中国鲎同工酶组织器官特异性表达

已成为濒危的海洋生物．中国鲎资源的枯竭必然带来中国鲎遗传多样性的丧失 ，而遗传多样性是物种
长期生存 和保护 进化潜 力 的物质 基础 ．有关 中国鲎 的研究 ，在 ２ ０世纪初 就引起 了人们 的广泛 兴趣 … ． 国内外学者 已经在 中国鲎形态 、发育 、生态 及药 用价 值等方 面做 了大量研究 ｕ Ｊ ，而有关 中国 鲎的酶 学 研究仅 见 Ｓｌ ｄｒ ｅ ｎ ｅ 等应 用 ｌ ａ ０种等位 酶分析 美洲 鲎 的遗 传 多样 性 Ｊ ，目前 对 中 国鲎 的酶 化学 研究 未 见 任何报道 ．本文 采用垂 直 聚丙烯酰胺 凝胶 电泳技 术 ，分析 中国鲎 ６种组织器 官 中的 ７种 同工 酶的酶
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集美大学学报 （ 自然科学版 ）
第 ｌ ５卷
１ ２ 电泳 、染色及 固定 ．
采用不连续聚丙烯酰胺垂直凝胶电泳 ，于 ４℃冰箱中进行．电泳条件参照文献 ［ ８ ，乙醇脱 ７— ］ 氢酶 （ Ｄ 、山 梨 醇脱 氢 酶 （ Ｄ 、酯 酶 （ Ｓ ） Ａ Ｈ） Ｓ Ｈ） Ｅ Ｔ 、过 氧 化 氢 酶 （ Ａ ） Ｃ Ｔ 、天 冬 氨 酸转 氨 酶 （Ａ ） Ａ Ｔ 、苹果 酸脱氢 酶 （ Ｒ） 和苹果 酸 酶 （ Ｅ） 的染 色方 法参 照 Ｈａ ｓ ＭＤ Ｍ ｍ ＿ 、曾呈 奎 等 ｍ 和王
氢酶在鳃 和黄色结缔组织中不表 达；山梨醇脱氢酶 在鳃 中不 表达 ；酯酶 、过氧化氢 酶和苹果酸脱氢 酶在 ６ 种组织器官 中均有表达 ，但表达活性存在差异 ；而天冬氨酸转化酶 Ａ ｔ 位点在鳃 中不表达． ａ 一１
［ 关键词】 中国鲎 ；同工酶 ；电泳 ；组织特异性 ［ 中图分类 号］Ｑ９ ５ ５ ；Ｑ９ ６ ５ ［ 文献标志码 ］Ａ
中国鲎 同工 酶 组 织器 官特 异性 表 达
林文燕 ，翁朝 红 ，杨 江 东 ，李伟 文 ，孙 敏 ，冯宇月１ ， ２
（ ．集美大学水产学院，福建 厦 门 ３ １２ ；２ １ ６０ １ ．福建 省高校水产科学技术 与食 品安全重点实验室，福建 厦 门 ３１２ ） ６ ０ １
［ 摘要 ］采用垂直 聚丙烯 酰胺 凝胶 电泳技术 ，分析 了中国 鲎 ６种组织 器官 （ 肝胰腺 、心脏 、肠 、鳃 、 肌 肉和黄色 结 缔 组 织 ） 的 乙 醇 脱 氢 酶 （ Ｄ 、 山梨 醇脱 氢 酶 （ Ｄ 、酯 酶 （ Ｓ ） Ａ Ｈ） Ｓ Ｈ） Ｅ Ｔ 、过 氧 化 氢 酶 （Ａ ） Ｃ Ｔ 、天冬氨酸转化酶 （ Ｔ 、苹果 酸脱 氢 酶 （ Ｈ）和苹 果酸 酶 （ Ｅ）等 ７种 同工酶 的活性 和分 从 ） ＭＤ Ｍ 布 ，并对其酶谱 的表型进行了分析．结果表明 ，中 国鲎 的同工酶 系统存在 不同程度 的组织特异性 ．乙醇脱
清液，加入两倍体积的蔗糖溶液 （ 蔗糖 ）＝４ （ ０％ ），再加入 ２ 溴酚蓝 ，即制备好 了酶提取液 ， ０ 可直接用 于 电泳或 一 ４℃低 温短期保 存备 用．
