多糖的提取分别方法
c多糖提取
c多糖提取
c多糖提取涉及多个步骤。
其中，溶剂提取法是最常用的方法，包括水提法、酸提法和碱提法。
水提法是以水为溶剂，通过热水浸提或冷水浸提来提取多糖。
酸提法和碱提法则是在特定酸性和碱性条件下提取多糖，但需要注意酸碱度可能会影响多糖的空间结构和生物活性。
此外，酶提取法和超声波辅助提取法也是常用的多糖提取方法，具有条件温和、杂质易除、回收率高等特点。
具体步骤如下：
1.选择合适的提取溶剂，如水、酸、碱或酶溶液等。
2.对原料进行预处理，如破碎、粉碎、浸提等，以便更好地提取
多糖。
3.将原料放入提取溶剂中，进行加热或冷浸等处理，以促进多糖
的溶解和提取。
4.对提取液进行过滤、离心或沉降等操作，去除杂质和残渣。
5.对提取液进行浓缩、沉淀或结晶等处理，得到多糖粗品。
6.对多糖粗品进行纯化，如凝胶过滤、离子交换或透析等操作，
得到高纯度的多糖。
7.对纯化后的多糖进行质量检测和鉴定，如分子量测定、单糖组
成分析等。
需要注意的是，不同种类的多糖具有不同的理化性质和生物学活性，因此需要根据具体情况选择合适的提取方法和条件。
同时，多糖的提取和纯化过程中需要注意防止氧化和降解，以确保多糖的生物活性。
植物多糖的提取方法
植物多糖的提取方法
植物多糖的提取方法包括以下几种：
1.水浸法：将植物材料粉碎，加入适量的水，反复浸泡、过滤，然后用高温高压蒸馏干燥。
2.酸碱法：将植物材料经过脱色、清洗后再进行酸、碱处理，酸法将其浸泡于酸性溶液中，碱法将其浸泡在碱性溶液中，然后加热、搅拌，过滤后后再进行脱色、浓缩、干燥。
3.酶解法：将植物材料粉碎后，加入适量的水和酵素，经过酶解反应，然后脱色、浓缩、干燥。
4.超声波法：将植物材料加入酸性或碱性溶液中，然后使用超声波振荡器进行振荡，使多糖物质分离出来，再进行脱色、浓缩、干燥。
5.微波辅助提取法：将植物材料加入适量的水或有机溶剂中，加热至一定温度并进行微波辅助提取，然后进行脱色、浓缩、干燥。
多糖提取方案(7月)
多糖提取方案方案一：热水侵提法材料5g→以1：10v加蒸馏水90℃回流4h→8000r/min,10min离心→沉淀重复三次→合并上清浓缩（抽滤，蒸发）→sevag去蛋白（正丁醇：氯仿=4：1，sevag:滤液=1：5，分液漏斗中反复进行，直到分界面处无白色混悬）→8000r/min离心10min→上清浓缩（抽滤，蒸发）→定容50ml→硫酸苯酚法测多糖含量方案二：水提醇沉法材料5g→加10ML 85%乙醇回流2h(一次)→以1：10v加蒸馏水90℃回流4h→8000r/min,10min离心→沉淀（重复3次）→合并上清浓缩（抽滤，蒸发）→以1：5v加95%乙醇，4℃，静置24h→8000r/min离心→沉淀分别用无水乙醇，丙酮，乙醚抽洗（重复3次）→sevag去蛋白（正丁醇：氯仿=4：1，sevag:滤液=1：5，分液漏斗中反复进行，直到分界面处无白色混悬）→8000r/min离心10min→上清浓缩（抽滤，蒸发）→定容50ml→硫酸苯酚法测多糖含量方案三：酶+热水侵提材料5g→以1：10v加蒸馏水，调节pH=6.0→加入1%复合酶，50℃水浴1h→90℃回流4h →8000r/min,10min离心→沉淀（重复3次）→合并上清浓缩（抽滤，蒸发）→sevag去蛋白（正丁醇：氯仿=4：1，sevag:滤液=1：5，分液漏斗中反复进行，直到分界面处无白色混悬）→8000r/min离心10min→上清浓缩（抽滤，蒸发）→定容50ml→硫酸苯酚法测多糖含量方案四：微波辅助法材料5g→以1：10v加蒸馏水→微波低火，3min→90℃回流4h→8000r/min,10min离心→沉淀（重复3次）→合并上清浓缩（抽滤，蒸发）→sevag去蛋白（正丁醇：氯仿=4：1，sevag:滤液=1：5，分液漏斗中反复进行，直到分界面处无白色混悬）→8000r/min离心10min→上清浓缩（抽滤，蒸发）→定容50ml→硫酸苯酚法测多糖含量方案五：超声波辅助法材料5g→以1：10v加蒸馏水→超声波600w，20min→90℃回流4h→8000r/min,10min离心→沉淀（重复3次）→合并上清浓缩（抽滤，蒸发）→sevag去蛋白（正丁醇：氯仿=4：1，sevag:滤液=1：5，分液漏斗中反复进行，直到分界面处无白色混悬）→8000r/min离心10min→上清浓缩（抽滤，蒸发）→定容50ml→硫酸苯酚法测多糖含量方案六：高浓度酸预处理法20mg材料→加2ml，90%的甲酸溶液，混匀，→100℃沸水浴2h→旋转蒸发3次以除去甲酸→加6mol./L盐酸10ml，真空封管，置于80℃，水浴2.5h→调pH至中性6.5-7.0→用磷酸缓冲液(pH=7.0)定容50ml方案七：碱提取法材料5g→以1：10v加0.5mol/lNaOH水溶液→4℃中提取，离心取上清→用36%乙酸中和地白的胶状沉淀→用水洗涤得到多糖→浓缩（抽滤，蒸发）→定容50ml→硫酸苯酚法测多糖含量方案八：盐提+水提+碱提+酸提材料5g→乙酸乙酯，丙酮索氏提取4h,去脂→1:10v，0.9%NaCl水溶液过夜→均浆，离心，重复3次，该上清为PC1→残渣于高压锅中120℃热水提30min，重复3次→上清过DEAE-Sephadex(A-50),柱，分别用磷酸缓冲液和1mol/Lnacl水溶液淋洗多糖PC2和酸性多糖PC2-A→0.5mol/lNaOH水溶液于4℃从以上残渣中提取上清，用36%乙酸中和地白的胶状沉淀→用水洗涤得到多糖PC3→残渣用88%甲酸提取后用水沉淀得到多糖PC4→分别测多糖的含量。
