丁硼乳膏质量标准研究

丁硼乳膏质量标准研究

发表时间：2013-06-06T15:46:01.090Z 来源：《医药前沿》2013年第11期供稿作者：冯定军丁捷飞胡黎凤俞伟[导读] 内标物的确定用水杨酸甲酯、环己酮、正十四烷等进行试验，结果发现正十四烷较为适合作内标

冯定军丁捷飞胡黎凤俞伟（宁波立华制药有限公司浙江宁波 315174）【摘要】目的：通过含量测定制定丁硼乳膏的质量标准。方法：采用气相色谱法测定丁香酚的含量；采用紫外-可见分光光度法测定硼砂的含量。结果：丁香酚进样量为0.01759-0.28144μg时线性关系良好，平均加样回收率为99.6% (RSD=0.52%， n=5)；硼砂在0.018mg/ml～0.18mg/ml范围内线性关系良好。结论：该方法简便，可靠，准确，可用于该制剂的质量控制。【关键词】丁香酚硼砂丁硼乳膏气相色谱法紫外-可见分光光度法【中图分类号】R927 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）11-0007-02 丁硼乳膏是一种以丁香罗勒油，硼砂为主药的一种复方制剂，它具有消炎，止痛等功效，临床上用于牙龈炎，牙周炎，牙龈红肿，口腔炎[1]。制剂中丁香罗勒油是唇形科植物丁香罗勒（Ocimum gratissimum L.）的全草经水蒸气蒸馏得到的挥发油，具有镇痛、防腐的功效，其主要成分为丁香酚。而硼砂也有解毒防腐之功效，因此被广泛用于牙科及口腔疾病的治疗[3]。

本文参考文献[2-7]对本产品的质量标准作了研究，采用气相色谱法测定丁香酚的含量；采用紫外-可见分光光度法测定硼砂的含量。方法准确，灵敏，专属性强，适于作为丁硼乳膏的质量控制标准。

1 仪器与试药

Agilent 6890气相色谱仪；UV-2450紫外分光光度仪；丁香酚对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号：725-200209（供含量测定用）；硼砂对照品由佳妮化工有限公司提供；内标物：正十四烷（阿拉丁试剂），批号：27840。试验样品丁硼乳膏由宁波立华制药有限公司提供，批号分别为20120301、20120302、20120303。正己烷（分析纯）。

2 丁香酚的含量测定

2.1色谱条件色谱柱：HP-5MS石英毛细管柱（30m× 0.25mm）；检测器：氢火焰离子化检测器（FID）；载气：氮气；流速：1.2ml/min；柱温：150℃；进样口温度230℃；检测器温度：240℃；进样量：1μl；分流比：10:1；理论塔板数按丁香酚峰计不得低于5000，丁香酚与其他峰分离度不低于1.5。内标物为正十四烷。

2.2溶液的制备

2.2.1内标溶液精密量取正十四烷0.12ml于100ml容量瓶中，加正己烷至刻度制成含正十四烷1.2μl/ml的溶液，作为内标溶液。

2.2.2标准品溶液取丁香酚对照品35mg，精密称定，置于50ml容量瓶中，加正己烷制成含丁香酚0.7mg/ml的储备液。

校正因子的测定：精密量取内标溶液1ml，储备液2ml，用正己烷稀释成10ml，摇匀，取1μl注入气相色谱系统，记录丁香酚和正十四烷的峰面积计算校正因子。

2.2.3供试品溶液精密称取供试品约0.2g，置预先称定重量的10ml离心管底部，用玻棒讲供试品涂于离心管3ml刻度以下内壁，使成一薄层，加正己烷3ml，振摇并放置3min，离心。将上清液移至精密加有1ml内标溶液的10ml容量瓶中，再向离心管中加入2.5ml正己烷，用玻棒搅拌，使乳膏在正己烷液面下的内管壁上形成一薄层，玻棒用滤液纸条擦净，纸条置离心管中，玻棒用少量正己烷冲洗，洗液置离心管中，离心，将上清液移至上述10ml容量瓶中，同法再提取一次，用正己烷稀释至刻度，摇匀即得。

2.3方法学验证

2.3.1线性关系考察精密量取储备液0.25，0.5，1.0，2.0，4.0ml分别置10ml容量瓶中，各精密加入内标溶液1ml，再加正己烷稀释至刻度，摇匀，各取1μl进样，记录色谱图，以对照品峰面积与相应内标峰面积之比为纵坐标（Y），对照品浓度与相应内标浓度之比为横坐标（X ）进行线性回归。

结论，本品样品溶液浓度在17.5μg/ml～280μg/ml范围内，浓度比与峰面积比线性关系方程为Y=1.164X－0.0266，相关系数R2=0.9995，可见本品在17.5μg/ml～280μg/ml浓度范围内，浓度与峰面积有良好的线性关系。

2.3.2干扰试验按处方比例及工艺制备不含丁香罗勒油的样品适量，按2.2.3项下供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液，吸取阴性样品溶液，对照品溶液及样品溶液各1μl注入气相色谱系统，按2.1项色谱条件进样，结果在丁香酚峰及内标峰保留时间处无吸收峰出现。表明样品中其他成分不干扰测定，方法专属性强（色谱图见图1）。

