小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞使用说明
大小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞分离培养方法
大小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞分离培养方法程涵蓉;吴本清;何少茹【摘要】肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)是肺泡上皮细胞的"祖细胞",可分化为AECⅠ,其作用与肺组织的生理功能密切相关,获取AECⅡ将为肺部疾病的研究提供良好的实验模型和基础.大鼠和小鼠是常用的制备AECⅡ的动物,胎肺的消化方法和消化酶的种类、分离纯化的方法、鉴别的方法以及培养方法等是AECⅡ研究的重点和难点,虽然已经进行了广泛研究,但目前尚未形成一套完善的胎鼠AECⅡ分离、纯化与鉴定的方法.此外,AECⅡ的产量、纯度和传代等都是需要将来继续探索的问题.%Type Ⅱ alveolar epithelial cells(AEC Ⅱ) are the ''progenitor cells'' of alveolar epithelial cell,which can differentiate into AECⅠ and its effect is closely related to physiological function of lung tissue.Fetal rat AECⅡ provides a good experimental model and basis for studying lungdise ases.Rats and mice are the common animals for preparing AEC Ⅱ.Fetal lung digestion methods and digestive enzyme types,isolation and purification methods, identification and culture methods are the focus of AEC Ⅱ studies,though extensive studies have been c arried out,good methods for AECⅡisolation,purification and identification have not been established.The production,purity and survival of AEC Ⅱ are need to be explored in the future.【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2017(023)013【总页数】5页(P2653-2657)【关键词】胎鼠;大鼠;小鼠;肺泡Ⅱ型细胞;分离;纯化;鉴定【作者】程涵蓉;吴本清;何少茹【作者单位】暨南大学第二临床医学院广东省深圳市人民医院儿科,广东深圳518020;广东省人民医院儿科广东省医学科学院,广州 510080;南方医科大学,广州510515;暨南大学第二临床医学院广东省深圳市人民医院儿科,广东深圳518020;广东省人民医院儿科广东省医学科学院,广州 510080;南方医科大学,广州 510515【正文语种】中文【中图分类】R321.54肺泡Ⅱ型上皮细胞(type Ⅱ alveolar epithel ial cell，AECⅡ)被认为是肺泡上皮细胞的“干细胞”，具有原代特性，因而原代培养的AECⅡ是病因学和病机学的重要模型[1]。
小鼠支气管上皮细胞培养方法
小鼠支气管上皮细胞培养方法
小鼠支气管上皮细胞培养是一种常用的实验方法，可以用于研究呼吸系统相关疾病以及药物筛选等。
以下是一种常见的小鼠支气管上皮细胞培养方法的步骤：
1. 准备培养基：使用适合支气管上皮细胞培养的基础培养基，如DMEM/F12。
添加相应的补充剂，如胰岛素、转铁蛋白、乙酰半胱氨酸等。
2. 准备培养皿：在无菌条件下，将细胞培养皿或培养板涂覆上胶原蛋白或玻璃片，并在37摄氏度的培养箱中预热。
3. 收集支气管组织：选择小鼠支气管组织，将其收集并放置在含有含有抗生素和抗真菌药物的PBS缓冲液中。
4. 组织消化：将支气管组织切割成小块，并加入含有胰酶和DNA酶的消化溶液中，在37摄氏度的培养箱中进行消化。
5. 细胞分离：用吸管轻轻吹动溶解的组织块，使细胞充分分散。
将细胞悬浮液过滤，并进行离心，以去除残留的消化酶和细胞碎片。
6. 细胞培养：将细胞悬浮液转移到预先准备好的培养皿或培养板中，加入培养基，并将其放置在37摄氏度、5% CO2的培养箱中。
7. 细胞培养和维护：根据需要，定期更换培养基，并监测细胞的生长状态。
细胞可以用于后续实验，如药物处理、基因表达分析等。
需要注意的是，在进行小鼠支气管上皮细胞培养时，应遵守相关伦理规定，并确保操作环境的无菌性。
小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞处理方法
小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞处理方法小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞处理方法及细胞说明书仅供参考，具体操作还需要根据到货时细胞密度，细胞生长状态等具体情况，酌情处理。
一．小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞贴壁细胞客户接收到细胞，用75%的酒精消毒（建议配制75%酒精的水是灭菌过的）培养瓶外部。
肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X 各一张）。
显微镜观察细胞，当细胞融汇80%左右（可以传代的情况下），细胞应该在37度培养箱预温1-2h后再做处理。
如未达到细胞传代密度，培养瓶应预留一部分培养基继续培养。
严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
用PBS2-3ml/次轻轻洗细胞表面，加入适量的0.05%胰酶-EDTA消化细胞,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
1000rpm,5min离心，重悬细胞。
换新的细胞培养瓶，37℃,5%CO2培养。
二．小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞悬浮细胞1.接收到细胞，用75%的酒精消毒（建议配制75%酒精的水是灭菌过的）培养瓶外部。
2.肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒）。
5.1000rpm,5min离心，重悬细胞。
换新的细胞培养瓶和新鲜培养基，37℃,5%CO2培养。
小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离、培养和鉴定
小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的别离、培养和鉴定
小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的别离、培养和鉴定
目的:建立一套可靠的小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(AEC Ⅱ)别离、纯化和培养技术, 为进一步研究小鼠支气管肺泡干细胞(BASC)的增殖、分化及其在肺腺癌发生中的作用奠定根底.方法:采用分散酶消化小鼠肺组织块,经免疫黏附法纯化小鼠AEC Ⅱ,并进展原代培养.用SP-C和CCSP免疫荧光染色和透射电镜对所别离的细胞进展鉴定.结果:该方法所获得细胞产量大、纯度高.AEC Ⅱ比例约为(80±2.6)%(n=5),Clara细胞约
(6.7±1.2)%(n=5),并能维持培养3～5 d.透射电镜观察AEC Ⅱ,细胞内可见板层小体.结论:该方法是一种可靠的`小鼠AEC Ⅱ的别离、纯化和培养技术,可满足一般的实验要求.
作者：
安江洪钱莘敖绪军卓文磊陈正堂 AN Jiang-hong QIAN Shen AO Xu-jun ZHUO Wen-lei CHEN Zheng-tang 作者单位：
第三军医大学附属新桥医院解放军肿瘤研究所,重
庆,400037
刊名：
医学研究生学报 ISTIC
英文刊名：
JOURNAL OF MEDICAL POSTGRADUATES
年，卷(期)：
2023 21(3)
分类号：
Q813.1
【关键词】：^p ：
肺泡Ⅱ型上皮细胞原代细胞培养小鼠支气管肺泡干细胞。
小鼠气管和支气管上皮细胞使用说明
小鼠气管和支气管上皮细胞小鼠气管和支气管上皮细胞产品介绍：为使能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。