多糖提取工艺流程
多糖提取工艺流程多糖是一类具有生理活性的大分子多糖化合物，广泛存在于植物和动物体内。
多糖具有多种生物功能，如抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等，被广泛应用于食品、医药等领域。
多糖的提取工艺流程一般包括原料处理、提取、精制和产品制备等步骤。
首先是原料处理。
多糖的原料可以是植物组织（如菌丝体、根茎、果皮等）或动物组织（如骨胶原、蚕丝等）。
原料一般需要经过洗净、破碎或切割等处理，以便提高提取效率。
接下来是提取步骤。
常用的提取方法包括水浸提、酶解提取和物理法提取等。
水浸提是将原料与适量的溶剂（通常是水）进行浸泡，通过温度、时间等条件调整提取效果。
酶解提取是利用特定酶对原料进行酶解，以释放多糖。
物理法提取包括超声波提取、微波辅助提取等，通过物理能量的作用来促进多糖的释放。
然后是精制步骤。
提取得到的多糖溶液往往含有其他杂质，需要进行一系列的物理或化学处理来去除杂质。
常见的精制方法包括过滤、脱蛋白、浓缩等。
过滤可以通过微孔膜、滤纸等进行，去除悬浮颗粒。
脱蛋白是通过添加盐类或酶来沉淀或水解蛋白质，以去除蛋白质杂质。
浓缩是将多糖溶液加热蒸发，使得溶液浓度提高。
最后是产品制备。
精制后的多糖可以用于制备各种多糖产品。
常见的制备方法包括干燥、喷雾干燥、制粒等。
干燥是将多糖溶液在低温下加热蒸发，使其转化为固态。
喷雾干燥是将多糖溶液通过喷雾器雾化，并在高温下迅速脱水，形成微粒状的产品。
制粒是将多糖溶液制成颗粒状，方便存储和使用。
除了以上提到的基本步骤外，多糖提取过程中还可以根据实际需要进行一些调整和改进。
例如，可以采用超临界流体提取技术、微波辅助提取技术等来提高提取效率和产品质量。
同时，还可以根据多糖的特性和所需应用调整提取条件，如调整温度、酶种和酶解时间等。
总之，多糖的提取工艺流程不仅要考虑提取效果和工艺成本，还要兼顾产品质量和安全性。
多糖的提纯化技术
多糖的提纯化技术
溶剂提取法
(1) 水提法：以水为溶剂，可采用热水浸提或冷水浸提（植物多糖多采用热水浸提，可直接或离心去除杂质），由于多糖不溶于乙醇，可通过沉淀将多糖提纯出来。
水提法的确缺点在于温度高、耗时长、提取率低。
(2) 酸提法：有些含酸性基团的多糖在酸性条件下不易溶解，可用盐酸或乙酸处理后，再用乙醇或不溶性络合物将多糖沉淀出来。
酸提法容易破坏多糖的空间结构，一般较少使用。
(3) 碱提法：一些含有糖醛酸的多糖和酸性多糖在碱性条件下都比较稳定，可提高多糖的提取率，一般用硼氢化钠或硼氢化钾作为溶剂。
碱提法的不足之处在于某些多糖在碱性较强时会降解，而且容易影响成品的色泽和风味。
多糖提取分离的原理和方法
多糖提取分离的原理和方法
多糖提取分离是指从植物、海洋生物、微生物等来源中提取和分离多糖类化合物的过程。
其原理主要基于多糖的化学性质和溶解性特点。
多糖提取分离的方法主要有以下几种：
1. 溶剂提取法：利用有机溶剂（如水、醇类、醚类等）将多糖提取出来。
这种方法适用于多糖相对溶解性较好的样品。
2. 酶解法：利用特定酶解剂酶解样品中与多糖相结合的其他物质，使多糖分离出来。
常用的酶解剂有蛋白酶、纤维素酶等。
3. 离子交换层析法：利用树脂的阳离子或阴离子交换功能将多糖从样品中分离出来。
这种方法适用于多糖具有不同电荷性质的样品。
4. 等温沉淀法：通过调节多糖样品中的溶液温度和离子浓度，使多糖形成胶体，并在一定条件下沉淀。
常用的方法有醇法、果胶酸盐法等。
5. 凝胶过滤法：利用凝胶材料的孔隙大小将多糖与其他物质分离。
常用的凝胶材料有琼脂、琼脂糖等。
补充说明：以上提到的方法只是多糖提取分离的常用方法之一，实际操作中还可
以根据样品特点选择合适的提取和分离方法。
1.多糖的提取方法
1.多糖的提取方法生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、动物多糖3大类。
多糖的提取首先要根据多糖的存在形式及提取部位，决定在提取之前是否做预处理。
动物多糖和微生物多糖多有脂质包围，一般需要先加入丙酮、乙醚、乙醇或乙醇乙醚的混合液进行回流脱脂，，多糖提取温度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等。
水提醇沉法提取多糖不需特殊设备，生产工艺成本低，安全，适合工业化大生产，是一种可取的提取方法。
但由于水的极性大，容易把蛋白质、苷类等水溶性的成分浸提出来，从而使提取液存放时腐败变质，为后续的分离带来困难，且该法提取比较耗时，提取率也不高。
1．1．2酸提法为了提高多糖的提取率，在水提醇沉法的基础上发展了酸提取法。
如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH值下难以溶解，可用乙酸或盐酸使提取液成酸性，再加乙醇使多糖沉淀析体是指物质处于临界温度和临界压力以上时的状态，这种流体兼有液体和气体的特点，密度大，粘稠度小，有极高的溶解，渗透到提取材料的基质中，发挥非常有效的萃取功能。