A B C A:阴性样品溶液 B:对照品溶液 C:供试品溶液

图1 GC色谱图

2.3.3精密度试验取对照品溶液一份，按2.1色谱条件，精密量取1μl进样，重复进样6次，每次测得丁香酚的峰面积与相应内标峰面积之比的RSD为0.31％。

2.3.4重复性试验取同一批号丁硼乳膏6份，按2.2.3项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件测定含量，结果6份样品丁香酚平均含量RSD为0.47％。

2.3.5稳定性试验对同一供试品溶液在放置1，2，4，8，16，24 h 后按含量测定方法的色谱条件测定，记录对照和内标的峰面积。测得丁香酚峰面积与内标峰面积之比的RSD为0.04%，表明供试品溶液在24 h 内稳定。

2.3.6回收率试验精密称取已知含量的样品5份，分别加入丁香酚对照品储备液1ml，按2.2.3项处理方法制备溶液，按2.9项测定含量，计算平均回收率（n=6）为99.6%(RSD%=0.52)。数据见表1：

2.3.7样品含量测定取供试品溶液，按2.1项色谱条件进样，按内标法计算丁香酚含量。三批供试品的含量分别为6.7‰，6.9‰，6.7‰。

3 硼砂的含量测定

3.1溶液的制备

3.1.1标准品溶液取硼砂对照品45mg，精密称定，置于100ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀即得。

3.1.2供试品溶液精密称取供试品0.18g，置蒸发皿中，加硫酸溶液（1→2）2ml，使其分散后加水适量，加热煮沸数分钟，移至50ml 量瓶中，蒸发皿用水洗净，洗液并入量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。用干燥滤纸滤过，弃去初滤液，取续滤液备用。

3.2测定方法精密量取对照品溶液与供试品溶液各2ml，分别置于锥形瓶中，加盐酸2滴，摇匀，置冷水浴中，边冷却边精密加硫酸10ml，摇匀，精密加0.1%胭脂红硫酸溶液（取胭脂红0.1mg，加硫酸溶解使成100ml）10ml，摇匀，放置45分钟，在610nm的波长处测定吸收度。

3.3线性关系考察精密量取硼砂对照品45mg，精密称定，置于100ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2，5，10，15，20ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液各2ml，分别置于锥形瓶中，加盐酸2滴，摇匀，置冷水浴中，边冷却边精密加硫酸10ml，摇匀，精密加0.1%胭脂红硫酸溶液（取胭脂红0.1mg，加硫酸溶解使成100ml）10ml，摇匀，放置45分钟，在

610nm的波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标（Y），对照品浓度为横坐标（X）进行线性回归。得回归方程为Y=5.2647X+0.0012。

结论，本品样品溶液浓度在0.018mg/ml～0.18mg/ml范围内，浓度与吸收度线性关系方程为Y=5.2647X+0.0012，相关系数R2=1，可见本品在0.018mg/ml～0.18mg/ml范围内，浓度与吸收度有良好的线性关系。

3.4稳定性试验对同一供试品溶液在放置1，2，4，8，16，24 h 后，按照测定方法测定其吸光度，测得其吸光度的RSD为0.23%，表明供试品溶液在24 h 内稳定。

3.5精密度试验精密量取3.1.1项下标准品溶液2ml，置于锥形瓶中，加盐酸2滴，摇匀，置冷水浴中，边冷却边精密加硫酸10ml，摇匀，精密加0.1%胭脂红硫酸溶液（取胭脂红0.1mg，加硫酸溶解使成100ml）10ml，摇匀，放置45分钟，在610nm的波长处测定吸收度。重复测定6次，记录吸光度。测得吸光度的RSD为0.30%。

3.6样品含量测定按供试品溶液制备方法及测定方法测三批供试品中硼砂的含量，数据分别为25.6‰，26.3‰，25.9‰。

4 讨论

4.1提取方法及提取时间的确定本试验对丁硼乳膏中丁香酚的提取方法做了研究，分别采用离心提取，挥发油提取器提取，超声提取三种方法，三种方法各有优缺点。挥发油提取器提取杂质干扰少，能有效保护毛细管柱寿命，但操作复杂且费时；超声提取快捷、简便，但是提取温度过高可致丁香酚挥发；离心提取既简单快捷，又能避免温度过高导致丁香酚损失的缺点，分析三种提取方法，最后选择离心提取。

精密称取同一批供试品约0.2 g，分别离心不同时间，按拟定方法制备供试品溶液，测定其含量。试验结果表明，离心20min （6.53μg/g）比离心15 min（5.84μg/g）含量明显增高，而离心20 min（6.53μg/g）和离心30 min（6.55μg/g）结果并无明显差别，说明离心20min 3次即可提取完全，故选择离心20分钟。

4.2色谱柱的确定在色谱分析中，分别选用固定液为100%二甲基聚硅氧烷，6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷，10%聚乙二醇的毛细管柱进行测定，结果以固定液为100%二甲基聚硅氧烷的毛细管柱分析获得较好色谱条件。

4.3内标物的确定用水杨酸甲酯、环己酮、正十四烷等进行试验，结果发现正十四烷较为适合作内标，样品色谱中与正十四烷的保留时间相应处无杂质峰干扰，样品加入内标后，内标物与样品中其它相邻峰达到满意的分离(分离度>1.5)，故选择正十四烷作为内标。

参考文献

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