派瑞金提供的小鼠气管和支气管上皮细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。
研发的小鼠气管和支气管上皮细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。
同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
小鼠气管和支气管上皮细胞注意事项：1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 请用相同条件的培养基用于细胞培养。
培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。
4. 建议收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。
5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。
小鼠气管和支气管上皮细胞其他相关小鼠原代细胞：小鼠小肠粘膜上皮细胞小鼠大隐静脉平滑肌细胞小鼠肺微血管内皮细胞小鼠冠状动脉平滑肌细胞小鼠肺血管平滑肌细胞小鼠大隐静脉内皮细胞小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞小鼠冠状动脉内皮细胞小鼠气管上皮细胞小鼠骨细胞小鼠气管平滑肌细胞小鼠滑膜细胞小鼠肺成纤维细胞小鼠骨骼肌细胞小鼠支气管上皮细胞小鼠表皮细胞小鼠支气管成纤维细胞小鼠真皮成纤维细胞小鼠肺大静脉平滑肌细胞小鼠破骨细胞小鼠肺大动脉平滑肌细胞小鼠皮肤肥大细胞小鼠肺大动脉内皮细胞小鼠前脂肪细胞小鼠肺动脉成纤维细胞小鼠成骨细胞小鼠肺大静脉内皮细胞小鼠关节软骨细胞小鼠气管和支气管上皮细胞小鼠胎儿表皮角质形成层细胞小鼠胰岛细胞小鼠成年表皮角质形成层细胞小鼠胰腺星状细胞小鼠皮下脂肪细胞小鼠胰腺导管上皮细胞小鼠内脏脂肪细胞小鼠颌下腺上皮细胞小鼠脑动脉血管内皮细胞小鼠腮腺细胞小鼠脑动脉血管平滑肌细胞小鼠乳腺上皮细胞小鼠脑静脉血管内皮细胞小鼠胰腺上皮细胞小鼠脑静脉血管平滑肌细胞小鼠甲状腺上皮细胞小鼠脑膜细胞小鼠淋巴管内皮细胞小鼠神经胶质细胞小鼠淋巴成纤维细胞小鼠海马神经元细胞小鼠外周血白细胞小鼠脑微血管内皮细胞小鼠骨髓基质细胞小鼠脑成纤维细胞小鼠食管上皮细胞小鼠神经小胶质细胞小鼠食管平滑肌细胞小鼠雪旺氏细胞小鼠肠动脉内皮细胞小鼠小脑颗粒细胞小鼠肠静脉内皮细胞小鼠嗅鞘细胞小鼠肝实质细胞小鼠视网膜微血管内皮细胞小鼠肝动脉内皮细胞小鼠小梁网细胞小鼠肝动脉平滑肌细胞小鼠视网膜色素上皮细胞小鼠小肠血管内皮细胞小鼠视网膜muller细胞小鼠小肠隐窝上皮细胞小鼠虹膜色素上皮细胞小鼠肝内胆管上皮细胞小鼠晶状体上皮细胞小鼠胃粘膜上皮细胞小鼠角膜上皮细胞小鼠肝窦内皮细胞小鼠视网膜神经节细胞小鼠肝星形细胞小鼠角膜成纤维细胞小鼠直肠平滑肌细胞小鼠脉络膜血管细胞小鼠小肠平滑肌细胞小鼠牙乳头细胞小鼠结肠平滑肌细胞小鼠肝外胆管上皮细胞小鼠肠上皮细胞小鼠肝Kupffer细胞小鼠肠微血管细胞小鼠骨髓间充质干细胞小鼠肠巨噬细胞小鼠下丘脑神经元细胞小鼠子宫内膜上皮细胞小鼠睾丸支持细胞小鼠卵巢颗粒细胞小鼠心肌微血管内皮细胞小鼠子宫颈上皮细胞小鼠真皮微血管上皮细胞小鼠子宫平滑肌细胞小鼠胚胎成纤维细胞小鼠卵巢上皮细胞小鼠心脏干细胞小鼠子宫成纤维细胞小鼠神经干细胞小鼠卵巢成纤维细胞小鼠骨髓来源内皮祖细胞小鼠肾实质细胞小鼠椎间盘髓核细胞小鼠肾系膜细胞小鼠肾足突细胞小鼠膀胱上皮细胞小鼠肾小管平滑肌细胞小鼠膀胱平滑肌细胞小鼠肾成纤维细胞小鼠肾动脉内皮细胞小鼠尿道上皮细胞小鼠肾动脉平滑肌细胞小鼠输尿管上皮细胞小鼠肾小管上皮细胞小鼠肾管状上皮细胞小鼠肾小球内皮细胞小鼠心肌细胞小鼠前列腺上皮细胞小鼠心肌成纤维细胞小鼠肾上皮细胞小鼠主动脉内皮细胞小鼠膀胱成纤维细胞小鼠主动脉平滑肌细胞小鼠血管外膜成纤维细胞。
Flotillin-2在高氧诱导肺上皮细胞凋亡中的作用
广 东 医学
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３ ８卷 ５
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把 小鼠置
于 高氧环境 中处理 ２ ４ ｈ后 ， 取其肺脏切 片通过免 疫组化检 测 Ｆ ｌ ｏ ｔ 一 ２的表达 。通过体 外肺 上皮细胞 株进 一步验证 高氧后 Ｆ ｌ ｏ ｔ 一 ２在 细胞 中基 因和蛋 白水平 的表 达情 况。通过 质粒转染 的方 式把 Ｆ ｌ ｏ ｔ 一２的基 因整合进肺 上皮细胞
剂 提收 总 Ｒ Ｎ Ａ， 川逆 转 录 试 剂 盒 （ Ａ Ｂ １ ） 按 试 剂 蜕 Ｉ Ｊ ｉ Ｊ 合成 ｅ １ ） Ｎ Ａ ． ．Ｒ ｅ ａ ｌ ｔ ｉ ｍｅ— Ｐ Ｃ Ｒ采 用 Ｓ Ｙ ｆ ３ Ｉ ： Ｉ ｇ ｉ ｎ Ｐ Ｃ Ｒ 试制盒 （ Ａ ｐ １ ） ｌ ｉ ｅ ｄ Ｂ ｉ ｏ ｓ ｙ ｓ ｔ ｅ ｍ ｓ ） 按 操作 说ｆ Ｊ ｉ 】 操 作， 衙环 条件 为 ： ５ ０ ２ １ １ ｌ ｉ ｉ １ ， ９ ５ ｌ ０ ｎ ｌ ｉ ｌ １ ， 然 ９ ５ ｌ ５ ｓ ， ５ ８ ￣ Ｃ ｌ ｌ ｌ ｌ ｉ ｎ ， 共４ ０个循 环 ． ．所 得 数 ｊ Ｉ 大 】 参之 比 为ｌ 卡 Ｉ Ｉ 埘值， ｝ ｌ 问以＿ 卡 Ｈ 对 值 作 比较 日的 Ｉ 夫 ｊ １ 内 参 ｆ Ｊ ｌ 物 下 ： Ｆ ｌ ｏ ｔ ｉ ｌ ｌ ｉ ｎ 一２ 引 物 ： 正 向： ５ 一Ｇ Ｇ Ｃ
大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞使用说明
大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞编号名称规格北京派瑞金GK1003大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞5×105cells/瓶为能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。
派瑞金提供的大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。
研发的大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。
同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
大鼠II型肺泡上皮细胞简介：1、名称：大鼠II型肺泡上皮细胞2、组织来源：正常大鼠3、规格：25cm2培养瓶4、细胞简介：肺泡上皮细胞由肺泡I型(AECI)上皮细胞和肺泡Ⅱ型(AECII)上皮细胞构成，其比例约为1：2，这两类细胞在功能上和形态上明显不同。
AEC II在数量上比AECI 多，但是即使将AECⅡ顶部的微绒毛计算在内，其所占的肺泡上皮表面面积的比例也不足10%。
AECⅡ呈立方形，胞浆里面含有板层小体是其基本特征，是鉴别AECⅡ的主要依据。
肺泡Ⅱ型上皮细胞是肺泡上皮组织干细胞，在正常的细胞更新和修复过程中，它既可以分化为AECⅡ，也可以通过有丝分裂来维持自身细胞群。
本公司生产的大鼠II型肺泡上皮细胞采用胰酶和胶原酶消化制备而来，细胞总量约为5X105个/瓶，细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
5、培养基信息：1）培养基类型：M1992）添加因子：FBS、Penicillin、Streptomycin等大鼠II型肺泡上皮细胞使用方法：收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1.取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。
小鼠肺泡灌洗
把小鼠喉咙处皮肤剪开，用镊子把气管周围的组织分离开，气管暴露出来。
注射器7号针头，针尖剪掉，再磨平，把动物仰位固定，针头从嘴巴里进去，伸到气管里。
和平时灌胃一样，只是现在伸到气管。
在甲状腺（气管显得稍宽处）下面，针头就伸到这里，大约甲状腺过3毫米处。
然后拿一根线，从气管下穿过，把针头和气管一起结扎了，其实就是把针头固定在里面，不让它跑出来。
打结时用点力，手拨动针头时明显感觉针头动不了就可以了。
然后注射器吸取液体推进气管，第一次一般吸不完全，没关系，第二次的液体推进去后就能吸出来很多了。
我基本能全部吸出来的。
希望能帮上忙。
标题：小鼠肺泡灌洗标准操作规程关键词：肺泡灌洗；细胞分类计数；细胞因子目的：检查小鼠各种病理生理状态(特别是肺部疾病)下，肺部出现的各种病理改变。
例：哮喘模型中检测嗜酸细胞的分类数有否提高，灌洗液中各种细胞因子，如IL-4,IL-5,IL-10,IFN-r等水平。