而且这种溶解能力随着压力的升高而增大，提取结束后，再通过减压将其释放出来，具有保持有效成分的活性和无溶剂残留等优点。
由于CO2的超临界条件（TC＝304．6℃，Tp＝7．38MPa）容易达到，常用于超临界萃取的溶剂，在压力为8～40MPa时的超临界CO2足以溶解任何非极性、中极性化合物，在加入改性剂后则可溶解极性化物。
壁内的活性多糖，多糖释放的多少和复合酶的加入量、酶解温度、酶解时间、酶解pH值有直接的关系。
酶解法提取的实质是通过酶解反应强化传质过程。
此法具有条件温和、杂质易除和得率高等优点。
1．3物理强化法1．3．1微波辅助提取法微波萃取是高频电磁波穿透萃取媒质，到达被萃取物料的内部，能迅速转化为热能使细胞内部温度快速上升，细胞内部压力超过细胞壁承受力，细胞破裂，细胞内有效成分流出，在较低的温度下溶解于萃取媒质，通过进一步过滤和分离，获得萃取物料。
多糖的提取分离方法
1.多糖的提取方法生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、动物多糖3 大类。
多糖的提取首先要根据多糖的存在形式及提取部位，决定在提取之前是否做预处理。
动物多糖和微生物多糖多有脂质包围，一般需要先加入丙酮、乙醚、乙醇或乙醇乙醚的混合液进行回流脱脂，释放多糖。
植物多糖提取时需注意一些含脂较高的根、茎、叶、花、果及种子类，在提取前，应先用低极性的有机溶剂对原料进行脱脂预处理，目前多糖的提取方法主要有溶剂提取法、生物提取法、强化提取法等。
1．1溶剂法1．1．1水提醇沉法水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法。
多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强的溶剂。
用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到70 %左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置5 h，多糖的质量分数和得率均较高。
影响多糖提取率的因素有：水的用量、提取温度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等。
水提醇沉法提取多糖不需特殊设备，生产工艺成本低，安全，适合工业化大生产，是一种可取的提取方法。
但由于水的极性大，容易把蛋白质、苷类等水溶性的成分浸提出来，从而使提取液存放时腐败变质，为后续的分离带来困难，且该法提取比较耗时，提取率也不高。
1．1．2酸提法为了提高多糖的提取率，在水提醇沉法的基础上发展了酸提取法。
如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH 值下难以溶解，可用乙酸或盐酸使提取液成酸性，再加乙醇使多糖沉淀析出，也可加入铜盐等生成不溶性络合物或盐类沉淀而析出。
由于H＋的存在抑制了酸性杂质的溶出，稀酸提取法提取得到的多糖产品纯度相对较高，但在酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂，且酸会对容器造成腐蚀，除弱酸外，一般不宜采用。
因此酸提法也存在一定的不足之处。
1．1．3碱提法多糖在碱性溶液中稳定，碱有利于酸性多糖的浸出，可提高多糖的收率，缩短提取时间，但提取液中含有其它杂质，使粘度过大，过滤困难，且浸提液有较浓的碱味，溶液颜色呈黄色，这样会影响成品的风味和色泽。
多糖分离纯化
多糖分离纯化1. 概述多糖是由许多重复单元组成的生物大分子，具有广泛的生物功能和应用价值。
多糖的分离纯化是从混合物中分离出目标多糖并提高纯度的过程。
本文将介绍多糖分离纯化的常用方法和技术，以及其在食品、药品和生物工程等领域的应用。
2. 多糖的分离方法多糖的分离方法主要包括溶剂沉淀、离子交换、凝胶过滤、超滤、逆流层析、电泳和气相色谱等。
下面将分别介绍这些方法的原理和应用情况。
2.1 溶剂沉淀溶剂沉淀是利用溶剂的物理性质，如极性和温度等，使多糖在溶液中发生相分离的方法。
通常采用醇类溶剂，如乙醇或异丙醇。
溶剂沉淀适用于多糖与其他溶质的溶解度差异较大的情况，但纯度较低。
2.2 离子交换离子交换是利用离子交换树脂上的功能基团与多糖分子间发生离子交换反应的方法。
树脂的功能基团可以选择性吸附或释放多糖分子。
离子交换适用于多糖的分子量差异较大的情况，例如海藻酸和壳聚糖的分离。
2.3 凝胶过滤凝胶过滤是利用凝胶的孔隙结构将分子按大小分离的方法。
多糖分子较大，可以被凝胶孔隙排除，而小分子可以通过凝胶透过。
凝胶过滤常用于多糖与其他小分子的分离，如蛋白质和核酸。
2.4 超滤超滤是利用超滤膜的孔隙结构将溶液分离的方法。
超滤膜的孔径可以根据需要选择，通常是分子量截留范围在1 kDa至100 kDa之间。
超滤适用于多糖与其他大分子的分离，如蛋白质和核酸。
2.5 逆流层析逆流层析是利用多糖与填料间的亲和作用进行分离的方法。
填料可以是具有特定亲和性的配体，如亲和树脂。
逆流层析适用于分子间相互作用较强的多糖分离。
2.6 电泳电泳是利用电场作用将分子按电荷和大小进行分离的方法。
多糖可根据电荷差异选择合适的电泳方法，如聚丙烯酰胺凝胶电泳和毛细管电泳。
电泳在多糖的分子量分析和负载量测定中广泛应用。
