血膜进行固定，对厚血膜进行溶血处理。 薄血膜固定：将血片薄血膜朝下，呈45°倾斜， 用吸管吸取一定量的甲醇或无水乙醇进行固定。 厚血膜溶血：将清水滴加于厚血膜上或将厚血膜 向下插入水槽中，待厚血膜表面呈白色即可。
位 置： 玻片左半部分或第4格前缘到第6格中部。 外 观： 舌状，厚薄均匀，无划痕。在玻片上形成
平铺的红细胞，红细胞之间互相接触而不相互重叠。
注 意： 推制时速度要均匀。血滴大小、推片与载
玻片之间夹角大小及展开血膜的速度快慢等会影响血 膜的厚薄。
正确的推片姿势
标准的疟原虫血片
制片注意事项
染色方法： 每张血片约需要染液2ml，将染液混合均匀，
滴加于血膜上并覆盖整个血膜，染色15-20min。然后用清 水轻轻将染液冲洗干净，晾干后镜检。
瑞（吉）氏染液的染色方法
染色前的处理： 血膜干燥后,先用清水对厚血膜溶
脱血红蛋白，待厚血膜晾干后，直接进行染色。（这 种染色方法省略了固定薄血膜这一步骤，因染液中含 较高浓度的甲醇，在染色过程中对薄血膜进行固定）。