主体内容（操作步骤）：实验的准备实验的器材、仪器、药品：4℃遇冷的单纯PBS和4℃遇冷的含1%BSA的PBS；手术器械：眼科剪，眼科镊，穿刺针或4号半头皮针；血细胞计数板；低温离心机实验操作规程：灌洗分单侧和双侧。
单侧一般为颈部和胸部解剖，气管和一侧肺叶结扎。
再用穿刺针插入气管上端，0.3mlPBS反复冲洗,一般为3遍，每遍冲洗次数根据需要决定，一般3-5次即可。
双侧灌洗则只需要进行颈部解剖，暴露气管进行插管。
PBS灌洗量增高到0.8ml.灌洗次数同上。
结果判定：1.回收的灌洗液4℃，1500r离心10分钟，回收上清置于-20℃等待进行细胞因子检测；2.用1ml含有1%BSA的PBS重悬细胞沉淀，取10ul重悬液进行细胞计数。
余液再次4℃离心，参数同上；3.离心后去上清，不需太彻底，可根据第二步细胞计数所得结果和需要涂片张数决定需要残留多少上清重悬细胞沉淀。
一般如果细胞总数有10*6次方/ml的话，用80-100ul重悬可以涂三张片，这样玻片上细胞密度比较适中。
一种大鼠ⅱ型肺泡上皮细胞原代提取方法
一种大鼠ⅱ型肺泡上皮细胞原代提取方法大鼠ⅱ型肺泡上皮细胞原代提取方法：
1.采集实验动物，洗涤表皮，将肺泡放入PBS缓冲液中浸泡；
2. 以刮片的方式，将少量的肺泡放入蜜糖酸钠液(0.25 mg/ml)内，均匀搅拌分散肺泡；
3.将搅拌后的肺泡液滤过，采用毛细管滤过，去除杂质；
4. 采用0.25% trypsin/EDTA液溶解上皮细胞，对溶解后的细胞悬液进行脱离，细胞懸浮液放入新配制的培养皿内，恢复培养；
5.采用体外培养技术，添加特殊的培养基，进行培养，培养环境控制在37℃、5%CO2的条件下，从而获得大鼠ⅱ型肺泡上皮原代细胞。
2型肺泡细胞名词解释
2型肺泡细胞名词解释
2型肺泡细胞，又称为Ⅱ型肺泡细胞，是肺泡中的一种细胞类型。
它主要分布于肺泡壁上，与1型肺泡细胞共同构成了肺泡结构。
2型肺泡细胞具有许多重要功能。
首先，它们是肺泡内主要的上
皮细胞，能够分泌肺泡表面活性物质（SP-A、SP-B、SP-C和SP-D）。
这些物质能够降低肺泡表面张力，防止肺泡坍塌，并增强肺泡稳定性。
其次，2型肺泡细胞还能吞噬和清除肺泡内的异物和细菌，发挥
着肺部免疫防御的作用。
它们还参与调节肺内炎症反应和免疫应答，
并分泌多种细胞因子和炎症介质，对炎症过程起到调节作用。
此外，2型肺泡细胞还具有细胞再生与修复的能力。
在肺部受损时，它们可以增殖和分化为1型肺泡细胞，以恢复肺泡结构和功能。
总之，2型肺泡细胞在维持肺部结构和功能、免疫防御与修复等
方面发挥着重要的作用。
小鼠肺组织各类细胞标志
小鼠肺组织各类细胞标志
小鼠肺组织各类细胞的标志如下：
1. 上皮细胞：上皮细胞是肺部的主要组成部分，主要负责气体交换。
它们的标志包括基底层细胞（如角蛋白5、8和18）、肺泡上皮细胞（如表面活性蛋白C、E和H）等。
2. 内皮细胞：内皮细胞是构成肺部血管的主要细胞类型。
它们的标志包括CD31和VEGF受体等。
3. 间质细胞：间质细胞是支持肺组织的细胞类型，主要负责提供结构支持和参与免疫反应。
它们的标志包括波形蛋白和α-平滑肌肌动蛋白。
4. 免疫细胞：免疫细胞在肺部发挥重要的免疫防御作用。
他们的标志包括CD45（广义免疫细胞标志）、T细胞（如CD3ε、CD4和CD8）、B细胞（如CD19和CD20）、巨噬细胞（如F4/80和CD68）等。
请注意，这些标志仅为部分细胞类型的代表性标志，实际应用时可能需要根据具体的研究目的和实验条件进行选择。
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小鼠支气管上皮细胞使用说明
小鼠支气管上皮细胞小鼠支气管上皮细胞产品说明：为使能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。
派瑞金提供的小鼠支气管上皮细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。
研发的小鼠支气管上皮细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。
同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
小鼠支气管上皮细胞注意事项：1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 请用相同条件的培养基用于细胞培养。
培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。
4. 建议收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。
5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。
小鼠支气管上皮细胞其他相关小鼠原代细胞：小鼠小肠粘膜上皮细胞小鼠大隐静脉平滑肌细胞小鼠肺微血管内皮细胞小鼠冠状动脉平滑肌细胞小鼠肺血管平滑肌细胞小鼠大隐静脉内皮细胞小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞小鼠冠状动脉内皮细胞小鼠气管上皮细胞小鼠骨细胞小鼠气管平滑肌细胞小鼠滑膜细胞小鼠肺成纤维细胞小鼠骨骼肌细胞小鼠支气管上皮细胞小鼠表皮细胞小鼠支气管成纤维细胞小鼠真皮成纤维细胞小鼠肺大静脉平滑肌细胞小鼠破骨细胞小鼠肺大动脉平滑肌细胞小鼠皮肤肥大细胞小鼠肺大动脉内皮细胞小鼠前脂肪细胞小鼠肺动脉成纤维细胞小鼠成骨细胞小鼠肺大静脉内皮细胞小鼠关节软骨细胞小鼠气管和支气管上皮细胞小鼠胎儿表皮角质形成层细胞小鼠胰岛细胞小鼠成年表皮角质形成层细胞小鼠胰腺星状细胞小鼠皮下脂肪细胞小鼠胰腺导管上皮细胞小鼠内脏脂肪细胞小鼠颌下腺上皮细胞小鼠脑动脉血管内皮细胞小鼠腮腺细胞小鼠脑动脉血管平滑肌细胞小鼠乳腺上皮细胞小鼠脑静脉血管内皮细胞小鼠胰腺上皮细胞小鼠脑静脉血管平滑肌细胞小鼠甲状腺上皮细胞小鼠脑膜细胞小鼠淋巴管内皮细胞小鼠神经胶质细胞小鼠淋巴成纤维细胞小鼠海马神经元细胞小鼠外周血白细胞小鼠脑微血管内皮细胞小鼠骨髓基质细胞小鼠脑成纤维细胞小鼠食管上皮细胞小鼠神经小胶质细胞小鼠食管平滑肌细胞小鼠雪旺氏细胞小鼠肠动脉内皮细胞小鼠小脑颗粒细胞小鼠肠静脉内皮细胞小鼠嗅鞘细胞小鼠肝实质细胞小鼠视网膜微血管内皮细胞小鼠肝动脉内皮细胞小鼠小梁网细胞小鼠肝动脉平滑肌细胞小鼠视网膜色素上皮细胞小鼠小肠血管内皮细胞小鼠视网膜muller细胞小鼠小肠隐窝上皮细胞小鼠虹膜色素上皮细胞小鼠肝内胆管上皮细胞小鼠晶状体上皮细胞小鼠胃粘膜上皮细胞小鼠角膜上皮细胞小鼠肝窦内皮细胞小鼠视网膜神经节细胞小鼠肝星形细胞小鼠角膜成纤维细胞小鼠直肠平滑肌细胞小鼠脉络膜血管细胞小鼠小肠平滑肌细胞小鼠牙乳头细胞小鼠结肠平滑肌细胞小鼠肝外胆管上皮细胞小鼠肠上皮细胞小鼠肝Kupffer细胞小鼠肠微血管细胞小鼠骨髓间充质干细胞小鼠肠巨噬细胞小鼠下丘脑神经元细胞小鼠子宫内膜上皮细胞小鼠睾丸支持细胞小鼠卵巢颗粒细胞小鼠心肌微血管内皮细胞小鼠子宫颈上皮细胞小鼠真皮微血管上皮细胞小鼠子宫平滑肌细胞小鼠胚胎成纤维细胞小鼠卵巢上皮细胞小鼠心脏干细胞小鼠子宫成纤维细胞小鼠神经干细胞小鼠卵巢成纤维细胞小鼠骨髓来源内皮祖细胞小鼠肾实质细胞小鼠椎间盘髓核细胞小鼠肾系膜细胞小鼠肾足突细胞小鼠膀胱上皮细胞小鼠肾小管平滑肌细胞小鼠膀胱平滑肌细胞小鼠肾成纤维细胞小鼠肾动脉内皮细胞小鼠尿道上皮细胞小鼠肾动脉平滑肌细胞小鼠输尿管上皮细胞小鼠肾小管上皮细胞小鼠肾管状上皮细胞小鼠肾小球内皮细胞小鼠心肌细胞小鼠前列腺上皮细胞小鼠心肌成纤维细胞小鼠肾上皮细胞小鼠主动脉内皮细胞小鼠膀胱成纤维细胞小鼠主动脉平滑肌细胞小鼠血管外膜成纤维细胞。
小鼠肺微血管内皮细胞使用说明
小鼠肺微血管内皮细胞小鼠肺微血管内皮细胞产品说明：为使客户能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。
派瑞金提供的小鼠肺微血管内皮细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。
研发的小鼠肺微血管内皮细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。
同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
小鼠肺微血管内皮细胞注意事项：1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。
培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。
4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。
5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。