2.7 气相色谱气相色谱是利用样品在气相载体中的分配和迁移以实现分离的方法。
多糖需要经过甲硅烷衍生化处理后才可以进行气相色谱分析。
气相色谱适用于多糖的含量测定和结构分析。
多糖的提取分离方法
1、多糖的提取方法生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、动物多糖3 大类。
多糖的提取首先要根据多糖的存在形式及提取部位,决定在提取之前就是否做预处理。
动物多糖与微生物多糖多有脂质包围,一般需要先加入丙酮、乙醚、乙醇或乙醇乙醚的混合液进行回流脱脂,释放多糖。
植物多糖提取时需注意一些含脂较高的根、茎、叶、花、果及种子类,在提取前,应先用低极性的有机溶剂对原料进行脱脂预处理,目前多糖的提取方法主要有溶剂提取法、生物提取法、强化提取法等。
1.1溶剂法1.1.1水提醇沉法水提醇沉法就是提取多糖最常用的一种方法。
多糖就是极性大分子化合物,提取时应选择水、醇等极性强的溶剂。
用水作溶剂来提取多糖时,可以用热水浸煮提取,也可以用冷水浸提渗滤,然后将提取液浓缩后,在浓缩液中加乙醇,使其最终体积分数达到70 %左右,利用多糖不溶于乙醇的性质,使多糖从提取液中沉淀出来,室温静置 5 h,多糖的质量分数与得率均较高。
影响多糖提取率的因素有:水的用量、提取温度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等。
水提醇沉法提取多糖不需特殊设备,生产工艺成本低,安全,适合工业化大生产,就是一种可取的提取方法。
但由于水的极性大,容易把蛋白质、苷类等水溶性的成分浸提出来,从而使提取液存放时腐败变质,为后续的分离带来困难,且该法提取比较耗时,提取率也不高。
1.1.2酸提法为了提高多糖的提取率,在水提醇沉法的基础上发展了酸提取法。
如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH 值下难以溶解,可用乙酸或盐酸使提取液成酸性,再加乙醇使多糖沉淀析出,也可加入铜盐等生成不溶性络合物或盐类沉淀而析出。
由于H＋的存在抑制了酸性杂质的溶出,稀酸提取法提取得到的多糖产品纯度相对较高,但在酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂,且酸会对容器造成腐蚀,除弱酸外,一般不宜采用。
因此酸提法也存在一定的不足之处。
1.1.3碱提法多糖在碱性溶液中稳定, 碱有利于酸性多糖的浸出,可提高多糖的收率,缩短提取时间,但提取液中含有其它杂质,使粘度过大,过滤困难,且浸提液有较浓的碱味,溶液颜色呈黄色,这样会影响成品的风味与色泽。
多糖的提取分离纯化及分析鉴定方法研究
多糖的提取分离纯化及分析鉴定方法研究多糖是由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的高分子化合物。
多糖具有广泛的应用价值，包括食品、医药、化妆品和生物材料等领域。
因此，对多糖的提取、分离纯化以及分析鉴定方法的研究具有重要意义。
一、多糖的提取方法1.物理法物理法主要包括热水提取法、酸碱提取法和微波提取法等。
热水提取法是最常用的提取方法之一，通过加热使细胞壁破烂，有利于多糖的溶出。
酸碱提取法则是利用酸碱反应将多糖从细胞壁中释放出来。
微波提取法则是利用微波辐射对样品进行加热，加速多糖的溶解和释放。
2.化学法化学法主要包括酶解法、酶解分离法和酸碱水解法等。
酶解法是利用特定的酶对样品进行处理，将多糖分解为单糖，然后进行分离和纯化。
酸碱水解法则是通过酸碱反应将多糖水解为低聚糖和单糖。
3.生物法生物法是利用微生物或植物产生的酶对多糖进行酶解和分离。
生物法具有选择性强、工艺简单等优点，在多糖提取中得到了广泛的应用。
二、多糖的分离纯化方法多糖的分离纯化方法主要包括离子交换色谱法、凝胶渗透色谱法和亲和色谱法等。
1.离子交换色谱法离子交换色谱法是利用离子交换树脂对多糖进行分离的方法。
通过控制溶液pH值和离子强度等条件，使不同电荷的多糖在树脂上发生吸附反应，实现多糖的分离纯化。
2.凝胶渗透色谱法凝胶渗透色谱法是根据多糖分子量的大小来进行分离的方法。
多糖分子量越大，越容易在凝胶渗透色谱柱的孔隙中滞留，分离得到纯度较高的多糖。
3.亲和色谱法亲和色谱法是利用多糖与一些特定配体之间的相互作用进行分离的方法。
例如，可以利用亲和色谱柱上的特定配体与多糖的特定结构之间的结合作用，实现多糖的分离和纯化。
三、多糖的分析鉴定方法多糖的分析鉴定方法主要包括红外光谱法、紫外光谱法、核磁共振波谱法、高效液相色谱法和气相色谱法等。
1.红外光谱法红外光谱法能够通过检测样品吸收、散射或透射特定波长的红外光来分析多糖的结构和功能。
2.紫外光谱法紫外光谱法是利用多糖分子在紫外可见光区域的吸收特性进行分析。
中药提取物除多糖的方法
中药提取物除多糖的方法
中药提取物中多糖的去除方法主要有以下几种：
1.水提醇沉法：根据多糖大分子化合物的特性，选择水与醇等极性强的溶剂，期间可用热
水与冷水两种浸提方法，再通过加入乙醇使多糖从提取液中沉淀出来。
2.酸提法：为提升多糖提取率，可在水提醇沉法的基础上，控制酸度，以便在酸性较强的
环境中避免多糖中糖苷键断裂。
3.碱提法：部分多糖在碱液中具备更优异的提取率，为避免在酸性溶液中造成多糖损失，