［ 收稿 日期］２０ １ ｏ ０ ９— ２一 ９ ［ 修回 日期］２ １ ０ ２ ０ ０－ １－ ０ ［ 基金项 目］ 国家科技基础条件平台建设子项 目 （０ ６ Ｋ ３ ４０ ０７ Ｋ ３ ４０ ；福建省教育厅项 目 （００ ０ ） ２０ Ｄ ． ０７ ，２０ Ｄ Ａ ０７ ） ｇ ２６２ ６ ［ 作者简介］林文燕 （９ ８ ，女 ，实验师 ，从事水环 境分析与海洋生物研究 ．通讯作 者 ：翁朝 红 （９ １ ） １６ 一） １７ 一 ， 女 ，副教授 ，从事细胞遗传学研究 ，Ｅｍ ｉ ｅｇｈｏｏｇ ｍ ｄ． ｎ － ａ ：ｗ ｎｚａｈｎ＠ｊ ｍ ｅ ｕｅ ． ｌ
Ｏ 引言
中 国鲎 （ ａｈｐｅｓｔ ｄｎａｕ ）属 于节 肢 动物 门 （ ｒ ｒｐｄ ） Ｔ ｃｙ ｌｕ ｉｅｔｔｓ ｒ Ａ ｔ ｏｏ ａ 、肢 口纲 （ ｒｓ ｍ ｔ） ｈ Ｍｅ ｔ ａ 、剑 尾 目 ｏｏ ａ
（ ｉ ｏｕａ 、鲎科 （ ｉｕｉａ） Ｘｐ ｓｒ） ｈ Ｌｍ ｌ ｅ ，是 现存肢 口纲 仅有 ４个种类 之一 ． 中国鲎 主要分 布 于 日本 的 濑户 内 ｄ 海和 九州岛北 岸 、中 国的东 南沿海 、东南 亚等 地 ¨ ２． 中国鲎是 中 国东 南沿海 特色 的海产 品 ，其 血液 ＩＪ 制品 （ 鲎试剂 ）在 医药上具 有广泛 的应用 ． 由于过度 捕捞 和海 洋污 染 ，中 国鲎在 中国沿海 即将 消失 ，
Baidu Nhomakorabea第ｌ ５卷
第 ５期
集美大学学报 （ 自然科学版）
Ｊｕ ａ ｏ ｍ ｉ ｎ ｅｓｙ Ｎ ｔ ａ Ｓｉ ｃ） ｏｒ ｌ ｆ ｉｅ Ｕ ｉ ｒ ｔ（ ａ ｒｌ ｃ ｎｅ ｎ Ｊ ｖ ｉ ｕ ｅ
Ｖｏ． ５ Ｎ ． １ １ ｏ ５
Ｓｐ ０ ０ ｅ ．２ １
２１ ００年 ９月
［ 文章编号］１０ ０７—７０ （０ ０ ０ ０ ３ ０ ４５ ２ １ ｝５－ ３ ３— ５
谱表型 ， 探讨其同工酶系统的遗传基础 ，为进一步进行中国鲎遗传多样性分析和资源保护提供有价值
的生化遗传 指标 和理论基 础 ．
１ 材料 与 方 法
１ １ 材 料 的采集与样 品的 制备 ．
中国鲎 （ ａｈｐｅｓｔｄｎａｕ） 集 于浙 江温州 洞头 岛海域 ，采样 时 间为 ２０ Ｔ ｃｙｌ ｉｅｔｔｓ 采 ｕ ｒ ０ ８年 ７ － ．活体 一９月 运 回后 暂养 于集 美大 学水产 养殖试 验场 ，取每个 个体 的肝胰 腺 、心脏 、肠 、鳃 、肌 肉和黄色结 缔组织 等 ６种组 织器 官 ，置 于 一 ０℃冰箱保存 备用 ．取 样 品 ０５ｇ ８ ． 加入 约 ８０ｍＬ的预冷 Ｔｉ— Ｉ ０ ｒ ＨＣ 组织 缓 冲 ｓ 液 （．１ｍｏ Ｌ Ｈ： ． ） 冰浴研磨 匀浆 ，于 ４ｏ ００ ｌ ，ｐ ７０ ／ Ｃ冷冻离 心机 中 以 １ ０ ｍｉ ２００ｒ ｎ离心 １ ｎ ／ ５ｍｉ，取 上