小鼠肺微血管内皮细胞其他相关小鼠原代细胞：小鼠小肠粘膜上皮细胞小鼠大隐静脉平滑肌细胞小鼠肺微血管内皮细胞小鼠冠状动脉平滑肌细胞小鼠肺血管平滑肌细胞小鼠大隐静脉内皮细胞小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞小鼠冠状动脉内皮细胞小鼠气管上皮细胞小鼠骨细胞小鼠气管平滑肌细胞小鼠滑膜细胞小鼠肺成纤维细胞小鼠骨骼肌细胞小鼠支气管上皮细胞小鼠表皮细胞小鼠支气管成纤维细胞小鼠真皮成纤维细胞小鼠肺大静脉平滑肌细胞小鼠破骨细胞小鼠肺大动脉平滑肌细胞小鼠皮肤肥大细胞小鼠肺大动脉内皮细胞小鼠前脂肪细胞小鼠肺动脉成纤维细胞小鼠成骨细胞小鼠肺大静脉内皮细胞小鼠关节软骨细胞小鼠气管和支气管上皮细胞小鼠胎儿表皮角质形成层细胞小鼠胰岛细胞小鼠成年表皮角质形成层细胞小鼠胰腺星状细胞小鼠皮下脂肪细胞小鼠胰腺导管上皮细胞小鼠内脏脂肪细胞小鼠颌下腺上皮细胞小鼠脑动脉血管内皮细胞小鼠腮腺细胞小鼠脑动脉血管平滑肌细胞小鼠乳腺上皮细胞小鼠脑静脉血管内皮细胞小鼠胰腺上皮细胞小鼠脑静脉血管平滑肌细胞小鼠甲状腺上皮细胞小鼠脑膜细胞小鼠淋巴管内皮细胞小鼠神经胶质细胞小鼠淋巴成纤维细胞小鼠海马神经元细胞小鼠外周血白细胞小鼠脑微血管内皮细胞小鼠骨髓基质细胞小鼠脑成纤维细胞小鼠食管上皮细胞小鼠神经小胶质细胞小鼠食管平滑肌细胞小鼠雪旺氏细胞小鼠肠动脉内皮细胞小鼠小脑颗粒细胞小鼠肠静脉内皮细胞小鼠嗅鞘细胞小鼠肝实质细胞小鼠视网膜微血管内皮细胞小鼠肝动脉内皮细胞小鼠小梁网细胞小鼠肝动脉平滑肌细胞小鼠视网膜色素上皮细胞小鼠小肠血管内皮细胞小鼠视网膜muller细胞小鼠小肠隐窝上皮细胞小鼠虹膜色素上皮细胞小鼠肝内胆管上皮细胞小鼠晶状体上皮细胞小鼠胃粘膜上皮细胞小鼠角膜上皮细胞小鼠肝窦内皮细胞小鼠视网膜神经节细胞小鼠肝星形细胞小鼠角膜成纤维细胞小鼠直肠平滑肌细胞小鼠脉络膜血管细胞小鼠小肠平滑肌细胞小鼠牙乳头细胞小鼠结肠平滑肌细胞小鼠肝外胆管上皮细胞小鼠肠上皮细胞小鼠肝Kupffer细胞小鼠肠微血管细胞小鼠骨髓间充质干细胞小鼠肠巨噬细胞小鼠下丘脑神经元细胞小鼠子宫内膜上皮细胞小鼠睾丸支持细胞小鼠卵巢颗粒细胞小鼠心肌微血管内皮细胞小鼠子宫颈上皮细胞小鼠真皮微血管上皮细胞小鼠子宫平滑肌细胞小鼠胚胎成纤维细胞小鼠卵巢上皮细胞小鼠心脏干细胞小鼠子宫成纤维细胞小鼠神经干细胞小鼠卵巢成纤维细胞小鼠骨髓来源内皮祖细胞小鼠肾实质细胞小鼠椎间盘髓核细胞小鼠肾系膜细胞小鼠肾足突细胞小鼠膀胱上皮细胞小鼠肾小管平滑肌细胞小鼠膀胱平滑肌细胞小鼠肾成纤维细胞小鼠肾动脉内皮细胞小鼠尿道上皮细胞小鼠肾动脉平滑肌细胞小鼠输尿管上皮细胞小鼠肾小管上皮细胞小鼠肾管状上皮细胞小鼠肾小球内皮细胞小鼠心肌细胞小鼠前列腺上皮细胞小鼠心肌成纤维细胞小鼠肾上皮细胞小鼠主动脉内皮细胞小鼠膀胱成纤维细胞小鼠主动脉平滑肌细胞小鼠血管外膜成纤维细胞。
肺泡Ⅱ型上皮细胞衰老与肺纤维化研究进展
㊃综述㊃基金项目:国家自然科学基金矽肺纤维化靶向m i R N A 筛选㊁验证及其与A c -S D K P 交互调控的作用和机制(81972988);河北省自然科学基金O C -S T AM P 促进肺泡Ⅱ型上皮细胞衰老在矽肺纤维化中的机制研究(H 202009052);河北省高等学校科学技术研究项目A c -S D K P 抑制吸入性S i O 2诱导的破骨细胞活化和大鼠骨密度下降的作用及其机制(Z D 2019077)通信作者:徐洪,E m a i l :x u h o n g@n c s t .e d u .c n 肺泡Ⅱ型上皮细胞衰老与肺纤维化研究进展张 乙a ,徐 洪b(华北理工大学a .临床医学院;b .公共卫生学院,河北唐山063210) 摘 要:细胞衰老是肺纤维化进程的关键步骤之一,而肺泡Ⅱ型上皮细胞的衰老则可能通过与巨噬细胞㊁成纤维细胞的交互作用,形成了肺纤维化壁龛,从而加速了肺纤维化进展㊂而以肺泡Ⅱ型上皮细胞衰老作为靶向,可能是今后治疗肺纤维化的策略之一㊂关键词:肺纤维化;肺泡;上皮细胞;细胞衰老中图分类号:R 135.2 文献标志码:A 文章编号:1004-583X (2020)10-0939-04d o i :10.3969/j.i s s n .1004-583X.2020.10.015 肺纤维化是多种肺部疾病的最终表现,以失控的损伤修复为主要特征,引起了炎性细胞浸润㊁成纤维细胞增殖㊁肌成纤维细胞转化,最终导致细胞外基质(e x t r a c e l l u l a rm a t r i x ,E C M )的过度沉积,引起肺泡正常结构和功能的破坏㊂肺纤维化早期诊断较为困难,无特异性的临床表现,亦无特异性的治疗手段,因此研究肺纤维化发生㊁发展机制与寻求新的治疗靶点,一直是肺部疾病相关研究领域的难点和热点问题㊂研究发现,细胞衰老是多种肺部疾病发生㊁发展的重要因素[1]㊂本文复习了近年来有关肺泡Ⅱ型上皮细胞(a l v e o l a r t y pe Ⅱc e l l s ,A T 2)衰老在肺纤维化发生㊁发展相关机制的相关文献㊂1 细胞衰老可能是肺纤维化形成的核心机制之一衰老能够引起肺内干细胞的减少㊁线粒体功能失调㊁氧化应激损伤加剧和端粒酶缩短,最终导致肺内细胞不能保持稳态平衡,是慢性阻塞性肺疾病和特发性肺纤维化(i d i o p a t h i c p u l m o n a r y fi b r o s i s ,I P F )等多种肺部疾病发生㊁发展的重要因素[1]㊂复制性衰老与端粒酶损伤有关,D N A 损伤反应(D N Ad a m a ge r e s po n s e ,D D R )通过激活毛细血管扩张性共济失调突变激酶(a t a x i at e l a n g i e c t a s i a -m u t a t e d ge n e ,A T M )和毛细血管扩张性共济失调R a d 3相关激酶(a t a x i a t e l a n gi e c t a s i aa n dR a d 3-r e l a t e dk i n a s e ,A T R ),引起p 53介导的短暂增殖停滞,D N A 损伤修复成功则重新进入细胞周期,修复失败则走向衰老或凋亡;过早性/应激相关衰老则与端粒长度无关,通过p 16I N K 4a -R b 信号㊁p 53-p 21C I P 1信号的活化和相应的细胞周期阻滞,或以p 27信号作为靶向,以衰老相关分泌表型(s e n e s c e n c e -a s s o c i a t e ds e c r e t o r y p h e n o t y pe ,S A S P )为主要特点,与肺纤维化的形成关系密切[2-3]㊂S A S P 表型能够激活多种促纤维化信号,包括p 38促分裂原活化蛋白激酶(p 38m i t o g e n -a c t i v a t e d p r o t e i nk i n a s e ,p 38MA P K )信号和J a n u s 活化激酶(J a n u s -a c t i v a t e dk i n a s e s ,J A K )信号,并导致核因子-κB (n u c l e a rf a c t o r -κB ,N F -κB )信号的激活,从而引起了炎性介质如白细胞介素(i n t e r l e u k i n,I L )㊁生长因子如转化生长因子(t r a n s f o r m i n gg r o w t hf a c t o r ,T G F )-β和巨噬细胞集落刺激因子(m a c r o p h a g ec o l o n y -s t i m u l a t i n g f a c t o r ,M -C S F )㊁趋化因子和基质金属蛋白酶(m a t r i xm e t a l l o pr o t e i n a s e ,MM P )的升高;其他与S A S P 有关的标记物的信号还包括纤溶酶原激活物抑制剂1(p l a s m i n o g e na c t i v a t o r i n h i b i t o r -1,P A I -1)㊁磷脂酰肌醇-3激酶(p h o s p h o i n o s i t i d e -3-k i n a s e ,P I 3K )-哺乳动物类雷帕霉素靶蛋白(m a mm a l i a nt a r ge tof r a p a m yc i n ,m T O R )信号等,S A S P 细胞通过自分泌和旁分泌的形式促进细胞衰老的范围和程度,并引起慢性炎症的扩展,并能够引起巨噬细胞-肺泡上皮细胞-成纤维细胞间促纤维化信号的交互作用[4]㊂因此,以S A S P 靶蛋白和靶信号作为治疗方向,或上调组蛋白去乙酰化酶(s i r t u i n1或6)的表达,或利用特异的靶向微小R N A (m i c r oR N A ,m i R N A ),或利用二甲双胍激活腺苷酸活化蛋白激酶(a d e n o s i n em o n o p h o s ph a t e a c t i v a t e d p r o t e i n k i n a s e ,AM P K )信号,有可能通过拮抗细胞衰老,从而改善肺功能㊁延缓肺纤维化的进展,即细胞衰老信号可能是抗肺纤维化治疗的靶向之一[4]㊂㊃939㊃‘临床荟萃“ 2020年10月20日第35卷第10期 C l i n i c a l F o c u s ,O c t o b e r 20,2020,V o l 35,N o .10Copyright ©博看网. All Rights Reserved.