通常碱提法会防止多糖降解，并加入氮气或硼氢化钠等药品，以此控制碱性浓度，避免碱性较强发生多糖水解状况。
4.酶法：生物方法，利用酶将多糖从其他成分中分离出来。
5.物理法：如超滤法、凝胶色谱法等，根据多糖和其它成分分子大小的差异进行分离。
6.化学法：利用多糖在不同化学环境下溶解度的差异进行分离。
水提醇沉法提取多糖
水提醇沉法提取多糖多糖是一类具有重要生物活性的高分子化合物，其中包括葡聚糖、木聚糖、海藻酸等。
多糖具有许多生物功能，如抗肿瘤、免疫调节、抗氧化等，因此被广泛应用于医药、保健品和食品工业中。
目前，提取多糖的方法主要有水提醇沉法、超声波法、微波法等。
本文将重点介绍水提醇沉法提取多糖的原理、步骤和注意事项。
一、原理水提醇沉法是一种常用的多糖提取方法，其原理是利用水和有机溶剂（如乙醇）的不相溶性，在不同极性环境下使多糖从植物中萃取出来。
首先将植物样品加入适量的水中，加热使细胞壁断裂释放出内部成分；然后加入适量的乙醇使其中极性环境发生改变，从而促进多糖与溶剂之间的相互作用；最后离心沉淀得到含有多糖的沉淀物。
二、步骤1. 样品制备：将待提取的植物材料洗净，去除杂质，切成小块或粉碎成粉末。
2. 水提取：将样品加入适量的水中，加热至沸腾，持续煮沸一段时间（时间根据不同植物种类和部位而定），使细胞壁断裂，释放出内部成分。
然后用滤纸过滤掉残渣，得到水提液。
3. 醇沉淀：将水提液加入适量的乙醇中，混合均匀后静置一段时间（通常为24小时），多糖会在乙醇-水界面处形成沉淀。
然后用离心机离心10-15分钟（3000 rpm），将上清液倒掉并保留沉淀。
4. 沉淀洗涤：用适量的乙醇洗涤沉淀物2-3次，以去除杂质和残余溶剂。
5. 干燥称重：将洗涤后的沉淀物放在干燥器中干燥至恒重。
最后称取干燥后的多糖产物重量，并计算多糖产率。
三、注意事项1. 样品的处理应尽量避免破坏多糖的结构和活性。
2. 水提取时，水的用量应适当，过多会稀释溶液，过少会影响提取效果。
3. 醇沉淀时，乙醇的浓度和加入量应根据不同植物种类和部位而定。
4. 离心时应控制转速和时间，以避免对多糖产物造成损伤。
5. 洗涤后的沉淀物要彻底干燥，以避免水分影响多糖产物重量和质量。
总之，水提醇沉法是一种简单易行、操作方便、提取效果好的多糖提取方法。
在实际应用中，还需要根据不同植物种类和部位等因素进行优化，并结合其他分离纯化技术进一步提高多糖产率和纯度。
多糖的分离纯化及分析
多糖的分离纯化及分析一、多糖的提取方法（一）溶剂提取法1、水提法水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法.多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强的溶剂.用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到70%左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置5h，多糖的质量分数和得率均较高.2、酸碱提法有些多糖适合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。
有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。
与酸提类似，碱提中碱的浓度也应得到有效控制，因为有些多糖在碱性较强时会水解。
3、超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是近年来发展起来的一种新的提取分离技术.（二）生物酶提取法酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。
此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物，常用的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶等。
（三）超声提取法超声波是一种高频率的机械波，其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏，有利用植物有效成分的释放，而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流，有效地减小、消除与水相之间的阻滞层，加大了传质效率，有助于溶质的扩散。
超声波提取与传统的提取方法相比，有提取效率高、时间短、耗能低等优点。
（四）微波提取微波是频率介于300MHz和300GHz之间的非电离电磁波，微波提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部，由于溶剂及细胞液吸收微波能细胞内部温度升高，压力增大，当压力超过细胞壁的承受能力时，细胞壁破裂，位于细胞内部的有效成份从细胞中释放出来，传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。
二、多糖的分离纯化（一）多糖的分离采用一般方法提取的多糖通常是多糖的混合物，分级的方法可达到纯化的目的．可按溶解性不同进行分级、按分子大小和形状分级(如分级沉淀、超滤、分子筛、层析等)，也可按分子所带基团的性质分级．1、按溶解性不同分离（1）分步沉淀法分步沉淀法是根据不同多糖在不同浓度低级醇、酮中具有不同溶解度的性质，从小到大按比例加入甲醇或乙醇或丙酮进行分步沉淀．（2）盐析法盐析法是根据不同多糖在不同盐浓度中溶解度不同而将其分离的一种方法。
多糖的提取原理
多糖的提取原理
多糖的提取原理是将植物或微生物中的多糖分子，经过一系列的物理、化学方法进行分离和纯化。
首先，利用机械方法（如研磨、切割等）破碎植物细胞壁或微生物细胞膜，释放出多糖分子。
然后，可以通过浸提、溶解、离心等方法将多糖与其他组分分离。
接下来，可以利用不同特性的分离方法进一步提取纯化多糖。
常见的方法包括酸碱水解、醇沉、离子交换层析、凝胶过滤层析、凝胶电泳等。
其中，酸碱水解可以利用多糖在酸性或碱性条件下的溶解性差异进行分离。
醇沉可以根据多糖与醇溶液的亲和性差异实现分离。
离子交换层析则是利用多糖在具有固定电荷的树脂上吸附和洗脱的原理进行纯化。
凝胶过滤层析和凝胶电泳可以根据多糖的分子大小和电荷来分离。
最后，对提取得到的多糖进行浓缩和干燥，得到纯化的多糖样品。
此外，还可以利用光谱分析、色谱分析等方法对提取得到的多糖进行结构表征和定量分析。
总之，多糖的提取原理是依靠一系列的物理、化学方法对植物或微生物中的多糖进行分离和纯化，最终得到纯化的多糖样品。
水溶性多糖的提取及结构测定方案
水溶性多糖的提取及结构测定方案提取水溶性多糖方法:1. 蒸馏水提取法将植物材料使用蒸馏水浸泡一定时间后，在常温下加热，使多糖向水中溶解。
然后进行过滤、冷却、离心等操作，分离出水溶性多糖。
优点：简单易行，可获得高纯度多糖。
缺点：需耗费大量水和时间，获得的多糖含量低。
2. 酸碱法提取法将植物材料使用强酸或强碱处理，破坏细胞壁，释放出多糖。
然后中和酸或碱，进行沉淀或过滤，获得多糖。
优点：易操作，可获得高纯度多糖，提取产量高。
缺点：对多糖结构有影响，需要严格控制处理时间、温度等参数。
3. 高压法提取法将植物材料加入高压蒸馏水中，在高温高压下进行提取。
然后通过冷却和离心等步骤，分离出水溶性多糖。
优点：高效、快捷、获得的多糖含量高。
缺点：需要专业设备，投资成本高。
结构测定方案：1. 紫外-可见光谱分析法将多糖样品溶解在水中，使用紫外-可见光谱仪测量其吸收光谱。
通过分析吸收峰位、峰形等特征，推断多糖结构。
优点：简单易用，快速。
缺点：只能得出对多糖主要结构的推测。
2. 红外光谱分析法将多糖样品与 KBr 混合后压成盘，进行红外光谱测量。
通过分析吸收峰位、峰形等特征，确定多糖结构。
优点：稳定可靠，测量精度高。
缺点：需要专业技能和设备。
3. 核磁共振光谱分析法将多糖样品溶解在溶剂中，使用核磁共振仪进行分析。
通常使用的是1H核磁共振技术。
通过分析多糖分子内部原子的化学位移、耦合常数等特征，确定多糖结构。
优点：精确度高，能够解析多糖结构。
缺点：需要专业技能和设备，而且成本较高。
总的来说，不同的提取方法和结构测定方法各有优缺点，需要根据具体的研究目的和条件来选择。
同时，为了保证研究结果的可靠性和精确度，提取和分析过程中需要注意控制实验条件和误差。
微生物多糖提取方法
微生物多糖提取方法：1、分步沉淀法多糖的结构和分子量不同，其性大小不同，在有机溶剂（如醇或酮）中的溶解度不同，根据这一原理，可以依此增加醇浓度，从而将多糖按分子量从大到小的沉淀出来。
但是分沉淀法一般得不到均一性多糖。
仍需要借助柱层析法等进一步纯化，方可得到均一性的多糖。
2、柱层析法要获得均一性的多糖，一般是先经过阴离子交换柱进行粗步纯化，然后再用凝胶柱进一步纯化。
有些多糖也采用大孔树脂柱进行纯化。
下面对这三种柱层析法进行详细介绍。
3、阴离子交换法一般使用阴离子交换柱对真菌、藻类和高等植物的多糖进行初步分离。
阴离子交换色谱常用的介质有DEAE-纤维素、DEAE-琼脂糖凝胶、DEAE-葡萄糖凝胶。
常用的有DEAE-52和DEAE-Sepharose。
例如用DEAE-52柱对大杯香菇等菌类、玉米等植物、桑黄等藻类粗多糖进行分离纯化。
使用DEAE-52填料进行多糖的初步分离纯化，该柱子一般直径偏大，其中以2.6cm多，操作过程中流动相的流速也较快，流速一般在0.7-2ml/min之间，以1ml/min多，至于柱子的长度，选择范围较广，从25-100cm不等。
DEAE-Sepharose柱也常被用在对菌类、植物和藻类粗多糖的初步分离纯化中，在选择层析柱的直径、流速和长度的方面与DEAE-52相似。
DEAE-52或DEAE-Sepharose柱的流动相都是纯水和不同浓度的NaCl溶液。
4、凝胶色谱法凝胶色谱法根据被分离组分尺寸大小与凝胶的孔径关系实现分离，类似于分子筛的作用。
常用的凝胶有葡聚糖凝胶（SephadexG）、SephadexLH-20、聚丙烯酸凝胶ToyopearlHW等。
多糖的进一步分离往往会选择用各种凝胶进行分离纯化。
选择使用哪一种凝胶对多糖进行纯化的标准是多糖的分子量，不同种类和型号的凝胶能够分离多糖类型和分子量范围不同。
凝胶柱的柱子规格常具有长而细的特点，直径以1.6cm偏多。
无论什么类型的凝胶柱，流动相多为蒸馏水或者一定浓度的NaCl溶液。