然而值得注意的是,细胞衰老可能对器官纤维化起到正㊁反两反面的调节作用㊂在I P F㊁四氯化碳诱导的肝纤维化和多囊肾等一些衰老相关的疾病中发现,衰老相关成纤维细胞形成S A S P并分泌少量的T G F-β1,促进邻近成纤维细胞转化活化为纤维化相关成纤维细胞,但敲除p53基因或阻断衰老途径后,器官纤维化的进展反而加剧,表现为剧烈的D N A损伤,不可控的细胞增殖和凋亡,E C M分泌紊乱[5-6]㊂进一步研究则发现,虽然衰老相关成纤维细胞与纤维化相关成纤维细胞均可表达肌成纤维细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-s m o o t h m u s c l ea c t i n,α-S MA)且具有典型的肌成纤维细胞超微结构和收缩特性,但是衰老相关成纤维细胞与E C M有关的m R N A缺失表达,而蛋白水解酶㊁胶原酶㊁弹性酶和基质溶酶等表达水平升高,对邻近的纤维化相关成纤维细胞增殖和迁移具有一定的抑制作用[7-8]㊂虽然目前尚无细胞衰老与尘(矽)肺纤维化发生㊁发展直接相关的文献报道,但衰老相关因素与尘(矽)肺纤维化进展关系密切㊂流行病学调查显示,尘肺病患者接尘年龄与发病工龄呈负相关,即随着接尘年龄的增加,发病工龄相应缩短[9]㊂课题组前期研究也发现,与衰老有关的标记物,如p21㊁磷酸化组蛋白H2A X(p h o s p h o r y l a t e d h i s t o n e H2A X,γH2A X)随大鼠染尘时间增加而增高[10]㊂其他研究也发现,支气管一次性灌注构建的小鼠模型肺组织中,也存在着γH2A X表达水平的上调[11]㊂与衰老有关的自噬㊁内质网应激和线粒体应激等信号在矽肺发生㊁发展中的异常活化,通过调节p53及其下游信号,参与了对慢性炎症㊁胶原沉积㊁肌成纤维细胞分化和上皮间质转化等促纤维化信号的调控[12-13],即在尘(矽)肺纤维化进展中,也可能伴随了衰老信号的激活㊂2肺泡Ⅱ型上皮细胞的衰老加速了肺纤维化进程已知A T2在维持肺内稳态中具有重要意义,其主要功能包括增殖成为新的A T2细胞㊁向A T1细胞分化㊁分泌表面活性物质,具有肺水转运功能和免疫功能,因此部分文献认为A T2细胞的功能异常是肺纤维化形成的重要因素,自噬㊁内质网应激和线粒体应激导致D D R被激活,除了可以导致A T2细胞的凋亡以外,同时能够诱导A T2发生衰老,形成S A S P 表型,是肺纤维化重要的驱动因素[14]㊂已经证实A T2细胞衰老多伴有其他表型的转换,与内质网应激关系密切㊂在I P F患者以及博来霉素小鼠模型中,均发现了衰老相关指标的上调,且来源于博来霉素小鼠的原代A T2细胞β半乳糖苷酶(s e n e s c e n c e-a s s o c i a t e dβ-g a l a c t o s i d a s e,S A-β-g a l)染色阳性,分泌型焦磷酸蛋白(s e c r e t e d p h o s p h o p r o t e i n,S P P)1和MM P2等公认的S A S P 指标表达均增加,且表现出上皮-间质转化(e p i t h e l i a l-m e s e n c h y m a l t r a n s i t i o n,E MT)表型,予以抗衰老药达沙替尼(d a s a t i n i b)和懈皮素(q u e r c e t i n)则能够显著抑制博来霉素介导的细胞衰老和纤维化病变[15]㊂内质网应激关键蛋白葡萄糖调节蛋白(g l u c o s e r e g u l a t e d p r o t e i n,G R P)78基因敲除小鼠的A T2细胞表现出内质网应激损伤㊁凋亡㊁衰老和分化能力下降等表现,并伴随着T G F-β1信号的异常激活,提示内质网应激是衰老和I P F之间的主要联系[16]㊂另有研究也发现,细胞分裂周期蛋白(c e l l d i v i s i o n c y c l e42,C d c42)的缺失表达能够导致A T2细胞不能分化为A T1细胞,即无法形成新的肺泡结构,且机械张力的增高导致A T2细胞T G F-β信号的异常激活,驱动衰老小鼠发生 外周向中心发展 的进展性肺纤维化,该研究将肺泡再生受损㊁机械性张力和进展性肺纤维化建立了联系[17]㊂该研究还利用单细胞测序(s i n g l e-c e l l R N A s e q u e n c i n g,s c R N A-s e q)技术将A T2细胞区分为两种亚群,其中与C d c42表达缺失的基因与I P F发相关靶基因有类似的特点,多集中在肌动蛋白骨架的调节和黏着斑信号[17],与肌成纤维细胞分化关系密切[18]㊂针对3例对照和6例I P F患者肺组织的s c R N A-s e q研究发现,存在不同作用类型的肺上皮细胞,其中命名为 不确定(i n d e t e r m i n a t e) 阶段的肺上皮细胞伴随着T G F-β㊁p53㊁W n t等信号的异常激活[19]㊂来源于博来霉素小鼠肺组织的s c R N A-s e q 研究也发现,老龄鼠A T2细胞炎症相关指标上调,脂质代谢指标下调[20]㊂另有研究显示,A T2分化为A T1细胞在生理与病理状态下机制不同,并与邻近成纤维细胞有关[21]㊂上述研究提示,A T2细胞可能具有多种亚群,除了分泌肺泡表面活性物质㊁分化为A T1细胞外,其可能还具有其他类型的作用,在病理状态下也可能具有不同的反应㊂3肺泡Ⅱ型上皮细胞的衰老可能是肺纤维化壁龛形成的重要因素肺内干细胞主要包括基细胞(还包括C l a r a细胞),以表达转录因子肿瘤蛋白63(t u m o r p o t e i n63, T r p63)㊁细胞角蛋白5㊁平足蛋白(p o d o p l a n i n)等为主要特征,可自我更新并分化为气道基细胞㊁纤毛细胞和分泌细胞,对于维持气道上皮完整性具有重要意义[22]㊂而A T2细胞作为肺内干细胞,与壁龛细胞(成纤维细胞㊁平滑肌细胞和内皮细胞)㊁E C M和来㊃049㊃‘临床荟萃“2020年10月20日第35卷第10期 C l i n i c a l F o c u s,O c t o b e r20,2020,V o l35,N o.10Copyright©博看网. All Rights Reserved.源于壁龛细胞的可溶性因子形成的干细胞壁龛共同调节了肺内稳态[23]㊂基于肺部分切除术模型,能够发现血小板源性生长因子(p l a t e l e td e r i v e d g r o w t h f a c t o r,P D G F)α阳性表达的肺成纤维细胞作为肺壁龛细胞,对于A T2细胞对急性肺损伤的修复具有重要意义,如果阻断了P D G Fα阳性表达的肺成纤维细胞相关信号,则影响A T2细胞的增殖和修复功能;体外培养也发现,与成纤维细胞共培养的A T2细胞更容易产生克隆性增殖,并可向A T1细胞分化[23]㊂因此肺壁龛是维持肺稳态的重要微环境㊂在肺纤维化进展中,A T2细胞存在衰老信号㊁促纤维化信号㊁转分化信号的异常激活,是A T2细胞具有不同的亚群的依据[18-21],也可以认为A T2细胞在空间上和时间上多个信号的异常激活交织在一起,展现了A T2细胞不同的细胞命运㊂研究发现,肺泡壁龛(间充质)细胞能够对W n t信号发生应答,以P D G Fα阳性表达为特征,对于A T2细胞的生长和自我更新具有重要意义;而阳性表达A x i n2的壁龛细胞则在损伤后优先分化为肌成纤维细胞,参与损伤修复/纤维化进程[24]㊂另外一项研究则发现,阳性表达A x i n2的A T2细胞是肺内干细胞的主要亚群,能够接受来自邻近的成纤维细胞的W n t分泌信号并保持干细胞特性,即成纤维细胞短程旁分泌W n t促进A T2细胞的活性和增殖;当发生损伤时, A T2细胞能够自分泌W n t信号并暂时扩大干细胞储备,并向A T1细胞分化,从而进行损伤修复[21]㊂在病理性条件下,E C M能够通过整合素信号驱动内源性潜在型T G F-β1信号的激活,促进A T2细胞发生E MT[25]㊂A T2细胞在T G F-β1诱导的E MT进程中,能够通过分泌结缔组织生长因子(c o n n e c t i v e t i s s u e g r o w t h f a c t o r,C T G F)反过来通过自分泌和旁分泌形式活化成纤维细胞,从而促进了纤维化进展[26]㊂在对石棉肺的研究中发现,组织驻留的肺泡㊁支气管周和血管周巨噬细胞和单核细胞来源的巨噬细胞构成了纤维化壁龛,其中清除单核细胞来源的巨噬细胞能够有效的改善肺纤维化病变,单核细胞来源的巨噬细胞通过M-C S F及其受体信号,通过激活P D G Fα从而促进了成纤维细胞的增殖,并调节不同亚群的A T2细胞,这种巨噬细胞-间质(成纤维)细胞和A T2细胞交互作用,是肺纤维化壁龛形成的重要环节[27]㊂课题组最近的实验结果也发现,在矽肺纤维化不同的发展阶段,A T2细胞呈现不同的特征表型,即正常情况下静息㊁巨噬细胞肺泡炎阶段增殖/活化㊁矽结节形成阶段失去原有功能(可能是衰老),最终凋亡㊂且A T2细胞与巨噬细胞一样,在染尘早期即激活,可能与其邻近的成纤维细胞㊁E C M 和巨噬细胞的交互作用形成纤维化壁龛㊂推测A T2细胞在空间上和时间上多个信号的异常激活交织在一起,展现不同的细胞命运,包括衰老㊁凋亡,以及由 抗纤维化功能 向 促纤维化功能 转变,可能是肺纤维化发生㊁发展的新机制之一㊂综上所述,细胞衰老是肺纤维化发生㊁发展的重要环节㊂目前研究发现的与细胞衰老有关的信号和治疗靶点,在正常的肺稳态调控中也具有重要意义,对这些已知促纤维化信号的阻断反而可能会起到相反结果,因此对于肺纤维化的靶向治疗应更为精准㊂以A T2细胞作为靶向细胞,以拮抗细胞衰老作为治疗靶点,能够从逆转纤维化和维持肺内稳态两个方面拮抗肺纤维化的形成,可视为今后肺纤维化治疗有前景的策略之一㊂参考文献:[1] C h o S J,S t o u t-D e l g a d oHW.A g i n g a n d l u n g d i s e a s e[J].A n n uR e vP h y s i o l,2020,82:433-459.