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1.多糖的提取方法生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、动物多糖3 大类。
多糖的提取首先要根据多糖的存在形式及提取部位，决定在提取之前是否做预处理。
动物多糖和微生物多糖多有脂质包围，一般需要先加入丙酮、乙醚、乙醇或乙醇乙醚的混合液进行回流脱脂，释放多糖。
植物多糖提取时需注意一些含脂较高的根、茎、叶、花、果及种子类，在提取前，应先用低极性的有机溶剂对原料进行脱脂预处理，目前多糖的提取方法主要有溶剂提取法、生物提取法、强化提取法等。
1．1溶剂法1．1．1水提醇沉法水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法。
多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强的溶剂。
用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到70 %左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置5 h，多糖的质量分数和得率均较高。
影响多糖提取率的因素有：水的用量、提取温度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等。
水提醇沉法提取多糖不需特殊设备，生产工艺成本低，安全，适合工业化大生产，是一种可取的提取方法。
但由于水的极性大，容易把蛋白质、苷类等水溶性的成分浸提出来，从而使提取液存放时腐败变质，为后续的分离带来困难，且该法提取比较耗时，提取率也不高。
1．1．2酸提法为了提高多糖的提取率，在水提醇沉法的基础上发展了酸提取法。
如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH 值下难以溶解，可用乙酸或盐酸使提取液成酸性，再加乙醇使多糖沉淀析出，也可加入铜盐等生成不溶性络合物或盐类沉淀而析出。
由于H＋的存在抑制了酸性杂质的溶出，稀酸提取法提取得到的多糖产品纯度相对较高，但在酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂，且酸会对容器造成腐蚀，除弱酸外，一般不宜采用。
因此酸提法也存在一定的不足之处。
1．1．3碱提法多糖在碱性溶液中稳定，碱有利于酸性多糖的浸出，可提高多糖的收率，缩短提取时间，但提取液中含有其它杂质，使粘度过大，过滤困难，且浸提液有较浓的碱味，溶液颜色呈黄色，这样会影响成品的风味和色泽。
1．1．4超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是近年来发展起来的一种新的提取分离技术。
超临界流体是指物质处于临界温度和临界压力以上时的状态，这种流体兼有液体和气体的特点，密度大，粘稠度小，有极高的溶解，渗透到提取材料的基质中，发挥非常有效的萃取功能。
而且这种溶解能力随着压力的升高而增大，提取结束后，再通过减压将其释放出来，具有保持有效成分的活性和无溶剂残留等优点。
由于CO2的超临界条件（TC＝304．6 ℃，Tp＝7．38 MPa）容易达到，常用于超临界萃取的溶剂，在压力为8～40 MPa 时的超临界CO2足以溶解任何非极性、中极性化合物，在加入改性剂后则可溶解极性化物。
该法的缺点是设备复杂，运行成本高，提取范围有限。
1．2酶解法1．2．1单一酶解法单一酶解法指的是使用一种酶来提取多糖，从而提高提取率的生物技术。
其中经常使用的酶有蛋白酶、纤维素酶等。
蛋白酶对植物细胞中游离的蛋白质具有分解作用，使其结构变得松散；蛋白酶还会使糖蛋白和蛋白聚糖中游离的蛋白质水解，降低它们对原料的结合力，有利于多糖的浸出。
1．2．2复合酶解法复合酶解法采用一定比例的果胶酶、纤维素酶及中性蛋白酶，主要利用纤维素酶和果胶酶水解纤维素和果胶，使植物组织细胞的细胞壁破裂，释放细胞壁内的活性多糖，多糖释放的多少和复合酶的加入量、酶解温度、酶解时间、酶解pH 值有直接的关系。
酶解法提取的实质是通过酶解反应强化传质过程。
此法具有条件温和、杂质易除和得率高等优点。
1．3物理强化法1．3．1微波辅助提取法微波萃取是高频电磁波穿透萃取媒质，到达被萃取物料的内部，能迅速转化为热能使细胞内部温度快速上升，细胞内部压力超过细胞壁承受力，细胞破裂，细胞内有效成分流出，在较低的温度下溶解于萃取媒质，通过进一步过滤和分离，获得萃取物料。
微波辅助提取多糖和其他的萃取方法比较，微波萃取效率高，操作简单，且不会引入杂质，多糖纯度高，能耗小，操作费用低，符合环境保护要求，是很好的多糖提取方法。
1．3．2超声波辅助提取法超声波提取是利用超声波的机械效应、空化效应及热效应。
机械效应可增大介质的运动速度及穿透力，能有效的破碎生物细胞和组织，从而使提取的有效成分溶解于溶剂之中；空化效应使整个生物体破裂，整个破裂过程在瞬间完成，有利于有效成分的溶出；热效应增大了有效成分的溶解速度，这种热效应是瞬间的，可使被提取成分的生物活性尽量保持不变；此外，许多次级效应也能促进提取材料中有效成分的溶解，提高了提取率。
超声波提取与水煮法醇沉法相比，萃取充分，提取时间短；与浸泡法相比，提取率高。
1．3．3高压脉冲法高压脉冲法是对两电极间的流态物料反复施加高电压的短脉冲（典型为20～80 kV/cm）进行处理，作用机理有多种假说，如细胞膜穿孔效应、电磁机制模型、粘弹极性形成模型、电解产物效应、臭氧效应等，研究最多的是细胞膜穿孔效应。
动物、植物、微生物的细胞，在外加电场作用下，产生横跨膜电位，绝缘的生物膜由于电场形成了微孔，通透性发生变化，当整个膜电位达到极限值（约为1 V）时，膜破裂，膜结构变成无序状态，形成细孔，渗透能力增强。
电位差达到临界点，细胞破裂。
2.多糖的分离纯化2．1 除蛋白2．1．1Sevage 法根据蛋白质在氯仿等有机溶剂中变性的特点，用V（氯仿）∶V（戊醇或正丁醇）为5∶1 或4∶1，混合物剧烈振摇20～30 min，蛋白质变性生成凝胶，离心分离，分去水层和溶剂层交界处的变性蛋白质。
此种只能除去少量蛋白质，效率不高，须反复多次，多糖有损失。
但此方法比较温和，在避免多糖降解上效果较好，如配合加入一些蛋白质水解酶，用Sevage 法效果更佳。
此法不能除去脂蛋白，因为脂蛋白溶于氯仿。
2．1．2三氟三氯乙烷法将多糖溶液与三氟三氯乙烷等体积混合，低温搅拌10 min 左右，离心分离得上层水层，水层继续用上述方法反复处理几次，得无蛋白质的多糖溶液，此法效率较Seavg 法高，但溶剂沸点低，易挥发，不宜大量应用。
2．1．3三氯乙酸法三氯乙酸是一种有机酸，使多糖提取液中的蛋白质与有机酸作用而变性沉淀。
该法是在多糖水提液中滴加5 %～10 %与多糖水提取液等体积的三氯乙酸，混匀静置过夜，离心除去胶状沉淀，重复以上的操作直至溶液不再继续混浊为止，得无蛋白质的多糖。
三氯乙酸浓度越大，除蛋白质效果越好，但对多糖的影响也越大，可能是三氯乙酸对多糖结构具有破坏作用，使多糖降解，而且这种破坏作用随着三氯乙酸浓度增大而增强。
植物多糖常采用三氯乙酸法除蛋白质，也可先用蛋白水解酶，使样品中的蛋白质部分降解后再用Sevag 法效果更好；微生物多糖去除蛋白常采用Sevag 法、三氟三氯乙烷法；也可用盐析法、有机溶剂萃取等方法除蛋白。
2．2多糖的分离主要有分级沉淀、季铵盐沉淀法、金属盐沉淀法、色谱分离、膜分离、透析、电渗析等，目前大多采用DEAE－凝胶或其他各种不同类型的凝胶柱层析以及离子交换色谱法。
2．2．1分级沉淀法大多数活性多糖可溶于水，3 个碳以下的多糖还可溶于乙醇，随着聚合度的增大，多糖在乙醇中的溶解度逐渐降低。
根据这一性质可在多糖的浓缩水溶液中分批加入乙醇，使乙醇的体积浓度逐渐增加到50，100，200，900 mL/L，从而使不同聚合度的多糖分别沉淀析出。
2．2．2色谱分离法常用两种色谱分离方法：一是凝胶柱色谱法，二是离子交换色谱法。
2．2．3膜分离法膜分离技术（membrane separation technology，MST）是一种高效分离技术，分离过程以选择透过性膜作为分离介质，通过在膜两侧施加某种推动力（压力差、化学位差、电位差等），使原料液中组分有选择性的通过膜。
目前应用较多的是超滤和微滤技术。
3多糖的分析鉴定3．1含量的测定测定方法：硫酸－苯酚法、硫酸－蒽酮法、比色定量法、分光光度法、纸色谱法、离子交换色谱法、yaphe 法、薄层色谱法、酶法、原子吸收法、HPLC 法、凝胶电泳法、亲和电泳法、连续流动分析法检测法[44]、次亚碘酸盐定量法、蒽酮－硫酸法（总糖）、DNS 法（还原法）、磷钼比色法、邻钾苯胺比色法等。
每种方法只对某些多糖的测量效果好。
比色法、分光光度法、离子交换色谱法、酶法和电泳法等可同时用于多糖的定性定量分析。
3．2纯度鉴定多糖是高分子化合物，其纯品微观上是不均一的，通常所说的多糖纯品实质上是一定分子量范围的均一组分。
多糖纯度鉴定的常用方法：超离心、高压电泳、凝胶层析、HLPC 法等。
现在应用较多的是HLPC 法，旋光度测定也是纯度测定的一种方法。
3．3分子量的测定多糖分子量的测定是研究多糖性质的一项重要工作。
常用方法：渗透压法、蒸气压渗透剂法、端基法、粘度法、光散射法、凝胶色谱法、超过率法、沉淀法、凝胶电泳法、HPLC 法、超离心分析法、分子筛色谱法、GPC 法、MALDI－TOF－MS 法。
3．4结构测定3．4．1多糖一级结构测定多糖的一级结构分析，主要是分析组成多糖的单糖类型、数目、连接方式及苷建构型。
常用化学法和仪器分析法。
多糖组分与分子比例测定法：部分酸解法、完全酶解法、色谱法；吡喃、呋喃环形式结构的分析：红外光谱；连接次序：选择性光谱法、糖苷键顺序水解、核磁共振；α－β－异头异构体：糖苷酶水解、核磁共振；羟基被取代情况：甲基化反应、气相色谱、过碘酸氧化、Smith 降解法和测硫酸基法（terho 法）、核磁共振、质谱法；糖链、肽链连接方式：单糖与氨基酸组成、稀碱水解法、肼解反应；多糖结构的分析方法很多，迄今没有一种方法可以单独完成多糖结构的分析。
仪器分析与化学方法相结合是常用的多糖结构测定方法。
3．4．2多糖高级结构测定目前研究多糖的二级结构常用的手段是NMR 技术，如2D－NMR，13C 谱，通用的方法是将现代NMR 技术与理论计算相结合通过一定的理论计算筛选构象，主要的理论计算方法有从头计算、丰度经验计算及经验力场计算。
圆二色谱法（CD）也可用于糖的构象分析，近年来，以精确三维结构知识为基础揭示重要生命活动的规律已达到前所未有的深度和广度，多糖作为一类重要的生物活性大分子其结构的研究势必推动对多糖的认识向深层次发展。