[2]S c h a f e rM J,W h i t eT A,I i j i m aK,e ta l.C e l l u l a rs e n e s c e n c em e d i a t e s f i b r o t i c p u l m o n a r y d i s e a s e[J].N a tC o mm u n,2017, 8:14532.[3] M a r tín e z-Z a m u d i o R I,R o b i n s o n L,R o u x P F,e t a l.S n a p S h o t:c e l l u l a r s e n e s c e n c e p a t h w a y s[J].C e l l,2017,170(4):816-816.[4] B a r n e sP J,B a k e rJ,D o n n e l l y L E.C e l l u l a rs e n e s c e n c ea sam e c h a n i s m a n dt a r g e ti n c h r o n i cl u n g d i s e a s e s[J].A m JR e s p i rC r i tC a r eM e d,2019,200(5):556-564.[5] M e n g X,W a n g H,S o n g X,e ta l.T h e p o t e n t i a lr o l e o fs e n e s c e n c e i nl i m i t i n g f i b r o s i sc a u s e d b y a g i n g[J].J C e l lP h y s i o l,2020,235(5):4046-4059.[6] W a t e r s D W,B l o k l a n d K E C,P a t h i n a y a k e P S,e t a l.F i b r o b l a s t s e n e s c e n c e i n t h e p a t h o l o g y o f i d i o p a t h i c p u l m o n a r yf i b r o s i s[J].A mJP h y s i o lL u ng C e l lM o lPh y si o l,2018,315(2):L162-L172.[7] M e l l o n eM,H a n l e y C J,T h i r d b o r o u g hS,e t a l.I n d u c t i o no ff i b r o b l a s t s e n e s c e n c eg e n e r a t e s an o n-f i b r o g e n i cm y o f i b r o b l a s tp h e n o t y p e t h a t d i f f e r e n t i a l l y i m p a c t so nc a n c e r p r o g n o s i s[J].A g i n g(A l b a n y N Y),2016,9(1):114-132.[8]S h i b a m o t oM,H i g oT,N a i t oA T,e t a l.A c t i v a t i o no fD N Ad a m a ge r e s p o n s e a n dc e l l u l a r s e n e s c e n c e i nc a r d i a cf i b r o b l a s t sl i m i t c a r d i a c f i b r o s i s a f t e rm y o c a r d i a l I n f a r c t i o n[J].I n tH e a r tJ,2019,60(4):944-957.[9]殷红,周旋,陈海莲,等.开始接尘年龄与尘肺发病工龄的相关性[J].中华劳动卫生职业病杂志,2014,32(10):754-755.[10]S h i f e n g L,H o n g X,X u eY,e t a l.A c-S D K P i n c r e a s e sα-T A T1a n d p r o m o t e s t h e a p o p t o s i s i n l u n g f i b r o b l a s t s a n de p i t h e l i a lc e l l sd o u b l e-s t i m u l a te d w i t h T G F-β1a n ds i l i c a[J].T o x i c o lA p p l P h a r m a c o l,2019,369:17-29.[11] Z h o u Q,G u a n Y,H o u R,e ta l.P o l y G m i t i g a t e ss i l i c a-i n d u c e d p u l m o n a r y f i b r o s i s b y i n h i b i t i n g n u c l e o l i n a n d㊃149㊃‘临床荟萃“2020年10月20日第35卷第10期 C l i n i c a l F o c u s,O c t o b e r20,2020,V o l35,N o.10Copyright©博看网. 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构建原代分离培养与鉴定小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的方法及模型
构建原代分离培养与鉴定小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的方法及模型纯化法能够获得产量和纯度都具有优势的AECⅡ，符合一般的体外实验的要求。
【关键词】原代分离；小鼠；肺泡Ⅱ型上皮细胞；方法；模型1材料和方法 1.1材料设计：单一样本观察。
地点：某某大学中心实验室。
材料：健康清洁的小鼠6只，雌雄均为3只，体重19～23g。
在实验中对动物的处置符合国家《关于善待动物的指导性意见》中的相关规定。
试剂及仪器主要包括DEME培养基、青霉素、链霉素、Ⅰ型胶原酶、胰蛋白酶等等以及兔抗鼠SP-A-抗、SP-C-抗、多聚赖氨酸、SABC试剂盒、DAB试剂盒、高速台式离心机、培养箱以及倒置显微镜和透射电镜等等。
1.2方法小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞分离：将小鼠脱颈处死，尽快取下肺组织并洗干净；将其剪成小块；放入10mL的离心管，以2mL/只小鼠的标准加入1g/L胰蛋白酶。
将吸管吹打均匀后在37℃的温度孵育5min，将消化好的细胞悬液移除，并加入与之等量的含10%胎牛血清的DEME中止消化；使用同法用1g/L胰蛋白酶对肺组织进行5mim的消化，将消化好的细胞悬液移除并中止消化；在剩余肺组织中，按上述标准加入Ⅰ型胶原酶，孵育15min，移除细胞悬液，加入同上的胎牛血清，中止消化；吸管混匀后用过滤、离心、去上清，用DEME重悬沉淀。
小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞纯化与培养：将肺细胞悬液接种入包被小鼠1gG的培养皿中，并孵育，吸出含未黏附细胞的液体接种于另一包被小鼠的1gG培养皿中，同法继续孵育2次，并使用胎牛血清重悬沉淀，并接种于培养皿和培养板中，24h后换液，此时贴壁的即为Ⅱ型上皮细胞。
小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的鉴定：将其置于6孔培养板内，并使用多聚赖氨酸浸泡，吸出多聚赖氨酸后彻底吹干。
对纯化后的肺细胞悬液浓度进行调整并接种于盖玻片，并加入SP-A-抗及SP-C-抗，进行免疫细胞化学操作，然后置于倒置显微镜下观察。
2结果在AECⅡ的产量、纯度及活力方面，每只小鼠的平均值分别为、、倒置显微镜下，免疫黏附纯化后的AECⅡ在接种后的12～18h开始伸展贴壁，形状为圆形活力放心，且有小颗粒，胞核明显。
大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离、纯化和鉴定
大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离、纯化和鉴定张雪梅;陈海龙;王朝晖;张利;纪军【摘要】目的:探讨大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡ)分离、培养及鉴定的方法.方法:采用Dobbs法提取ATⅡ.肺动脉灌洗减少肺内红细胞,气管灌洗除去肺泡腔内的白细胞,将胰蛋白酶、胶原酶灌入肺内消化分离细胞;采用免疫贴附法纯化细胞,将细胞悬液培养于覆被IgG的平皿中,有Fc段受体的细胞被黏附,而无Fc段受体的ATⅡ得以纯化.ATⅡ的鉴定采用电镜和肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)免疫组化染色,其在电镜下有特征性板层小体,免疫组化染色见胞浆有SP-A表达.结果:纯化后台盼蓝染色显示细胞活力为95%以上.通过SP-A免疫组化染色判定,纯化后ATⅡ纯度可达92%.结论:分离、纯化大鼠ATⅡ时,合适的胰蛋白酶浓度及作用时间对细胞活性有重要作用,大鼠IgG黏附纯化可以得到高纯度的ATⅡ,通过电子镜观察板层小体和免疫组化染色检测细胞SP-A表达可用于鉴定ATⅡ.%Objective To study the method of primary culture of alveolar type Ⅱ (AT Ⅱ) cells. Methods AT Ⅱ cells were isolated by Dobbs's method. The cells were purified by using rat IgG coated dishes and were characterized by using electronic microscopy and SP-A immunohistochemical staining. The cellular ultra-structure of AT Ⅱ cells was observed by electronic microscopy. Results The trypan blue staining showed the cell viability over 95 percent. Immunohistochemical staining using anti-SP - A demonstrated that the purity of AT Ⅱ cells was 92%. Conclusion In AT Ⅱ cells isolation, purification and identification procedures, optimizing the concentration of digest enzyme and time can improve the cell vitality. Purification of AT Ⅱ cells with IgG coated plate is a better method than other reported methods. AT Ⅱ cells could becharacterized through detection of the lamellar bodies with electronic microscopy and SP-A Immunohistochemical staining.【期刊名称】《中国中西医结合外科杂志》【年(卷),期】2011(017)005【总页数】3页(P489-491)【关键词】肺泡Ⅱ型上皮细胞;肺表面活性物质相关蛋白A;细胞培养【作者】张雪梅;陈海龙;王朝晖;张利;纪军【作者单位】解放军210医院普外科,大连,116023;大连医科大学附属第一医院普外科,大连,116011;大连市中心医院,大连,116033;大连市中心医院,大连,116033;大连市中心医院,大连,116033【正文语种】中文【中图分类】Q95-33;R655.3肺泡Ⅱ型上皮细胞（alveolar typeⅡ cells，ATⅡ）对维持肺泡的结构和功能具有重要意义，其功能包括增殖、合成和分泌肺表面活性物质、维持肺泡内外液体平衡及免疫调节作用。
肺泡Ⅱ型上皮细胞功能的研究进展
肺泡Ⅱ型上皮细胞功能的研究进展杨青【摘要】Alveolar epithelial type Ⅱ cell ( AT2) ,one of the mammalian alveolar epithelial cell,is the major cell type that synthesizes and secretes pulmonary surfactant. Its synthesizing and secreting function has been reported in recent years to be regulated and affected by a variety of body fluid and environmental factors, with a number of genes, proteins and signal pathways involved. AT2 has proliferation, differentiation and repair function,its abnormal trans-differentiation may be associated with lung fibrosis and tumor formation. It plays an important role in maintaining alveolar fluid balance and the function is regulated by a variety of body fluid and inflammatory factors,which may participate in lung injury and pulmonary edema pathological processes. AT 2 is also involved in innate immunity and immune regulatory mechanisms. It also presents antigen to T cells and regulates T cell differentiation. Studying the alveolar type D epithelial cell function helps to understand the physiological functional mechanism of alveolar and the process of multiple pulmonary diseases. Further study in the regulation of its function may have a promising prospect in treating and preventing pulmonary diseases.%肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar epithelial ty pe Ⅱ cell,AT2)是构成哺乳类动物肺泡上皮的主要细胞之一,是合成和分泌肺泡表面活性物质的主要细胞.近年来研究发现其合成和分泌功能受多种体液及环境因素的影响和调控,并涉及多种相关基因、蛋白及信号通路.AT2具有增殖、分化及修复功能,其异常转分化可能与肺纤维化及肿瘤发生有关.AT2在维持肺泡内液体平衡中发挥重要作用,并受多种体液与炎症因子调控,可能参与肺损伤和肺水肿的病理过程.AT2参与固有免疫及免疫调节机制,可向T细胞呈递抗原并调节T细胞的分化.对肺泡Ⅱ型上皮细胞功能的研究有助于理解肺泡生理功能和多种肺部疾病的发病和病理过程,对其功能调节机制的研究在多种肺部疾病的防治中有临床应用前景.【期刊名称】《复旦学报（医学版）》【年(卷),期】2012(039)006【总页数】5页(P658-662)【关键词】肺泡Ⅱ型上皮细胞;肺泡表面活性物质;固有免疫;肺损伤;炎症【作者】杨青【作者单位】复旦大学上海医学院上海200032【正文语种】中文【中图分类】R593.1哺乳动物的肺泡上皮主要由肺泡Ⅰ型上皮细胞（alveolar epithelial typeⅠcell，AT1）和肺泡Ⅱ 型上皮细胞（alveolar epithelial typeⅡcell，AT2）构成。
小鼠肺泡灌洗
把小鼠喉咙处皮肤剪开，用镊子把气管周围的组织分离开，气管暴露出来。
注射器7号针头，针尖剪掉，再磨平，把动物仰位固定，针头从嘴巴里进去，伸到气管里。
和平时灌胃一样，只是现在伸到气管。
在甲状腺（气管显得稍宽处）下面，针头就伸到这里，大约甲状腺过3毫米处。
然后拿一根线，从气管下穿过，把针头和气管一起结扎了，其实就是把针头固定在里面，不让它跑出来。
打结时用点力，手拨动针头时明显感觉针头动不了就可以了。
然后注射器吸取液体推进气管，第一次一般吸不完全，没关系，第二次的液体推进去后就能吸出来很多了。
我基本能全部吸出来的。
希望能帮上忙。
标题：小鼠肺泡灌洗标准操作规程关键词：肺泡灌洗；细胞分类计数；细胞因子目的：检查小鼠各种病理生理状态(特别是肺部疾病)下，肺部出现的各种病理改变。
例：哮喘模型中检测嗜酸细胞的分类数有否提高，灌洗液中各种细胞因子，如IL-4,IL-5,IL-10,IFN-r等水平。
主体内容（操作步骤）：实验的准备实验的器材、仪器、药品：4℃遇冷的单纯PBS和4℃遇冷的含1%BSA 的PBS；手术器械：眼科剪，眼科镊，穿刺针或4号半头皮针；血细胞计数板；低温离心机实验操作规程：灌洗分单侧和双侧。
单侧一般为颈部和胸部解剖，气管和一侧肺叶结扎。
再用穿刺针插入气管上端，0.3mlPBS反复冲洗,一般为3遍，每遍冲洗次数根据需要决定，一般3-5次即可。
双侧灌洗则只需要进行颈部解剖，暴露气管进行插管。
PBS灌洗量增高到0.8ml.灌洗次数同上。
结果判定：1.回收的灌洗液4℃，1500r离心10分钟，回收上清置于-20℃等待进行细胞因子检测；2.用1ml含有1%BSA的PBS重悬细胞沉淀，取10ul重悬液进行细胞计数。
余液再次4℃离心，参数同上；3.离心后去上清，不需太彻底，可根据第二步细胞计数所得结果和需要涂片张数决定需要残留多少上清重悬细胞沉淀。
一般如果细胞总数有10*6次方/ml的话，用80-100ul重悬可以涂三张片，这样玻片上细胞密度比较适中。
异甘草素对小鼠急性肺损伤的保护作用及其机制
基金项目：陕西省自然科学基础研究计划项目（２０２０ＪＭ－６５６）；陕西省中医药管理局课题资助项目（２０１９－ＺＺ－ＪＣ０３７）；陕西省重点研发计划项目（２０２０ＺＤＬＳＦ０１－０６） 作者简介：王贵佐，男，１９８２－０５生，博士，主治医师，Ｅ ｍａｉｌ：ｚｈｘｙｘｗｇｚ＠１２６．ｃｏｍ 收稿日期：２０２０－１１－１１异甘草素对小鼠急性肺损伤的保护作用及其机制王贵佐１，王 霜２，陈芬芬３，王水利１，汪玲果１，杨淑梅１ （１陕西省人民医院呼吸与危重症医学科，西安 ７１００６８；２西安医学院；３西安交通大学第二附属医院干部保健科； 通讯作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｓｈｕｍｅｉｙａｎｇｈｘ＠１６３．ｃｏｍ）摘要： 目的 探讨异甘草素对ＬＰＳ诱导小鼠急性肺损伤的保护作用及其可能机制。
方法 ６－８周的ＢＡＬＢ／ｃ雄性小鼠１８只随机分成：对照组（Ｃｏｎ组）、ＬＰＳ组和异甘草素组（ＩＳＬ＋ＬＰＳ组）。
Ｃｏｎ组小鼠气管内滴注无菌ＰＢＳ６０μｌ作用２４ｈ；ＬＰＳ组小鼠气管内滴注１ｍｇ／ｍｌＬＰＳ６０μｌ，作用２４ｈ；ＩＳＬ＋ＬＰＳ组小鼠在ＬＰＳ给药前１ｈ给予５％ＤＭＳＯ溶解异甘草素（２００ｍｇ／ｋｇ）腹腔注射，再气管内滴注１ｍｇ／ｍｌＬＰＳ６０μｌ造模２４ｈ。
观察各组小鼠肺组织病理学变化，肺泡灌洗液中炎症细胞总数及中性粒细胞计数，ＥＬＩＳＡ法检测肺泡灌洗液中ＴＮＦ α的浓度，测定肺组织内髓过氧化物酶（ＭＰＯ）活性、丙二醛（ＭＤＡ）含量和超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活力。
Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ方法检测Ｎｒｆ２的细胞核易位变化。
结果 与对照组相比，ＬＰＳ组病理学显示大量的炎性细胞浸润，肺组织结构明显被破坏。
与对照组相比，ＬＰＳ组支气管肺泡灌洗液中细胞总数、中性粒细胞数明显增加（Ｐ＜０ ０１），ＴＮＦ α的浓度显著升高（Ｐ＜０ ０１），肺组织匀浆ＭＰＯ活性显著升高（Ｐ＜０ ０１），ＳＯＤ活力显著下降（Ｐ＜０ ０１），两组间细胞核内的Ｎｒｆ２蛋白水平差异没有统计学意义（Ｐ＞０ ０５）。
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小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞
小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞产品说明：
为使客户能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。
派瑞金提供的小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。
研发的小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。
同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞注意事项：
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。
培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。
4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。
5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。
小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞其他相关小鼠原代细胞：
小鼠小肠粘膜上皮细胞小鼠大隐静脉平滑肌细胞
小鼠肺微血管内皮细胞小鼠冠状动脉平滑肌细胞
小鼠肺血管平滑肌细胞小鼠大隐静脉内皮细胞
小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞小鼠冠状动脉内皮细胞
小鼠气管上皮细胞小鼠骨细胞
小鼠气管平滑肌细胞小鼠滑膜细胞
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小鼠支气管上皮细胞小鼠表皮细胞
小鼠支气管成纤维细胞小鼠真皮成纤维细胞
小鼠肺大静脉平滑肌细胞小鼠破骨细胞
小鼠肺大动脉平滑肌细胞小鼠皮肤肥大细胞
小鼠肺大动脉内皮细胞小鼠前脂肪细胞
小鼠肺动脉成纤维细胞小鼠成骨细胞
小鼠肺大静脉内皮细胞小鼠关节软骨细胞
小鼠气管和支气管上皮细胞小鼠胎儿表皮角质形成层细胞小鼠胰岛细胞小鼠成年表皮角质形成层细胞小鼠胰腺星状细胞小鼠皮下脂肪细胞
小鼠胰腺导管上皮细胞小鼠内脏脂肪细胞
小鼠颌下腺上皮细胞小鼠脑动脉血管内皮细胞
小鼠腮腺细胞小鼠脑动脉血管平滑肌细胞小鼠乳腺上皮细胞小鼠脑静脉血管内皮细胞
小鼠胰腺上皮细胞小鼠脑静脉血管平滑肌细胞小鼠甲状腺上皮细胞小鼠脑膜细胞
小鼠淋巴管内皮细胞小鼠神经胶质细胞
小鼠淋巴成纤维细胞小鼠海马神经元细胞
小鼠外周血白细胞小鼠脑微血管内皮细胞
小鼠骨髓基质细胞小鼠脑成纤维细胞
小鼠食管上皮细胞小鼠神经小胶质细胞
小鼠食管平滑肌细胞小鼠雪旺氏细胞
小鼠肠动脉内皮细胞小鼠小脑颗粒细胞
小鼠肠静脉内皮细胞小鼠嗅鞘细胞
小鼠肝实质细胞小鼠视网膜微血管内皮细胞小鼠肝动脉内皮细胞小鼠小梁网细胞
小鼠肝动脉平滑肌细胞小鼠视网膜色素上皮细胞
小鼠小肠血管内皮细胞小鼠视网膜muller细胞
小鼠小肠隐窝上皮细胞小鼠虹膜色素上皮细胞
小鼠肝内胆管上皮细胞小鼠晶状体上皮细胞
小鼠胃粘膜上皮细胞小鼠角膜上皮细胞
小鼠肝窦内皮细胞小鼠视网膜神经节细胞
小鼠肝星形细胞小鼠角膜成纤维细胞
小鼠直肠平滑肌细胞小鼠脉络膜血管细胞
小鼠小肠平滑肌细胞小鼠牙乳头细胞
小鼠结肠平滑肌细胞小鼠肝外胆管上皮细胞
小鼠肠上皮细胞小鼠肝Kupffer细胞
小鼠肠微血管细胞小鼠骨髓间充质干细胞
小鼠肠巨噬细胞小鼠下丘脑神经元细胞
小鼠子宫内膜上皮细胞小鼠睾丸支持细胞
小鼠卵巢颗粒细胞小鼠心肌微血管内皮细胞
小鼠子宫颈上皮细胞小鼠真皮微血管上皮细胞
小鼠子宫平滑肌细胞小鼠胚胎成纤维细胞
小鼠卵巢上皮细胞小鼠心脏干细胞
小鼠子宫成纤维细胞小鼠神经干细胞
小鼠卵巢成纤维细胞小鼠骨髓来源内皮祖细胞
小鼠肾实质细胞小鼠椎间盘髓核细胞
小鼠肾系膜细胞小鼠肾足突细胞
小鼠膀胱上皮细胞小鼠肾小管平滑肌细胞
小鼠膀胱平滑肌细胞小鼠肾成纤维细胞
小鼠肾动脉内皮细胞小鼠尿道上皮细胞
小鼠肾动脉平滑肌细胞小鼠输尿管上皮细胞小鼠肾小管上皮细胞小鼠肾管状上皮细胞小鼠肾小球内皮细胞小鼠心肌细胞
小鼠前列腺上皮细胞小鼠心肌成纤维细胞小鼠肾上皮细胞小鼠主动脉内皮细胞小鼠膀胱成纤维细胞小鼠主动脉平滑肌细胞小鼠血管外膜成纤维细胞。